Hemijski sastojci listova Cistanche

Sažetak: Cistanchelistovi se dugo koriste kao tradicionalna medicinaliječenjeishemijski moždani udar, angina, ihipertenzijai kao zdrav napitak ikozmetika zaprotiv starenja. Ova studija je imala za cilj da izoluje što više jedinjenja iz ekstrakta etanolalistova dragulja za identifikaciju biološki aktivnih spojeva. Antioksidativni efekatsloja etil acetata iz etanolnog ekstrakta listova persimona demonstrirano je pomoću2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) test i onlajn tečna hromatografija visokih performansi-2,20 -kazino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kiselina) (HPLC-ABTS) analiza. Novi flavonoid,kaempferol-3-O- -D-2"-kumaroilgalaktozid (1), i novo prirodno jedinjenje, kaempferol-3-O- -D-2"-feruloilglukozid (3) izolovani su iz sloja etil acetata, zajedno sa 25 prethodnopoznata jedinjenja, uključujućičetrnaest flavonoida, jedan jonon, dva kumarina, sedam triterpenoida,i jedan acetofenon. Interpretacijom spektrometrijskih i spektroskopskih podataka utvrđena je njihova struktura. Sva izolirana jedinjenja su brzo procijenjena korištenjem onlineHPLC-ABTSesej, a od ovih jedinjenja4–8, 11, 13, 15, i16 jasno prikazanoantioksidativnih efekata. Thekoličina ovih jedinjenja je bila {{0}}.3–0,65 posto ekstrakta.

Ključne riječi:Diospyros kaki; Listovi dragulja; flavonoid; antioksidans

Kliknite ovdje da biste Cistanche obogatili flavonoidima za kozmetičko sredstvo protiv starenja

1. Uvod

Diospyros kakiThunb. (persimmon) pripada porodici Ebenaceae i široko je rasprostranjendistribuiran u Koreji, Kini i Japanu. Njeni plodovi se jedu svježi ili suvi, a listovidugo se koristi kao tradicionalna medicina za liječenje ishemijskog moždanog udara, angine, hipertenzije,ateroskleroza i zarazne bolesti [1]. Osim toga, korišteni su i njegovi listovikao zdravi napici i kozmetika zbog svojih svojstava protiv starenja i sposobnosti dapomaže u sprječavanju nakupljanja kolesterola i melanina [1]. Nedavna istraživanja su pokazalada ekstrakti listova dragulja posjeduju širok spektar bioloških svojstava,uključujući uklanjanje radikala, neuroprotekciju, inhibiciju tromboze, antiaterosklerozu,i antialergijski [2–6]. Prethodno fitokemijsko istraživanje sugeriralo je da različitavrsteflavonoidia terpenoidi su glavni sastojci [7], i nekoliko tanina,Naftokinoni, kumarini, jononi i masne kiseline su također prijavljeni [8–12]. Reaktivne vrste kiseonika (ROS) su reaktivne molekule proizvedene u biološkim sistemima,a ravnoteža između stvaranja i eliminacije ROS-a je dobro kontrolirana u normalnom stanjustanična fiziologija [13]. Međutim, prekomjerno stvaranje ROS uzrokuje oksidativna oštećenja,i zauzvrat, starenje i bolesti povezane sa starenjem uključujući rak, dijabetes i Parkinsonovu bolestbolest [14]. Dakle, otkrivanje antioksidansa kao što su flavonoidi i fenolna jedinjenjamože biti obećavajuća strategija za liječenje ovih bolesti.

U sklopu našeg kontinuiranog projekta pronalaženja biološki aktivnih jedinjenja [15], theantioksidativni učinak ekstrakta etanola (EtOH) i otapala iz persimonalistovi su ocijenjeni pomoću 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) testa i online visoke performansetečna hromatografija-2,20 -kazino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kiselina)(HPLC-ABTS) analiza. Fitokemijska studija na listovima kakija dovela je do izolacijejednog novog flavonoida (1), jedno novo prirodno jedinjenje (3) i25 ranijepoznatih jedinjenja. Primjena spektroskopskih i spektrometrijskih metoda karakterizirala je strukture. Sva izolovana jedinjenja su brzo testiranaantioksidativni efekti koristeći online HPLC-ABTS. Nadalje, kvantitativna analizasva izolovana jedinjenja izvedena su u ovoj studiji.

