Kružna RNK CircDVL1 inhibira progresiju karcinoma bubrežnih ćelija čistih ćelija kroz os MiR-412-3p/PCDH7

Abstract

Karcinom renalnih ćelija providnih ćelija (ccRCC) je primarni karcinom bubrega sa visokim agresivnim fenotipom i izuzetno lošom prognozom. Akumulirani dokazi sugeriraju da kružne RNK (circRNA) igraju ključnu ulogu u nastanku i razvoju različitih karcinoma kod ljudi. Međutim, ekspresija, klinički značaj i regulatorna uloga circRNA u ccRCC ostaju uglavnom nejasni. Ovdje izvještavamo da je circDVL1 smanjen u serumima i tkivima pacijenata s ccRCC i negativno korelira sa malignim karakteristikama ccRCC. Prekomjerna ekspresija circDVL1 inhibira proliferaciju, inducira zaustavljanje G1/S, pokreće apoptozu i smanjuje migraciju i invaziju u različitim ccRCC stanicama in vitro. Shodno tome, prekomjerna ekspresija circDVL1 potiskuje tumorigenost ccRCC u modelu mišjeg ksenotransplantata. Mehanički, circDVL1 služi kao spužva za onkogeni miR-412-3p, čime se sprječava miR-412-3p-posredovana represija njegovog ciljnog protokadherina 7 (PCDH7) u ccRCC ćelijama. Naši rezultati zajedno pokazuju da circDVL1 ispoljava funkciju supresije tumora tokom progresije ccRCC kroz circDVL1/miR-412-3p/PCDH7 osu, i sugeriraju da bi circDVL1 mogao biti novi dijagnostički i prognostički marker i terapijski cilj za ccRCC.

Ključne riječi

circDVL1; karcinom bubrežnih ćelija; miR-412-3p; PCDH7; biomarker

Kliknite ovdje da biste saznali koje su prednosti Cistanchea

Uvod

Karcinom bubrežnih ćelija (RCC) je izuzetno smrtonosan maligni karcinom urološkog sistema i ozbiljno utiče na zdravlje ljudi [1]. Incidencija RCC-a se povećala u posljednjih nekoliko desetljeća, sa 73.750 novih slučajeva dijagnosticiranih u Sjedinjenim Državama 2020. godine [2, 3]. RCC sa čistim ćelijama (ccRCC), najčešći i najagresivniji podtip RCC, čini 70-75 posto slučajeva RCC [4]. Važno je da je više od 30 posto pacijenata s ccRCC povezano s metastazama pri početnoj dijagnozi. Štaviše, iako je radikalna operacija glavna opcija liječenja primarnog ccRCC, još uvijek je oko 40 posto pacijenata iskusilo relaps i metastaze sa 5-godišnjim ukupnim preživljavanjem manjim od 10 posto [5, 6]. Ove dileme naglašavaju hitnu potrebu da se istraže molekularni mehanizmi koji leže u osnovi razvoja ccRCC, i kao dijagnostički i prognostički biomarkeri i kao potencijalni terapijski ciljevi.

Kružne RNK (circRNA) su nekodirajuće RNK sa jednolančanim strukturama zatvorene petlje koje ih čine visoko stabilnima [7, 8]. Nedavne studije su pokazale da circRNA ima u izobilju u krvi [9, 10], pljuvački [11] i egzozomima [12], što ukazuje da bi mogle poslužiti kao novi dijagnostički biomarkeri [13]. S obzirom da je tečna biopsija manje invazivna od tradicionalne biopsije tkiva [14], circRNA se smatraju vrijednim prediktivnim alatima za preciznu medicinu [15-17]. Konkretno, nekoliko circRNA, kao što su cricNOX4, circEGLN3 i circPRRC2A, mogu djelovati kao potencijalni biomarkeri za dijagnozu i/ili prognozu RCC, koji su sažeti u našem nedavnom pregledu [18]. Osim toga, trenutna istraživanja se uglavnom fokusiraju na izmjenu ekspresije circRNA u tkivima ccRCC [19, 20], međutim, njihovi nivoi u tečnoj biopsiji ostaju uglavnom nepoznati, što otežava istraživanje potencijalnih biomarkera. Nadalje, iako se pokazalo da nekoliko circRNA, uključujući circHIAT1 [21], circ-AKT3 [22] i cRAPGEF5 [23], igraju važnu ulogu u započinjanju i napredovanju ccRCC [18], sistematsko istraživanje circRNA uključenih u ccRCC razvoj, kao i njihovi osnovni molekularni mehanizmi, još uvijek nedostaju.

Ovdje smo prvo odredili ekspresiju circRNA u uzorcima seruma pacijenata s ccRCC i zdravih kontrola koristeći circRNA mikromrežu. Značajno je da smo identifikovali novu circRNA circDVL1 povezanu sa ccRCC (ID trupa: hsa_circ_ 0009267), koja je kodirana u DVL1 genu. CircDVL1 je značajno smanjen u serumu pacijenata s ccRCC, a njegova ekspresija je u obrnutoj korelaciji sa ccRCC Fuhrmanovom ocjenom, sugerirajući potencijal kao biomarker. Štaviše, CircDVL1 je smanjen u tumorskim tkivima ccRCC. Shodno tome, circDVL1 može inhibirati proliferaciju, inducirati zaustavljanje ćelijskog ciklusa, pokrenuti apoptozu i smanjiti migraciju i invaziju ćelija ccRCC. Mehanički, circDVL1 funkcionira kao miR-412-3p spužva za povećanje ekspresije PCDH7. Zajedno, ovi nalazi identificiraju circDVL1 kao tumor supresor za ccRCC i sugeriraju njegov potencijal i kao dijagnostički biomarker i kao terapeutska meta.

