Mrežna farmakologija i eksperimentalna validacija spoja baziranog na cistanche u liječenju benigne hiperplazije prostate putem modulacije puta PI3K/AKT
Jun 17, 2025
Abstract
Cilj:
Da istražitepreventivno i terapijsko djelovanje granula jedinjenja na bazi Cistancheaonbenigna hiperplazija prostate (BPH)i razjasniti osnovne mehanizmemrežna farmakološka predviđanjau kombinaciji sain vivo eksperimenti na životinjama.
Biljne tablete na bazi Cistanchea sa visokim aktivnim sastojcima
Idite na listu proizvoda Saznajte više detalja
Metode:
(1) Aktivni sastojciofCistanche deserticolai druge pomoćne biljke su pregledane putemTCMSP baza podataka, upotpunjen rudarenjem literature. Ciljevi ovih fitokemikalija su predviđeni upotrebomPubChem, Swiss Target Prediction, iKomparativna toksikogenomska baza podataka (CTD). Sakupljeni su ciljevi povezani sa BPHGeneCards, CTD, DrugBank, iDisGeNET. Identificirana analiza raskrsnice125 potencijalnih terapijskih ciljevaCistanchea u liječenju BPH. Amreža protein-protein interakcije (PPI).je izgrađen pomoćuSTRING, iAnaliza obogaćivanja GO i KEGG putaizvedene su putemMetascape. Sveobuhvatanmreža "biljni spoj-ciljni put".vizualiziran je korištenjemCytoscape, a ključni ciljevi su potvrđeni krozmolekularno spajanjekoristećiAutoDock Vina.
(2) Šezdeset mužjaka pacova nasumično je podijeljeno u šest grupa: kontrola, model, pozitivna kontrola (Qianlie Shutongkapsule, 0,324 g/kg) i tri grupe dozaCistanche spoj granula(visoka: 3,24 g/kg, srednja: 1,62 g/kg, niska: 0,81 g/kg). BPH je izazvankastracija i injekcija testosteron propionata. Pacovi su primali oralni tretman dnevno tokom 30 dana. Izračunati su vlažnu težinu i indeks prostate. Nivoi u serumuCOX-2, VEGF, iPGE2mjerene su putem ELISA.Histopatološke promjenesu posmatrani HE bojenjem, iekspresija proteinaofAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, iVEGFprocijenjen je Western blot-om.
Rezultati:
(1) Ukupno260 složenih meta, 1,584 meta povezanih s BPH, i125 preklapajućih terapijskih ciljevasu identifikovani. Ključni ciljevi uključeniAKT1, TNF, TP53, IL1, EGFR, CASP3, iPTGS2. Analize obogaćivanja su to pokazaleIL-17, HIF-1, TNF, iPI3K-AKT signalni puteviigraju kritične uloge. Osnovni aktivni sastojci kao što suluteolin, apigenin, glikozidi trputca, mangiferin, iizoviteksinpokazao jake afinitete vezivanja sa ciljevima kao što suAKT1, PTGS2, CASP3, iIL6, sa energijama vezivanja manjom ili jednakom –6 kcal/mol.
(2) Rezultati in vivo su to pokazaliCistanche granule značajno smanjuju težinu i indeks prostate(P < 0,05 ili P < 0,01), poboljšanostruktura žlezdai ublaženepitelna hiperplazija. Nivoi u serumuCOX-2, PGE2, iVEGFsu značajno smanjene. Izražavanjep-AKT1, p-PI3K, COX-2, iVEGFu tkivu prostate značajno smanjena (P < 0,05 ili P < 0,01).
zaključak:
Ova studija pruža preliminarne dokaze daBiljna terapija bazirana na cistanchenaprezanjapreventivno i terapijsko djelovanje protiv BPH, prvenstveno kroz modulacijuPI3K/AKT signalni put, inhibicijaCOX-2 i PGE2, i suzbijanjeVEGF posredovana proliferacija ćelija prostate. Ključne bioaktivne komponente kao što suglikozidi trputca, mangiferin, iluteolinmogu poslužiti kao glavni farmakološki agensi. Ovi nalazi podržavaju potencijalEkstrakt Cistanchekao aprirodni lek za zdravlje prostate.
