Nanočestice cinkovog oksida potiču proces starenja na način koji zavisi od veličine

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

Abstract

Nanočestice (NP) cinkovog oksida (ZnO) se općenito koriste u kozmetičkoj robi, šupama, biosenzorima i isporuci lijekova. Kao in vitro idealni sistemi, mezenhimalne matične ćelije (MSC) se koriste za ispitivanje akutne toksičnosti. U ovoj studiji, procijenjeni su citotoksični efekti ZnO NP-a na MSC-ove ovisno o veličini. Koštana srž i adipozni MSC tretirani su ZnO NP prosječne veličine 10-30 i 35-45 nm. Utvrđeno je da su koncentracije ZnO NP od 5 i 10 ug/ml sigurne koncentracije za veličine NP od 10-30 i 35-45 nm, respektivno.cistanche benefitsAnaliza ćelijskog ciklusa je pokazala da mala veličina ZnO NP ima više negativnih efekata na proces ulaska ćelije u sintezu DNK u poređenju sa većom veličinom. Rezultati testa -galaktozidaze pokazali su promociju Forocessa starenja u ćelijama tretiranim manjom veličinom ZnO NP. Utvrđeno je da obje veličine NP povećavaju regulaciju gena povezanih sa starenjem NF-kB i p53 i smanjuju regulaciju gena protiv starenja Nanog. Ukratko, manja veličina ZnO NP može poboljšati proces starenja u stanicama.

Molimo kliknite ovdje da saznate više

1. Uvod

U posljednjoj deceniji, nanotehnološka industrija se mora brzo razvijati širom svijeta. Nanočestice cinkovog oksida (ZnO) (NP) se općenito koriste u proizvodima za njegu ljepote, šupama, biosenzorima, isporuci lijekova, bioimagingu i kao antifungalni i antibakterijski agensi [1-5]. ZnO nanostrukture imaju nekoliko odličnih svojstava, kao i stabilnost jedinjenja, veliki raspon specifične površine, visoku elektronsku korespondenciju i aktivnost elektro jedinjenja [6]. ZnO NP se najvećim dijelom koriste kao dodana supstanca koja raspršuje UV svjetlost u kozmetičkim proizvodima kao što su kreme za sunčanje, paste za zube i proizvodi za sjaj [7, 8]. Uz široku primjenu nanostrukturiranih supstanci za komercijalne artikle, smatralo se da je biološka sigurnost ovih materijala istraživala prirodne i toksikološke učinke aberantnog i neposrednog ispoljavanja ovih supstanci [9]. Zbog svojih reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) i netopivih metalnih jona, nanomaterijali kao što je ZnO imaju toksični uticaj na ćelije [10,11].cistanche holesterolKako je toksičnost ZnO NP veća u ultračistoj vodi nego u fiziološkom rastvoru puferovanom fosfatom (PBS) u različitim vodenim medijima, toksičnost ZnO NP je uglavnom u skladu sa slobodnim ionima cinka [12]. Dok cink NP kompleks sa medijima uzrokuje manju toksičnost, koncentracija Zn2 plus jona je znatno smanjena. Nastali Zn2 plus netopivi ZnO NP izazivaju nekrozu i upalu [13]. Međućelijski ROS, koji je uzrokovan ZnO NP, inducira ćelijsku smrt i disfunkciju mitohondrijske oksidativne fosforilacije [10].