Cistanche dodatak

Materijali i metode

1. Klinički uzorci

Ovu studiju je odobrio Etički komitet Prve pridružene bolnice Univerziteta Zhejiang (2021-104). Osamnaest podudarnih uzoraka ccRCC i susednih netumorskih tkiva prikupljeno je od pacijenata sa ccRCC. Uzorci su nakon operacije brzo konzervirani u tečnom dušiku, a zatim pohranjeni na -80 stepeni do daljnje upotrebe. Prikupljeni su uzorci seruma od 60 pacijenata sa ccRCC i 66 zdravih kontrola. Zatim su uzorci obrađeni odgovarajućim metodama, a dobijeni serum je čuvan na -80 stepeni do dalje upotrebe.

2. Ćelijske linije i ćelijska kultura

Sve ćelijske linije su kupljene od Nacionalne zbirke provjerenih ćelijskih kultura (Kina). 786-O i Caki{1}} ćelije su uzgajane u RPMI 1640 (HyClone), ACHN ćelije su uzgajane u MEM (HyClone), a 293T ćelije su uzgajane u DMEM (Gibco) mediju. Svi mediji za ćelijske kulture su dopunjeni sa 10 posto fetalnog goveđeg seruma (Gibco) i 1 posto mješavine penicilina i streptomicina (Gibco). Ćelijske kulture su održavane u vlažnom inkubatoru na 37 stepeni i 5% CO₂.

3. CircRNA mikromrežna analiza

Profiliranje CircRNA mikromreža u uzorcima seruma izvedeno je pomoću Arraystar humanog CircRNA Array V2 (Capital Biotechnology, Kina). GeneSpring softver V13.0 (Agilent Technologies) je korišten za sumiranje podataka, normalizaciju i kontrolu kvaliteta mikromreža. CircRNA sa pragom promjene puta veće od ili jednako 2 i manje od ili jednako -2 i P-vrijednošću < 0.05 smatrane su statistički značajnim. Hijerarhijska analiza klastera izvedena je korištenjem standardizirane Euklidske udaljenosti s potpunom povezanosti.

4. RNA sekvenciranje (RNA-seq) i analiza podataka

Sljedeća generacija RNA-seq provedena je kao što je prethodno opisano [24, 25]. miR-412-3p i kontrolne mimikom transficirane 786-0 ćelije su korištene za sekvenciranje RNK. Konstrukciju biblioteke i bioinformatičke analize sirovih podataka sproveo je Novogene Co., Ltd. (Peking, Kina). Podaci RNA-seq deponovani su u Gene Expression Omnibus (GEO) pod pristupnim brojem GSE175492.

5. Ekstrakcija RNK i kvantitativni RT-PCR (RT-qPCR) u realnom vremenu

RT-qPCR je izveden kao što je prethodno opisano [26, 27]. Ukupna RNK je izolovana iz seruma, ćelija i tumorskog tkiva pomoću AG RNAex Pro reagensa (AG, Hunan, Kina). Za detekciju circRNA, 1 ug ukupne RNK je digestiran sa RNase R (3 U/ug, Epicenter Technologies, Madison, SAD, Cat#RNR07250) na 37 stepeni tokom 10 minuta, a komplementarna DNK (cDNA) je generisana pomoću HiScript II 1st. Komplet za sintezu cDNK lanaca (Vazyme). Nivoi ekspresije cirkRNK i mRNA su normalizovani na -aktin. Da bi se odredila ekspresija miRNA, obavljena je reverzna transkripcija sa kompletom za sintezu prvog lanca miRNA miR-XTM (Takara Bio USA, CA, USA, Cat. #638313) sa ekspresijom U6 (Rnu6–1) kao endogenom kontrolom. Relativni nivo ekspresije RNK određen je metodom 2-ΔΔCt. Sve sekvence prajmera za analizu qRT-PCR prikazane su u tabeli S2.

6. Konstrukcija plazmida i stabilna transfekcija

Da bi se konstruisao vektor prekomerne ekspresije circDVL1 i circDVL1-MUT, circDVL1 i mutirana circDVL1 sekvenca su klonirani u vektor pcDNA 3.1( plus ) Laccase 2 MCS Exon, koji je naručen od Addgene (#69893) [28]. ACHN i 786-O ćelije su transficirane sa circRNA i vektorima negativne kontrole koristeći Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Nakon 48 h, stabilno transficirane ćelije koje eksprimiraju circDVL1 su odabrane dodavanjem 800 ug/mL G418 u mediju za kulturu.