Ključne riječi:
Cistanche deserticola; Ekstrakt Cistanche; benigna hiperplazija prostate (BPH); mrežna farmakologija; PI3K/AKT put; VEGF; COX-2; PGE2; upala prostate; prirodni lijek za prostatu; biljni tretman za BPH; tradicionalna kineska medicina; fitoterapija; molekularno spajanje; model pacova
Pozadina
Benigna hiperplazija prostate (BPH)je čest urološki poremećaj kod muškaraca srednjih i starijih godina. U svojim ranim fazama BHP karakterizira učestalost mokrenja, hitnost, oklevanje i nepotpuno mokrenje. Kako bolest napreduje, mogu se javiti teži simptomi kao što su hematurija, bolno mokrenje, kamenac u mokraćnoj bešici, pa čak i disfunkcija bubrega [1-2]. Studije [3] su pokazale da incidencija BHP raste s godinama, pogađajući preko 50% muškaraca starijih od 50 godina, što značajno narušava kvalitetu života.
Trenutni tretmani BPH uglavnom uključujufarmaceutskih proizvoda i hirurških intervencija, što može dovesti donuspojave, komplikacije i dugoročne posljedice[4–7]. stoga,Tradicionalna kineska medicina (TCM)formulacije koje suklinički efikasan sa manje nuspojavasu zadobili sve veću pažnju kao alternativne terapije za BPH.
Biljne granule na bazi cistanchesu pokazali protuupalno, diuretičko i tkivno zaštitno djelovanje u urinarnim stanjima. Prethodne studije [9–10] su pokazale da se biljni recepti prvenstveno zasnivaju naCistanche deserticolanaprezatizaštitni efektiprotiv BPH na životinjskim modelima. Preliminarno istraživanje naše grupe [11] sugerira da ova formula može smanjiti upalu prostateinhibiranje medijatora upalekao što suCOX-2, PGE2, IL-6, iTNF-. Poštoprostatitis je često komorbidno stanje koje pogoršava BHP, ova studija ima za cilj evaluacijumehanizam djelovanja i terapijski potencijalod aSmjesa na bazi Cistanchekoristećimrežna farmakologija i in vivo validacijau modelu BPH kod pacova.
Wecistanche usluga podrške - kontaktirajte nas da dobijete veleprodajnu cijenu
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel:+86 15292862950
1. Materijali i metode
1.1 Eksperimentalne životinje
Ukupno 70 muških SD pacova SPF razreda (180–220 g) obezbijedio je Centar za laboratorijske životinje Medicinskog univerziteta Guangxi (licenca: SCXK [Gui] 2020-0003). Protokole za životinje odobrio je Institucionalni komitet za etiku životinja (broj odobrenja: GXBGMP20220602). Pacovi su smešteni u standardnim uslovima sa kontrolisanom temperaturom (23 ± 2 stepena), vlažnošću (60 ± 5%) i ciklusom svetlosti/mraka od 12 sati.
1.2 Lijekovi i reagensi
Cistanche spoj granula (probna formulacija)
Pozitivna kontrola: Qianlie Shutong kapsule (0,324 g/kg)
Testosteron propionat injekcija (15 mg/kg)
ELISA setovi za COX-2, PGE2, VEGF
Antitela: anti-AKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, VEGF, GAPDH
Western blot reagensi, SDS-PAGE gelovi i sistemi za snimanje
Svi reagensi su nabavljeni od pouzdanih domaćih i međunarodnih dobavljača
1.3 Oprema
Analitička vaga (preciznost 0,0001g)
Obrnuti biološki mikroskop (Olympus IX73)
Čitač mikropločica (Tecan M200)
Western blot sistem (Bio-Rad)
Stanica za snimanje (GE Imager 680)
1.4 Predviđanje cilja za aktivne spojeve Cistanche
Aktivni sastojci izCistanche deserticolai druge komplementarne biljke su preuzete izTCMSP baza podataka, filtrirano pooralna bioraspoloživost (OB veća ili jednaka 30%)isličnost sa drogom (DL veći ili jednak 0,18). Literaturno provjerena bioaktivna jedinjenja koja ne zadovoljavaju ove pragove su također uključena. Pretpostavljeni ciljevi su bili predviđeniPubChem, SwissTargetPrediction, iCTD, koristeći filtere za visoku GI apsorpciju i povoljna svojstva ADME.