Cistanche može protiv starenja

Nekoliko in vivo eksperimenata je ukazalo na štetne efekte Zn NP-a na različite oblike života kao što su drozofile [14], ribe [15], amfipodi [16], miševi [17], pacovi [18] i bakterije [19]. Također je prijavljeno da Zn NP pokazuju in vitro toksičnost [20-22]. Unatoč mnogim skrivenim toksičnostima povezanim sa ZnO NP, oni se široko koriste za različite biomedicinske primjene i farmaceutske svrhe [23]. Stoga su potrebna dalja istraživanja kako bi se procijenio toksični utjecaj ovog spoja na stanice. U toksikološkim istraživanjima, MSC se koriste kao idealno in vivo modeliranje [24]. Izolacija i proširenje MSC-a u kulturi je lako, a njihova diferencijacija se vrši odgovarajućom stimulacijom. Mezenhimalne matične ćelije koštane srži (BMSC) pokazuju osjetljivost na testove citotoksičnosti lijekova protiv raka i nekih drugih citotoksičnih lijekova [25]. Štaviše, mezenhimske matične ćelije dobijene iz masnoće (AMSC) koriste se za procjenu sigurnosti lijekova i otkrivanje lijekova [26]. Stoga smo u ovoj studiji pretpostavili da bi AMSC i BMSC ciljani ZnO NP mogli biti prikladni za razmatranje potencijalnih rizika u razvoju starenja. Za procjenu toksičnosti stanica, vrlo je značajan test ekspresije gena, faktor koji igra ulogu u ranim toksičnim procesima [26]. Dakle, kao specifičan marker matičnih ćelija, Nanog gen je korišten u ovom istraživanju za predviđanje toksičnosti. Nanog ima dvije funkcije u diferencijaciji matičnih stanica i samoobnavljanju [27]. Štaviše, Nanog gen stimuliše supresiju starenja tako što smanjuje ekspresiju p27KIPI gena [28].nuspojave cistanche deserticolaKao klasični odgovor na genotoksičnost, kako bi se ograničila proliferacija stanica, p53 u oštećenim genomima uzrokuje zaustavljanje ćelijskog ciklusa i smrt stanice. Brojna istraživanja su istakla ulogu NF-kB okvira u aktiviranju stimulativnih promjena u tkivima tokom starenja [29]. Stoga su u ovoj studiji razmatrani test ćelijskog ciklusa, galaktozidaza in situ i nivoi mRNA gena NF-kB, p53 i Nanog.

2 Materijali i metode

2.1 Svojstva i karakterizacija nanočestica

Kupljene su dvije različite veličine ZnO NP-a (Sigma Aldrich, SAD) sa sljedećim informacijama: jedna prosječne veličine 10-30nm, plus 99 posto čistoće, gustine 5,606 g/cm³ i oko 20-60m2/ g površine, a drugi sa 35-45 nm prosječne veličine,＋99 posto čistoće, 5,606g/cm³ gustine i oko 65m-/g površine (slika 1). Zatim je zaliha od 100 ug/ml suspenzije ZnO NP u 1 ml PBS-a pripremljena sonikacijom u trajanju od 3 min.

2.2 Izolacija mezenhimskih matičnih ćelija

BMSC su odabrani od {{0}}sedmičnih (200-250 g) mužjaka pacova. Uklonjene su epifize, pristupilo se šupljinama srži, a čepovi ukupne koštane srži (BM) su isprani iz tibijalne i femoralne kosti pomoću šprice od 10 ml koja je sadržavala Dulbeccov modifikovani medijum orla (DMEM) (Laboratories Inc., MA, SAD) plus 10 postotak fetalnog goveđeg seruma (FBS). Uzorci BM-a su prikupljeni i precizno uznemireni uzastopnim iglama za želju od 18 i 20, koje su dodane na sličan špric od 10 ml. Zatim je suspenzija ćelija centrifugirana 5 minuta na 1000 o/min. Nakon peletiranja ćelija, one su resuspendirane u mediju sa 10 posto FBS. Da bi se odigrao brojač broja ćelija, 4 procenta octene kiseline pomešano je sa malom količinom suspenzije da se liziraju crvena krvna zrnca. Brojanje ćelija je vršeno hemocitometrom. Nakon toga, ćelije veličine 5×10' su postavljene u posudu za kulturu od 100 mm, držane u 5 posto CO2 na 37 stepeni i mijenjane svježim podlogom svakih 3-4 dana [30]. Koristeći kolagenazu tipa I (0,15 posto težine prema zapremini) tokom 1 sata na 37 stepeni, masno tkivo je zatim enzimski odvojeno. Da bi se uklonile nedisocirane čestice, suspenzija je filtrirana pomoću 70-um filtera. Zatim je dodan DMEM sa 10 posto (v/v) FBS i centrifugiran na 700×g 5 minuta. Konačno, talog ćelije je resuspendiran u DMEM sa 1 posto (v/v) penicilina/streptomicina i 10 posto (v/v) FBS [31].

2.3 Ćelijska kultura

AMSC i BMSC su uzgajani u DMEM (Laboratories Inc., MA, USA) sa 1 posto antibiotika i 10 posto FBS u standardnim uslovima kulture (na 37 stepeni, u 5 posto CO2 i 95 posto vlažnosti)[32].

