joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

IL-22-posredovano bubrežno metaboličko reprogramiranje putem PFKFB3 za liječenje ozljede bubrega

Wei Chen, et al

Graphical Abstract

IL-22 slabibubregpovredaputem metaboličkog reprogramiranja bubrežnih TEC-a, reguliše funkciju mitohondrija i glikolizu u oštećenim TEC-ovima i ublažava nakupljanje mitohondrijske ROS i disfunkcionalnih mitohondrija putem indukcije AMPK/AKT i PFBFK3 aktivnosti. PoboljšanjebubregpovredaIL-22 putem regulacije signalizacije relevantne za metabolizam je certificiran na životinjskim modelima oštećenja bubrega izazvanih cisplatinom i dijabetičke nefropatije.

Abstract

Oštećenje bubrega pokreće pogoršanje metaboličkih stanja u ćelijama tubula koje dovode do razvoja završnog stadijuma bubrežne bolesti (ESTD). Interleukin-22 (IL- 22) je efikasan terapeutski protuotrov zabubregpovredaputem promicanja oporavka bubrega, ali malo se zna o osnovnim molekularnim mehanizmima. Ovdje prvo pružamo dokaz da IL-22 slabibubregpovredaputem metaboličkog reprogramiranja bubrežnih tubularnih epitelnih ćelija (TECs). Konkretno, naši podaci sugeriraju da IL-22 reguliše mitohondrijalnu funkciju i glikolizu u oštećenim TEC-ovima. Dalja zapažanja pokazuju da IL-22 ublažava nakupljanje mitohondrijalnih reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) i disfunkcionalnih mitohondrija putem indukcije AMPK/AKT signalizacije i aktivnosti PFBFK3. Kod miševa, poboljšanje odbubregpovredai nekroza i poboljšanje bubrežnih funkcija putem regulacije ovog metabolizma relevantne signalizacije i mitohondrijalne sposobnosti rekombinantnog IL-22 potvrđeni su u životinjskim modelima oštećenja bubrega izazvanih cisplatinom i dijabetičke nefropatije (DN). Uzeti zajedno, naši nalazi otkrivaju nove mehaničke uvide u zaštitne efekte IL-22 na bubrege i ističu terapijske mogućnosti IL-22 i uključenih metaboličkih regulatora u različitim bolestima bubrega.

KLJUČNE RIJEČIinterleukin-22,bubregpovreda, metaboličko reprogramiranje, mitohondrijalna disfunkcija

Cistanchetubulosasprečava bolest bubrega, kliknite ovdje za uzorak

1. UVOD

Akutnabubregpovreda(AKI), uobičajena zabrinutost javnog zdravlja povezana s visokim mortalitetom i morbiditetom, pogađa milione hospitaliziranih pacijenata širom svijeta i pokazuje brzo rastuću incidenciju.1–3 Osnovna patofiziologija AKI nije u potpunosti shvaćena, ali uključuje oštećenje i apoptozu bubrega tubularne epitelne ćelije (TEC), posebno u proksimalnom tubulu.4–7 Više vrsta literature podržava da njihovo teško i trajno oštećenje često uzrokuje nepotpunu i neprilagođenu popravku tkiva, što dovodi do upalnog odgovora, tubularne degeneracije, fibroze bubrega i eventualne progresije u krajnji stadijum bubrežne bolesti (ESTD).8–10 Nažalost, osim potporne nege zasnovane na dijalizi, nema dobro uspostavljenih terapijskih sredstava zabubregpovredaje dostupno. Stoga je proaktivno liječenje prijeko potrebno kako bi se smanjila patnja koju uzrokuje pacijentima i značajno financijsko opterećenjebubregpovredapojedincima i društvu.

Interleukin-22 (IL-22), važan član porodice citokina IL-10, nedavno je privukao ogromnu pažnju kao sredstvo za preživljavanje kod brojnih poremećaja uzrokovanih oštećenjem epitela.11–13 IL -22 izaziva zaštitu tkiva i homeostazu prvenstveno putem aktivacije STAT3 signalnog puta i promocije epitelne proliferacije.14,15 Važno je da su studije pokazale da je ekspresija IL-22R1 ograničena na bubrežne proksimalne TEC-ove , a liječenje IL-22 može zaštititi od oštećenja bubrežnog epitela i ubrzati regeneraciju tubula.16,17 Međutim, iako akumulirani dokazi ukazuju na to da je IL- 22 efikasan terapeutski protuotrov zabubregpovreda, malo se zna o osnovnim mehanizmima oporavka TEC-ova izazvanih IL- 22-. Razumijevanje molekularne osnove IL-22 značajno je i za istraživanje kako IL-22 djeluje na inhibiciju AKI ili ESTD i za otkrivanje molekularnih modifikatora kao i ključnih procesa uključenih u prevenciju oštećenja bubrega.

Obnavljanje bubrega nakon oštećenja je metabolički ovisan i komplikovan proces.18 Nedavni dokazi pokazuju da metabolički potpisi ćelija mogu regulirati preživljavanje i plastičnost bubrežnih stanica i na taj način pružiti korisne mehaničke uvide u to kako metabolički procesi kontroliraju popravak tkiva.19,20 Konkretno, ovi nalazi pokazuju da metaboličko reprogramiranje pomoću PGC1 ili sistema S-nitrozo-CoA reduktaze štiti odbubregpovreda. Mehanički, povećana glikoliza i oksidativna fosforilacija (OXPHOS) mogu promovirati rast i odbrambene signalne puteve ili mogu zadovoljiti veće energetske zahtjeve mitoze i anaboličke biosinteze tokom popravke organa.19,21 Nedavno su naše studije pokazale da IL-22 ublažava mitohondrijalna disfunkcija u jetri, koja uključuje ćelijske metaboličke procese.22,24 Stoga se pitamo da li IL-22 štiti od oštećenja bubrega i apoptoze regulacijom njihovog metaboličkog stanja. Da bismo odredili mehanizme popravke bubrega posredovane IL-22, tretiramo ljudske proksimalne tubularne epitelne ćelije (PTEC) stresnom stimulacijom. Predlažemo da IL-22 pokreće metaboličko reprogramiranje kako bi se poboljšala glikoliza i OXPHOS, koji sprječavaju disfunkciju TEC-a. Dalje pokazujemo da je IL-22 inducirao ovaj program putem aktivacije AMPK/AKT signalizacije i njegovih molekularnih modifikatora kako bi se ublažila mitohondrijalna disfunkcija. Naša zapažanja bacaju svjetlo na regulaciju metaboličkih stanja za liječenje i prevenciju bolesti bubrega i pružaju nove uvide za razvoj efikasnih novih intervencija za ozljede organa općenito.

