Ukupni glikozidi Cistanche Deserticola pospješuju oporavak neuroloških funkcija indukcijom neurovaskularne regeneracije putem Nrf- 2/Keap-1 puta kod MCAO/R pacova

Pozadina:

Tradicionalna kineska medicina Cistanche deserticola je prijavljena kao validna za kardiovaskularne i cerebrovaskularne bolesti. Međutim, njegove aktivne komponente za zaštitu od ishemijskog moždanog udara nisu jasne. Cilj nam je bio da istražimo aktivne komponente C. deserticola protiv ishemijskog moždanog udara, kao i njegove potencijalne mehanizme.

Metode:

Istraživali smo zaštitne efekte ekstrakata iz C. deserticola, ukupnih glikozida (TG), polisaharida (PS) i oligosaharida (OS) u modelu okluzije-reperfuzije srednje moždane arterije kod štakora (MCAO/R). 2, 3, 5-Bojenje trifeniltetrazolijum hloridom (TTC) korišteno je za procjenu volumena cerebralnog infarkta, a Evansov plavi test je usvojen za procjenu permeabilnosti krvno-moždane barijere (BBB). Zatim, izrazi CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap-1 i Nrf{{ 13}} su analizirani pomoću western blotinga ili imunofluorescencije, a aktivnosti MDA, SOD, CAT i GSH-Px su analizirane pomoću kompleta.

Rezultati:

Tretman TG-om značajno je smanjio rezultate neurološkog deficita i volumena infarkta, promovirao angiogenezu i neuralno remodeliranje i efikasno održavao integritet krvno-moždane barijere u poređenju sa modelnom grupom. Nadalje, TG su značajno smanjile nivoe MDA i povećale antioksidativne aktivnosti (SOD, CAT i GSH-Px) u mozgu. U međuvremenu, TG-ovi su značajno smanjili Keap-1 ekspresiju i olakšali Nrf{4}} nuklearnu translokaciju. Naprotiv, nisu uočeni zaštitni efekti za grupe PS i OS.

zaključak:

TG su glavne aktivne komponente C. deserticola protiv MCAO/indukovane cerebralne ozljede, a zaštita je uglavnom putem Nrf-2/Keap-1 puta.

KliknitePrirodni proizvod sa ekstraktom Cistanche Deserticola

UVOD

Moždani udari se smatraju glavnim uzrokom smrti i invaliditeta u svijetu (Donnan et al., 2008). Gotovo 87 posto svih slučajeva moždanog udara izazvano je ishemijskim moždanim udarom (Ovbiagele i Nguyen-Huynh, 2011.). Trenutno, najefikasnije sredstvo i jedini lijek koji je odobrila FDA za liječenje ishemijskog moždanog udara je rekombinantni tkivni aktivator plazminogena. Međutim, veliki broj pacijenata sa moždanim udarom ne reaguje na ovaj lijek, zbog njegovog uskog terapijskog vremenskog okvira i ozbiljnog rizika od hemoragijskih komplikacija (Lee et al., 2012; Schellinger i Kohrmann, 2014). Glavni izazov trombolitičkog liječenja je ishemijska/reperfuzijska (I/R) ozljeda, koja se smatra glavnim uzrokom ozljede mozga i destrukcije funkcije. Reperfuzija nakon cerebralne ishemije povećava rizik od krvarenja u mozgu dok dovodi do neurovaskularnih ozljeda i proizvodnje prekomjernih reaktivnih vrsta kisika (ROS) koje oštećuju krvno-moždanu barijeru (Alluri et al., 2015.). Nekoliko studija je potvrdilo da je poremećaj BBB glavni uzrok patogeneze ishemijskog moždanog udara (Cao et al., 2016b).

BBB se uglavnom sastoji od endotelnih ćelija, pericita, astrocita, neurona i bazalnih membrana. Osnovne komponente BBB-a su cerebralne mikrovaskularne endotelne ćelije koje su spojene čvrstim spojevima, ograničavajući tako egzogene molekule u mozak. Patološke promjene uskih spojeva—posebno okludin, claudin-5 i zonula occludens-1 (ZO-1)—značajno utiču na funkciju BBB tokom ishemijskog moždanog udara, posebno na propusnost barijere (Liu et. al., 2014.; Hu i sur., 2018.; Liu i sur., 2019.). Tokom I/R perioda, prekomjerni ROS je jedan od glavnih faktora koji dovode do direktnog oštećenja moždanih neurona (Ding et al., 2014). Prekomjerna proizvodnja ROS-a dovodi do degradacije određenih spojeva i poremećaja BBB-a, što dovodi do toga da egzogeni molekuli ulaze u mozak kroz BBB, što dovodi do pogoršanja oštećenja mozga (Cheon et al., 2016.; Zhang QY et al., 2017.). Stoga se zaštita BBB antioksidansima smatra potencijalnim načinom za sprječavanje reperfuzijskih ozljeda.

Osim razgradnje BBB-a, I/R može dovesti do neurovaskularnih ozljeda i neuronske smrti (Jung et al., 2010). Tokom moždanog udara, povećana smrt neuronskih ćelija može biti rezultat oksidativnog stresa (Chi et al., 2018), a brojne studije su pokazale da ROS pogoršava težinu moždanog udara i neurološka oštećenja (Kondo et al., 1997; Crack et al., 2001; Crack et al., 2006). Iako klinička ispitivanja nisu dala zadovoljavajuće rezultate, neuroprotekcija je i dalje obećavajuća strategija za liječenje akutnog ishemijskog moždanog udara (Moretti et al., 2015). Stoga je pronalaženje učinkovitih neuroprotektivnih lijekova za liječenje moždanog udara korist za pacijente s moždanim udarom.

Tradicionalna kineska medicina (TCM) poduzima mjere kako bi intervenirala protiv unutrašnje neravnoteže tijela (Gaire, 2018). Zbog složene patogeneze ishemijskog moždanog udara, multifaktorski učinak TCM i njegovih aktivnih sastojaka igra ključnu ulogu u liječenju moždanog udara. Cistanche deserticola YC Ma, rasprostranjena u sušnim ili polusušnim područjima širom Mongolije i sjeverozapadne Kine, bila je široko korištena TCM biljka za liječenje raznih bolesti kao što su zaboravnost i depresija više od 1,000 godine u Kini . Moderne farmakološke studije su pokazale da su sirovi ekstrakti iz C. deserticola pokazali višestruke farmakološke aktivnosti, kao što su poboljšanje funkcije učenja i pamćenja, neuroprotekcija, jačanje imuniteta, antioksidansi, efekti protiv starenja i umora (Ko i Leung, 2007; Wang et al. , 2012; Li et al., 2015). Hemijska analiza C. deserticola je pokazala da njeni glavni sastojci uključuju feniletanoidne glikozide, iridoidne glikozide, polisaharide i oligosaharide (Jiang i Tu, 2009). Međutim, aktivne komponente C. deserticola za zaštitu mozga nisu sasvim jasne.

Neuroprotektivna svojstva C. deserticola impliciraju njen terapeutski potencijal kod kognitivnih bolesti kao što su moždani udar i depresija, kao i Alchajmerova bolest (Wang et al., 2017). Međutim, istraživanja o utjecaju C. deserticola na moždani udar, uključujući njegove aktivne komponente i mehanizme djelovanja, vrlo su ograničena.

U ovom radu istražili smo zaštitni učinak tri ekstrakta iz C. deserticola, ukupnih glikozida (TG, feniletanoidnih glikozida i drugih glikozida), polisaharida (PS) i oligosaharida (OS) na cerebralne I/R ozljede. Naši nalazi mogu doprinijeti preciznoj kliničkoj primjeni C. deserticola i pružiti lijek kandidata za terapiju ishemijskog moždanog udara.

MATERIJALI I METODE

Hemikalije i reagensi

Stabljike Cistanche deserticola su kupljene iz Alashana, Unutrašnja Mongolija, i identifikovane od strane jednog od autora (P.-F. Tu). TG, PS i OS pripremljeni su prema našoj prethodno objavljenoj metodi (Gao et al., 2015). Kvantitativna analiza TG izvršena je tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC) kako je prethodno opisano (Li et al, 2019), a njen kromatogram je prikazan na slici 1. Glavne komponente TG su ehinakozid, tubulozid A, akteozid, izoakteozid, i 2'-acetilakteozid; njihov sadržaj je 163,05 mg/g, 4,125 mg/g, 41,66 mg/g, 22,655 mg/g, odnosno 12,045 mg/g. Sadržaj PS i OS je 69,42 posto i 65,24 posto, respektivno, kako je utvrđeno HPLC i analizom fenol-sumporna kiselina (Zhang A. et al., 2018; Shi et al, 2019).