7. Vijabilnost ćelije

Test vitalnosti ćelija je određen kompletom CCK8 (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan, Cat# CK04), kao što je prethodno opisano [29]. 786-O i ACHN circDVL1 prekomjerne ekspresije i kontrolne ćelije su zasijane u 96-ploče sa jažicom. U naznačeno vreme dodat je rastvor CCK8 (10 μL) i inkubiran na 37 stepeni 2 h, a apsorbancija je merena spektrofotometrom.

Herba Cistanche

8. Formiranje kolonija

Testovi formiranja kolonija provedeni su kako je prethodno opisano [24]. ACHN (800 ćelija/jamicu) i 786-O ćelije (400 ćelija/jažicu) su kultivirane 10 dana i zatim fiksirane sa 4 posto paraformaldehida otprilike 30 minuta, nakon čega je slijedilo bojenje sa 0,1 posto kristalno ljubičaste otopine oko 15 min. Klonovi koji sadrže više od 50 ćelija računali su se kao jedna kolonija.

9. Analiza ćelijskog ciklusa

Ćelije su sinhronizovane u medijumu RPMI 1640 bez FBS preko noći i prebačene na medijum sa 10 procenata FBS u narednih 48 sati. Ćelije su isprane, ponovo suspendovane u 70 posto etanola u PBS-u i pohranjene na -20 stepeni preko noći. Zatim su ćelije obojene rastvorom propidijum jodida (PI) koji sadrži RNazu A za analizu ćelijskog ciklusa.

10. Analiza apoptoze

Analiza apoptoze ACHN i 786-O ćelija provedena je pomoću Annexin V-FITC/PI kompleta za detekciju apoptoze (Beijing Biosea Biotechnology, Kina) prema uputama proizvođača.

11. Testovi migracije ćelija i invazije

In vitro, kapacitet migracije ćelija je procenjen korišćenjem transwell komora sa polikarbonatnim membranama od 8 μm (Millipore, MA, SAD). Testovi ćelijske invazije su izvedeni sa transwell komorama obloženim sa 100 μL Matrigela (BD Biosciences, SAD). 786-O ćelije (2×104) ili ACHN ćelije (4×104) su suspendirane u 200 μL RPMI 1640 bez seruma i zasijane u gornje transwell komore, a zatim je dodano 600 μL medija koji sadrži 20 posto FBS u donje komore. Zatim su ćelije kultivisane 24 h da bi se izmerila migracija i 48 h da bi se procenila invazija. Ćelije u gornjoj komori su pažljivo ostrugane, a ćelije u donjem odjeljku su fiksirane sa 4 posto paraformaldehida i obojene kristalno ljubičastom bojom. Dobijene su slike i ćelije su izbrojane mikroskopom.

12. Western blot

Ukupni proteini su ekstrahovani, kvantificirani i odvojeni na 10 posto SDS-PAGE gelova, a zatim prebačeni na poliviniliden difluorid membrane (Millipore, MA, SAD), koje su inkubirane sa primarnom anti-gliceraldehid 3- fosfat dehidrogenazom (GAPDH) (Proteinch, 60004-1-Ig), anti-PCDH7 (Abcam, ab139274) primarna antitijela na 4 stepena preko noći.

13. Imunofluorescentno bojenje

Ćelije su zasijane na pokrovnim stakalcima 24 h i fiksirane sa 4 posto paraformaldehida, permeabilizirane sa 0.2 posto Triton X-100 20 minuta i inkubirane sa 5 posto goveđeg serumskog albumina. Zatim su ćelije inkubirane sa primarnim antitijelom specifičnim za Ki67 (1:400, ab48027, Abcam) na 4 stepena preko noći, a zatim su inkubirane sa 488-konjugiranim kozjim anti-zečjim IgG (1:150, D110088, Sangon ) na 37 stepeni 1 h. Ćelije su obojene 4′,6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI), a slike su dobijene Leica fluorescentnim mikroskopom (DM4000).

14. Formiranje tumora in vivo i bojenje Ki67

Šestosedmični mužjaci golih miševa BALB/c (kupljeni od Šangajske SLAC) podijeljeni su u 2 grupe (n=5 za svaku grupu). Miševi su inokulirani sa približno 3×106 kontrolnih ćelija ili circDVL1 prekomerno eksprimirajućim ACHN ćelijama supkutanom injekcijom. Veličina tumora je mjerena kliznom kaliperom svaka 3 dana, počevši od 6. dana nakon injekcije. Volumen tumora je izračunat kao dužina × širina × visina/2. Svi eksperimenti su provedeni u skladu sa Smjernicama za njegu i korištenje laboratorijskih životinja (NIH publikacija 80-23, revidirana 1996.) i odobreni su od strane Komiteta za brigu o životinjama Univerziteta Zhejiang, Hangzhou, Kina.