Cistanche može liječitibubregpovreda

2 MATERIJALI I METODE

2.1 Reagensi

Oligomicin, rotenon i cijanid p-trifluorometoksi fenil-hidrazon (FCCP) dobijeni su od Sea horse Biosciences; rekombinantni IL-22 je obezbijedio Novoprotein (Kina); Dobijeni su cisplatin (Crisp.), MitoTrackerGreen, LY294002, 5,5′,6,6′-tetrahloro-1,1′,3,3′-tetraetilbenzimidazolilkarbocijanin jodid (JC-1) i jedinjenje C iz Beyotime Biotechnology (Kina); antitela koja ciljaju na Glut1, -Actin, p-AMPK, AMPK i GAPDH su kupljena od Abcam-a; antitela za STAT3, p-STAT3 (Y705), AKT, p-AKT (S473), PFKFB3 i Caspase-3 kupljena su od Cell SignalingTechnology; rapamicin, palmitinska kiselina (Palm.), Z-VAD-FMK i glukoza su dobijeni od Sigma-Aldrich; MitoSOX, Hoechst33342, MitoTracker Red i PKH26 su dobijeni od Invitrogena.

2.2 Ćelijska kultura

Epitelna ćelija proksimalnog tubula (HK{{0}}) dobijena je od Banke ćelija Šangajskog instituta za biohemiju i ćelijsku biologiju, Kineske akademije nauka, i održavana prema standardnim protokolima. HK-2 je zasijan u ploče sa šest jažica (1 × 106 ćelija/jažicu) ili 96-ploče za jažice (1 × 105 ćelija/jamicu) i uzgojeno u 90 posto RPMI1640 mediju (Gibco) sa dodatkom 100 U/ml penicilina, 100 µg/ml streptomicina i 10 posto fetalnog goveđeg seruma (FBS) (Gibco). Prvo smo inkubirali HK-2 sa IL-22 (0,5 µg/ml) 0,5 h, zatim 50 mM d-glukoze ili 5 µg/ml cisplatina ili 0,2 mM palmitinske kiseline ili ili 4 µM doxorubicin ) tokom 24 h. U nekim slučajevima, ćelije su kultivisane u prisustvu Z-VAD-FMK (10 µM), jedinjenja C (5 µM), LY294002 (20 µM) ili rapamicina (50 nM) za naznačena vremena.

2.3 Eksperimenti s morskim konjima

Analizirali smo TEC koristeći Seahorse XF96 Extracelular Flux-Analyzer za promjene u brzini ekstracelularne kiseline (ECAR) i stopi potrošnje kisika (OCR). Ukratko, HK-2 (1 × 105) je uzgajan na 96-pločama morskog konjića preko noći. Zatim smo isprali ćelije sa medijumom za analizu morskog konjića koji sadrži 1 mM piruvata, 10 mM glukoze i 2 mM glutamina (ili bez glukoze za testiranje ECAR-a) u atmosferi bez CO2 na 37◦C za {{18 }}.5 h. Eksperimentalni podaci su zabilježeni nakon što su dolje navedeni inhibitori ubrizgani u optimalnoj koncentraciji FCCP (1.0 µM), oligomicina (1,0 µM), rotenona/antimicina A (0,5 µM), 2-DG (50 mM) ili glukoze (10 mM).

Cistanche može liječitipovreda bubrega

2.4 Miševi i životinjski modeli

Mužjaci BALB/c miševa (6-8 sedmica) su kupljeni od Slaccas Experimental Animal Co. (Šangaj, Kina). Db/db i Db/m miševe je obezbijedio Centar za istraživanje modela životinja Univerziteta Nanjing (Nanjing, Kina). Svi miševi su držani u objektima bez specifičnih patogena (SPF) i uzgajani prema standardnim protokolima. Za AKI model, BALB/c miševi su primili cisplatin (20 mg/kg) ili fiziološku otopinu intraperitonealnom injekcijom. Db/db miševi su hranjeni hranom s visokim udjelom masti (HFD) u naznačenim vremenskim tačkama kako bi se izazvala dijabetička nefropatija (DN). Db/m miševi su hranjeni hranom za jelo kao kontrolna grupa. U eksperimentima sa AKI na životinjama, IL-22 je intraperitonealno ubrizgavan u dozi od 0,5 mg/kg/dan ili 1,5 mg/kg/dan tokom 4 uzastopna dana. U eksperimentima sa DN životinjama, IL-22 je intraperitonealno ubrizgavan u dozi od 2,5 mg/kg dva puta sedmično tokom osam uzastopnih sedmica. Kontrolni miševi su primili odgovarajuću količinu PBS-a. Naši eksperimentalni postupci na životinjama provedeni su prema protokolima koje je procijenio i odobrio Etički komitet za brigu o životinjama i upotrebu Farmaceutskog fakulteta Univerziteta Fudan. Imunohistohemijsko bojenje, mjerenje potencijala mitohondrijske membrane, histološko i bojenje reaktivnih kisikovih vrsta (ROS) sekcija bubrega izvedeno je kao što je prethodno opisano.22-24

2.5 PCR u realnom vremenu

Dobili smo ukupnu RNK pomoću TRNzol reagensa (Beyotime Biotechnology, Kina) iz uzoraka ćelija ili tkiva, a zatim ih transkribovali na cDNK koristeći test kit za MMLV-reverznu transkriptazu (Beyotime Biotechnology). Nivo ekspresije mRNA analiziran je PCR instrumentima u realnom vremenu (BioRad) koristeći SYBR green qPCR-mix set za analizu (Beyotime Biotechnology) i standardiziran na GAPDH.

2.6 Protočna citometrija

Ćelije bubrega su uzgajane i tretirane kao što je gore opisano. Bojenje MitoSOX (mitohondrijski ROS), MitoTracker Green (ukupna mitohondrijska masa) i MitoTracker Red (potencijal mitohondrijske membrane) obavljeno je prema uputama proizvođača i prethodnim istraživanjima.22–24 Rezultate smo dobili pomoću Beckman Coulter Flow Cytometra i Softver CytExpert (BD Biosciences).

2.7 Unos glukoze

Izmjerili smo koncentraciju glukoze u supernatantu stanične kulture testom uzimanja glukoze prema protokolu proizvođača i prethodnim istraživanjima (GAHK20; Sigma). Normalizacija rezultata je izvršena prema broju ćelija.