2. Rezultati i diskusija

2.1. Antioksidativni efekat listova persimona

Procijenjen je antioksidativni učinak etanolnog (EtOH) ekstrakta listova draguljaza preliminarni skrining putem DPPH (Slika1A). 0.125 mg/mLekstrakt je uklonio otprilike 80 posto DPPH radikala, dok je 0,025 mg/mL askorbinakiselina je činila 94 posto radikala. Online HPLC-ABTS test je izveden brzoosigurati pouzdanost ovih rezultata (Slika1D). Galna kiselina i Trolox korišteni su kao internistandardima. Kromatogram na 734 nm (negativni pik) sugerirao je da otprilikedevet sastojaka moglo bi imati antioksidativno djelovanje. Galna kiselina i Trolox (6-hidroksi- 2,5,7,8-tetrametil kroman-2-karboksilna kiselinaacid) korišteni su kao interni standardi za osiguranjepouzdanost rezultata. Zaključeno je da su većina ovih pikova bili derivati ​​flflavonoidakao što su flavonoidni glikozid i flavanol, na osnovu izvršene analize dereplikacijepoređenjem ultraljubičastog (UV) i masenog spektra jedinjenja sa objavljenimpodaci. Frakcioniranje vođeno biološkim testom sugerira da su ova antioksidativna jedinjenja bilau izobilju u sloju etil acetata (EtOAc), dok voda (H2O) sloj je pokazao slabaktivnost (slika1B,C). 

Slika 1. Efekti uklanjanja DPPH ekstrakta EtOH (A), EtOAc sloja (B) i sloja HO (C) HhO sloja listova persimona: (D) online ABTS-HPLC hromatogram EtOH ekstrakta.

2.2. Phytochemical Investigation

Za identifikaciju ovih antioksidativnih spojeva, različiti kromatografski i spektroskopskiprovedene su metode za izolaciju i strukturnu karakterizacijuspojeva. Novi flavonoid (1) i novi prirodni spoj (3) su dobijeni odetil acetatni sloj ekstrakta etanola, zajedno sa 25 ranije prijavljenih jedinjenja,naime kempferol-3-O- -2"-kumaroilglukozid (2) [16], ( plus )-katehin (4) [17], hiperozid(5) [17], izokvercitrin (6) [18], kvercetin-3-O- -2"-galoilgalaktozid (7) [19], kvercetin-3-O- -2"-galoilglukozid (8) [20], trifolin (9) [18], astragalin (10) [18], kempferol{0}}O- - 2"-galoilgalaktozid (11) [21], kempferol{0}}O- -arabinozid (12) [22], kempferol{0}}O- - 2"-galoilglukozid (13) [23], kvercetin-3-O- -2"-kumaroilglukozid (14) [24], kvercetin(15) [15], kempferol (16) [25], (6S,9S)-rozeozid (17) [26], scopoletin (18) [27], umbelliferon(19) [28], 1-(2,4-dihidroksi-6-metilfenil)etanon (20) [29], barbinervinska kiselina (21) [30], diospirična kiselina B (22) [7], rotungenska kiselina (23) [31], pomolna kiselina (24) [32], sijarezinolna kiselina(25) [33], oleanolna kiselina (26) [25], i ursolna kiselina (27) [25] pomoću spektroskopskog ispektrometrijske i fizičke podatke u poređenju sa objavljenim podacima, kao i sa tankimanaliza slojne hromatografije (TLC) (slike2 i3). Među njima su jedinjenja2, 16, 17, 19, 20, i24 su prvo bili izolovani odD. kaki. 