Cistanche kapsule

15. Fluorescentna in situ hibridizacija (FISH)

Sintetizirana je circDVL1 sonda dvostrukog digoksigenina (DIG) - peroksidaze hrena (HRP) (Exon Biotechnology, Guangzhou, Kina). Kontrolne i circDVL1 ćelije sa prekomjernom ekspresijom ACHN kultivirane su na poklopnim stakalcima i inkubirane sa označenom sondom na 37 stepeni tokom 24 sata. Nakon ispiranja, stakalca su inkubirana u anti-DIG sekundarnom antitelu na 37 stepeni tokom 1 h. Za detekciju circDVL1 signala korištena je metoda pojačanja signala tiramina, a ćelije su obojene DAPI. Za co-FISH, poklopna stakalca su inkubirana sa DIGlabeled circDVL1 i biotinom obilježenim miR-412-3p.

16. Test RNA imunoprecipitacije (RIP).

RIP testovi su izvedeni sa Magna RIP™ RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kitom (Millipore, MA, SAD). 786-O ćelije su lizirane u kompletnom RIP puferu za lizu, a zatim inkubirane sa puferom za imunoprecipitaciju koji sadrži magnetne kuglice koje su konjugirane sa AGO2 (Abcam, MA, SAD) ili kompleksom IgG antitijela na 4 stepena preko noći. Zatim su imunoprecipitirane RNK testirane RT-qPCR.

17. Dual-luciferase reporter test

CircDVL1, PPM1H-3'UTR i PCDH7-3'UTR sekvence, koje su sadržavale mutirana miR-412-3p vezujuća mjesta, i njihove odgovarajuće mutirane sekvence, sintetizirane su i zatim subklonirane u reporter luciferaze vektor psiCHECK-2 (Promega) za proizvodnju circDVL1-WT, circDVL1-Mut1, circDVL1-Mut2, PPM1H-3'UTR-WT, PCDH{ {14}}'UTRWT, PCDH7-3'UTR-Mut1 i PCDH7-3'UTR-Mut2 vektori. Različite 3'UTR sekvence PPM1H i PCDH7 sadrže fragment od 500 bp koji sadrži potencijalna miR-412-3p vezujuća mjesta (okružena sa 250 bp). Relativna aktivnost luciferaze je procijenjena pomoću dual-luciferase reporter testa (Promega, SAD). Svi testovi su izvedeni u tri nezavisna ponavljanja.

18. Statistička analiza

Statističke analize su rađene sa GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Razlike između grupa procijenjene su Studentovim t-testom ili jednosmjernom analizom varijanse (ANOVA). Smatralo se da su razlike između grupa statistički značajne kada su P-vrijednosti bile < 0.05.

Diskusija

Predloženi su i eksperimentalno evaluirani različiti tipovi ccRCC biomarkera, uključujući mRNA [32], miRNA [33], lncRNA [34] i circRNA [35]. Međutim, nijedan od njih nije potvrđen kao tačni dijagnostički biomarkeri za rutinsku kliničku upotrebu kod pacijenata s ccRCC. Ovdje je naša studija ilustrovala da circDVL1 igra važnu ulogu u napredovanju ccRCC. Prvo smo pregledali serum pacijenata s ccRCC i zdravih kontrola kako bismo identificirali različito eksprimirane circRNA pomoću mikromreža circRNA. Podaci RT-qPCR otkrili su da je circDVL1 dramatično smanjen u ccRCC uzorcima. Prethodne studije su pokazale da circRNA mogu poslužiti kao latentni serumski biomarkeri kod različitih karcinoma [36, 37]. Na primjer, Bei et al. pokazalo je da je egzosomalni has-circ-0004771 povećan u serumu prikupljenom od pacijenata sa kolorektalnim karcinomom [38]. Ipak, istraživanja o specifičnoj ulozi circRNA kao neinvazivnog biomarkera u ccRCC su još uvijek ograničena. Naša studija je otkrila da je circDVL1 značajno smanjen u serumu pacijenata s ccRCC i da smanjena ekspresija serumskog circDVL1 može biti uzrokovana tumorom. Nadalje, nivo circDVL1 u serumu imao je značajnu dijagnostičku vrijednost u razlikovanju pacijenata sa tumorima Fuhrman stepena I-II i Fuhrmanovog stepena III-IV. Stoga bi serum circDVL1 mogao biti obećavajući dijagnostički marker za ccRCC. Međutim, nekoliko zdravih pacijenata pokazalo je nizak nivo circDVL1 u svom serumu, što ukazuje da bi praćenje pacijenata isključivo na osnovu analize ove cirkulirajuće RNK moglo rezultirati lažno pozitivnim rezultatima. Stoga je vrijednost circDVL1 kao jednog dijagnostičkog markera donekle ograničena i kombinacija različitih cirkulirajućih RNK ​​možda će biti potrebno analizirati kako bi se dobilo pouzdano predviđanje razvoja tumora i metastaza.

Kao novoidentifikovana circRNA, biološka i patološka uloga circDVL1 nije istražena. U ovoj studiji procijenili smo ulogu i regulatorni mehanizam circDVL1 u ccRCC. Funkcionalni testovi su pokazali da prekomjerno eksprimirani circDVL1 može smanjiti proliferaciju ccRCC stanica, sposobnost formiranja kolonija i tumorogeni potencijal, vjerovatno zbog povećane apoptoze ćelija in vitro i potisnutog razvoja tumora in vivo. Podaci su implicirali da bi circDVL1 mogao imati funkciju supresora tumora u ccRCC.

