Predvidite ulogu LncRNA u starenju bubrega na osnovu sekvenciranja RNK Ⅱ

Korelacija lncRNA Gm43360 i njenih potencijalnih ciljnih mRNA

LncRNA Gm43360 je odabran za istraživanje jer je povezao dvije mreže koekspresije lncRNA-mRNA. Nivo ekspresije Adra1a je bio u pozitivnoj korelaciji (rho=0.8650, p=0.026) sa nivoom Gm43360, Csnk1a1 (kazein kinaza 1A1) je bio u negativnoj korelaciji (rho{{12 }}.8084, p=0.0084) (slika 5a). Da bi se dalje potvrdila korelacija lncRNA Gm43360 i njenih potencijalnih ciljnih mRNA Adra1a i Csnk1a1, u ovoj studiji je dizajniran plazmid prekomerne ekspresije lncRNA Gm43360. Ekspresija Csnk1a1 se smanjila prema očekivanjima, a ekspresija Adra1a se takođe smanjila, ali ne značajno. Zatim smo srušili lncRNA Gm43360 pomoću siRNA da bismo otkrili da li je utjecala na ekspresiju njenih ciljnih mRNA. Kao što se i očekivalo, Csnk1a1 je povećan u lncRNA Gm43360 knockdown ćelijama u odnosu na negativnu kontrolnu grupu siRNA (slika 5b). Deseto, otkrili smo ulogu lncRNA Gm43360 u ćelijskom ciklusu. Rezultati kompleta za brojanje ćelija-8 (CCK-8) pokazali su da lncRNA Gm43360 promoviše vitalnost ćelija (slika 5c). Rezultati su pokazali da lncRNA Gm43360 povećava procenat ćelija S faze i smanjuje procenat ćelija G1 faze u poređenju sa negativnom kontrolom (slika 5d). Te p53 i p21 proteini su bili uključeni u regulaciju ćelijskog ciklusa i stoga su bili znakovi ćelijskog starenja. Nivoi ekspresije p53 i p21 su značajno smanjeni u grupi sa prekomernom ekspresijom u odnosu na kontrolnu grupu. Nivoi ekspresije p53 i p21 su značajno povećani u siRNA grupi u odnosu na siRNA kontrolnu grupu (slika 5e). Prekomjerna ekspresija lncRNA Gm43360 smanjila je broj SA- -gal-pozitivnih ćelija, a -gal-pozitivnih ćelija se povećala u grupi transfektiranih Gm43360 (slika 5f). Uzeti zajedno, ovi rezultati pokazuju da lncRNA Gm43360 inhibira starenje bubrežnih tubularnih epitelnih ćelija puteminhibiranje ekspresije Csnk1a1.

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE SA 25% EHINAKOZIDA I 9% AKTEOZIDA ZA BUBREŽNU FUNKCIJU

Diskusija

U ovoj studiji procijenili smo podatke o ekspresiji mRNA iz bubrega mladih i starih miševa i sproveli analizu bio-informacija koje su otkrile funkcije aberantno eksprimiranih mRNA. Uočili smo 347 mRNK sa povećanom regulacijom i 355 mRNA sa smanjenom regulacijom, kao i 130 lncRNA sa povećanom regulacijom i 91 smanjenu lncRNA ustari mišji bubrezi u poređenju sa bubrezima mladih miševa. Osim toga, pokazalo se da su ove mRNA uključene u puteve povezane sa starenjem, kao što suoksidativna fosforilacija, AMPK signalni put, Wnt signalni put, Rap1 signalni put i bolest povezana sa starenjem, koji su pokazali funkcije različito eksprimiranih mRNA u patogenezi bubrežnog starenja.

Duga nekodirajuća RNA NEAT1 je zaštitni faktor u napredovanju fibroze bubrega u bubrežnim tubularnim epitelnim ćelijama [21]. Slučajno, u našim rezultatima sekvenciranja, lncRNA NEAT1 je bila izražena na nižim razinama u bubrezima starijih miševa nego kod mladih miševa, što je u skladu s prethodnim nalazima. LincRNA-Gm4419 ubrzava upalu i fibrozu putem mehanizama posredovanih NF-kB/NLRP3 inflamazomima kod dijabetičke nefropatije [22]. U našim rezultatima sekvenciranja, također smo otkrili da je ekspresija Gm4419 bila veća u bubrezima starijih miševa nego kod mladih miševa, ali nije bilo značajne razlike. LncRNA Gm43360 se nalazi na hromozomu 5 (Chr5:122494022–122,494,908, 2887 bp). Prema UCSC Genome Browseru, Gm43360 se nalazi u intronu gena Atp2a2 koji kodira protein. Međutim, do danas nije bilo izvještaja o uključenosti lncRNA Gm43360 u bolesti. U ovoj studiji, nokdaun lncRNA Gm43360 potaknuo je starenje bubrežnih tubularnih epitelnih ćelija. Osim toga, identificirali smo mnoge različito eksprimirane lncRNA u rezultatima sekvenciranja i istražili ih.