Jedinjenje 1 je dobijeno kao žuti prah, u kojem je molekulska formula utvrđena kao C3olO3 na osnovu podataka masene spektrometrije visoke rezolucije (HRMS). Spektar je pokazao apsorpcione trake na 207 i 315 nm, što ukazuje da jedinjenje 1 ima okosnicu flavonola. Podaci 'H nuklearne magnetne rezonance (NMR) (Tabela 1, Slika S1) pokazali su tipičan obrazac kumaroiliranog flavonol glikozida, pokazujući dva seta signala tipa AA'BB' ({{10}}.{11 }} (2H, d, J= 8.5 Hz, H-2' i H-6 ),6.87 (2H, d, J{{20}} .5 HzH-3' i H-5')) u B prstenu kaempferola kao i signali (0 7.45 (2H, d, J=8. 5 HzH-2 i H{{3{{104}}}}"), 6,81 (2H, d, J=8,5 Hz, H-3 i H-5 posto) u aromatičnom prstenu kumaroilne grupe. Dva dubletna signala (8H 7,65 (1H, d, J=15.5 Hz, H-7") i 6,35 (1Hd, J=16.0 Hz, H-8") su uočeni, što ukazuje na trans-olefinske protone grupe zemalja. Dodatno, anomerni protonski signal (0H 5,57 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1) uočeno je u šećernoj regiji, što ukazuje na prisustvo cikličke šećerne grupe konfigurirane B. Poboljšanje 13C i bez izobličenja putem polarizacije prijenosom NMR podataka (Iable 1Slika S2) pokazala je 30 rezonancija koje se sastoje od dva trans-olefinska ugljika, deset aromatičnih ugljika i šest ugljika glukozilnog dijela i deset ne-protoniranih ugljika uključujući dva karbonilna ugljika. Konkretno, hemijski pomaci na C-2, C-3 i C-4 (8c 158.1, 134.9 i 179.2) bili su karakteristični signali flavonol3-0-glikozida. Dodatno, signal karbonilnog ugljika na C-1" (8c 168.7) i dva trans-olefinska ugljična signala na C-2'" i C-3"(6 146.9 , 115.2) bili su tipični hemijski pomaci kumaroil grupe. Anomerni signal ugljika na C-1(6C 100.4) i drugi signali za glikozilni dio od C-2" do C-6" ' (6c74.3, 73.4, 70.5, 77.4 i 62.0) su uočeni. Ovi jednodimenzionalni (1D) NMR podaci su se preklapali s onima za kempferol-3-0-B-2"-kumaroilglukozid (2) (16). Međutim, pažljivo poređenje 13C NMR podataka između dva jedinjenja sugeriralo je da jedinjenje 1 ima dio galaktoze, što je dalje demonstrirano NMR podacima nuklearneOverhauserove spektroskopije poboljšanja (NOESY) (slika S6). Dok je NOES korelacija između H-2 i H-4 je uočeno u jedinjenju 2, nije bilo korelacije između ovih protona u jedinjenju 1. Generalno, tumačenje 13C NMR i NOESYNMR podataka je efikasna metoda za određivanje tipa glikozilnog dijela Zaključeno je da je lokacija galaktoznog dijela na C-3 prema pomaku na niže polje C-2i C-4, što dalje dokazuje korelacija heteronuklearne višestruke veze (HMBC između H{ {123}}" i C-3 (Slika S5). Pokazalo se da je pozicija kumaroil grupe na C-2" na osnovu pomaka u niže polje (0 5.36 (1H, dd, J=10.0, 8.0 Hz, H{ {134}}")) i HMBC korelaciju između H-2' i C-1. Kao rezultat toga, struktura jedinjenja 1 određena je kao kempferol-3-0-B-2"-kumaroilgalaktozid. Iako je jedinjenje 2 ranije izolovano iz različitih izvora, uključujući Ouercus suber (16] i Alliumporrum (34), spoj 1 je izolovan i strukturno karakteriziran po prvi put.

Compound3 izolovan je u obliku žutog praha, te je utvrđena molekularna formulakao C31H28O14 analizom HRMS podataka. UV spektar je pokazao UVapsorpcija na 210 i 327 nm zbog istog aglikona sa spojevima1 i2. The1H NMR podaci (tab1, Slika S10) bili su slični onima spoja2, ali složeno3 imao feruloilnu grupu umjesto kumaroilne grupe, o čemu svjedoči prisustvo andodatna metoksi grupa (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OCH3)). Dodatno, anomerni protonsignal (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )), što ukazuje na glikozilnu vezuBio je-konfiguracija, i signal pomaknut prema dolje (5,03 (1H, t,J = 8.5 Hz, H-200 )) je prikazano u oblasti šećera, kao i kod jedinjenja1. The13C NMR podaci (tab1, SlikaS11) pokazao je 31 rezonanciju od kojih su dvijetrans-olefinski ugljici, deset kvartarnih ugljenika,deset aromatičnih ugljika, šest ugljika glukozilnog dijela i jedan metoksi ugljik i deset neprotoniranihugljika, uključujući dva karbonilna ugljika koja odgovaraju kempferolu, feruloilu,i grupe glukoze. Konkretno, ugljični signali iz C-200 do C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 i 62.5) sugerira prisustvo glukoznog dijela. Lokacije glukoznog dijelai feruloil grupa su dodijeljene HMBC korelacijama dugog dometa između H-100 iC-3 (δC 134.8) i H-200 i C{0}}000 (δC 168.4) (Slika S14). Pozicija dodatnogmetoksi grupa određena je ključnom korelacijom između 3000 -OCH3 i C{0}}000 (δC 149.4). Gore navedeni rezultati sugeriraju strukturu spoja3 kao kaempferol-3-O- - 2"-feruloil glukozid. Koliko znamo, spoj3 je samo prijavljen kao aproizvod hidrolize 3-O- -(2-O-feruloil)-glukozil-7,40 -di-O- -glukozil kempferol, izolovan odAllium tuberosum[35]. Dakle, struktura od3 je razjašnjena kao novaprirodno jedinjenje.