CircRNA mogu promovirati inicijaciju i progresiju tumora djelujući kao miRNA spužve. Stoga smo ispitali da li circDVL1 može regulisati biogenezu miRNA tokom karcinogeneze ccRCC. Koristeći softver miRanda i miRWalk, otkrili smo da circDVL1 ima potencijalno vezujuće mjesto za miR-412-3p. Luciferazni reporterski testovi su pokazali direktnu vezu između circDVL1 i miR-412-3p. Prethodne studije su pokazale da je miR-412-3p bio uključen u patogenezu različitih karcinoma kroz različite molekularne mehanizme [31, 39, 40]. Na primjer, miR-412-3p je imao onkogenu ulogu u karcinomu debelog crijeva, promovišući migraciju, invaziju i ćelijsku proliferaciju matičnih ćelija raka [31]. Štaviše, ekspresija miR-412-3p je povećana u ekstracelularnim vezikulama kod pacijenata sa oralnim karcinomom skvamoznih ćelija (OSCC) [39]. Slično, naši rezultati sugeriraju da je miR-412-3p važan tumorski promotor u ccRCC.

Cistanche prah

Pored toga, identifikovan je i cilj circDVL1/miR-412-3p. Protokadherini (PCDH) su transmembranski proteini koji pripadaju superfamiliji kadherina, koji igraju značajnu ulogu u ćelijskoj adheziji i signalnim putevima. PCDH7 je član porodice PCDH i ima dobro utvrđenu ulogu u prepoznavanju ćelija i ćelijskoj adheziji [41]. Općenito je poznato da je gubitak adhezije rani korak u invaziji tumorskih stanica i metastazama. Novi dokazi sugeriraju da je PCDH7 aberantno izražen u različitim tipovima tumora. Na primjer, kod humanog karcinoma pluća nemalih stanica, PCDH7 je često bio prekomjerno eksprimiran i funkcionirao je kao onkogen da inducira ćelijsku transformaciju i promovira tumorigenezu pluća potencirajući MAPK signalizaciju [42]. Nasuprot tome, PCDH7 je inhibirao migraciju i invaziju ćelija raka želuca preko E-kadherina [43]. Štaviše, smanjena ekspresija PCDH7 pronađena je kod raka debelog crijeva [44] i mokraćne bešike [45]. Ovi podaci ukazuju da PCDH7 ima različite funkcije u različitim tipovima tumora. U ovoj studiji smo pokazali da su nivoi PCDH7 smanjeni u uzorcima tumora ccRCC. Zanimljivo je da su funkcionalni eksperimenti spašavanja otkrili da su svojstva supresora tumora circDVL1 dijelom posljedica njegovog učinka na PCDH7. Naša studija snažno sugerira važnost circDVL1/miR-412-3p/PCDH7 regulatorne ose u progresiji ccRCC.

Ova studija ima nekoliko ograničenja. Testirali smo tri specifične siRNA za endogeni circDVL1, ali nažalost, sve ove siRNA nisu uspjele da sruše circDVL1 vjerovatno zbog jedinstvene strukture ove circRNA, kao i njene niske bazalne ekspresije u ccRCC ćelijama. Osim toga, naši rezultati su pokazali da bi circDVL1 mogao biti terapijski cilj kod pacijenata s ccRCC, potrebne su kliničke studije s velikim grupama pacijenata kako bi se dodatno pokazao njegov klinički značaj. U našoj studiji nismo istraživali uzrok smanjene regulacije circDVL1 u ccRCC lezijama. Prijavljeno je da su proteini koji vežu RNK (RBP), uključujući quaking (QKI), regulatorni protein 1 za spajanje epitela (ESRP1) i spojeni u sarkom (FUS) uključeni u posttranskripcijsku formaciju circRNA [{{10 }}]. Osim toga, neki faktori transkripcije (npr. ZEB1, c-Myb i c-Jun) su također uključeni u biogenezu specifičnih circRNA [49-52]. Također, studije su pokazale da modifikacija m6A posreduje u degradaciji circRNA. Park i dr. izvijestili su da su circRNA modificirane m6A također smanjene preko YTHDF2- HRSP12-RNase P/MRP ose [53]. Ostaje neizvjesno da li su ovi RBP, faktori transkripcije i metilacija m6A uključeni u smanjenje regulacije circDVL1. U našem budućem istraživanju pokušat ćemo istražiti uzvodni regulatorni mehanizam circDVL1 u razvoju ccRCC i tumorigenezi.

Ukratko, pokazali smo da je nivo circDVL1 smanjen u serumu pacijenata s ccRCC. Značajno, dalje smo istraživali regulatorne mehanizme circDVL1 i pokazali da circDVL1 potiskuje ccRCC tumorigenezu promovišući ekspresiju PCDH7 probijanjem miR-412-3p. Stoga je naša studija pokazala da bi circDVL1 mogao biti potencijalna terapijska meta za buduće liječenje ccRCC.

Reference

1.Cheng SK, Chuah KL. Metastatski karcinom bubrežnih ćelija na pankreas: pregled. Arhiv patologije i laboratorijske medicine. 2016; 140: 598-602.