1.5 Identifikacija ciljeva vezanih za BHP
"BPH" je pretraživan u više baza podataka uključujućiDisGeNET, CTD, GeneCards, iDrugBankprikupljanje ciljeva vezanih za bolest. Zadržani su samo ciljevi sa skorom relevantnosti iznad medijane, a duplikati su uklonjeni kako bi se dobio skup ciljeva BPH visoke pouzdanosti.
1.6 Analiza ukrštanja za potencijalne terapeutske ciljeve
UkrštanjemCistanche složene metesa poznatimGeni vezani za BPH, identifikovali smo potencijalterapijski ciljevi protiv BPH, vizualizirano prekoVennovi dijagramikoristeći R softver.
1.7 Izgradnja mreže interakcije proteina i proteina (PPI).
Potencijalni ciljevi su postavljeni naSTRING v11.5baze podataka za izgradnju PPI mreže. Vizualizacija i topološka analiza (centralnost stepena) su izvršene korišćenjemCytoscape 3.9.1.
1.8 Analiza GO i KEGG obogaćivanja
Analize obogaćivanja zaOntologija gena (GO)funkcije iKEGG putevisu sprovedene korišćenjemMetascape, sa značajem postavljenim naP < 0,01.
1.9 Izgradnja mreže "Bilje-složeni-ciljani put".
Ključni putevi relevantni za BPH odabrani su iz rezultata obogaćivanja KEGG-a. Avišeslojna mrežapovezivanje biljaka, aktivnih jedinjenja, ciljeva i puteva konstruisano je u Cytoscapeu, a ključni čvorovi su analizirani pomoćuNetwork Analyzerplugin.
1.10 Verifikacija molekularnog povezivanja
Šest osnovnih ciljnih proteina (PTGS2, AR, CASP3, IL6, PTGS1, AKT1) i spojevi vrhunskog ranga (luteolin, apigenin, izoviteksin, mangiferin, glikozidi trputca) su odabrani zamolekularno spajanje. Proteinske kristalne strukture su preuzete saRCSB Protein Data Bank(https://www.rcsb.org), a pristajanje je izvršeno pomoćuAutoDock Vina. Energije vezivanja su vizualizirane i analizirane korištenjemPyMOL.
1.11 Životinjski model i grupiranje
Nakon 7 dana aklimatizacije, 60 mužjaka pacova nasumično je podijeljeno u 6 grupa (n=10): kontrolna, modelna, pozitivna kontrola i niske, srednje, visoke dozeCistanche složene grupe(0,81, 1,62, 3,24 g/kg). BHP je indukovana putemorhiektomijapraćenoinjekcije testosteron propionata(15 mg/kg) tokom 28 dana. Primjena lijeka počela je 29. dana i nastavila se 30 dana.
1.12 Sakupljanje uzoraka
Nakon završnog tretmana, pacovi su anestezirani i krv je uzeta iz abdominalne aorte. Prostate su secirane, izvagane iindeks prostate (mg/g)je izračunato. Uzorci su pohranjeni na –80 stepeni radi analize.
1.13 ELISA za serumske inflamatorne markere
Nivoi u serumuCOX-2, PGE2, iVEGFodređivani su korištenjem ELISA kompleta prema uputama proizvođača.
1.14 Histološka analiza (H&E bojenje)
Tkiva prostate su fiksirana, umotana u parafin, isječena i obojenahematoksilin i eozin (H&E). Pod svjetlosnom mikroskopijom uočene su patološke promjene.
1.15 Western blotting
Nivoi ekspresije proteinaAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, iVEGFsu analizirani od straneWestern blot. Intenzitet trake je kvantificiran korištenjemImageJ, saGAPDHkao interna kontrola.
1.16 Statistička analiza
Podaci su analizirani korišćenjemSPSS 22.0. Rezultati su predstavljeni kaosrednja vrijednost ± SD. Jednosmjerna ANOVA iLSD-t testsu korišteni za grupna poređenja, saP < 0,05smatra statistički značajnom.