2.8 Gene knockdown

Koristili smo malu interferirajuću RNK (siRNA; RiboBio, Kina) da srušimo specifične gene. Prvo, Lipofectamine RNAiMAX i siRNA (100 pmol) su lagano pomiješani pipetiranjem i inkubirani na 37°C 0,5 h. Zatim smo promijenili standardni medij za ćelijsku kulturu u koktel za transfekciju i inkubirali ćelije 6 h za transfekciju siRNA gena. Zatim smo promijenili koktel za transfekciju u svježi medij za kulturu stanica. Nakon 48 h ćelije bubrega su inkubirane sa IL-22 za dalja istraživanja.

Cistanche može liječitipovreda bubrega

2.9 Western blot

Ekstrahovali smo ukupne proteine ​​iz ćelija ili tkiva pomoću RIPA pufera za lizu (Beyotime Biotechnology, Kina). Zatim smo sakupili lizate centrifugiranjem na 4◦C pri 12 000 o/min tokom 10 min. Nakon toga, lizati su zagrevani puferima za uzorke na 100◦C 15 min, podvrgnuti elektroforezi na natrijum dodecil sulfat-poliakrilamidnom gelu (SDS–PAGE) i elektrotransferirani na poliviniliden difluorid (PVDF) membranu, Nemačka (Millipore). Membrane su zatim blokirane sa 5 procenata goveđeg serumskog albumina (BSA) tokom 2 h i koinkubirane sa primarnim antitelima na 4◦C preko noći. Nakon tri puta ispiranja, membrane su inkubirane sa sekundarnim antitijelima konjugiranim s peroksidazom hrena (CST, SAD). Proteinske mrlje su vizualizirane pomoću poboljšanog hemiluminiscentnog sistema za snimanje.

2.10 Imunofluorescencija

Ćelije bubrega su fiksirane sa 3% -4% paraformaldehida i permeabilizirane sa 0.1% Triton X-100. Zatim smo blokirali ćelije sa 5% BSA na 2 h. Ćelije su inkubirane preko noći sa anti-GLUT1 antitelom na 4◦C, isprane četiri puta, a zatim obojene sa PKH26. Nakon toga, ćelije bubrega su obojene Hoechst 33342 i postavljene na stakalce. Podaci su dobijeni konfokalnom mikroskopijom.

2.11 RNA-seq i bioinformatika

TEC-ovi uzorci (2 × 107) su lizirani i ukupna RNK je ekstrahirana korištenjem RNeasy mini kita, prema protokolima proizvođača (Beyotime, Šangaj, Kina). Eukariotski RNA-seq je izveden korištenjem tehnologije sekvenciranja sljedeće generacije (NGS) na Illumina HiSeq sistemu sekvenciranja, obezbjeđujući 50-osnovnu dužinu čitanja. Poravnavanje očitavanja sekvenciranja je urađeno korištenjem TopHat v2.0.12 u odnosu na UCSC mm10 sklop. Analiza diferencijalne ekspresije izračunata je pomoću paketa DESeq2 (http://www.bioconductor.org/packages/release/ bioc/html/DESeq2.html), a analize statističke značajnosti su izvedene u R (v3.1.1; http://www. .r-project.org/). Prekomjerna zastupljenost putanje izvedena je korištenjem R paketa ReactomePA.

2.12 Statistika

Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD) i prikazani pomoću GraphPad Prism 5.0. Za rezultate koji upoređuju dvije ili više grupa, razlike su izračunate korištenjem Studentovog t-testa ili jednosmjerne analize varijanse (ANOVA): ***p < 0.00="" 1,="" **p="">< 0,01="" i="" *p=""><>

Cistanche može liječitipovreda bubrega

3 REZULTATA

3.1 IL-22 čuva ćelijski metabolizam u TEC

Budući da je sugerirano da su mitohondrije važne organele koje integriraju ćelijski metabolizam i apoptotske procese, procijenili smo mitohondrijalnu funkciju u TEC-ima koji su stimuliranibubregpovredafaktori i tretirani IL-22.25 Kao što je prikazano na slici 1A–D, stopa bazalne potrošnje kiseonika u mitohondriju (OCR), maksimalni respiratorni kapacitet (MRC) i disanje su bili značajno blokirani u TEC-ovima u stresnim situacijama. Značajno je da su ove abnormalnosti u velikoj mjeri spriječene liječenjem IL- 22. Glikoliza u oštećenim TEC-ovima, o čemu svjedoči stopa ekstracelularne acidifikacije (ECAR), također je bila izrazito ograničena, u poređenju sa IL-22 plus TEC-ovima izazvanim stimulansima (Slika 1B i E). Nadalje smo pokazali da kompromitirana oksidativna fosforilacija (OXPHOS) i glikoliza u oštećenim TEC-ima nisu sekundarni efekti apoptoze kroz ko-tretman inhibitorom pan-kapaze (slika S1). I IL-22-posredovani reparativni efekti na metaboličke defekte bili su specifični za bubrežne TEC (Slika S2). Dodatno, IL-22 je promovirao HK2 ćelije OXPHOS i glikolizu u odsustvu stimulusa, što ukazuje da efekti IL-22 na metaboličke puteve nisu specifični za oštećene TEC (Slika S3). Štaviše, naši rezultati su također pokazali da je IL-22 promovirao ekspresiju i translokaciju IL-22R1. U međuvremenu, fosforilacija STAT3 i efekti metaboličkog reprogramiranja IL-22 su potpuno razoružani IL-22R1 nokdaunom (slika S4). Ovi nalazi sugeriraju da je IL-22 obnovio metaboličko stanje TEC-a direktnom aktivacijom IL-22R1. Budući da su brojni dokazi sugerirali da je Glut1 igrao glavnu ulogu u glikolizi i homeostazi glukoze,26 smo, stoga, pitali da li IL{29}} utiče na translokaciju ili ekspresiju Glut1. Kao što smo i očekivali, pokazali smo da IL-22 ne samo da je promovirao translocirani Glut1 na površinu ćelijske membrane (PKH26) i ekspresiju Glut1, već i poboljšao unos glukoze (Slike 1F i G). Sve u svemu, ova zapažanja su pokazala da IL-22 može poboljšati OXPHOS i glikolizu u oštećenim TEC-ovima.