LncRNA su klasifikovane u cis-regulaciju ili trans-regulaciju zasnovanu na lncRNA regulatornim mehanizmima. Cis-djelujuće lncRNA mogu utjecati na ekspresiju susjednih gena ovisno o elementima koji djeluju na cis, kao što su promotori, pojačivači i regulatorne sekvence, koje su udaljenosti između lncRNA i mRNA manje od 100 kb. Trans-djelujuće lncRNA se odnose na lncRNA koje napuštaju mjesto transfekcije i djeluju na udaljenim mjestima (tj. udaljenost između lncRNA i mRNA je veća od 100 kb) [23]. lncRNA MAAT povećava ekspresiju susednog gena Mbnl1 kroz cis-regulatorni modul [24]. lncRNA Pnky igra ulogu trans-djelovanja regulatora u razvoju korteksa [25]. U ovoj studiji, postojao je transregulatorni odnos između lncRNA Gm43360 i Csnk1a1. Csnk1a1 je gen supresor tumora [26] koji kodira protein koji učestvuje u ćelijskom ciklusu i procesu ćelijske diobe [27]. Csnk1a1 downregulation induciraupalne bolesti povezane sa starenjemodgovor sa zaustavljanjem rasta kod kolorektalnih tumora [26]. Csnk1a1 je bio smanjen kada je Gm43360 bio reguliran naviše; stoga je vjerovatno da lncRNA Gm43360 učestvuje ustarenje bubregabyregulacija ekspresije Csnk1a1.

Zaključci

Naše istraživanje mreže koekspresije lncRNA-mRNA ustarenje bubregaotkrili su lncRNA, lncRNA Gm43360, koja može igrati zaštitnu ulogu u starenju bubrega i proširila naše razumijevanje mehanizama uključenih ustarenje bubrega

materijali i metode

Uzorci Mladi (3-mjesečni) i stari (24-mjesečni) mužjaci miša C57BL/6J kupljeni su od Centra za eksperimentalne životinje Univerziteta Xiamen i uzgajani su u standardnom okruženju. Svi miševi su imali slobodan pristup hrani i vodi. Miševi su se aklimatizirali na novi objekat mjesec dana prije nego što su žrtvovani. Miševi su anestezirani uretanom intraperitonealnom injekcijom u dozi od 750 mg/kg prije uzimanja uzorka. Mladi i stari miševi su žrtvovani istog dana.Rezidualni mišji bubregtkivo je korišteno za sekvenciranje u svakom testu. Urađeni su RNA-seq i histopatologijaodvojeni bubreziod istog miša. Tkivo bubrega je sakupljeno od miševa. Jedan bubreg je odmah uronjen u 10% neutralni puferirani formalin za naknadno ugradnju sekcija, a drugi bubreg je podijeljen na nekoliko tkiva i odmah stavljen u tečni dušik, a zatim pohranjen na -80 stepeni. Studiju je podržao Etički komitet Prve pridružene bolnice Univerziteta Xi'an Jiaotong (Shaanxi, Kina) (br. 2018-G-164). Sve metode su provedene prema smjernicama i propisima životinjske etike. Ova studija je provedena u skladu sa smjernicama ARRIVE.

Histopatologija bubrega

Uzorci bubrežnog tkiva mladih i starih miševa fiksirani su u 10% rastvoru paraformaldehida preko noći. Deset sekcija je dehidrirano, umotano u parafin i izrezano na 4-µm debljine. PAS i Massonovo trihromatsko bojenje izvedeno je standardnim protokolima. Slike su snimljene kamerom i izmjerena je pozitivna površina bojenja. Površina za slike histopatološke kamere izračunata je pomoću Image-Pro Plus 6.0.