Standardne reference ehinakozida (A0282), tubulozida A (A0942), akteozida (A0280), izoakteozida (A0281) i 2'-acetilakteozida (A0943) kupljene su od Chengdu Must Biotechnology (Sichuan, Kina). Čistoća svih standarda je više od 98 posto. Nissl Stain H&E kompleti su kupljeni od Bostera (Wuhan, Kina). Edaravone (T0407-1) ​​je kupljen od Target Mola (Šangaj, Kina). Kupljeni su zečji anti-pacovski MAP-2 (ab32454), Nrf-2 (ab31163), PDGFRb (ab32570), Keap-1 (ab66620) i miš CD31 protiv pacova (ab24590) iz Abcam Inc (Cambridge, MA, SAD). Zečji antipacov Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M) i Occludin (BS72035) kupljeni su od Bioworld Technology (Nanjing, Kina). Cell Signaling Technology Inc. (Boston, MA, SAD) je bio izvor zečjeg anti-pacova Synapsina-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-Smooth Muscle Actina (a-SMA,19245T). GAPDH (HRP-60004) je kupljen od Proteintech Group, Inc. (Čikago, SAD).

Sekundarna antitijela su isporučena od Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Peking, Kina). Hoechst 33258 je nabavljen od Beyotime (Jiangsu, Kina).

Životinje

Sprague-Dawley pacovi (mužjaci, težine 250-300 g) su dobijeni od Vital River Laboratory Animal Technology (Peking, Kina) i smješteni u klimatiziranoj prostoriji koja je držana u ciklusu svjetlo/mrak od 12 sati. Svi eksperimenti na životinjama izvedeni su prema smjernicama ARRIVE istraživanja na životinjama (Kilkenny et al., 2010; McGrath et al., 2010), a odobreni su od strane Institucionalnog odbora za negu i upotrebu životinja pri Univerzitetskom zdravstvenom centru Pekinga (LA2019123).

Eksperimentalni protokoli na životinjama

Pacovi su podvrgnuti MCAO/R, kao što je prethodno opisano (Wang et al., 2018). Ukratko, otkrivena je lijeva zajednička karotidna arterija (CCA), vanjska karotidna arterija (ECA) i unutrašnja karotidna arterija (ICA), a 3-0 najlonski monofilamentni šav je umetnut iz ECA u ICA do sredine cerebralna arterija (MCA). Nakon 1,5 h MCA okluzije, reperfuzija je simulirana uklanjanjem filamenta. Tokom hirurškog zahvata, telesna temperatura svih pacova održavana je na 37,0 stepeni.

Uprava za lijekove

Pacovi su nasumično podijeljeni u šest grupa korištenjem SPSS softvera verzije 22.0 kako je opisano (Jiang et al., 2014): normalna grupa (NOR); grupa modela (MOD); grupa edaravona (pozitivan lijek, 6 mL/kg, EDI); TG grupa (280 mg/kg, TG); PS grupa (280 mg/kg, PS) i OS grupa (280 mg/kg, OS). TG, PS i OS su davani jednom dnevno nakon MCAO/R tokom 14 dana. Grupe NOR i MOD tretirane su normalnom fiziološkom otopinom. Broj životinja prikazan je u tabeli 1.

Mjerenje težine i modificiranog neurološkog deficita (NSS)

Telesna težina je praćena 14. dana pomoću ADVENTURE™ digitalne vage (OHAUS, New Jersey, SAD). Masa je procijenjena prema metodi koju je opisao FJ Wang (Wang et al., 2018), uz manje izmjene.

2, 3, 5-Bojenje trifeniltetrazolijum hloridom (TTC)

Volumen infarkta je mjeren kako je prethodno opisano (Wang et al., 2015). Ukratko, mozgovi su podijeljeni u sedam jednako raspoređenih koronalnih blokova (2 mm). Ovi preseci su obojeni sa 2% TTC (Coolaber, Peking, Kina) na 37 stepeni tokom 15 minuta. Volumen infarkta ( posto )=(volumen ipsilateralne ishemijske hemisfere − zapremina kontralateralne ishemijske hemisfere)/volumen kontralateralne ishemijske hemisfere × 100.

Nissl i H&E bojenje

Pacovi su duboko anestezirani, a cijeli mozak je zatim brzo uklonjen iz lubanje i fiksiran korištenjem 4 posto paraformaldehida i ugrađen u parafinski vosak, te izrezan na kriške debljine 7 µm. Isječci su obojeni Nisslom i H&E. U ovoj studiji, šest nasumičnih polja 200 × 200 µm je uhvaćeno u svakom uzorku tkiva svjetlosnim mikroskopom. Broj Nisslovih tijela prebrojan je pomoću IPP softvera verzije 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, SAD).

Evans Blue Assay

Pacovima je ubrizgan 2 posto EB (Coolaber Science & Technology Co., LTD) nakon MCAO/R. Dva sata kasnije, pacovi su anestezirani, a cijeli mozak je zatim brzo uklonjen i homogeniziran u acetonu. Supernatanti su analizirani na 620 nm pomoću čitača apsorbancije 800 TS (BioTek, SAD).

Mjerenje aktivnosti katalaze (CAT), superoksid dismutaze (SOD), malondialdehida (MDA) i glutation peroksidaze (GSH-Px)

Svi uzorci seruma su centrifugirani na 4,000 × rpm 15 minuta na 4 stepena, a zatim analizirani da bi se otkrile aktivnosti MDA, CAT, SOD i GSH-Px prema uputama proizvođača (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd, Kina).

Western blotting analiza

Tkiva mozga (100 mg) prikupljena od svakog štakora su homogenizovana i lizirana u RIPA puferu za lizu, a zatim analizirana da bi se detektovala koncentracija proteina korišćenjem BCA kompleta (Beijing TransGen Biotech Co., Ltd.). Ukupni proteini tkiva su napunjeni na 10 posto SDS-PAGE gelova i prebačeni na nitroceluloznu membranu. Membrana je blokirana korištenjem 5 posto obranog mlijeka, a zatim inkubirana preko noći s primarnim antitelima na 4 stepena. Membrana je zatim inkubirana sa sekundarnim antitelom. Western blot analiza je analizirana korišćenjem Kodak Digital Imaging System (5200 Multi, Tanon, Kina).

Imunofluorescentna analiza

Urađeno je imunofluorescentno bojenje za CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, okludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2 i Keap-1. Primarna antitijela protiv Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2 i Keap{15}} razrijeđena su do 1 :200 i 1:100, respektivno. Sekundarna antitela Alexa Flur 488 mišjeg anti-zečjeg IgG i rodaminskog (TRITC) kozjeg anti-zečjeg IgG-a su oba razblažena do 1:200. Jezgra su obojena Hoechst 33258. Slike su snimljene korišćenjem Vectra® Polaris™ automatizovanog kvantitativnog sistema za slikanje patologije (PerkinElmer, SAD). Ekspresija proteina je analizirana korištenjem IPP softvera verzije 6.0.

Statistička analiza

Svi podaci su opisani kao srednja vrijednost ± SD. SPSS softver verzija 22.0 je izvršen za statističku analizu. Jednosmjerna ANOVA je korištena prilikom poređenja različitih grupa. P < 0.05 se smatra statističkom razlikom.

REZULTATI

TG povećavaju tjelesnu težinu i smanjuju oštećenja mozga kod MCAO/R pacova

Nakon 14 dana izlječenja sa TG, PS, Oss i EDI, procijenjene su tjelesne težine, neurološki deficiti i volumeni infarkta I/R pacova. Rezultati su pokazali da je tjelesna težina u MOD grupi značajno smanjena, dok je smanjena težina u grupama TG, PS i EDI povećana (Slika 2A). Rezultati neurološkog deficita su značajno smanjeni EDI i TG (Slika 2B). Rezge mozga u pacovima NOR grupe bile su tamno crvene i nije bilo infarkta, dok su štakori iz grupe MOD pokazali veliki ipsilateralni cerebralni infarkt. Nakon tretmana TG, volumen infarkta je značajno smanjen (Slike 2C, D). Tretman PS i OS nije pokazao očigledan učinak na gore navedene indekse. Gore navedeni podaci su pokazali da TG mogu značajno ublažiti cerebralnu ozljedu izazvanu I/R, ali PS i OS ne mogu.