SLIKA 1 IL-22 čuva mitohondrijalnu sposobnost i glikolizu u TEC-ovima. (A i B) Koristimo Seahorse XF96 Extracelular Flux Analyzer za testiranje promjena u brzini ekstracelularne kiseline (ECAR) i stopi potrošnje kisika (OCR) TEC-a. OCR i ECAR u TEC inkubiranim sa 50 mM glukoze, ili 5 µg/mL cisplatina, ili 0.2 mM palmitinske kiseline, ili 4 µM DOX u prisustvu ili odsustvu IL{{8} }. (C) Maksimalni respiratorni kapacitet (MRC) TEC-a procijenjen promjenama OCR-a u realnom vremenu. (D i E) Krive u OCR i ECAR TEC nakon inkubacije sa oligomicinom, FCCP, glukozom, rotenonom i {{10}}DG. (F) Lokalizacija i ekspresija nuklearne (plava), Glut1 (zelena) i plazma membrane (crvena) u TEC-ovima. (G) Potrošnja glukoze u TEC nakon tretmana IL-22 tokom 24 h. n=3; skale, 20 µm; Studentov t-test (neuparen); ***p < 0,001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.2 IL-22 poboljšava akumulaciju disfunkcionalnih mitohondrija u TEC-ima putem aktivacije mitofagije

formiranje LC3 puncta u TEC nakon izlaganja stimulansima (Slika 2F). Zatim smo iscrpili mitofagiju kako bismo procijenili njenu funkciju na metabolizam ćelija tubula putem siRNA-ATG5 (slika S6). Naši podaci sugeriraju da smanjenje mitofagije u TEC značajno inhibira zaštitne efekte IL-22 u očuvanju mitohondrijalne kondicije (Slika 2E), što ukazuje da IL-22 sprječava mitohondrijalnu disfunkciju putem aktivacije mitofagije.

SLIKA 2 IL-22 inhibira mitohondrijalnu disfunkciju i mitohondrijalnu akumulaciju ROS-a putem indukcije mitofagije. (A) Mitohondrijska masa je obojena i procijenjena MitoTracker Green-om i protočnom citometrijom. Mitohondrijski ROS je procijenjen u TECs obojenim MitoSOX (B). Potencijal mitohondrijske membrane je procijenjen u TECs obojenim MitoTracker Green i MitoTracker Red (C); Mitohondrijalnu akumulaciju ROS-a procijenili su MitoTracker Green i MitoSOX (D). (E) Rezultati konfokalne slike sugeriraju mitohondrijalnu ROS proizvodnju označenu sa MitoSOX. (F) Reprezentativne mikroskopske slike ukazuju na formiranje punktata LC3-GFP u prisustvu ili odsustvu IL-22 TEC-a stimuliranih kao (A) tokom 24 h. (E) OCR je procijenjen u prisustvu ili odsustvu IL-22 i siRNA-ATG5 tokom 24 h. n=3; Studentov t-test (neuparen); ***p < 0.001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.3 IL-22 održava mitohondrijski integritet TEC-a putem aktivacije AMPK/AKT signalizacije

AMPK signalizacija, kao ključno signalno čvorište koje povezuje opstanak i metabolizam ćelije, kontrolirani metabolizam glukoze, sintezu lipida i mitohondrijalnu funkciju.28 Prema renalnom zaštitnom efektu interleukina-22 posredovanom metaboličkim reprogramiranjem TEC-a, procijenili smo da li IL-22 je regulirao integritet mitohondrija putem aktivacije AMPK signalne transdukcije. Otkrili smo da IL-22 povećava aktivnost STAT3/AMPK/AKT signalne transdukcije u oštećenim TEC-ovima, što je dokazano fosforilacijom STAT3, AMPK i AKT (Slika 3A). Dodatno, ovi procesi su blokirani u tubularnim ćelijama kojima nedostaje STAT3, što je pokazalo da IL-22 reguliše AMPK/AKT signalizaciju preko STAT3 (Slike 3B i C; Slika S7). Dalje smo inkubirali TEC sa spojem C i LY294002 kako bismo direktno inhibirali AMPK/AKT signalne transdukcije, a zatim procijenili njihove mitohondrijalne funkcije i stanja metabolizma. Rezultati su otkrili da zajednički tretman sa ovim inhibitorima signalizacije značajno sprečava poboljšani OXPHOS i glikolitički tok izazvan tretmanom IL-22 (Slika 3D–I), što sugerira da IL-22 promovira metabolizam TEC-a putem aktivacije AMPK /AKT signalni put.

SLIKA 3 Indukcija AMPK/AKT signalizacije od strane IL-22 održava mitohondrijsku kondiciju. TEC-i su stimulirani 50 mM glukoze, ili 5 µg/mL cisplatina, ili 0.2 mM palmitinske kiseline, ili 4 µM DOX u prisustvu ili odsustvu IL-22, jedinjenja C , ili LY294002 za naznačena vremena. (A i B) Aktivacija AMPK/AKT signalnog puta u TEC ili STAT3-WT i STAT3–KD TEC procijenjena je Western blot analizom. (C i D) Analizirane su promjene u OCR-u i ECAR-u TEC-a. (E) Aktivacija AMPK/AKT signalnog puta u TEC je procijenjena Western blot analizom. (F–I) Promjene u OCR-u i ECAR-u TEC-a mjerene su u TEC-ovima u odnosu na TEC-ove tretirane jedinjenjem C i LY294002. Studentov t-test (neuparen); n=3; ***p < 0,001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.4 IL-22 čuva ćelijski metabolizam i mitohondrijski integritet TEC-a putem indukcije PFKFB3

Štaviše, da bismo istražili kako su mitohondrijalna sposobnost i metabolizam TEC-a poboljšani, koristili smo analizu sekvenciranja RNK (RNA-seq) za procjenu ekspresije gena nakon ozljede stimulusa i tretmana IL-22. Pokazali smo da je više gena značajno promijenjeno u TEC nakon inkubacije IL-22 (slika 4A). Koristeći dostupne baze podataka, izvršena je analiza obogaćivanja skupa gena tih gena koji su regulirani naviše, što je sugeriralo značajno obogaćivanje gena u signalnom putu AMPK i signalnom putu MYC cilja (Slika S8). Značajno je da je PFKFB3 značajno inducirao IL-22 među genima tokombubregpovredafaktori stimulacije (Slika 4A). Ova zapažanja su također naznačena konfokalnim slikama, Q-PCR-om i western blot-om. Visoka ekspresija PFKFB3 zavisila je od AMPK/AKT signalizacije (Slika 4B i C; Slika S9).