2.4 Karakterizacija površinskih markera BMSC i AMSCS

BMSC i AMSC su sakupljeni 5 minuta na 37 stepeni, stavljeni na ploče centrifugiranjem od 200×g tokom 5 minuta i isprani ohlađenim PBS. Zatim, 5 ul antitijela konjugiranih s fluorescein izotiocijanatom (FITC), uključujući CD34-PE, CD90-FITC, CD45-FITC i CD73-FITC (Thermo Fisher Scientific, Njemačka), dodan je u BMSC i AMSC, a zatim pohranjen na sobnoj temperaturi (RT) i tamnom mjestu 20 minuta. Uzorci su evaluirani protočnim citometrom (BD FACS Calibre; San Jose, CA, USA)[33, 34].

2.5 In vitro citotoksičnost

Za ispitivanje citotoksičnosti NPS-a, BMSC-i i AMSC-i su kultivirani u {{0}}jažice sa konfluentnošću od 70-80 posto, sve čestice su suspendirane u potpunom DMEM-u (10 posto razrijeđenih NP-a sa 90 posto DMEM koji sadrži PBS)[35]. Sonikacija u kupatilu je obavljena dva puta, svaki put po 5 minuta, da se fino pomiješaju konačne koncentracije ZnO NP. Stoga su BMSC i AMSC tretirani različitim koncentracijama (0,3,5,10,25 i 50 ug/ml) ZnO NP tokom 24, 48 i 72 h. Zatim je korišćen MTT test za testiranje održivosti tretiranih ćelija.cistanche dosage redditPriprema osnovnog rastvora MTT ((3-(4,5-smanjenje etil tiazol-2-il)- 2,5-difeniltetrazolijum bromida) urađena je dodavanjem 1ml PBS-a na 5mg MTT (Sigma, USA) na tamnom mestu.Potom je 20ul matičnog rastvora pomešano sa svim eksperimentalnim jažicama (kontrolne ćelije i ZnO NP tretirani različitim koncentracijama), vibrirano 10 min i inkubirano na 37 stepeni 3h Na kraju, uzorci su izbačeni iz inkubatora i pomešani sa DMSO, sa ljubičastom bojom koja je primetna u ovoj fazi.Razvijeni su pipetiranjem i odmah očitani u prisustvu UV na 570nm.

2.6. Test ćelijskog ciklusa

BMSC i AMSC su zasijani u različite 6-ploče s bunarima. Dok je opaženo spajanje ćelija od 70 posto, sigurne koncentracije ZnO NP (dobivene su 5 i 10 ug/ml u manjim i većim veličinama ZnO NP, respektivno) tretirane su na ćelijama za MTT test i inkubirane 72 sata na 37 stepeni (5 posto). CO2). Mediji su uklonjeni sa konfokalnog diska nakon 72 sata i dva puta su isprani PBS-om i centrifugirani. Ćelije su fiksirane upotrebom etanola (70 posto) na 4 stepena tokom 2 dana. Zatim su inkubirane ćelije ponovo isprane PBS-om i lagano protresene, nakon čega je medij potpuno uklonjen sa konfokalnog diska. Zatim je dodano 10 ul RNase i inkubirano 45 min. Za bojenje, ćelije su suspendovane sa 10 ul rastvora propidijum jodida (Sigma, SAD). Potreban je protočni citometar za procjenu DNK stanica [36].

2.7 Galaktozidaza in situ test za ćelijsko starenje

Aktivnost galaktozidaze povezane sa starenjem (SA-gal), kao uobičajenog biomarkera za ispitivanje starenja u ćelijama, procijenjena je pomoću kompleta za bojenje SA- - (Thermo Fisher Scientific, Njemačka) isto kao iu prethodnim studijama [37]. Ćelije su posađene u 24-ploče i tretirane sa dvije različite veličine ZnO NP sa sigurnim koncentracijama. Zatim su isprani u PBS-u, fiksirani u mješavini G/F fiksatora (20 posto glutaraldehida ＋ 37 posto formaldida) i inkubirani na sobnoj temperaturi 3-5 min. Zatim su ćelije obojene u svježem rastvoru za bojenje (10 ml citrata Na plus 250 ul kalijum fercijanida ＋ 250 ul kalijum ferocijanida ＋ 100 ul MgCl ＋ 250 ul NaCl ＋ 200 ul X-gal） u trajanju od 2 h 37 100 ul X-gal) na tamnom mjestu od 2 h 37 18 pos. zelena boja vizualizirana je pomoću invertnog svjetlosnog mikroskopa.