TG ublažavaju histopatološka oštećenja kod MCAO/R pacova

Da bi se utvrdili neki od efekata tretmana TG, PS i OS na histopatološka oštećenja, H&E bojenje je urađeno kako bi se otkrila patološka oštećenja. Histomorfološke strukture mozga u NOR grupi su redovno raspoređene. Morfološke promjene u TG grupama bile su manje od onih u MOD grupi. Međutim, grupe za liječenje PS i OS nisu pokazale značajno poboljšanje morfoloških promjena (Slika 3).

TGs ublažavaju neuronske ozljede nakon I/RI indukovanih pacova

Nisslovo bojenje je pokazalo histopatološke promjene neurona u polusjeni ishemijskog područja. Kao što je prikazano na slici 4, normalni neuroni su imali jasnu nukleolu i netaknutu strukturu. U MOD grupi, neuroni su imali povećane međućelijske prostore. Lijepa tijela su nestala, smežurana i duboko umrljana. Međutim, ove promjene su rijetko uočene u grupama EDI, TG i PS. Ovi rezultati su ilustrirali da TG i PS mogu značajno umanjiti oštećenje neurona izazvano ishemijom/reperfuzijom.

TGs ublažavaju poremećaj BBB-a nakon I/RT tretiranih pacova

Evansov plavi test je klasična metoda za istraživanje promjene permeabilnosti BBB-a. Rezultati eksperimenta su pokazali da je povećana Evans plava uočena u MOD grupi, dok je značajno smanjena Evans plava kod pacova tretiranih TGs i EDI. Štaviše, nije bilo značajne razlike između PS i OS terapijskih grupa (Slika 5). Ovi rezultati sugeriraju da TG mogu značajno umanjiti BBB poremećaj.

TG promovišu angiogenezu kod I/R povrijeđenih pacova

Novije studije pokazuju da angiogeneza igra ključnu ulogu u neurološkom funkcionalnom oporavku i prognostičkim ishodima nakon akutnog ishemijskog moždanog udara (Yuen et al., 2015). Za procjenu efekata TG, PS i OS na angiogenezu, CD31 i a-SMA su korišteni za kvantifikaciju kapilarnih brojeva. Imunofluorescentno bojenje je pokazalo da je MOD grupa izazvala značajno smanjenje ekspresije CD31 (Slike 6A, B) i aSMA (Slike 6C, D) u polusjeni ishemijskih područja I/R pacova, u poređenju sa normalnim pacovima. Ovaj rezultat je pokazao da I/R može uzrokovati vaskularno oštećenje u polusjeni korteksa ishemijskih hemisfera. Međutim, tretman TGs i EDI značajno je povećao gustoću kapilara, angiogenezu i arteriogenezu na što ukazuje povećana ekspresija CD31 i a-SMA. Ovi rezultati sugeriraju da bi TG mogli promovirati angiogenezu u ishemijskoj polusjeni I/R štakora, ali PS i OS ne bi mogli.

TG povećavaju ekspresiju proteina čvrstog spoja kod I/R ozlijeđenih pacova

Poremećaj BBB-a može povećati sadržaj vode u mozgu i oticanje tkiva, što dovodi do ozljede mozga. Proteini čvrstog spoja su važne strukturne komponente BBB (Tenreiro et al., 2016; Jiang et al., 2018). Da bi se testiralo da li tretman TG, PS i OS nakon moždanog udara može uticati na integritet BBB, imunofluorescentnom analizom izvršeni su izrazi ZO-1, claudin-5 i okludina. Rezultati su pokazali da su izrazi claudin-5, occludin i ZO-1 bili vidno smanjeni u MOD grupi. Međutim, oni su značajno povećani nakon 14 dana njegove primjene. Grupe PS i OS nisu pokazale značajne promjene u ekspresiji ovih proteina (Slika 7). Ovi podaci su pokazali da TG mogu regulisati ekspresiju proteina tesnog spoja i održati integritet BBB nakon I/R ozljede.

TG povećavaju pokrivenost pericitima na kapilarama kod I/R povrijeđenih pacova

Pokrivenost kapilarima pericitima igra ključnu ulogu u održavanju integriteta BBB (Armulik et al., 2010; Daneman et al., 2010). Stoga smo testirali da li se pokrivenost pericitima može povećati tretmanom TG, PS i OS. Rezultati analize intenziteta imunofluorescencije pokazali su da su ekspresije i PDGFRb i CD31 dramatično smanjene u MOD grupi. Davanje TG-a I/R štakorima značajno je oporavilo ili čak povećalo intenzitet ekspresije PDGFRb i CD31, ali nije uočena razlika u grupama koje su tretirane PS i OS (Slika 8). Stoga bi tretman TG mogao značajno povećati pokrivenost pericitima. Ovi nalazi su dalje potvrdili da TG mogu održati integritet BBB nakon I/R.

TG-ovi promovišu neuronsko remodeliranje kod I/R ozlijeđenih pacova

Prema brojnim studijama, neurogeneza nakon moždanog udara može značajno poboljšati funkcionalni oporavak (Grefkes i Ward, 2014; Zhang et al., 2019). Sinaptofizin (SYN), proteini postsinaptičke gustine 95 (PSD-95) i protein 2 povezan s mikrotubulama (MAP-2) korišteni su kao markeri za ispitivanje neuronske plastičnosti u ishemijskoj polusjeni korteksa. Da bi se procijenili efekti tretmana TG, PS i OS na neurogenezu kod I/R povrijeđenih pacova, izvršena je imunofluorescencija i western blot za SYN, PSD95 i MAP-2 ekspresije. Kao što je prikazano na slikama 9 i 10, nivoi ekspresije SYN, PSD95 i MAP{12}} kod I/R štakora nakon 14 dana reperfuzije su se smanjili u poređenju sa NOR štakorima, dok bi izlječenje TGs i PSs moglo značajno povećati- regulišu nivoe njihove ekspresije. Grupa OS nije imala značajne promjene u poređenju sa grupom MOD. Podaci su pokazali da je TGs i PSs lijek bio u stanju dramatično promovirati neuronsko remodeliranje nakon I/R ozljede.

TGs Alter Nrf-2 i Keap{1}} ekspresije kod I/R ozlijeđenih štakora

Oksidativni stres je glavni patogeni mehanizam u I/R ozljedi (Ya et al., 2018; Yu et al., 2018). Studije su potvrdile da je Nrf-2 glavni regulator antioksidativnih odgovora (Thompson et al., 2015). Da bismo istražili oksidativne odgovore posredovane Nrf-2 i Keap-1 nakon I/R ozljede, procijenili smo citoplazmatsku ekspresiju kao i nuklearnu translokaciju Keap-1. U međuvremenu, ekspresija Nrf-2 u moždanim tkivima pacova povređenih I/R je takođe analizirana (Slike 10 i 11). Prema imunofluorescentnoj analizi, utvrđeno je da se Nrf-2 uglavnom nalazi u citoplazmi u NOR grupi. U grupi TGs, ekspresija Nrf-2 u citoplazmatskoj lokalizaciji je smanjena, ali povećana u jezgru, a također je uočena smanjena Keap{12}} ekspresija. Podaci su pokazali da se zaštita mozga TG može povezati sa modulacijom Nrf-2 i Keap-1.

TGs ublažavaju oksidativni stres moždanog tkiva kod I/R ozlijeđenih štakora

Da bi se potvrdili antioksidativni efekti TG, aktivnosti SOD, CAT, GSH-Px i MDA su procijenjene kod I/R povrijeđenih pacova. Na slici 12, sadržaj MDA je značajno povećan u MOD grupi, a istovremeno je smanjena aktivnost SOD, CAT i GSH-Px u odnosu na normalne pacove. Suprotno tome, tretman TG je doveo do značajnog smanjenja sadržaja MDA i povećanja aktivnosti SOD, CAT i GSH-Px. Ovi rezultati su dodatno potvrdili antioksidacionu aktivnost TG.

DISKUSIJA

Mnoga istraživanja sugeriraju da TCM C. deserticola ima opsežne biološke aktivnosti, npr. poboljšava sposobnost učenja, pamćenja i imuniteta (Dong et al., 2007.; Jiang i Tu, 2009.; Wang et al., 2017.; Xia et al., 2018). Međutim, aktivne komponente C. deserticola za neuroprotekciju ostaju nejasne. Trenutni rad ima za cilj ispitivanje aktivnih komponenti iz C. deserticola protiv ishemijskog moždanog udara na MCAO/R modelu. Tri ekstrakta iz C. deserticola (TG, PS i OS) korištena su za procjenu njihovog djelovanja na MCAO/R pacove, kao i mogućih mehanizama. Moždani udar je uobičajena akutna cerebrovaskularna bolest. Epidemiološke studije pokazuju da je moždani udar češći kod muškaraca nego kod žena (Sealy-Jefferson et al., 2012; Guzik i Bushnell, 2017).