Prethodne studije su sugerirale da se PFKFB3 može regulirati brojnim signalnim transdukcijama kako bi se ubrzala regeneracija epitela i popravak nakon ozljede.29,30 Stoga smo spekulirali da je IL-22 inducirao PFKFB3 da očuva ćelijski metabolizam TEC-a i održi njihovu mitohondrijsku sposobnost . Uočili smo da inhibicija AMPK/AKT signalizacije smanjuje ekspresiju PFKFB3 (slika 4D). Dakle, utišali smo PFKFB3 da dalje proučavamo njegove funkcije u TEC-ovima nakon IL-22 inkubacije. Naši nalazi su pokazali da je utišani PFKFB3 ublažio efekte metaboličkog reprogramiranja IL-22 na obnavljanje ECAR-a i OCR-a (Slika 4E i F), te spriječio unos glukoze kao i disfunkcionalne mitohondrije (Slike 4G i H). Štaviše, dalje smo pokazali da su efekti metaboličkog reprogramiranja IL-22 potpuno razoružani STAT3-nokdaunom dok bi prekomjerna ekspresija PFKFB3 mogla spasiti ove fenotipove, što sugerira da je IL-22 obnovio metaboličko stanje oštećenih epitelnih ćelija bubrega putem direktnog ciljanja STAT3-AMPK/AKT-PFKFB3 signalizacije (Slika S10). Uzeti zajedno, ovi nalazi pokazuju da je aktivacija PFKFB3 igrala važnu ulogu u mitohondrijskoj kondiciji i eliminaciji disfunkcionalnih mitohondrija nakonbubregpovreda.

SLIKA 4 IL-22 održava integritet mitohondrija i ćelijski metabolizam TEC-a putem indukcije PFKFB3. (A) Vulkanski dijagram za ekspresiju gena u TECs stimulisanim glukozom, ili cisplatinom, ili palmitinskom kiselinom, ili CCl4 u prisustvu ili odsustvu IL-22 tokom 24 h. (B) Konfokalni mikroskopski podaci pokazali su prekomjernu ekspresiju PFKFB3 u TEC nakon tretmana IL-22, što je zahtijevalo AMPK/AKT signalnu aktivaciju. (C) Rezultati PCR-a u realnom vremenu pokazuju da je IL-22 inducirao prekomjernu ekspresiju PFKFB3 u TEC-ovima, koja bi mogla biti inhibirana AMPK/AKT signalnim blokom. (D) Aktivacija signalnog puta AMPK/AKT/PFKFB3 u TEC nakon tretmana jedinjenjem C i LY294002. (E i F) ECAR i OCR u TEC u prisustvu ili odsustvu IL-22, ili si-PFKFB3 tokom 24 h. (G) Potrošnja glukoze u TEC nakon tretmana IL-22 ili si-PFKFB3 tokom 24 h. (H) Mitohondrijska disfunkcija je procijenjena u TECs obojenim MitoTracker Red i MitoTracker Green. Studentov t-test (neuparen); n=3; ***p < 0.001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.5 IL-22 ublažava ozljedu bubrega kod AKI izazvanog cisplatinom putem supresije bubrežne akumulacije ROS-a i mitohondrijalne disfunkcije

Kako bismo testirali našu hipotezu da IL-22 regulira metaboličke profile bubrega kako bi suzbio ozljedu bubrežnih tubula in vivo, prvobitno smo procijenili bubrežne funkcije kod miševa tretiranih IL-22- koji su primali cisplatin (Slika 5A). Četiri dana nakon injekcije cisplatina, IL-22 ne samo da je značajno smanjio tubularna ćelijska oštećenja i krvarenje; njihova bubrežna disfunkcija je također značajno oslabljena, što je procijenjeno serumskim nivoima azota uree u krvi (BUN) i kreatinina (Cr) (Slika 5B-D). Dalje smo predložili da se spriječi IL-22bubregpovredaputem poboljšanja regeneracije bubrega i aktiviranja AMPK/AKT signalizacije i PFKFB3 (Slika 5E i F; Slika S11). Zatim smo upotrijebili MitoSOX (boja za ROS specifičnu za mitohondrije) i JC-1 (boju zavisnu od potencijala mitohondrijalne membrane) za procjenu mitohondrijalne disfunkcije uključene u ćelijski metabolizam i apoptozu. U segmentima bubrega miševa koji su bili tretirani cisplatinom, bilo je uporedivih akumulacija ROS. Treba napomenuti, četiri dana nakon tretmana IL-22, nivoi ROS su značajno smanjeni u oštećenim bubrezima u poređenju sa ROS kod miševa nakon tretmana PBS (Slika 5G). Uzeti zajedno, ova zapažanja su ponudila dokaze da je IL-22 igrao zaštitnu ulogu u AKI izazvanom cisplatinom putem kontrole mitohondrijalne sposobnosti.

SLIKA 5 IL-22 ublažava oštećenje bubrega kod AKI izazvanog cisplatinom putem inhibicije bubrežne akumulacije ROS-a i disfunkcionalnih mitohondrija. (A) Šematski dijagram eksperimentalnih protokola za procjenu zaštitnih efekata IL-22 kod oštećenja bubrega izazvanog cisplatinom (20 mg/kg). PBS kao kontrolna grupa vehikuluma i N-acetil-l-cistein (NAC, 150 mg/kg) kao pozitivna kontrolna grupa. (B i C) Procijenjeni su nivoi BUN u serumu, nivoi Cr u serumu, težina bubrega i tjelesna težina. Prikazane su reprezentativne HE (D), Ki{9}} bojenje (E), MitoSOX (G) i JC{{10}} (G) slike preseka bubrega. (F) Poređenje STAT3/AMPK/AKT/PFKFB3 aktivacije u ekstraktima bubrega miševa tretiranih IL-22- procijenjeno je Western blot-om. Studentov t-test (neuparen); n=3; ***p < 0,001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.6 IL-22 ublažava oštećenje bubrega uzrokovano dijabetesom putem inhibicije mitohondrijalne disfunkcije kroz aktivaciju AMPK/AKT signalizacije i PFKFB3