SA‑ ‑gal bojenje

Aktivnost SA{{0}}gal je analizirana korištenjem kompleta za bojenje SA- -gal (Cell Signaling Technology #9860) prema protokolu proizvođača. Izmjerena je površina pozitivnog bojenja, a SA- -gal-pozitivne ćelije su izračunate pomoću Image-Pro Plus 6.0.

Konstrukcija i sekvenciranje biblioteke za ekstrakciju RNK

Samples (each 5 mice in young and old mice) were used for lncRNA and mRNA expression analyses. Young mice were numbered 3M1, 3M2, 3M3, 3M4, and 3M5, and old mice were numbered 24M1, 24M2, 24M3, 24M4, and 24M5. Total RNA was extracted using Trizol reagent (thermofsher, 15,596,018) following the manufacturer's instruction. The total RNA quantity and purity were analyzed of Bioanalyzer 2100 and RNA 6000 Nano LabChip Kit (Agilent, CA, USA, 5067−1511), and high-quality RNA samples with RIN number>7.0 su korišteni za konstruiranje biblioteke sekvenciranja. Nakon ekstrakcije ukupne RNK, mRNA je pročišćena od ukupne RNK (5 ug) pomoću Dynabeads Oligo (dT) (Thermo Fisher, Kalifornija, SAD) uz dva kruga prečišćavanja. Nakon prečišćavanja, mRNA je podijeljena na kratke fragmente korištenjem dvovalentnih katjona na visokim temperaturama (Magnesium RNA Fragmentation Module (NEB, kat. e6150, SAD) pod 94 stepena 5-7 min). Zatim su cijepani RNA fragmenti reverzno transkribirani da se dobije cDNK pomoću SuperScript™ II reverzne transkriptaze (Invitrogen, kat. 1,896,649, SAD), koji su zatim korišteni za sintezu U-obilježenih drugolančanih DNK sa E. coli DNK polimerazom I ( NEB, kat.m0209, SAD), RNase H (NEB, kat.m0297, SAD) i dUTP rješenje (Termo Fisher, kat.R0133, SAD). A-baza je zatim dodana na tupe krajeve svake niti, pripremajući ih za ligaciju na indeksirane adaptere. Svaki adapter je sadržavao prepust sa T-bazom za vezivanje adaptera za fragmentiranu DNK sa A-repom. Adapteri sa dvostrukim indeksom su vezani za fragmente, a odabir veličine je izvršen sa AMPureXP kuglicama. Nakon toplotno labilnog UDG enzima (NEB, kat.m0280, SAD) tretmana U-obilježenih drugolančanih DNK, ligirani proizvodi su amplificirani PCR-om pod sljedećim uvjetima: početna denaturacija na 95 stepeni u trajanju od 3 min; 8 ciklusa denaturacije na 98 stepeni u trajanju od 15 s, žarenja na 60 stepeni u trajanju od 15 s i ekstenzije na 72 stepena u trajanju od 30 s; a zatim konačna ekstenzija na 72 stepena u trajanju od 5 min. Prosječna dužina umetanja za finalne biblioteke cDNK bila je 300±50 bp. Konačno, izvršili smo sekvenciranje parnih krajeva 2×150 bp (PE150) na Illumina Novaseq™ 6000 (LC-Bio Technology CO., Ltd., Hangzhou, Kina) prema protokolu proizvođača [28].

Bioinformatička analiza Sekvenca i filtriranje čistih čitanja

Biblioteka cDNK konstruisana tehnologijom od objedinjene RNK izuzorci bubregamiševa je sekvencionirano i pokrenuto sa Illumina NovaseqTM 6000 platformom za sekvence. Koristeći Illumina pristup RNA-seq uparenog kraja, sekvencirali smo transkriptom, generirajući ukupno milion čitanja uparenih krajeva veličine 2×150 bp. Čitanja dobijena od mašina za sekvenciranje uključuju neobrađena čitanja koja sadrže adaptere ili baze niske kvalitete što će uticati na sljedeće sklapanje i analizu. Dakle, da bi se dobila visokokvalitetna čista čitanja, čitanja su dodatno filtrirana od strane Cutadapt-a [29] (https://cutadapt.readthedocs.io/en/stable/, verzija:cutadapt-1.9). Parametri su bili sljedeći:

1) uklanjanje čitanja koja sadrže adaptere;

2) uklanjanje čitanja koja sadrže polyA i poly;

3) uklanjanje očitavanja koja sadrži više od 5% nepoznatih nukleotida (N);

4) uklanjanje nekvalitetnih očitavanja koja sadrže više od 20% nekvalitetnih (Q-vrijednost manja ili jednaka 20) baza.