Tako su u našem eksperimentu za testove usvojeni mužjaci pacova. Naši rezultati su dokazali da indukcija I/R ubrzava oksidativni stres i volumen infarkta, razbijajući BBB i dovodi do ozljeda živaca i cerebrovaskularnih bolesti. Nakon skrininga, utvrđeno je da TG smanjuju volumen infarkta i potiču neuralno remodeliranje i angiogenezu. Štaviše, uočeno je da TG održavaju integritet BBB nakon I/R ozljede. Naprotiv, PS i OS ne ublažavaju značajno I/R ozljede. Stoga se TG-ovi smatraju glavnom aktivnom frakcijom C. deserticola za neuroprotekciju, potencijalno kroz promoviranje neuralnog remodeliranja, angiogeneze i integriteta BBB putem aktiviranja Nrf2/Keap-1 puta.

Sve veći dokazi pokazuju da je uspostavljanje efikasne kolateralne cirkulacije značajno važno za izbjegavanje formiranja infarkta i ishemijske polusjenice, te je kritičan tretman u ranoj fazi ishemijskog moždanog udara (ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016). Proliferacija vaskularnih endotelnih ćelija i glatkih mišićnih ćelija nakon ishemijskog infarkta određuje uspostavljanje kolateralne cirkulacije.

Međutim, modeli ishemije imaju zajednički fenomen - to jest, oksidativni stres široko je postojao u mikrovaskulaturi mozga. Podaci istraživanja su pokazali da veliki broj antioksidanata može poremetiti funkciju BBB i svojstva angiogeneze (Mentor i Fisher, 2017). CD31 i a-SMA su markeri vaskularnih endotelnih ćelija, kao i ćelija glatkih mišića (Saboor et al., 2016). Da bismo istražili učinak gore spomenute ćelijske proliferacije ekstrakata iz C. deserticola, ispitali smo ekspresiju CD31 i a-SMA u cerebralno ishemijskom penumbra homogenatu. Naši podaci su pokazali da TG upadljivo pojačavaju ekspresiju CD31 i a-SMA. Međutim, nije bilo značajnih razlika između PS i OS grupa. Stoga smo zaključili da TG mogu smanjiti oštećenje mozga promicanjem angiogeneze povećanjem ekspresije CD31 i a-SMA, dok PS i OS ne pružaju takvu zaštitu od oštećenja mozga. Ovi rezultati su dalje potvrdili da samo TG mogu spriječiti cerebralnu I/R ozljedu.

Ishemijski moždani udar može se smatrati rezultatom cerebralne ishemije uzrokovane oštećenjem neuronske plastičnosti ili remodeliranjem područja mozga. Većina pacijenata sa moždanim udarom pati od neuroloških deficita. Aktiviranje neurogeneze je obećavajuća strategija za pacijente s moždanim udarom za poboljšanje njihovih neuroloških funkcija (Cramer i Chopp, 2000). Neurogeneza direktno sudjeluje u oporavku neuroloških funkcija nakon I/R ozljede mozga (Zhang et al., 2019). Prethodna istraživanja pokazuju da TG mogu poboljšati stopu preživljavanja hipokampalnih piramidalnih stanica i inducirati neurogenezu (Lian et al., 2017). Oksidativni stres uzrokuje gubitak neurona tokom mnogih bolesti, kao što su Parkinson, moždani udar i tako dalje (Duan i Si, 2019; Singh et al., 2019). Nrf-2 transkribuje mnogo gena povezanih sa neuro-zaštitom u njihovoj promotorskoj regiji, uglavnom uključujući SOD, MDA, CAT i glutamil cistein ligaze, itd (Satoh et al., 2006). SYN, PSD-95 i MAP-2 proteini, koji su blisko povezani sa sinaptičkim formiranjem i neurotransmisijom, mogu se smatrati markerima istraživačke neuronske plastičnosti u regiji ishemijske polusjenice. Nakon proučavanja, otkrili smo da lijek sa TG može značajno povećati ekspresiju PSD95, SYN i MAP-2, što ukazuje da je cerebralna zaštita TG-a u korelaciji sa poboljšanom plastičnošću neurona tokom I/R. Međutim, šteta je što ne postoji očigledna razlika između PS-a i OS grupa. Ovi rezultati su pokazali da TG mogu povećati neuroplastičnost nakon cerebralne I/R ozljede.

Snimanje pacijenata sa moždanim udarom pokazalo je da se disfunkcija BBB može smatrati upečatljivim atributom per ishemijskog mozga (Bang et al., 2007). TJ, koji se sastoje od citoplazmatskih proteina, transmembranskih proteina i spojnih adhezionih molekula između kapilarnih endotelnih ćelija, vrlo su važni u održavanju integriteta BBB (Ye et al., 2019). Među njima, ZO-1, claudin-5 i okludin su najvažniji proteini u TJ. Sve više dokaza ukazuje na to da povećana permeabilnost BBB izazvana ishemijom generalno korelira sa promenama ZO-1, claudin-5 i okludina (Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu et al., 2017.; Liu et al., 2018.).

U ovom radu, rezultati su pokazali da iako TG mogu značajno povećati ekspresiju proteina ZO-1, claudin-5 i okludina u moždanim tkivima izazvanim MCAO, ni PS ni OS to nisu učinili. BBB se sastoji od cerebralnih endotelnih ćelija i usko je povezan sa pericitima (Nyul-Toth et al., 2016). Periciti su vitalni za integritet BBB (Bell et al., 2010). Ishemijski moždani udar izaziva smrt pericita i odvajanje od endotelnih stanica mozga u akutnoj fazi, destabilizirajući tako mikrovaskulaturu i mijenjajući svojstva BBB (Zechariah et al., 2013). Naši podaci su pokazali da TG mogu povećati pokrivenost pericita na kapilarama i povećati nivoe ekspresije ZO-1, claudin-5 i okludina. Ovi fenomeni su dokazali da TG mogu efikasno zaštititi integritet BBB nakon cerebralne I/R ozljede. Ukratko, TG mogu ublažiti cerebralne ozljede na više načina, kao što je promoviranje angiogeneze, poboljšanje plastičnosti neurona i održavanje integriteta BBB.

Zatim smo istražili signalni put kako bismo istražili mehanizam koji leži u osnovi zaštite TG mozga. Proces I/R ozljede je multifaktorski, te su stoga brojni mehanizmi uključeni u patogenezu. Oksidativni stres je osnovni faktor rizika koji doprinosi I/R-induciranoj ozljedi mozga (Suda et al., 2013.), kao što je oštećenje BBB strukture, disfunkcija vaskularnog endotela i pogoršanje ishemijske ozljede neurona (Xiong et al., 2015.; Caglayan et al., 2019.; Priestley et al., 2019.).

Stoga je oksidativni stres postao atraktivna terapijska meta kod ozljeda mozga uzrokovanih I/R. Enzimi faze 2, koji su posredovani nuklearnim faktorom E2-faktorom povezanim-2 (Nrf-2), smatraju se važnim sredstvom pomoću kojeg se neuroni štite od oksidativnog stresa (Suzuki i Yamamoto , 2015; Ya et al., 2018). Sve više dokaza ukazuje da je aktivacija Nrf-2 tokom I/R potencijalna terapijska meta za neuroprotekciju (Ding et al., 2015; Zhang R. et al., 2017). Nrf-2, kao važan regulator endogene antioksidativne odbrane, posreduje u nivou heme oksigenaze 1 (HO-1) i drugih antioksidativnih enzima, kao što je NAD(P)H kinon oksidoreduktaza 1 (NQO1), SOD, CAT, GSH i MDA (Siow et al., 2007; Ding et al., 2014). Štaviše, Nrf-2 igra važnu regulatornu ulogu u angiogenezi. Ova studija pokazuje da se Nrf-2 može značajno poboljšati i aktivirati u procesu vaskularnog razvoja (Wei et al., 2013).