Mi i drugi smo pokazali da IL-22 može ispoljiti zaštitnu moć kod dijabetičke nefropatije (DN), koja je bila glavni uzrok ESTD.31–33 Da bismo dalje proučavali osnovne mehanizme, hranili smo db/db miševe visoko- masne dijete (HFD), a zatim ih tretirali IL-22 (2,5 mg/kg, IP) tokom 8 sedmica (slika 6A). Kada su miševi hranjeni samo sa HFD, pored atrofije smo pronašli tubularnu fibrozu i dilataciju bubrega. Nasuprot tome, kada su miševi tretirani IL-22, fibroza bubrega i histopatologija su značajno poboljšane, kao i funkcije bubrega. Poboljšane funkcije bubrega također su demonstrirane smanjenim nivoima Cr u serumu, BUN-a i nivoa ukupnog albumina u urinu/24 h (UAE) (Slika 6B-E). Da bismo proučili jesu li ove aktivnosti povezane s mitohondrijama, procijenili smo mitohondrijalnu funkciju uključenu u ćelijski metabolizam i apoptozu. Rezultati su pokazali da su povećani nivoi mitohondrijalnog ROS-a i akumulirane disfunkcionalne mitohondrije značajno ublažene tretmanom IL-22 (Slika 6F i G). Da bismo dalje proučavali da li su zaštitne funkcije IL-22 u bubrezima posredovane putem PFKFB3, miševima smo ubrizgali PFKFB3 shRNA adenovirus da srušimo PFKFB3. Naši podaci pokazuju da su korisni efekti IL-22 na oštećenje bubrega izazvane HFD-om, nekrozu, steatozu, mitohondrijalnu disfunkciju i akumulaciju ROS-a i aktivaciju povezanih signalnih puteva značajno blokirani srušenjem PFKFB3 (Slika 6B-G) . Povećana ekspresija AMPK/AKT signalizacije je također uočena nakon tretmana sa IL-22 (slika 6H). Uz ublažavanje bubrežne disfunkcije, ekspresija PFKFB3 i važnih enzima u ćelijskom metabolizmu također je poboljšana u bubrezima miševa tretiranih IL-22- (Slike 6H i I). Dodatno, histološka analiza glavnih organa nije pokazala morfološke povrede nakon injekcije IL-22, što sugerira da bi IL-22 mogao biti siguran protuotrov bez značajnih nuspojava ili toksičnih reakcija zabubregpovredaporemećaji (Slika 12S). Sve u svemu, naši podaci sugeriraju da je IL- 22 ublažio oštećenje bubrega putem aktivacije AMPK/AKT signalne transdukcije, inhibicije akumulacije ROS-a i regulacije mitohondrijalne funkcije putem PFKFB3.

SLIKA 6 IL-22 ublažava oštećenje bubrega izazvano dijabetesom putem AMPK/AKT signalizacije i inhibicije disfunkcionalnih mitohondrija putem aktivacije PFKFB3. (A) Šematski dijagram eksperimentalnih protokola za procjenu zaštitnih efekata IL-22 kod oštećenja bubrega uzrokovanih dijabetesom. Db/m kao kontrolna grupa vozila. (B–D) Procijenjeni su nivoi BUN u serumu, nivoi Cr u serumu i UAE. Predstavljene su reprezentativne HE (E), MitoSOX (F) i JC-1 (G) slike preseka bubrega. (H i I) Poređenje STAT3/AMPK/AKT/PFKFB3 aktivacije u ekstraktima bubrega miševa tretiranih IL-22- procijenjeno je Western blot-om. Studentov t-test (neuparen); n=3; ***p < 0.001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

4 DISKUSIJA

IL-22 luče imune ćelije, kao što su NK ćelije, neutrofili, urođene limfoidne ćelije (ILC) i T ćelije, ali ne utiče direktno na ove ćelije. Uglavnom reguliše funkcije epitelnih ćelija zbog ograničene ekspresije IL-22R1 na epitelnim ćelijama uključujući TEC.15,34 Ranije studije su sugerirale da IL-22 može zaštititi od oštećenja bubrežnog epitela i ubrzati regeneraciju tubula kroz inhibiciju NLRP3 inflamasoma i aktiviranje STAT3 i AKT signalizacije.16,31 Međutim, osnovni mehanizmi ove zaštite još nisu razjašnjeni. Za dalje određivanje molekularne osnove funkcije IL- 22 ububregpovreda, prvo istražujemo može li IL-22 ublažiti disfunkciju ćelija bubrega i kasniju apoptozu kroz regulaciju njihovog metaboličkog stanja. Štaviše, proučavamo dva modelabubregpovredabolesti (AKI i DN) sa primjenom IL-22 i uporediti zapažanja sa onima kontrolnih grupa. Ukazujemo na to da IL-22 ispravlja metaboličko reprogramiranje kako bi održao integritet mitohondrija, smanjuje akumulaciju ROS mitohondrija u oštećenim TEC-ovima i ublažava progresivno oštećenje bubrega i nekrozu. Štaviše, naši nalazi sugeriraju da IL- 22 može aktivirati AMPK/AKT-povezane signalne puteve u TEC-ima i bubrezima, važne medijatore zacjeljivanja epitelnih rana i preživljavanja ćelija, kako bi poboljšao mitohondrijalnu disfunkciju i pogoršanje metaboličkih profila i otvorio novi polje za bubrežni zaštitni mehanizam posredovan IL-22. Sve u svemu, naši rezultati pokazuju da su zaštitni efekti IL-22 na bubrege posredovani procesima metaboličkog reprogramiranja.

Kritična uloga OXPHOS-a i glikolize u zaštiti bubrega otkrivena je u prethodnim studijama, gdje balansiranje korištenja goriva inhibitornom S-nitrozilacijom piruvat kinaze M2 (PKM2) štiti odbubregpovreda.19 Naši rezultati, koji ukazuju na promociju OXPHOS-a i glikolize od strane IL-22 putem povećanja ekspresije metaboličkih regulatora i uzimanja glukoze, pokazuju da IL-22 preokreće pogoršanje metaboličkih stanja povezanih sabubregpovreda. Ova zapažanja su u skladu s bubrežnim zaštitnim funkcijama rekombinantnog irisina i također u skladu s nalazima iz hepatocita, gdje su i OXPHOS i glikoliza potrebni za ćelijske funkcije, ali ako su one inhibirane, tada ćelije primarnih tubula i hepatociti postaju nefunkcionalni.35, 36

Mitohondrijska disfunkcija se pojavila kao ključna molekularna osnova koja integrira metaboličke profile i smrt stanica. Ovdje ilustriramo da je nakon stimulacije faktora povrede, tretman TEC-a sa IL-22 imao poboljšanu akumulaciju mitohondrijalnog ROS-a i disfunkcionalnih mitohondrija u poređenju sa smanjenim integritetom i funkcijom mitohondrija u kontrolnim grupama. Važno je da signalni putevi AMPK, senzori kritične energije, moduliraju metaboličke procese kako bi održali ćelijsku homeostazu i spriječili oštećenje ćelija ili tkiva.37–39 U trenutnoj studiji, naša zapažanja pokazuju da IL-22 čuva integritet i funkciju mitohondrija putem aktiviranja AMPK/AKT signalizacija kako bi se pokazalo da IL-22 sprječava mitohondrijalnu disfunkciju direktnom metodom, što je od vitalnog značaja za održavanje respiratornog kapaciteta TEC-a. Nadalje, demonstriramo da IL-22 signalizacija putem STAT3 ima direktne efekte na očuvanje mitohondrijalne kondicije, jer je prethodno ispitano da je indukovana fosforilacija STAT3 kritična za očuvanje integriteta mitohondrija.40,41