Kvalitet deset sekvenci je verificiran korištenjem FastQC [30] (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/, 0.11.9). uključujući Q20, Q30 i GC sadržaj čistih podataka. Nakon toga, proizvedeno je ukupno Gbp očišćenih očitavanja uparenih krajeva. Neobrađeni podaci o sekvenci su dostavljeni u NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) skupove podataka sa pristupnim brojem GSE154223.

Referentni genom/napomena je bio Mus_musculus.GRCm38. Izvor i verzija genske oznake korištene za analize je Ensembl_v88.

Transkripti skupština

Prvo, Cutadapt [29] je korišten za uklanjanje očitavanja koja su sadržavala kontaminaciju adaptera, baze niske kvalitete i neodređene baze. Deset kvalitetnih sekvenci je veoma nahranjeno korišćenjem FastQC (http://www.bioinformatics.Babra ham.ac.uk/projects/fastqc/). Koristili smo Bowtie2 [31] i Hisat2 [32] za mapiranje čitanja u genom miša. Mapirana očitanja svakog uzorka sastavljena su pomoću StringTie-a [33]. Deset, svi transkripti izuzorci bubregaspojeni su kako bi se rekonstruirao sveobuhvatan transkriptom koristeći Perl skripte. Nakon što je generiran konačni transkriptom, StringTie [33] i edgeR [34] su korišteni za procjenu nivoa ekspresije svih transkripata.

LncRNA identifikacija

Prije svega, odbačeni su transkripti koji su se preklapali s poznatim mRNA i transkripti kraći od 200 bp. Zatim smo koristili CPC [35] i CNCI [36] da predvidimo transkripte sa potencijalom kodiranja. Svi transkripti sa CPC bodom<-1 and CNCI score<0 were removed. The remaining transcripts were considered as lncRNAs.

Diferencijalno izražena analiza gena (DGEs).

StringTie [33] was used to perform expression levels for mRNAs and lncRNAs by calculating FPKM [37]. Genes differential expression analysis was performed by DESeq2 software between two different groups (and by edgeR between two samples) [34, 38]. The genes with the parameter of q value below 0.6 and absolute fold change>2 su smatrani različito eksprimiranim genima.

Predviđanje ciljanog gena i funkcionalna analiza lncRNA

Da bismo istražili funkciju funkcije lncRNA, predvidjeli smo cis-ciljne gene lncRNA. LncRNA mogu igrati cis ulogu u djelovanju na susjedne ciljne gene. U ovoj studiji, kodirajući geni u 100,000 uzvodno i nizvodno odabrani su Perl skriptom. Zatim smo pokazali funkcionalnu analizu ciljnih gena za lncRNA koristeći skripte BLAST2GO [39]. Puna veza komandi na javni domen bila je Jie-Li/README.md na glavnom · dandan-li/Jie-Li (github.com).

Kategorije ontologije gena (GO) i analiza Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)

Bioinformatička analiza za sekvenciranje RNK izvršena je pomoću alata OmicStudio (http://www.omicsudio.cn/tool). Analiza funkcionalnog obogaćivanja genske ontologije (GO) i analiza obogaćivanja iz Kjoto enciklopedije gena i genoma (KEGG) [37–39] korišćene su za analizu bioloških funkcija predviđenih ciljnih gena. GO analiza pojašnjava glavne biološke procese kroz tri aspekta: sastav ćelije, molekularne funkcije i biološke procese (http://www.geneontology.org/). Analiza prvo stavlja sve različito izražene gene i pozadinske gene u GO bazu podataka. Svaka stavka je mapirana, broj gena u svakoj stavci se izračunava, a hipergeometrijska distribucija se koristi za testiranje hipoteze kako bi se dobila P vrijednost rezultata obogaćivanja. Što je P vrijednost niža, to je značajniji rezultat obogaćivanja. KEGG je resurs baze podataka koji analizira različito eksprimirane mRNA genetskom biologijom kako bi istražio važne puteve povezane s ciljnim genima (https://www.genome.jp/kegg/). Rezultati su izraženi p-vrijednostima; što je p-vrijednost niža, to je rezultat obogaćivanja značajniji.

qRT–PCR

GAPDH je korišten kao endogena kontrola. Zatim su izračunati relativni nivoi ekspresije nepoznatih gena. Svi prajmeri su dizajnirani i sintetizirani posebno za ovaj eksperiment. Prajmeri za GAPDH su komercijalizovani. Specifičnost prajmera Adra1a i Csnk1a1 identifikovana je po jednom vrhuncu krivulje taljenja.