2.8 PCR u realnom vremenu

BMSC i AMSC sa dve različite veličine ZnO NP tretirani su u optimalnim koncentracijama od 5 i 10 ug/ml, respektivno. Sakupljeni su nakon 48 sati, a komplet za ekstrakciju RNK (Bio Basic INC) je korišten za ekstrakciju ukupne RNK. Prvi lanac cDNK sintetiziran je reverznom transkripcijom korištenjem SYBR Green qPCR MasterMix 2X kita, SYBR stupanj Premix Ex TaqIM (TaKaRa, Japan). Zatim je kvalitet i kvantitet sintetizirane cDNK procijenjen spektrofotometrom NanoDrop ND-1000 (Thermo Scientific, Njemačka).prednosti ekstrakta cistancheZatim je 2 ul cDNK korišteno za amplifikaciju ciljnog gena. Specifični prajmeri su dizajnirani pomoću Primer 3 softvera i korišteni za pojačavanje ekspresije gena p53, NF-kB i Nanog (General Biotech, Koreja). Sekvenciranje prajmera predstavljeno je u tabeli 1.

Nivoi ekspresije su normalizovani na nivo ekspresije GAPDH gena kao gena za održavanje domaćinstva. Za izvođenje PCR-a u realnom vremenu korišćen je prvi ciklus na 95 stepeni u trajanju od 3 minuta i 40 ciklusa na 95 stepeni tokom 20 sekundi, na 60 stepeni tokom 20 sekundi i na 72 stepena tokom 30 sekundi.

2.9 Statistička analiza

Svi testovi su izvedeni u tri primjerka, a rezultati su prikazani kao srednja vrijednost±standardna devijacija (SD). Podaci su ubačeni u softver SPSS (IBM Corp. NY, SAD) i analizirani dvosmjernom analizom varijanse (ANOVA).

3 rezultata

3.1 Analiza mezenhimskih matičnih ćelija protočnom citometrijom

Mezenhimalne matične ćelije štakora su odvojene od dva porekla, uključujući masno tkivo i BM. Provjereni su površinski CD markeri MSC-a, a većina AMSC-a ili BMSC-a (98,18 i 99,62 posto) je pronađena za CD90 kao pozitivan površinski marker u MSC-ima (Sl.2A, B). Nadalje, 94,80 i 99,76 posto CD73 u AMSC ili BMSC je definitivno obojeno, respektivno (sl. 2A, B). Štaviše, neznatan procenat BMSC ili AMSCs pokazao je ekspresiju CD45 (0.18 ili 0,56 procenata) i CD34 (0,71 ili 12,65 procenata) u AMSC ili BMSC, respektivno, koji su markeri hematopoetskih linija (Slika .2A, B). Ovi molekularni profili pokazuju izvanredna svojstva BMSC-a i AMSC-a. Nadalje, odobravaju kvalitetno uklanjanje hematopoetskih ćelija i izolaciju mezenhimskih matičnih ćelija iz masnog tkiva i BM tokom izolacije stromalnih ćelija.

3.2 In vitro citotoksičnost

Kolorimetrijski citotoksični test zasnovan na MTT primijenjen je da se ispita održivost BMSC ili AMSC nakon njihovog tretmana sa 10-30 i 35-45 nm ZnO NP tokom 1,2 i 3 dana (slika 3). Prema podacima prikazanim na slici 2, efekti dve različite veličine ZnO NP na BMSC ili AMSC su zavisili od doze i vremena. Pri dozi od 5 i 10 ug/ml, 10-30 i 35-45 nm ZnO NPs su ukazivale na dobru održivost za AMSC i BMSC, respektivno (slika 3). Nadalje, održivost AMSC i BMSC sa 35-45 nm ZnO NP je smanjena na način ovisan o dozi i vremenu pri istim koncentracijama (slika 3).