2. Jonasch E, Walker CL, Rathmell WK. Ontogeneza karcinoma bubrega jasnih ćelija i mehanizmi smrtnosti. Nat Rev Nephrol. 2021; 17: 245-61.

3. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Statistika raka, 2020. CA Cancer J Clin. 2020; 70.

4. Shuch B, Amin A, Armstrong AJ, Eble JN, Ficarra V, Lopez-Beltran A, et al. Razumijevanje patoloških varijanti karcinoma bubrežnih stanica: izdvajanje terapijskih mogućnosti iz biološke složenosti. Evropska urologija. 2015; 67: 85-97.

5. Koul H, Huh JS, Rove KO, Crompton L, Koul S, Meacham RB, et al. Molekularni aspekti karcinoma bubrežnih ćelija: pregled. Am J Cancer Res. 2011; 1: 240-54.

6. Sanchez-Gastaldo A, Kempf E, Gonzalez Del Alba A, Duran I. Sistemsko liječenje raka bubrežnih stanica: sveobuhvatan pregled. Cancer Treat Rev. 2017; 60: 77-89.

7. Kristensen LS, Andersen MS, Stagsted LVW, Ebbesen KK, Hansen TB, Kjems J. Biogeneza, biologija i karakterizacija kružnih RNA. Nature Reviews Genetics. 2019; 20: 675-91.

8. Patop IL, Wüst S, Kadener S. Prošlost, sadašnjost i budućnost circRNA. EMBO časopis. 2019; 38: e100836.

9. Perez de Acha O, Rossi M, Gorospe M. Circular RNAs in Blood maligncies. Front Mol Biosci. 2020; 7: 109.

10. Zhang SJ, Chen X, Li CP, Li XM, Liu C, Liu BH, et al. Identifikacija i karakterizacija kružnih RNA kao nove klase navodnih biomarkera u dijabetesnoj retinopatiji. Istraživačka oftalmologija i vizualna nauka. 2017; 58: 6500-9.

11. Bahn JH, Zhang Q, Li F, Chan TM, Lin X, Kim Y, et al. Pejzaž mikroRNK, RNK u interakciji sa Piwi i kružne RNK u ljudskoj pljuvački. Klinička hemija. 2015; 61: 221-30.

12. Li Y, Zheng Q, Bao C, Li S, Guo W, Zhao J, et al. Kružna RNK je obogaćena i stabilna u egzosomima: obećavajući biomarker za dijagnozu raka. Istraživanje ćelija. 2015; 25: 981-4.

13. Li S, Han L. Kružne RNK kao obećavajući biomarkeri u raku: otkrivanje, funkcija i dalje. Genomska medicina. 2019; 11:15.

14. Ye Q, Ling S, Zheng S, Xu X. Tečna biopsija u hepatocelularnom karcinomu: cirkulirajuće tumorske ćelije i cirkulirajuća tumorska DNK. Mol Cancer. 2019; 18:114.

15. Wen G, Zhou T, Gu W. Potencijal upotrebe kružne RNK krvi kao tečnog biopsijskog biomarkera za ljudske bolesti. Protein Cell. 2020.

16. Zhang Z, Yang T, Xiao J. Circular RNAs: Promising Biomarkers for Human Diseases. EBioMedicine. 2018; 34: 267-74.

17. Wang S, Zhang K, Tan S, Xin J, Yuan Q, Xu H, et al. Kružne RNK u tjelesnim tekućinama kao biomarkeri raka: nova granica tečnih biopsija. Mol Cancer. 2021; 20:13.

18. Wang Y, Zhang Y, Wang P, Fu X, Lin W. Cirkularne RNK u karcinomu bubrežnih ćelija: implikacije na tumorigenezu, dijagnozu i terapiju. Mol Cancer. 2020; 19:149.

19. Chen D, Chen W, Xu Y, Zhu M, Xiao Y, Shen Y, et al. Unaprijeđena imunološka kontrolna točka HHLA2 u karcinomu bubrežnih stanica bistrih stanica: novi prognostički biomarker i potencijalna terapijska meta. J Med Genet. 2019; 56: 43-9.

20. Lv Q, Wang G, Zhang Y, Shen A, Tang J, Sun Y, et al. CircAGAP1 promoviše progresiju tumora tako što upija miR-15-5p u karcinom renalnih ćelija bistrih ćelija. J Exp Clin Cancer Res. 2021; 40: 76.

21. Wang K, Sun Y, Tao W, Fei X, Chang C. Androgeni receptor (AR) promoviše migraciju i invaziju karcinoma renalnih stanica čistih stanica (ccRCC) mijenjanjem circHIAT1/miR-195-5p/29a{{ 4}}p/29c-3p/CDC42 signali. Rak slova. 2017; 394: 1-12.

22. Xue D, Wang H, Chen Y, Shen D, Lu J, Wang M, et al. Circ-AKT3 inhibira metastaze karcinoma karcinoma bubrežnih ćelija bistrih ćelija putem mijenjanja miR-296-3p/E-kadherinskih signala. Molekularni rak. 2019; 18:151.

23. Chen Q, Liu T, Bao Y, Zhao T, Wang J, Wang H, et al. CircRNA cRAPGEF5 inhibira rast i metastaziranje karcinoma bubrežnih ćelija putem miR-27a-3p/TXNIP puta. Rak slova. 2019; 469: 68-77.