Više vrsta literature je ranije pokazalo da PFKFB3 igra ulogu centralnog modulatora u ćelijskom metabolizmu.29–30,42 Ovdje prvo pokazujemo da IL-22 promoviše aktivaciju PFKFB3 putem AMPK/AKT signalizacije u TEC-ovima, sugerirajući IL{ {6}} reguliše metabolička stanja uključivanjem kontrole PFKFB3. Štaviše, prethodne studije dalje pokazuju da je PFKFB3 važan za kontrolu pretjeranog OXPHOS-a i glikolize u velikom broju ćelija ili tkiva.42,43 U skladu s ovim studijama, naša zapažanja također ukazuju na promociju OXPHOS-a i glikolize u IL-22- tretirani TEC putem aktivacije PFKFB3. Među brojnim nizvodnim modulatorima IL-22 koji su istraženi, naši podaci pokazuju da je PFKFB3 značajno povećan nakon tretmana IL-22 tokom TEC oštećenja i da je STAT3–AMPK/AKT PFKFB3 osa vitalna za očuvanje integriteta mitohondrija tokombubregpovreda(Slika 7). Ostaje da se ispitaju da li IL-22 također reguliše druge metaboličke regulatore i procese povezane s ozljedom bubrega kroz aktiviranje STAT3–AMPK/AKT-PFKFB3 signalnog puta.

SLIKA 7 Naši nalazi ilustruju važnu ulogu IL-22 u kontroli metabolizma ćelija bubrega za liječenje oštećenja bubrega kroz aktiviranje STAT3-AMPK/AKT-PFKFB3 ose. Ovi rezultati sugeriraju da bi terapeutske mogućnosti IL-22 i ciljanje povezane metaboličke signalizacije mogle biti direktno povoljne za liječenje ili prevenciju brojnih oštećenja bubrega

5 ZAKLJUČCI

U zaključku, demonstrirali smo terapeutski potencijal i osnovne mehanizme IL-22 kod oštećenja bubrega. IL-22 je regulisao metabolizam bubrežnih ćelija putem metaboličkog reprogramiranja radi očuvanja integriteta mitohondrija. Inhibicija njihovih regulatora (tj. AMPK, Akt i PFKFB3) mogla bi dovesti do abnormalnih metaboličkih profila i gubitka mitohondrijalne kondicije, kao što je naznačeno u TEC sa spontanim-22 tretmanom, koji je imao povećanu akumulaciju disfunkcionalnih mitohondrija i mitohondrijalnih ROS. Što je najvažnije, oštećenje bubrega zbog mitohondrijalne disfunkcije i akumulacije ROS-a na modelima miševa je značajno ublaženo IL-22 tretmanom kroz aktivaciju STAT3-AMPK-AKT-PFKFB3 signalizacije. Stoga je naša studija pokazala da ciljanje povezane metaboličke signalizacije može biti direktno povoljno za brojne bolesti oštećenja bubrega, a IL-22 je potencijalno terapeutsko sredstvo za prevenciju i liječenje ovih bolesti.

Cistanche proizvodi mogu tretiratipovreda bubrega

Od: 'IL-22-posredovano bubrežno metaboličko reprogramiranje putem PFKFB3 za liječenjebubregpovreda' byWei Chen, et al

---Clin. Transl. Med. 2021;11:e324.

REFERENCE

1. Mehta RL, Burdmann EA, Cerdá J, et al. Prepoznavanje i upravljanje akutnimbubregpovredau Međunarodnom društvu za nefrologiju 025 Global Snapshot: multinacionalna studija poprečnog presjeka. Lancet. 2016;387:2017-2025.

2. Lameire NH, Bagga A, Cruz D, et al. Akutnabubregpovreda: sve veći globalni problem. Lancet. 2013;382:170-179.

3. Mehta RL, Cerdá J, Burdmann EA, et al. Inicijativa Međunarodnog nefrološkog društva 0by25 za akutne bolestibubregpovreda(nula smrtnih slučajeva koji se mogu spriječiti do 2025.): slučaj ljudskih prava za nefrologiju.Lancet. 2015;385:2616-2643.

4. Levey AS, James MT. Akutnabubregpovreda. Ann Intern Med.2017;167:ITC66-ITC80.

5. Jansen MPB, Florquin S, Roelofs JJTH. Uloga trombocita u akutnojbubregpovreda. Nat Rev Nephrol. 2018;14:457-471.

6. Agarwal A, Dong Z, Harris R, et al. Ćelijski i molekularni mehanizmi AKI. J Am Soc Nephrol. 2016;27:1288-1299.

7. Linkermann A, Chen GC, Dong G, Kunzendorf U, KrautwaldS, Dong Z. Regulisana smrt ćelija u AKI. J Am Soc Nephrol.2014;25:2689-2701.

8. Ferenbach DA, Bonventre JV. Mehanizmi maladaptivnog popravka nakon AKI koji dovode do ubrzanog starenja bubrega i CKD.Nat Rev Nephrol. 2015;11:264-276.

9. Chawla LS, Eggers PW, Star RA, Kimmel PL. Akutnabubregpovredai hronična bolest bubrega kao međusobno povezani sindromi. N Engl J Med. 2014;371:58-66.

10. He L, Wei QQ, Liu J, et al. AKI na CKD: pojačane ozljede, potisnuta popravka i osnovni mehanizmi. Kidney Int.2017;92:1071-1083.

11. Forbester JL, Lees EA, Goulding D, et al. Interleukin-22 promoviše fagolizozomalnu fuziju da indukuje zaštitu od salmonella enterica Typhimurium u ljudskim epitelnim ćelijama. Proc Natl Acad Sci USA. 2018;115:10118-10123.

12. Geng H, Bu HF, Liu F, et al. U upaljenim crijevnim tkivima i epitelnim stanicama, signalizacija interleukina 22 povećava ekspresiju duge nekodirajuće RNK H19, koja potiče regeneraciju sluznice. Gastroenterologija. 2018;155:144-155.

13. Aden K, Tran F, Ito G, et al. ATG16L1 upravlja signalizacijom interleukina-22 u epitelu crijeva putem cGAS-STING-a. J ExpMed. 2018;215:2868-2886.

14. Huber SN, Gagliani LA, Zenewicz FJ, et al. IL-22BP reguliše inflamazom i modulira tumorigenezu u crijevima. Priroda. 2012;491:259-263.

15. Lindemans CA, Calafiore M, Mertelsmann AM, et al. Interleukin-22 promoviše regeneraciju epitela posredovanu crijevnim matičnim stanicama. Priroda. 2015;528:560-564.