Kao što je prethodno opisano (Jiang i Tu, 2009.), TG sadrže mnogo bioaktivnih spojeva, na primjer, ehinakozid, tubulozid A, akteozid, izoakteozid i 2'-acetilakteozid, a neki od njih su pokazali neuroprotektivne funkcije nakon cerebralne I/R ozljede ( Peng et al., 2016.). Ehinakozid ima mnogo farmakoloških efekata, kao što su antioksidacija, anti-senescencija, neuroprotekcija, anti-inflamacija, promocija cikatrizacije, hepatoprotekcija, promocija formiranja kostiju i antitumorske aktivnosti (Yu et al., 2016; Li et al., 2018; Zhang Y. et al., 2018; Ji i sur., 2019; Xu et al., 2019).

Nedavno je ehinakozid identifikovan kao moćan antioksidans u centralnom nervnom sistemu (Lu et al., 2016). Ehinakozid može smanjiti sadržaj MDA i poboljšati aktivnosti SOD i GSHPx kod ishemijske ozljede mozga, a molekularna analiza je pokazala da se ehinakozid može vezati za Keap-1, što dovodi do nuklearne translokacije Nrf-2 (Li et al., 2018). Studija Xia je pokazala da akteozid može smanjiti volumen infarkta i sadržaj vode u mozgu kako bi poboljšao neurološke deficite kod MCAO/R pacova ublažavanjem oksidativnog stresa (Xia et al., 2018). Druge studije su pokazale da izoakteozid može povećati aktivnosti ćelijskih antioksidativnih enzima, SOD i CAT u V79-4 ćelijama tretiranim H2O2-(Chae et al., 2005). Na osnovu gornjih izvještaja o aktivnim spojevima sadržanim u TG, moguće je zaključiti da bi TG mogli zaštititi od ishemijskog moždanog udara putem antioksidacijskih puteva.

Izvijestio sam o neuroprotektivnim efektima feniletanoidnih glikozida (PhG) na H2O2-indukovanu apoptozu na PC12 stanicama putem Nrf2/ARE puta (Li et al., 2018). Ovi PhG su značajno potisnuti pokretanjem nuklearne translokacije Nrf2 i povećanjem ekspresije HO-1, NQO1, katalitičke podjedinice glutamat-cistein ligaze (GCLC) i podjedinice modifikatora glutamat-cistein ligaze (GCLM) (Li et al., 2018). ; Gong et al., 2019.).

Stoga, ovi nalazi sugeriraju da put Nrf-2/ARE igra ključnu ulogu u zaštitnim efektima posredovanim PhGs na neuronske ćelije. Slično, u ovoj studiji smo otkrili da TG mogu smanjiti nivo MDA i povećati nivoe SOD, CAT i GSH-Px kod I/R štakora. U međuvremenu, TG bi mogli povećati ekspresiju Nrf2 u jezgru, smanjiti odgovarajuću ekspresiju u citoplazmi i značajno smanjiti ekspresiju Keap-1. Stoga, put Nrf-2/Keap-1 može biti uključen u neuroprotektivne efekte posredovane TG. Dalja validacija ovog puta bi se izvršila in vitro ćelijskom kulturom sa modelima oštećenja deprivacije kiseonika i glukoze/reoksigenacije u budućnosti. Štaviše, ekstrakti C. deserticola su davani u našoj studiji 14 dana u kontinuitetu. Pošto bi neurogeneza odraslih uticala na tumačenje neuroprotektivnih efekata tokom 14 dana reperfuzije, neurogeneza se ne može isključiti iz našeg trenutnog dizajna eksperimenta u istraživanju neuroprotektivnog efekta CT-a. Ovo je ograničenje našeg istraživanja.

U zaključku, TG iz C. deserticola mogu poboljšati angiogenezu i neurogenezu, kao i održati integritet BBB kod pacova sa I/R ozljedom, ali ne i PS i OS. Efekti bi mogli biti posredovani aktivacijom Nrf-2/Keap-1 puta.

IZJAVA O DOSTUPNOSTI PODATAKA

Sirove podatke koji podržavaju zaključke ovog članka autori će, bez nepotrebne rezerve, staviti na raspolaganje svakom kvalifikovanom istraživaču.

ETIČKA IZJAVA

Ovaj rad je obavljen u skladu sa Smjernicama za eksperimente na životinjama Pekinškog univerziteta. Protokole studije je odobrio Institucionalni komitet za negu i upotrebu životinja pri Univerzitetu u Pekingu (LA2019123).

DOPRINOSI AUTORA

YJ, KZ i PT dizajnirali su istraživanje. FW je izvršio istraživanje. FW i RL su analizirali podatke. FW, RL i JC napisali su rukopis i HPLC analizu. JC, KZ, YJ i PT revidirali su rukopis.

FINANSIRANJE

Ovu studiju podržali su Nacionalni ključni istraživački i razvojni projekat (2017YFC1702400, 2019YFC1711000), Nacionalna fondacija za prirodne nauke Kine (81773932) i Nacionalni program za istraživanje i razvoj ključnih tehnologija u Kini (2018ZX{6}} ).

REFERENCE

Alluri, H., Anasooya Shaji, C., Davis, ML, i Tharakan, B. (2015). Deprivacija glukoze kisikom i reoksigenacija kao in vitro model ishemijsko-reperfuzijske ozljede za proučavanje disfunkcije krvno-moždane barijere. J. Vis. Exp. 99, e52699. doi: 10.3791/52699

Armulik, A., Genove, G., Mae, M., Nisancioglu, MH, Wallgard, E., Niaudet, C., et al. (2010). Periciti regulišu krvno-moždanu barijeru. Nature 468 (7323), 557–561. doi: 10.1038/nature09522

Bang, OY, Buck, BH, Saver, JL, Alger, JR, Yoon, SR, Starkman, S., et al. (2007). Predviđanje hemoragijske transformacije nakon rekanalizacijske terapije pomoću T2*-permeabilnostne magnetne rezonancije. Ann. Neurol. 62 (2), 170–176. doi: 10.1002/ana.21174

Bell, RD, Winkler, EA, Sagare, AP, Singh, I., LaRue, B., Deane, R., et al. (2010). Periciti kontroliraju ključne neurovaskularne funkcije i neuronske fenotipove u mozgu odraslih i tijekom starenja mozga. Neuron 68 (3), 409–427. doi: 10.1016/j.neuron.2010.09.043

Caglayan, B., Kilic, E., Dalay, A., Altunay, S., Tuzcu, M., Erten, F., et al. (2019). Alil izotiocijanat ublažava oksidativni stres i upalu modulacijom Nrf2/HO-1 i NF-kappaB puteva kod traumatskih ozljeda mozga kod miševa. Mol. Biol. Rep. 46 (1), 241–250. doi: 10.1007/s11033-018-4465-4

Cao, G., Jiang, N., Hu, Y., Zhang, Y., Wang, G., Yin, M., et al. (2016a). Ruskogenin ublažava disfunkciju krvno-moždane barijere izazvanu cerebralnom ishemijom supresijom TXNIP/NLRP3 aktivacije inflamasoma i MAPK puta. Int. J. Mol. Sci. 17 (9), 1–17. doi: 10.3390/ijms17091418

Cao, G., Ye, X., Xu, Y., Yin, M., Chen, H., Kou, J., et al. (2016b). Injekcija praha YiQiFuMai poboljšava disfunkciju krvno-moždane barijere i edem mozga nakon fokalne cerebralne ishemije-reperfuzijske ozljede kod miševa. Drug Des. Dev. Ther. 10, 315–325. doi: 10.2147/dddt.S96818

Chae, S., Kim, JS, Kang, KA, Bu, HD, Lee, Y., Seo, YR, et al. (2005). Antioksidativna aktivnost izoakteozida iz Clerodendron trichotomum. J. Toxicol. Environ. Zdravlje A 68 (5), 389–400. doi: 10.1080/15287390590900750

Cheon, SY, Cho, KJ, Kim, SY, Kam, EH, Lee, JE i Koo, BN (2016). Blokada kinaze 1 koja regulira signal apoptoze smanjuje aktivnost matriksne metaloproteinaze 9 u endotelnim stanicama mozga i kasniju apoptozu u neuronima nakon ishemijske ozljede. Front. Cell Neurosci. 10, 213. doi: 10.3389/fncel.2016.00213

Chi, H., Chang, HY, i Sang, TK (2018). Mehanizmi smrti neuronskih ćelija u glavnim neurodegenerativnim bolestima. Int. J. Mol. Sci. 19 (10), 1–18. doi: 10.3390/ ijms19103082