24. Guo X, Lin W, Wen W, Huyghe J, Bien S, Cai Q, et al. Identificiranje novih gena osjetljivosti na rizik od raka debelog crijeva iz asocijacijske studije na 125.478 subjekata na nivou transkriptoma. Gastroenterologija. 2021; 160.

25. Wang J, Nie W, Xie X, Bai M, Ma Y, Jin L, et al. MicroRNA-874-3p/ADAM (A dezintegrin i metaloproteaza) 19 Posreduje u aktivaciji makrofaga i renalnoj fibrozi nakon akutne povrede bubrega. Hipertenzija. 2021; 77: 1613-26.

26. Kun-Peng Z, Chun-Lin Z, Jian-Ping H, Lei Z. Novi cirkulirajući hsa_circ_0081001 djeluje kao potencijalni biomarker za dijagnozu i prognozu osteosarkoma. Int J Biol Sci. 2018; 14: 1513-20.

27. Yuan Y, Bao J, Chen Z, Villanueva AD, Wen W, Wang F, et al. Multi-omics analiza za identifikaciju gena osjetljivosti na kolorektalni karcinom. Hum Mol Genet. 2021.

28. Kramer MC, Liang D, Tatomer DC, Gold B, March ZM, Cherry S, et al. Kombinatorna kontrola ekspresije kružne RNK Drosophile introničkim ponavljanjima, hnRNP i SR proteinima. Genes Dev. 2015; 29: 2168-82.

29. Guo X, Lin W, Bao J, Cai Q, Pan X, Bai M, et al. Sveobuhvatna cis-eQTL analiza otkrila je ciljne gene u lokusima osjetljivosti na rak dojke identificiranim u studijama asocijacija na genomu. Am J Hum Genet. 2018; 102: 890-903.

30. Zhong S, Wang J, Zhang Q, Xu H, Feng J. CircPrimer: softver za označavanje circRNA i određivanje specifičnosti circRNA prajmera. BMC Bioinformatics. 2018; 19:292.

31. Zhu K, Wang Y, Liu L, Li S, Yu W. Duga nekodirajuća RNA MBNL1-AS1 reguliše proliferaciju, migraciju i invaziju matičnih ćelija raka kod raka debelog crijeva interakcijom sa MYL9 putem spužvaste mikroRNA -412-3str. Klinike i istraživanja u hepatologiji i gastroenterologiji. 2020; 44: 101-14.

32. Schrödter S, Braun M, Syring I, Klümper N, Deng M, Schmidt D, et al. Identifikacija transportera dopamina SLC6A3 kao biomarkera za pacijente sa karcinomom bubrežnih ćelija. Molekularni rak. 2016; 15:10.

33. Ran L, Liang J, Deng X, Wu J. miRNA u predviđanju prognoze kod karcinoma bubrežnih ćelija sa čistim ćelijama. Biomed Res Int. 2017; 2017: 4832931.

34. Li JK, Chen C, Liu JY, Shi JZ, Liu SP, Liu B, et al. Duga nekodirajuća RNA MRCCAT1 promoviše metastaze karcinoma bubrežnih ćelija bistrih ćelija putem inhibicije NPR3 i aktiviranja p38-MAPK signalizacije. Molekularni rak. 2017; 16:111.

35. Sheng JQ, Liu L, Wang MR, Li PY. Kružne RNK u karcinomu probavnog sistema: potencijalni biomarkeri i terapijski ciljevi. Am J Cancer Res. 2018; 8: 1142-56.

36. Vea A, Llorente-Cortes V, de Gonzalo-Calvo D. Circular RNAs in Blood. Adv Exp Med Biol. 2018; 1087: 119-30.

37. Vo JN, Cieslik M, Zhang Y, Shukla S, Xiao L, Zhang Y, et al. Pejzaž kružne RNK kod raka. Cell. 2019; 176.

38. Pan B, Qin J, Liu X, He B, Wang X, Pan Y, et al. Identifikacija serumskog egzosomalnog has-circ-0004771 kao novog dijagnostičkog biomarkera kolorektalnog karcinoma. Front Genet. 2019; 10: 1096.

39. Gai C, Camussi F, Broccoletti R, Gambino A, Cabras M, Molinaro L, et al. MiRNA povezane s ekstracelularnim vezikulama pljuvačke kao potencijalni biomarkeri u oralnom karcinomu skvamoznih stanica. BMC Cancer. 2018; 18: 439.

40. Lenherr SM, Tsai S, Silva Neto B, Sullivan TB, Cimmino CB, Logvinenko T, et al. Profil ekspresije mikroRNA identificira tumore mokraćne bešike visokog stepena koji nisu invazivni na mišiće sa povećanim rizikom da pređu u invazivni fenotip. Geni (Bazel). 2017; 8.

41. Yoshida K. Oblik ćelije fibroblasta i adhezija in vitro su promijenjeni prekomjernom ekspresijom 7a i 7b izoforma protokadherina 7, ali ne i izoforme 7c. Cell Mol Biol Lett. 2003; 8: 735-41.