16. Xu MJ, Feng D, Wang H, Guan Y, Yan X, Gao B. IL-22 ublažava ishemijsko-reperfuzijsku ozljedu bubrega ciljajući epitel proksimalnog tubula. J Am Soc Nephrol. 2014;25:967-977.

17. Kulkarni OP, Hartter I, Mulay SR, et al. Toll-like receptor 4-induciran IL-22 ubrzava regeneraciju bubrega. J Am Soc Nephrol. 2014;25:978-989.

18. Kang HM, Ahn SH, Choi P, et al. Defektna oksidacija masnih kiselina u epitelnim stanicama bubrežnih tubula ima ključnu ulogu u razvoju fibroze bubrega. Nat Med. 2015;21:37-46.

19. Zhou HL, Zhang R, Anand P, et al. Metaboličko reprogramiranje pomoću sistema S-nitrozo-CoA reduktaze štiti odbubregpovreda. Priroda. 2019;565:96-100.

20. Dumešić PA, Egan DF, Gut P, ​​et al. Evolucijski konzervirani uORF reguliše PGC1 i oksidativni metabolizam kod miševa, muva i tune. Cell Metab. 2019;30:190-200.

21. Shyh-Chang N, Zhu H, Yvanka de Soysa T, et al. Lin28 poboljšava popravku tkiva reprogramiranjem ćelijskog metabolizma. Cell. 2013;155:778-792.

22. Chen W, Luan J, Wei G, et al. In vivo hepatocelularna ekspresija interleukina-22 korištenjem hibridnih nanočestica zasnovanih na penetraciji kao potencijalnih terapeutika protiv hepatitisa. Biomaterijali. 2018;187:66- 80.

23. Chen W, Zhang X, Fan J, et al. Povezivanje interleukina-22 sa apolipoproteinom AI poboljšava miševe od povrede jetre izazvane acetaminofenom. Theranostics. 2017;7:4135-4148.

24. Zai W, Chen W, Wu Z, et al. Ciljana isporuka gena interleukina-22 u jetru polimetforminom i hibridnim nanočesticama zasnovanim na penetraciji za liječenje nealkoholne masne bolesti jetre. ACS Appl Mater interfejsi. 2019;11:4842-4857.

25. Khacho M, Harris R, Slack RS. Mitohondrije kao centralni regulatori sudbine neuralnih matičnih ćelija i kognitivnih funkcija. Nat Rev Neurosci. 2019;20:34-48.

26. Ip WKE, Hoshi N, Shouval DS, Snapper S, Medzhitov R. Anti-inflamatorni efekat IL-10 posredovan metaboličkim reprogramiranjem makrofaga. Nauka. 2017;356:513-519.

27. Saito Y, Chapple RH, Lin A, Kitano A, Nakada D. AMPK štiti ćelije koje iniciraju leukemiju kod mijeloidnih leukemija od metaboličkog stresa u koštanoj srži. Cell Stem Cell. 2015;17:585- 596.

28. Mihajlova MM, Shaw RJ. AMPK signalni put koordinira rast ćelije, autofagiju i metabolizam. Nat Cell Biol. 2011;13:1016-1023.

29. Li FL, Liu JP, Bao RX, et al. Acetilacija akumulira PFKFB3 u citoplazmi kako bi potaknula glikolizu i zaštitila stanice od apoptoze izazvane cisplatinom. Nat Commun. 2018;9:508.

30. De Bock K, Georgiadou M, Schoors S, et al. Uloga glikolize izazvane PFKFB3- u nicanju posuda. Cell. 2013;154:651-663.

31. Dudakov JA, Hanash AM, van den Brink MR. Interleukin-22: imunobiologija i patologija. Annu Rev Immunol. 2015;33:747- 785.

32. Wang S, Li Y, Fan J, et al. Interleukin-22 je ublažio oštećenje bubrega i fibrozu kod dijabetičke nefropatije kroz inhibiciju aktivacije inflamasoma NLRP3. Cell Death Dis. 2017;8:e2937.

33. Shen YL, Chen W, Han L, et al. VEGF-B antitijelo i fuzioni protein interleukina-22 poboljšavaju dijabetičku nefropatiju kroz inhibiranje akumulacije lipida i upalnih odgovora. Acta Pharm Sin B. 2020. https://doi.org/10.1016/j. apsb.2020.07.002.

34. Ouyang W, O'Garra A. Citokini porodice IL-10 IL-10 i IL-22: od osnovne nauke do kliničkog prijevoda. Imunitet. 2019;50:871- 891.

35. Xiang X, Feng D, Hwang S, et al. Interleukin-22 ublažava akutnu i hroničnu insuficijenciju jetre reprogramirajući oštećene puteve regeneracije kod miševa. J Hepatol. 2020;72:736-745.

36. Chen W, Zai W, Fan J, et al. Interleukin-22 pokreće metaboličko adaptivno reprogramiranje za održavanje mitohondrijalne kondicije i liječenje ozljeda jetre. Theranostics. 2020;10:5879-5894.

37. Peng H, Wang Q, Lou T, et al. Preslušavanje mišića i bubrega posredovano miokinom potiskuje metaboličko reprogramiranje i fibrozu u oštećenim bubrezima. Nat Commun. 2017;8:1493.

38. Saberi B, Ybanez MD, Johnson HS, Gaarde WA, Han D, Kaplowitz N. Protein kinaza c (PKC) učestvuje u hepatotoksičnosti acetaminofena kroz c-jun-n-terminal kinaze (jnk) zavisne i nezavisne signalne puteve. Hepatologija. 2014;59:1543-1554.

39. Mo R, Lai R, Lu J, et al. Poboljšana autofagija doprinosi zaštitnim efektima IL-22 protiv oštećenja jetre izazvanih acetaminofenom. Theranostics. 2018;8:4170-4180.

40. Wegrzyn J, Potla R, Chwae YJ, et al. Funkcija mitohondrijalnog Stat3 u ćelijskom disanju. Nauka. 2009;323:793-797.

41. Chen W, Hu Y, Ju D. Genska terapija za neurodegenerativne poremećaje: napredak, uvidi i izgledi. Acta Pharm Sin B. 2020;10:1347-1359.

42. Cao Y, Zhang X, Wang L, et al. PFKFB3-posredovana endotelna glikoliza potiče plućnu hipertenziju. Proc Natl Acad Sci USA. 2019;116:13394-13403.

43. Doménech E, Maestre C, Esteban-Martínez L, et al. AMPK i PFKFB3 posreduju u glikolizi i preživljavanju kao odgovor na mitofagiju tokom mitotičkog zaustavljanja. Nat Cell Biol. 2015;17:1304- 1316.