Crack, PJ, Taylor, JM, Flentjar, NJ, de Haan, J., Hertzog, P., Iannello, RC, et al. (2001). Povećana veličina infarkta i pogoršana apoptoza u glutation peroksidazi-1 (Gpx-1) nokautnom mišjem mozgu kao odgovor na ishemijsku/reperfuzijsku ozljedu. J. Neurochem. 78 (6), 1389–1399. doi: 10.1046/j.1471- 4159.2001.00535.x

Crack, PJ, Taylor, JM, Ali, U., Mansell, A., and Hertzog, PJ (2006). Potencijalni doprinos NF-kappaB u smrti neuronskih ćelija kod miševa koji nokautiraju glutation peroksidazu-1 kao odgovor na ishemijsko-reperfuzijsku ozljedu. Stroke 37 (6), 1533–1538. doi: 10.1161/01.Str.0000221708.17159.64

Cramer, SC, i Chopp, M. (2000). Oporavak rekapitulira ontogenezu. Trends Neurosci. 23 (6), 265–271. doi: 10.1016/s0166-2236(00)01562-9

Daneman, R., Zhou, L., Kebede, AA, i Barres, BA (2010). Periciti su potrebni za integritet krvno-moždane barijere tokom embriogeneze. Nature 468 (7323), 562–566. doi: 10.1038/nature09513

Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Wang, M., Zhang, T., Park, J., et al. (2014). Neuroprotekcija acetil-11-keto-beta-bosvelinskom kiselinom, kod ishemijske ozljede mozga, uključuje odbrambeni put Nrf2/HO-1. Sci. Rep. 4, 7002. doi: 10.1038/srep07002

Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Li, Y., i Wen, A. (2015). Posttretman sa 11- keto-beta-bosvelinskom kiselinom poboljšava cerebralnu ishemiju-reperfuziju: put Nrf2/HO-1 kao potencijalni mehanizam. Mol. Neurobiol. 52 (3), 1430–1439. doi: 10.1007/s12035-014-8929-9

Dong, Q., Yao, J., Fang, JN, i Ding, K. (2007). Strukturna karakterizacija i imunološka aktivnost dva polisaharida koja se ekstrahiraju hladnom vodom iz Cistanche deserticola YC Ma. Ugljikohidrati. Res. 342 (10), 1343–1349. doi: 10.1016/j.carres.2007.03.017

Donnan, GA, Fisher, M., Macleod, M., i Davis, SM (2008). Moždani udar. Lancet 371 (9624), 1612–1623. doi: 10.1016/s0140-6736(08)60694-7

Duan, Q. i Si, E. (2019). MikroRNA-25 pogoršava Abeta1-42-indukovanu povredu hipokampalnog neurona kod Alchajmerove bolesti tako što smanjuje KLF2 preko Nrf2 signalnog puta u modelu miša. J. Cell Biochem. 120 (9), 15891–15905. doi: 10.1002/jcb.28861

ElAli, A. (2016). Implikacija signalizacije neurovaskularne jedinice u kontroli suptilne ravnoteže između ozljede i popravka nakon ishemijskog moždanog udara. Neural Regener. Res. 11 (6), 914–915. doi: 10.4103/1673-5374.184485

Gaire, BP (2018). Biljna medicina u ishemijskom moždanom udaru: izazovi i izgledi. Brada. J. Integr. Med. 24 (4), 243–246. doi: 10.1007/s11655-018-2828-2

Gao, Y., Jiang, Y., Dai, F., Han, Z., Liu, H., Bao, Z., et al. (2015). Studija o laksativnim sastojcima u Cistanche deserticola YC Ma. Mod. Brada. Med. 17 (04), 19–22 plus 26. doi: 10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.003

Gong, X., Xu, Y., Ren, K., Bai, X., Zhang, C., i Li, M. (2019). Feniletanoidni glikozidi iz Paraboea martini štite ćelije feohromocitoma štakora (PC12) od oštećenja ćelija izazvanih hidrogen peroksidom. Biosci. Biotechnol. Biochem. 83 (12), 2202–2212. doi: 10.1080/09168451.2019.1654359

Grefkes, C. i Ward, NS (2014). Kortikalna reorganizacija nakon moždanog udara: koliko i koliko funkcionalna? Neuroscientist 20 (1), 56–70. doi: 10.1177/ 1073858413491147

Guzik, A., i Bushnell, C. (2017). Epidemiologija moždanog udara i upravljanje faktorima rizika. Kontinuum (Minneap Minn) 23 (1, Cerebrovaskularni dis), 15–39. doi: 10.1212/con.0000000000000416

Hu, S., Wu, Y., Zhao, B., Hu, H., Zhu, B., Sun, Z., et al. (2018). Panax notoginseng saponini štite cerebralne mikrovaskularne endotelne ćelije od deprivacije kiseonika i glukoze/reperfuzijom izazvane barijerne disfunkcije putem aktivacije PI3K/Akt/Nrf2 antioksidantnog signalnog puta. Molecules 23 (11), 1–17. doi: 10,3390/molecules23112781

Iwasawa, E., Ichijo, M., Ishibashi, S., i Yokota, T. (2016). Akutni razvoj kolateralne cirkulacije i terapijski izgledi kod ishemijskog moždanog udara. Neural Regener. Res. 11 (3), 368–371. doi: 10.4103/1673-5374.179033

Ji, S., Li, S., Zhao, X., Kang, N., Cao, K., Zhu, Y., et al. (2019). Zaštitna uloga feniletanoidnih glikozida, torenozida B i savatizida A, kod Alchajmerove bolesti. Exp. Ther. Med. 17 (5), 3755–3767. doi: 10.3892/item.2019.7355

Jiang, Y., i Tu, PF (2009). Analiza hemijskih sastojaka u vrstama Cistanche. J. Chromatogr. 1216 (11), 1970–1979. doi: 10.1016/ j.chroma.2008.07.031

Jiang, T., Yu, JT, Zhu, XC, Wang, HF, Tan, MS, Cao, L., et al. (2014). Akutna predkondicioniranje metforminom daje neuroprotekciju protiv fokalne cerebralne ishemije pre-aktivacijom AMPK-zavisne autofagije. Br. J. Pharmacol. 171 (13), 3146–3157. doi: 10.1111/bph.12655

Jiang, X., Anđelković, AV, Zhu, L., Yang, T., Bennett, MVL, Chen, J., et al. (2018). Disfunkcija krvno-moždane barijere i oporavak nakon ishemijskog moždanog udara. Prog. Neurobiol. 163-164, 144–171. doi: 10.1016/j.pneurobio.2017.10.001

Jung, JE, Kim, GS, Chen, H., Maier, CM, Narasimhan, P., Song, YS, et al. (2010). Reperfuzija i neurovaskularna disfunkcija u moždanom udaru: od osnovnih mehanizama do potencijalnih strategija za neuroprotekciju. Mol. Neurobiol. 41 (2-3), 172–179. doi: 10.1007/s12035-010-8102-z

Kilkenny, C., Browne, WJ, Cuthill, IC, Emerson, M., i Altman, DG (2010). Poboljšanje izvještavanja o bionaučnim istraživanjima: Smjernice ARRIVE za izvještavanje o istraživanjima na životinjama. PLoS Biol. 8 (6), e1000412. doi: 10.1371/časopis. bio.1000412

Ko, KM, i Leung, HY (2007). Povećanje kapaciteta za stvaranje ATP-a, antioksidativna aktivnost i imunomodulatorno djelovanje kineskih Yang i Yin tonizirajućih biljaka. Brada. Med. 2, 3. doi: 10.1186/1749-8546-2-3

Kondo, T., Reaume, AG, Huang, TT, Carlson, E., Murakami, K., Chen, SF, et al. (1997). Smanjenje aktivnosti CuZn-superoksid dismutaze pogoršava ozljedu neuronskih stanica i stvaranje edema nakon prolazne fokalne cerebralne ishemije. J. Neurosci. 17 (11), 4180–4189. doi: 10.1523/JNEUROSCI.17-11-04180

Lee, M., Saver, JL, Alger, JR, Hao, Q., Starkman, S., Ali, LK, et al. (2012). Poremećaji propusnosti krvno-moždane barijere u ishemijskom moždanom udaru zadnje cirkulacije: učestalost i odnos s hemoragijskom transformacijom. J. Neurol. Sci. 313 (1-2), 142–146. doi: 10.1016/j.jns.2011.08.048

Li, N., Wang, J., Ma, J., Gu, Z., Jiang, C., Yu, L., et al. (2015). Neuroprotektivni efekti terapije herba na daljinu na pacijente sa umerenom Alchajmerovom bolešću. Evid-Based Complement Altern. Med. 2015, 103985. doi: 10.1155/2015/103985