3.3. Test ćelijskog ciklusa

Efekti ZnO NP-a na distribuciju BMSC-a i AMSC-a u ćelijskom ciklusu proučavani su bojenjem propidijum jodidom i mjereni protočnom citometrijom. Kao što je prikazano na slici 4, AMSC i BMSC tretirani sa 10-30nm ZnO NP

pokazalo je da je omjer ćelija koje ulaze u GO/Gl fazu povećan (82,2 i 82.01 posto) u poređenju sa kontrolnom grupom (81,92 i 78,76 posto, respektivno). Kada signali koji pokreću proliferaciju dožive apoptozu ili nedostaju, ćelije imaju tendenciju povećanja G0/G1 [38].

Štaviše, u AMSC i BMSC tretiranim sa 10-30nm ZnO NP, G2/M faza se smanjila (7,38 i 9,98 posto receptivno) u poređenju sa kontrolnom grupom (10,04 i 13,47 posto), što ukazuje da su ćelije zaustavljene na S ćelijskog ciklusa i G2/M faze i nisu aktivno proliferirali (Sl.4). Međutim, analiza ćelijskog ciklusa 35-45 nm ZnO NP je pokazala povećanu akumulaciju ćelija G2/M faze u AMSC i BMSC (14,19 i 16,18 posto, receptivno) u poređenju sa kontrolnom grupom G2/M (10,04 i 13,47). procenat ), što ukazuje na usporavanje procesa ćelijskog ciklusa (slika 4). Kada je DNK oštećena, G2 kontrolna tačka inhibira mitozu ćelija i osigurava proliferaciju duplikata genoma bez grešaka na svaku ćeliju ćerku.

3.4 Galaktozidaza in situ test

Aktivnost enzima beta-galaktozidaze korištena je u ovom radu za provjeru efekta 10-30 i 35-45 nm ZnO NP na starenje BMSC i AMSC. Naši rezultati su pokazali da su ćelijske površine sa pozitivnim zelenim bojenjem češće uočene u grupi tretiranoj ZnO NP kod oba tipa matičnih ćelija pacova u poređenju sa kontrolnom grupom (Sl. 5A, B).

U normalnim ćelijama, kisele lizozomalne -galaktozidaze su proizvedene i sakupljene u lizozomu, kao što je uočeno u kontrolnim grupama. Ali u ćelijama starenja, lizozom se povećao i proizveo gornji nivo -galaktozidaze, nazvane -galaktozidaze povezane sa starenjem (SA- -}gal), što je otkriveno u ćelijama tretiranim ZnO NP (slika 5). Pozitivne ćelije SA-gal obojene su plavo-zelenom bojom pod mikroskopijom svijetlog polja. Obje tretirane ćelije bile su pozitivne u odnosu na kontrolne grupe. Najveća plavo-zelena boja je dobijena u AMSC sa 10-30nm ZnO NP (slika 5A).

3.5 PCR u realnom vremenu

Relativna ekspresija gena NF-kB, P53 i Nanog procijenjena je u odnosu na GAPDH kao gen za održavanje i na BMSC i na AMSC, koji su bili izloženi 5 i 10 ug/ml ZnO NP u 10-30 i 35-45 nm veličine, respektivno, nakon 48h. Rezultati ekspresije Nanog gena u ćelijama tretiranim sa 10-30 i 35-45 nm ZnO NP su značajno pokazali (P<0.01)lower regulation="" in="" the="" amscs="" (fig.6a)="" and="" bmscs="" in="" comparison="" with="" the="" control="" group="" (fig.="">

Ćelije tretirane 10-30nm ZnO NPs pokazale su nižu ekspresiju Nanog gena u poređenju sa ćelijama tretiranim sa

4 Diskusija

Ova studija je procijenila toksične efekte dvije veličine ZnO NP na BMSC i AMSC;10-30nm kao manju veličinu i 35-45nm kao veću veličinu. Rezultati su otkrili da manja veličina ZnO NP ima toksičniji učinak od njegove veće veličine. Zona površine i veličina čestica NP su značajni kvaliteti materijala sa toksikološkog gledišta. Kako se veličina čestica smanjuje, područje njegove površine se uzdiže i omogućava da se veći dio njegovih čestica ili atoma prikaže površno za razliku od unutrašnje strane materijala [39].