42. Zhou X, Updegraff BL, Guo Y, Peyton M, Girard L, Larsen JE, et al. PROTOCADHERIN 7 Deluje preko SET i PP2A da potencira MAPK signalizaciju od strane EGFR i KRAS tokom tumorigeneze pluća. Cancer Res. 2017; 77: 187-97.

43. Chen HF, Ma RR, He JY, Zhang H, Liu XL, Guo XY, et al. Protokadherin 7 inhibira migraciju ćelija i invaziju preko E-kadherina kod raka želuca. Tumor Biol. 2017; 39: 1010428317697551.

44. Bujko M, Kober P, Mikula M, Ligaj M, Ostrowski J, Siedlecki JA. Promjene ekspresije gena povezanih s adhezijom stanica-ćelija u kolorektalnim tumorima. Oncol Lett. 2015; 9: 2463-70.

45. Lin YL, Wang YL, Fu XL, Li WP, Wang YH, Ma JG. Niska ekspresija protokadherina7 (PCDH7) je potencijalni prognostički biomarker za primarni nemišićni invazivni karcinom mokraćne bešike. Oncotarget. 2016; 7: 28384-92.

46. ​​Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, Conn VM, Salmanidis M, Phillips CA, et al. Potres proteina koji se vezuje za RNK reguliše formiranje circRNA. Cell. 2015; 160: 1125-34.

47. Errichelli L, Dini Modigliani S, Laneve P, Colantoni A, Legnini I, Capauto D, et al. FUS utiče na kružnu ekspresiju RNK u motornim neuronima mišjih embrionalnih matičnih ćelija. Nat Commun. 2017; 8: 14741.

48. Yu CY, Li TC, Wu YY, Yeh CH, Chiang W, Chuang CY, et al. Kružna RNK circBIRC6 učestvuje u molekularnom krugu koji kontroliše ljudsku pluripotenciju. Nat Commun. 2017; 8: 1149.

49. Lee YH, Kim HS, Kim JS, Yu MK, Cho SD, Jeon JG, et al. C-my reguliše autofagiju za vitalnost pulpe kod glukoznog oksidativnog stresa. J Dent Res. 2016; 95: 430-8.

50. Li Q, Wang Y, Wu S, Zhou Z, Ding X, Shi R, et al. CircACC1 regulira sastavljanje i aktivaciju AMPK kompleksa pod metaboličkim stresom. Cell Metab. 2019; 30.

51. Ren C, Zhang Z, Wang S, Zhu W, Zheng P, Wang W. Cirkularna RNK hsa_circ_0001178 olakšava invaziju i metastaze kolorektalnog karcinoma kroz pojačanu regulaciju ZEB1 putem spužvanja više miRNA. Biol Chem. 2020; 401: 487-96.

52. Zeng K, Chen X, Xu M, Liu X, Hu X, Xu T, et al. CircHIPK3 podstiče rast kolorektalnog karcinoma i metastaze tako što probija miR-7. Cell Death Dis. 2018; 9: 417.

53. Park OH, Ha H, Lee Y, Boo SH, Kwon DH, Song HK, et al. Endoribonukleolitičko cijepanje RNK koje sadrže mA pomoću RNase P/MRP kompleksa. Mol Cell. 2019; 74.

Ying Wang1,2, Yunjing Zhang1,2, Xinwan Su3, Qiongzi Qiu4, Yuan Yuan2, Chunhua Weng2, Sailan Zou5, Yan Tian5, Weidong Han6, Pengyuan Liu4, Xingyi Guo7, Jianhua Mao8, Xianghui P Fuqi, Xianghui P Fuqi3

1. Četvrta pridružena bolnica i Međunarodni instituti za medicinu, Medicinski fakultet Univerziteta Zhejiang, Jinhua 322000, Zhejiang, Kina.

2. Centar za bubrežne bolesti, Prva pridružena bolnica i Institut za translacionu medicinu, Medicinski fakultet Univerziteta Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, Kina.

3. Odsjek za urologiju, Prva pridružena bolnica, Medicinski fakultet Univerziteta Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, Kina.

4. Odsjek za respiratornu medicinu, bolnica Sir Run Run Shaw i Institut za translacionu medicinu, Medicinski fakultet Univerziteta Zhejiang, Hangzhou 310016, Zhejiang, Kina.

5. Odsjek za endokrinologiju i metabolizam, Državna ključna laboratorija za bioterapiju i centar za rak, West China Hospital, Sichuan University i Collaborative Innovation Center of Biotherapy, Chengdu 610041, Sichuan, Kina.

6. Odjel za medicinsku onkologiju, bolnica Sir Run Run Shaw, Medicinski fakultet Univerziteta Zhejiang, Hangzhou 310016, Zhejiang, Kina.

7. Odjel za epidemiologiju, Odsjek za medicinu, Vanderbilt epidemiološki centar i Vanderbilt-Ingram centar za rak, Medicinski fakultet Univerziteta Vanderbilt, Nashville 37203, TN, SAD.

8. Odsjek za nefrologiju, Nacionalni klinički istraživački centar za zdravlje djece, Dječija bolnica, Medicinski fakultet Univerziteta Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, Kina.