Li, M., Xu, T., Zhou, F., Wang, M., Song, H., Xiao, X., et al. (2018). Neuroprotektivni efekti četiri feniletanoidna glikozida na H(2)O(2)-indukovanu apoptozu na PC12 ćelijama putem Nrf2/ARE puta. Int. J. Mol. Sci. 19 (4), 1–17. doi: 10.3390/ijms19041135

Li, R., Zhao, M., Tu, P., i Jiang, Y. (2019). Simultano određivanje pet feniletanoidnih glikozida u Cistanches Herba pomoću kvantitativne analize višekomponenti pomoću jednog markera. J. Chin. Pharm. Sci. 28 (08), 537–546. doi: 10.5246/jcps.2019.08.051

Lian, J., Wang, L., Zhao, F., Lin, S., Yan, X., Jia, J., et al. (2017). Efekti glikozida cistanche na sinaptičku morfološku plastičnost kod miševa sa ubrzanim starenjem. J. Baotou Medl Coll. 33 (08), 78–80. doi: 10.16833/j.cnki.jbmc.2017.08.036

Liu, Y., Wang, D., Wang, H., Qu, Y., Xiao, X., i Zhu, Y. (2014). Zaštitni učinak HET0016 na edem mozga i disfunkciju krvno-moždane barijere nakon cerebralne ishemije/reperfuzije. Brain Res. 1544, 45–53. doi: 10.1016/ j.brainres.2013.11.031

Liu, P., Zhang, R., Liu, D., Wang, J., Yuan, C., Zhao, X., et al. (2018). Vremensko ispitivanje permeabilnosti krvno-moždane barijere i promjena proteina u čvrstom spoju u modelu trajne žarišne ishemije kod štakora. J. Physiol. Sci. 68 (2), 121–127. doi: 10.1007/s12576-016-0516-6

Liu, S., Chang, L., i Wei, C. (2019). Sonic hedgehog put posreduje zaštitu izazvanu Tongxinluo kapsulom protiv narušavanja krvno-moždane barijere nakon ishemijskog moždanog udara kod miševa. Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 124 (6), 660–669. doi: 10.1111/bcpt.13186

Lu, CW, Lin, TY, Huang, SK, i Wang, SJ (2016). Ehinakozid inhibira oslobađanje glutamata supresijom naponski ovisan ulaz Ca(2 plus ) i protein kinaze C u cerebrokortikalnim nervnim terminalima pacova. Int. J. Mol. Sci. 17 (7), 1–13. doi: 10.3390/ijms17071006

McGrath, JC, Drummond, GB, McLachlan, EM, Kilkenny, C., i Wainwright, CL (2010). Smjernice za prijavljivanje eksperimenata koji uključuju životinje: smjernice ARRIVE. Br. J. Pharmacol. 160 (7), 1573–1576. doi: 10.1111/j.1476-5381.2010.00873.x

Mentor, S. i Fisher, D. (2017). Agresivni antioksidativni reduktivni stres narušava angiogenezu endotelnih stanica mozga i funkciju krvno-moždane barijere. Curr. Neurovasc Res. 14 (1), 71–81. doi: 10.2174/1567202613666161129113950

Moretti, A., Ferrari, F., and Villa, RF (2015). Neuroprotekcija za ishemijski moždani udar: trenutno stanje i izazovi. Pharmacol. Ther. 146, 23–34. doi: 10.1016/j.pharmthera.2014.09.003

Nyul-Toth, A., Suciu, M., Molnar, J., Fazakas, C., Hasko, J., Herman, H., et al. (2016). Razlike u molekularnoj strukturi krvno-moždane barijere u moždanoj kori i bijeloj tvari: studija in silico, in vitro i ex vivo. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 310 (11), H1702–H1714. doi: 10.1152/ajpheart.00774.2015

Ovbiagele, B., i Nguyen-Huynh, MN (2011). Epidemiologija moždanog udara: unapređenje našeg razumijevanja mehanizma i terapije bolesti. Neuroterapeutika 8 (3), 319–329. doi: 10.1007/s13311-011-0053-1

Page, S., Munsell, A., i Al-Ahmad, AJ (2016). Cerebralna hipoksija/ishemija selektivno narušava komplekse čvrstih spojeva u mikrovaskularnim endotelnim ćelijama ljudskog mozga izvedenih iz matičnih ćelija. Barijere fluida CNS 13 (1), 16. doi: 10.1186/ s12987-016-0042-1

Peng, F., Chen, J., Wang, X., Xu, C., Liu, T., i Xu, R. (2016). Promjene u razinama feniletanoidnih glikozida, antioksidativne aktivnosti i drugih osobina kvaliteta u kriškama cistanche deserticola obradom parom. Chem. Pharm. Bik. (Tokio) 64 (7), 1024–1030. doi: 10.1248/CPB.c16-00033

Priestley, JRC, Fink, KE, McCord, JM, i Lombard, JH (2019). Aktivacija NRF2 sa Protandimom ublažava vaskularnu disfunkciju izazvanu solima i mikrovaskularnu refakciju. Mikrocirkulacija, 26 (7), e12575. doi: 10.1111/misc.12575

Saboor, F., Reckmann, AN, Tomczyk, CU, Peters, DM, Weissmann, N., Kaschtanow, A., et al. (2016). Ćelije vaskularnog zida koje eksprimiraju Nestin pokreću razvoj plućne hipertenzije. EUR. Respir. J. 47 (3), 876–888. doi: 10.1183/13993003.00574-2015

Satoh, T., Okamoto, SI, Cui, J., Watanabe, Y., Furuta, K., Suzuki, M., et al. (2006). Aktivacija Keap1/Nrf2 puta za neuroprotekciju pomoću elektrofilnih [korekcija elektrofilnih] induktora faze II. Proc. Natl. Akad. Sci. USA 103 (3), 768–773. doi: 10.1073/pnas.0505723102

Schellinger, PD, i Kohrmann, M. (2014). Utvrđen je vremenski okvir od 4.5-sata za intravensku trombolizu sa rekombinantnim tkivnim aktivatorom plazminogena. Stroke 45 (3), 912–913. doi: 10.1161/ strokeaha.113.002700

Sealy-Jefferson, S., Wing, JJ, Sanchez, BN, Brown, DL, Meurer, WJ, Smith, MA, et al. (2012). Uzrast i etnički specifične spolne razlike u riziku od moždanog udara. Gend Med. 9 (2), 121–128. doi: 10.1016/j.genm.2012.02.002

Shi, Z., Wu, Y., Zhu, Y., Cui, Wang, M., Yin, H., et al. (2019). Kvantitativno određivanje betaina, manitola, fruktoze, glukoze i saharoze u Cistanches Herba pomoću HPLC-ELSD. Mod. Brada. Med. 32 (6), 1–11. doi: 10.13313/ j.issn.1673-4890.20190320006

Singh, D., Reeta, KH, Sharma, U., Jagannathan, NR, Dinda, AK, i Gupta, YK (2019). Neuro-protektivni učinak monometil fumarata na ishemijsko-reperfuzijsku ozljedu kod pacova: Uloga Nrf2/HO1 puta u peri-infarktnoj regiji. Neurochem. Int. 126, 96–108. doi: 10.1016/j.neuint.2019.03.010

Siow, RC, Ishii, T. i Mann, GE (2007). Modulacija ekspresije antioksidativnih gena pomoću 4-hidroksinonenala: ateroprotektivna uloga Nrf2/ARE transkripcionog puta. Redox Rep. 12 (1), 11–15. doi: 10.1179/ 135100007x162167

Suda, S., Katsura, K., Kanamaru, T., Saito, M., i Katayama, Y. (2013). Valproična kiselina ublažava ishemijsko-reperfuzijsku ozljedu u mozgu štakora kroz inhibiciju oksidativnog stresa i upale. EUR. J. Pharmacol. 707 (1-3), 26–31. doi: 10.1016/j.ejphar.2013.03.020

Suzuki, T., i Yamamoto, M. (2015). Molekularna osnova Keap1-Nrf2 sistema. Slobodni Radic. Biol. Med. 88 (Pt B), 93–100. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.006

Tenreiro, MM, Ferreira, R., Bernardino, L., i Brito, MA (2016). Ćelijski odgovor krvno-moždane barijere na ozljedu: Potencijalni biomarkeri i terapeutski ciljevi za regeneraciju mozga. Neurobiol. Dis. 91, 262–273. doi: 10.1016/j.nbd.2016.03.014