Nanomaterijali manji od 50 nm pokazuju jedinstvena fizičko-hemijska svojstva zbog svoje male veličine, velike površine, niske cijene, poboljšane reaktivnosti i lakog ulaska u ćelijske razdjelnike [40-42]. Prema rezultatima našeg MTT testa, optimalne i sigurne koncentracije proučavanih manjih i većih veličina ZnO NP bile su 5 odnosno 10 ug/ml u odnosu na kontrolnu grupu. Naša analiza ćelijskog ciklusa je pokazala da sigurne koncentracije ZnO NP veličine 10-30 nm imaju toksične efekte na AMSC smanjujući broj ćelija u S i GO/G1 fazama, što ukazuje na zaustavljanje procesa ćelijskog ciklusa i gubitak signala proliferacije pogona. ZnO NP veličine 35-45 nm smanjili su ćelije u G2/M i S fazama, što je rezultiralo usporavanjem procesa ćelijskog ciklusa.

Rezultati naše studije su u skladu sa rezultatima drugih studija koje su pokazale da NP-ovi mogu dovesti do smrti ćelije putem oštećenja DNK ili organela [43, 44]. Iako postoje ograničeni toksikološki izvještaji o utjecaju ZnO NP, postoji nekoliko izvještaja o citotoksičnim efektima ZnO NP in vitro [45-47]. Studija je pokazala da je oksidativni stres aktiviran u ćelijama TR146 sa koncentracijom ZnO NP od 10 ug/ml [48] i u ćelijama SH-SY5Y sa koncentracijom od 15 ug/ml [49]. Proinflamatorni citokin oslobođen u THP-1 ćelijama sa 17,69 ug/ml ZnO NP 【20】. Oštećenje DNK je takođe napravljeno pri koncentraciji ZnO NP-a od 6,4 ug/ml u ćelijama humanog karcinoma debelog creva [50] i pri koncentraciji od 12,5 ug/ml u epitelnim ćelijama bubrega pacova [51]. Kontakt s nanomaterijalima je neizbježan jer oni postaju dio naše svakodnevice; shodno tome, uzima se u obzir toksičnost istraživanja nanomaterijala [52]. Slika 9 ilustruje interakciju ZnO NP u ćeliji sisara. Određivanje senescentnih ćelija pokazalo je povećan nivo aktivnosti lizozomalne galaktozidaze [53]. Naši rezultati SA- -gal testa pokazali su da ZnO NP u manjim i većim veličinama (10-30 i 35-45 nm) stimuliraju ćelije da proizvode lizozom. Međutim, visoka plavo-zelena boja indukovana je visokim nivoom lizozoma u ćelijama izloženim 10-30 nm ZnO NP u poređenju sa kontrolnom grupom.

P53 djeluje kao kvalitet životnog vijeka izvrsnosti zbog svoje snažne aktivnosti prigušivača tumora i kontrolora starenja [54]. p53 može smanjiti i povećati oksidativni stres vjerojatno zbog svog dvostrukog efekta na starenje. Naši PCR rezultati u realnom vremenu su pokazali značajno pojačanu ekspresiju p53 i NF-kB gena u ćelijama izloženim obema veličinama ZnO NP. Međutim, najveća prekomjerna ekspresija ovih gena je otkrivena u ćelijama tretiranim manjom veličinom (10-30}nm) NP-a. Štaviše, nivo mRNA Nanog gena smatran je genom protiv starenja. Za Nanog gen, rezultati našeg istraživanja pokazali su značajnu smanjenje regulacije obje proučavane veličine ZnO NP u obje tretirane ćelije. Međutim, najniža regulacija u veličini 10-30nm ukazuje da ZnO NP mogu biti toksičniji u manjoj veličini nego u većoj (35-45 nm).

5 Zaključak

ZnO NP (10-30 i 35-45 nm) podstiču ćelije na proces starenja. Manja veličina ZnO NP ima više toksičnih efekata na sintezu DNK od veće veličine. Najveće bojenje -galaktozidazom uočeno je u manjoj veličini od veće veličine ZnO NP. Osim toga, značajna prekomjerna ekspresija gena povezanih sa starenjem (NF-kB i p53) dobijena je u ZnO NP ćelijama tretiranim s obje veličine. Nadalje, došlo je do značajne regulacije gena protiv starenja (Nanog) u ćelijama tretiranim ZnO NP.

Ovaj članak je preuzet iz Journal of Materials Science: Materials in Medicine (2021) 32:128https://doi.org/10.1007/s10856-021-06602-x