Izgradite mrežu koekspresije mRNA-lncRNA

Transregulacija je zasnovana na istraživanju, a zatim je izračunata trans energija. Što je trans energija bila manja, to je veća mogućnost vezivanja. Zatim je takođe izračunat koeficijent korelacije mRNA-lncRNA. Mreža mRNA-lncRNA je konstruirana odabirom Spearmanovog koeficijenta korelacije većeg od 0.9. Mreža koekspresije mRNA-lncRNA je konstruisana korišćenjem softvera Cytoscape (v3.7.1).

Ćelijska kultura

Mišje bubrežne proksimalne tubularne epitelne ćelije (MRPT-EpiCs) uzgajane su u epitelnoj ćelijskoj sredini životinje (EpiCM-a, Cat. #4131) koja sadrži 2% fetalnog goveđeg seruma (FBS, Cat. #0010) i dodatak za rast epitelnih ćelija - životinja (EpiCGS-a, Cat. #4182) bez antibiotika u vlažnom inkubatoru na 37 stepeni i 5% CO2. Podloga za kulturu se mijenjala svaka 2-3 dana. Ćelije u logaritamskoj fazi rasta su subkulturisane kada je rast dostigao 90%. Suspenzija ćelija digestirana tripsinom je zasijana u 6-ploče sa 2*104 -5*104 ćelije u svakoj jažici. Sve ćelije korištene za transfekciju bile su između 2. i 5. generacije.

Konstrukcija plazmida i transfekcija ćelija

Plazmid prekomerne ekspresije lncRNA Gm43360 konstruisao je GeneChem (Šangaj, Kina). Okosnica plazmida bila je GV658, a CMV promotor je pokretao ekspresiju lncRNA. Klonirana nukleotidna sekvenca je data u dodatnom materijalu. Za obaranje lncRNA Gm43360, tri lncRNA ENS MORAJU00000197656-ciljati siRNA (lncRNA Gm43360- siRNA1, 5'-CCUUCACUCCAGCUGGUAATT-3'; lncRNA Gm43360-siRNA2, 5'-CCCUGUCA UGAAGUUTT-3'; i lncRNA Gm43360-siRNA3, 5'-GGUCAAAUAACUCAAUGGGTT-3') dizajnirani su i sintetizirani u GenePharma (Šangaj, Kina). Prema protokolu proizvođača, ćelije su transficirane sa 2500 ng plazmida ili 100 pmol siRNA sa 6 µl Lipofectamine™ 2000 transfekcionog reagensa (Invitrogen, SAD) po jažici. Nivoi ekspresije RNK i proteina detektovani su 48 sati nakon transfekcije, a svaki eksperiment je ponovljen najmanje tri puta. Kvantitativni PCR u realnom vremenu korišćen je za validaciju efikasnosti prekomerne ekspresije i obaranja lncRNA Gm43360.

Western blot analiza

Kultivisane ćelije su isprane ledeno hladnim PBS, dodano je 120 µl RIPA pufera (Heart, Kina), a inhibitor proteaze i PMSF (Heart, Kina) su dodani 30 minuta na ledu. Nakon sakupljanja ćelija u različite epruvete za mikrocentrifugu, koncentracija proteina je kvantifikovana. Pufer za punjenje je dodat svakom uzorku, a zatim je kuvan 7 minuta. Trideset mikrograma uzorka je odvojeno 12% SDS-PAGE (Beyotime, Kina) i elektrotransferirano na PVDF membrane (Thermo Fisher, SAD). Zatim su membrane blokirane sa 5% mlijeka. Membrane su inkubirane sa specifičnim primarnim antitelima: anti-p21 (1:1000, Abcam, ab109199), anti-p53 (1:1000, Proteintech, 10442-1-AP) i anti-GAPDH (1:3000, Profintech , 60004-1-Ig) preko noći na 4 stepena . Nakon ispiranja sa TBST, membrane su inkubirane sa sekundarnim antitelom 1 h na sobnoj temperaturi. Proteinske trake su opažene pomoću hemiluminiscentnog kompleta (Millipore, SAD). Ekspresija GAPDH je korištena za normalizaciju nivoa proteina.