Thompson, JW, Narayanan, SV, Koronowski, KB, Morris-Blanco, K., Dave, KR, i Perez-Pinzon, MA (2015). Signalni putevi koji vode do ishemijske neuroprotekcije mitohondrija. J. Bioenerg. Biomembr. 47 (1-2), 101–110. doi: 10.1007/s10863-014-9574-8

Wang, T., Zhang, X., i Xie, W. (2012). Cistanche deserticola YC Ma,"Desert ginseng": recenzija. Am. J. Chin. Med. 40 (6), 1123–1141. doi: 10.1142/s0192415x12500838

Wang, X., Wang, S., Wang, J., Guo, H., Dong, Z., Chai, L., et al. (2015). Neuroprotektivni učinak xueshuantong za injekciju (liofiliziran) u modelu prolazne i trajne cerebralne ishemije pacova. Evid-Based Complement Altern. Med. 2015, 134685. doi: 10.1155/2015/134685

Wang, D., Wang, H. i Gu, L. (2017). Antidepresiv i aktivnosti poboljšanja kognitivnih sposobnosti tradicionalne kineske biljke cistanche. Evid-Based Complement Altern. Med. 2017, 3925903. doi: 10.1155/2017/3925903

Wang, FJ, Wang, SX, Chai, LJ, Zhang, Y., Guo, H., i Hu, LM (2018). Injekcija Xueshuantong (liofilizirana) u kombinaciji sa salvijanolnom liofiliziranom injekcijom štiti od fokalne cerebralne ishemije/reperfuzijske ozljede kod pacova kroz slabljenje oksidativnog stresa. Acta Pharmacol. Sin. 39 (6), 998–1011. doi: 10.1038/aps.2017.128Wei, Y., Gong, J., Thimmulappa, RK, Kosmider, B., Biswal, S., i Duh, EJ (2013). Nrf2 djeluje ćelijski autonomno u endotelu kako bi regulirao formiranje vrha stanica i vaskularno grananje. Proc. Natl. Akad. Sci. SAD 110 (41), E3910–E3918. doi: 10.1073/pnas.1309276110

Xia, D., Zhang, Z., i Zhao, Y. (2018). Acteoside ublažava oksidativni stres i neuronsku apoptozu kod štakora s fokalnom cerebralnom ishemijom-reperfuzijskom ozljedom. Biol. Pharm. Bik. 41 (11), 1645–1651. doi: 10.1248/bob.b18-00210

Xiong, W., MacColl Garfinkel, AE, Li, Y., Benowitz, LI, i Cepko, CL (2015). NRF2 potiče preživljavanje neurona kod neurodegeneracije i akutnog oštećenja živaca. J. Clin. Invest. 125 (4), 1433–1445. doi: 10.1172/jci79735

Xu, HT, Zhang, CG, He, YQ, Shi, SS, Wang, YL, i Chou, GX (2019). Feniletanoidni glikozidi iz Schnabelia centifolia (Benth.) PDCantino promovišu proliferaciju osteoblasta. Phytochemistry 164, 111–121. doi: 10.1016/j.phytochem.2019.05.003

Ya, BL, Liu, Q., Li, HF, Cheng, HJ, Yu, T., Chen, L., et al. (2018). Mokraćna kiselina štiti od fokalne cerebralne ishemije/reperfuzijom izazvanog oksidativnog stresa aktivacijom Nrf2 i regulacijom ekspresije neurotrofnog faktora. Oksid. Med. Cell Longev 2018, 6069150. doi: 10.1155/2018/6069150

Ye, ZY, Xing, HY, Wang, B., Liu, M., i Lv, PY (2019). DL-3-butil ftalid štiti krvno-moždanu barijeru od ozljeda ishemije/hipoksije putem regulacije proteina čvrstog spoja. Brada. Med. J. (Engl.) 132 (11), 1344–1353. doi: 10.1097/cm9.0000000000000232

Yu, Q., Li, X., i Cao, X. (2016). Kardioprotektivni efekti ekstrakta bogatog feniletanoidnim glikozidima iz Cistanche deserticola kod infarkta miokarda izazvanog ishemijom reperfuzijom kod pacova. Ann. Vasc. Surg. 34, 234–242. doi: 10.1016/j.avsg.2016.04.002

Yu, N., Wang, Z., Chen, Y., Yang, J., Lu, X., Guo, Y., et al. (2017). Meliorativni učinak punkcije za puštanje krvi pri ruci dvanaest Jing-well točaka na cerebralni edem izazvan trajnom ishemijom srednjeg mozga putem zaštite čvrstih spojeva krvno-moždane barijere. BMC Complement Altern. Med. 17 (1), 470. doi: 10.1186/s12906-017-1979-6

Yu, W., Gao, D., Jin, W., Liu, S., i Qi, S. (2018). Propofol sprječava oksidativni stres smanjenjem ishemijske akumulacije sukcinata u fokalnoj cerebralnoj ishemiji-reperfuzijskoj ozljedi. Neurochem. Res. 43 (2), 420–429. doi: 10.1007/ s11064-017-2437-z

Yuen, CM, Chung, SY, Tsai, TH, Sung, PH, Huang, TH, Chen, YL, et al. (2015). Ekstrakorporalni udarni talas efikasno smanjuje volumen moždanog infarkta i poboljšava neurološku funkciju kod pacova nakon akutnog ishemijskog moždanog udara. Am. J. Transl. Res. 7 (6), 976–994.

Zechariah, A., ElAli, A., Doeppner, TR, Jin, F., Hasan, MR, Helfrich, I., et al. (2013). Faktor rasta vaskularnog endotela potiče pokrivanje moždanih kapilara pericitima, poboljšava cerebralni protok krvi tokom naknadne fokalne cerebralne ishemije i čuva metaboličku polusjenu. Stroke 44 (6), 1690–1697. doi: 10.1161/strokeaha.111.000240

Zhang, QY, Wang, ZJ, Sun, DM, Wang, Y., Xu, P., Wu, WJ, et al. (2017). Novi terapijski efekti staža na ishemijski moždani udar: novi mehanizmi integriteta BBB. Oksid. Med. Cell Longev 2017, 7150376. doi: 10.1155/2017/7150376

Zhang, R., Xu, M., Wang, Y., Xie, F., Zhang, G., i Qin, X. (2017). Nrf2-obećavajući terapeutski cilj za odbranu od oksidativnog stresa u moždanom udaru. Mol. Neurobiol. 54 (8), 6006–6017. doi: 10.1007/s12035-016-0111-0

Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B., et al. (2018). Imunostimulirajuća aktivnost polisaharida koji se ekstrahiraju vodom iz Cistanche deserticola kao biljnog adjuvansa in vitro i in vivo. PLoS One 13 (1), e0191356. doi: 10.1371/journal.pone.0191356

Zhang, Y., Wang, K., Chen, H., He, R., Cai, R., Li, J., et al. (2018). Protuupalni lignani i feniletanoidni glikozidi iz korijena Isodon terricolous (D.Don) Kudo. Phytochemistry 153, 36–47. doi: 10.1016/ j.phytochem.2018.05.017

Zhang, K., Zhang, Q., Deng, J., Li, J., Li, J., Wen, L., et al. (2019). ALK5 signalni put posreduje neurogenezu i funkcionalni oporavak nakon cerebralne ishemije/reperfuzije kod štakora putem Gadd45b. Cell Death Dis. 10 (5), 360. doi: 10.1038/s41419-019-1596-z

Sukob interesa:

Autori izjavljuju da je istraživanje sprovedeno u nedostatku bilo kakvih komercijalnih ili finansijskih odnosa koji bi se mogli protumačiti kao potencijalni sukob interesa.

Urednik rukovanja je izjavio zajedničku pripadnost, iako ne postoji druga saradnja, sa autorima KZ i YJ, u vrijeme pregleda.

Copyright © 2020 Wang, Li, Tu, Chen, Zeng i Jiang. Ovo je članak otvorenog pristupa koji se distribuira pod uslovima licence Creative Commons Attribution License (CC BY). Upotreba, distribucija ili reprodukcija na drugim forumima je dozvoljena, pod uslovom da su originalni autor(i) i vlasnik(i) autorskih prava navedeni i da je originalna publikacija u ovom časopisu citirana, prema prihvaćenoj akademskoj praksi. Nije dozvoljena nikakva upotreba, distribucija ili reprodukcija koja nije u skladu sa ovim uslovima.

For more information:1950477648nn@gmail.com