Compound11 izolovan je kao žuti prah. The1H NMR podaci (Slika S19)prikazan skup AA0 BB0 -tip signala (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-30, H-50 )) u B prstenu kempferola i singlet signal naδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) galoilnog dijela u aromatičnoj regiji, što je karakterističan signaldodijeljenog flavonola. Anomerni protonski signal (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) ukazuje da je glikozilna veza a-konfiguracija. Štaviše, niže poljepomaknuti protonski signal (5,27 (1H, t,J = 9.5 Hz, H-200 )) sugerira da galoil grupaje vezan za hidroksilnu grupu C-200 jer bi se ovaj pomak mogao pripisatianizotropni uticajO-galoilni dio [21]. The13C NMR podaci (Slika S20)pokazao 26 rezonancija, što ukazuje na alocirani flavonol glikozid. Ugljični signaliod C-200 do C-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 i 60.1) ukazuju na prisustvo galaktozemoiety. Dakle, struktura spoja11 je potvrđeno kao kaempferol-3-O- -200 - galoilgalaktozid. Iako složen11 prethodno izolovan iz raznih izvora,uključujućiD. kaki[21,36], samo1H NMR i MS podaci su ranije objavljeni. dakle,the13C NMR podaci su prvi put prijavljeni u ovoj studiji

2.3. Antioksidativna aktivnost izolovanih jedinjenja

Svi izolirani spojevi procijenjeni su na njihov antioksidativni učinak primjenom brzog onlinijska HPLC-ABTS analiza kako bi se utvrdilo koja su jedinjenja doprinijela antioksidativnom djelovanjuefekat listova dragulja. Jedinjenja4–8, 11, 13, 15, i16 pokazao snažan antioxidativne aktivnosti (slika4). Većina ovih jedinjenja bili su kempferol i kvercetinderivati, ali neki derivati ​​(1–3, 9, 10, 12, i14) nije pokazao aktivnosti. Theodnos struktura-aktivnost nije u potpunosti utvrđen, ali je djelimično otkriven. Uposebno, kvercetin i kempferol s galoilnim dijelovima (7, 8, 11, i13) utvrđeno je daimaju snažne aktivnosti, ali oni sa kumaroil ili feruloil ostacima (1–3 i16) nijepokazati sve aktivnosti.

Slika 4.Aktivnosti uklanjanja radikala izolovanih jedinjenja (4–8, 11, 13, 15, i16) procijenjeni su putem internetaHPLC-ABTS test.

2.4. Kvantitativna analiza izolovanih jedinjenja

Kvantitativna analiza svih izolovanih jedinjenja u ekstraktu rastvorljivom u EtOAcje obavljeno kako bi se potvrdilo da antioksidativni efekti listova dragulja mogu bitiuzrokovane ovim aktivnim spojevima. Specifična HPLC metoda sa detekcijom niza dioda ievaporativni detektor raspršenja svjetlosti razvijen je za simultano određivanjeod 27 jedinjenja. Sadržaj svih izolovanih triterpenoida bio je oko 5,9 postoekstrakt, i od njih, oni sijarezinolne kiseline (25), oleanolna kiselina (26), i ursoličnakiselina (27) predstavlja značajan udio, kao što je navedeno u prethodnim studijama [7]. Thesadržaj flavonoida bio je oko 5,4 posto, a od toga aktivnih spojevaiznosili 3,2 posto (tab2). Konkretno, sadržaj kaempferola-3-O- -200 -galoilgalaktozid(9), kaempferol-3-O- -2"-galoilglukozid (10), izokvercitrin (13), i kvercetin-3-O- -2"- galoilglukozid (15) bili su više od 0,3 posto . Analitička metoda je provjerena korištenjem ajednostavan postupak validacije kako bi se osigurala relevantnost metode, koja se pokazala adekvatnomspecifičnost, linearnost, tačnost i preciznost.

Pitajte za više:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950