Test proliferacije ćelija

Kapacitet ćelijske proliferacije određen je testom za brojanje ćelija-8 (CCK-8). Četrdeset osam sati nakon transfekcije, 90 µl novog medijuma i 10 µl CCK-8 rastvora je dodato u svaku jažicu (Beyotime, C0042). Ćelije su inkubirane 1-4 h na 37 stepeni u 5% CO2 i izmerene na 450 nm pomoću univerzalnog čitača mikroploče (Bio-Tek, SAD).

Protočna citometrijska analiza

Ćelije su postavljene u ploče sa 6-jažicama dan prije transfekcije. Četrdeset osam sati nakon transfekcije, ćelije su tripsinizovane i centrifugirane na 1000 rpm tokom 5 minuta. Zatim su ćelije fiksirane u 70% etanolu na 4 stepena najmanje 4 h. Nakon centrifugiranja, stanicama je dodana otopina za bojenje RNaze A i propidijum jodida (PI), a ćelije su zatim inkubirane 30 minuta na sobnoj temperaturi u mraku. Ćelije obojene Te analizirane su pomoću ACEA NovoCyte (Biosciences, SAD).

Statistička analiza

Podaci mjerenja po normalnoj distribuciji predstavljeni su kao srednja vrijednost±SD. Razlika između dvije različite grupe određena je korištenjem dvostranog neuparenog Studentovog t-testa, a p-vrijednost < 0.05 se smatra statistički značajnom. Svi proračuni su obavljeni pomoću GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, Inc., SAD).

Reference

1. Docherty MH, O'Sullivan ED, Bonventre JV, Ferenbach DA. Ćelijsko starenje u bubrezima. J Am Soc Nephrol. 2019;30(5):726–36.

2. Partridge L, Deelen J, Slagboom PE. Suočavanje sa globalnim izazovima starenja. Priroda. 2018;561(7721):45–56.

3. Pan JX. LncRNA H19 promovira aterosklerozu regulacijom MAPK i NF-kB signalnih puteva. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2017;21(2):322–8.

4. Wasson CW, Abignano G, Hermes H, Malaab M, Ross RL, Jimenez SA, Chang HY, Feghali-Bostwick CA, Del Galdo F. Duga nekodirajuća RNA HOTAIR pokreće EZH2-zavisnu aktivaciju miofibroblasta u sistemskoj skleroze kroz miRNA 34a zavisnu aktivaciju NOTCH. Ann Rheumatic Dis. 2020;79(4):507–17.

5. Luo J, Wang K, Yeh S, Sun Y, Liang L, Xiao Y, Xu W, Niu Y, Cheng L, Maity SN, et al. LncRNA-p21 mijenja neuroendokrinu diferencijaciju raka prostate uzrokovanu antiandrogen enzalutamidom putem modulacije EZH2/ STAT3 signalizacije. Nat Commun. 2019;10(1):2571.

6. Wang Y, Yang L, Chen T, Liu X, Guo Y, Zhu Q, Tong X, Yang W, Xu Q, Huang D, et al. Nova lncRNA MCM3AP-AS1 promovira rast hepatocelularnog karcinoma ciljajući miR-194-5p/FOXA1 os. Mol Cancer. 2019;18(1):28.

7. Wu YY, Kuo HC. Funkcionalne uloge i mreže nekodirajućih RNA u patogenezi neurodegenerativnih bolesti. J Biomed Sci. 2020;27(1):49.

8. Li Z, Wang Z. Starenje bubrega i bolesti povezane sa starenjem. Adv Experiment Med Biol. 2018;1086:169–87.

9. Wang X, Vrtiska TJ, Avula RT, Walters LR, Chakkera HA, Kremers WK, Lerman LO, Rule AD. Starost, funkcija bubrega i faktori rizika različito su povezani s kortikalnim i medularnim volumenima bubrega. Kidney Int. 2014;85(3):677–85.

10. Lin Q, Hou S, Dai Y, Jiang N, Lin Y. LncRNA HOTAIR cilja na miR-126-5p kako bi promovirao progresiju Parkinsonove bolesti kroz RAB3IP. Biol Chem. 2019;400(9):1217–28.

Wecistanche usluga podrške - najveći izvoznik cistanchea u Kini:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kupite za više detalja o specifikacijama:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop