Hemijska svojstva mannoglukana iz Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materijali

Korištene su oralne paste za konje dva različita proizvođača koje sadrže 10 mg/g (A) odnosno 20 mg/g (B) ivermektina. Urađen je kvantitativni test za ivermektin i sadržaj je bio 104,4–107,7 posto deklarisane koncentracije.

2. Test rastvaranja

Test je izveden sa doktoratom Eur. lopatica (Pharma Test, Heinberg, Njemačka), pri miješanju od 75 o/min ili 50 o/min, na 37 -0.5 C. Natrijum lauril sulfat (BDH Chemicals, Poole, Engleska) 0,5 posto (w /v) kao medij za rastvaranje korišten je vodeni rastvor (900 ml). Pasta (4 g A ili 2 g B) je stavljena u posudu špricem sa kanilom (A) ili ispuštanjem uzorka na površinu medija za otapanje (B). Nakon vremenskih intervala (15, 30, 45, 60 min i 2 h), uzet je uzorak medijuma za otapanje (2 ml), filtriran kroz stakleni filter i analiziran.

3. HPLC analiza

Određivanje ivermektina je izvršeno modifikovanom HPLC metodom kako je opisano u Ph. Eur. Analizirani rastvori su razblaženi metanolom (1:10). HPLC sistem se sastojao od oktadecil kolone (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integratora D-12500 A, detektora UV-Vis L{{7} }, pumpa L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Njemačka). Kao mobilna faza korišćena je smeša acetonitril:metanol:voda (64:24:16) sa brzinom protoka od 1,9 ml/min. Volumen ubrizganog uzorka bio je 20 ml, a detekcija je izvršena na 254 nm.

4. Studije rastvorljivosti

Pristup supstance je mućkan u dobro zatvorenim staklenim tikvicama sa odgovarajućim rastvaračem (Tabela 1) 20 h na 37 0.1 C. Suspenzije su filtrirane i filtrat, nakon razblaženja u metanolu, analiziran je HPLC-om. .

5. Stabilnost u kiselom rastvoru

Rastvori ivermektina u HCl {{0}}.1 M su čuvani u dobro zatvorenim staklenim bočicama na 20 C i 37 C. Kromatogrami rastvora su snimljeni pri t=0 i nakon 1, 2 i 6 h. Izračunata je površina ivermektina (retencijsko vrijeme 10,5 min) i dodatni pikovi.

Reference

FDA smjernice za industriju: SUPAC-SS nesterilni polučvrsti oblici doziranja. Promjene u povećanju i nakon odobrenja: hemija, proizvodnja i kontrole; in vitro testiranje oslobađanja i in vivo dokumentacija o bioekvivalentnosti. Maj 1997. FIP smjernice za ispitivanje rastvaranja čvrstih oralnih proizvoda (1997) Dissolute. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) FIP/AAPS smjernice za otapanje/in vitro ispitivanje oslobađanja novih/specijalnih oblika doze, AAPS PharmSciTech, 4 (1) članak 7 Moderni istraživački centar za tradicionalnu kinesku medicinu, škola farmaceutskih nauka, Pekinški univerzitetski zdravstveni centar, Peking, Kina

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Primljeno 13. februara 2004., prihvaćeno 4. aprila 2004., prof. dr Pengfei Tu, Centar za moderna istraživanja tradicionalne kineske medicine, Fakultet farmaceutskih nauka, Pekinški univerzitetski zdravstveni naučni centar, br. 38, Xueyuan Road , Haidian District, Peking 100083, Kina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Novi manoglukan izCistanche deserticolaiz Kine karakteriše. Jedinjenje je odgovorno za blagu stimulaciju proliferacije T i B limfocita izazvane mitogenom.

Cistanche deserticolaYC Ma je ​​holoparazit koji raste na korijenu dikotiledone biljke Haloxylon ammodendron Bunge koja je široko rasprostranjena na sjeverozapadu Kine. Kako je važan tonik u orijentalnoj medicini, tražene su mnoge aktivne komponente i farmakološke aktivnosti (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Ova svojstva mogu biti povezana s nekim od polisaharidnih komponentiCistanchekoje još nisu istražene. Mitogeni pektinski polisaharidi i neutralni polisaharidi su izolovani i okarakterisani izCistanche deserticolaiz Mongolije (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Božena et al. 1999). Ovdje izvještavamo o hemijskim svojstvima novog mannoglukana izCistanche deserticolaiz Kine, koji je odgovoran za blagu stimulaciju proliferacije T i B limfocita izazvane mitogenom. Nakon stabljikaCistanche deserticolaYC Ma su ekstrahovani sa 95 posto etanola, a za ekstrakciju ostatka korišćena je hladna destilovana voda. Ekstrakt hladne vode je precipitiran sa EtOH, protein je uklonjen i dijaliziran, čime se dobija sirovi polisaharid CCDP. Sirovi polisaharid je frakcioniran na DEAE koloni i Sephadex G-150 koloni kako bi se dobio polisaharid bez proteina (CDP-6), koji je sadržavao glukozu (89,2 posto) i manozu (1{{58} },4 posto ), a od kojih je prosječan Mr procijenjen na 6.8 -104. Polisaharid CDP-6 pokazao je [a 20 D 42 (c 1, H2O). Apsolutne konfiguracije šećera određene su GC TMS (– )-2-butil glikozida. CDP-6 je metiliran (Needs et al. 1993), hidrolizovan, pretvoren u alditol acetate i analiziran GC i GC-MS (tabela). Ovaj rezultat zajedno sa podacima o molarnom omjeru iz analize metilacije sugerira da CDP-6 ima pretežno 1,6-povezan Glcp i okosnicu 1,6- povezanu u manjoj mjeri razgranat na O{{ 24}} manoze. Analiza metilacije dva polimera (CDP-6-1, CDP-6–2) iz parcijalne hidrolize potvrdila je da CDP-6 ima okosnicu koja se sastoji od 1,6-povezanih glukozilnih ostataka i 1,6-vezani ostaci manozila, koji su supstituirani na O-3 manoze granama koje se sastoje od terminala, 1,6- povezanih glukozilnih ostataka i 1,3,{{38} }vezani ostaci manozila. Prema molarnim omjerima i literaturi (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), 13C NMR spektar CDP-6 pokazao je signale zbog anomernih ugljika a-d-Glcp (C{{45 }} na 98,4 ppm), bd-Map (C-1 na 104,3–104,9 ppm) i ad-Map (C-1 na 100.0 ppm). 1H NMR spektar CDP-6-2 u D2O pokazao je protonske signale koji odgovaraju ad-Glcp (H-1 na 4,94–4,95 ppm) i a-d-Map (H-1 na 4,96–5,00 ppm). 13C NMR spektar CDP-6-2 u D2O pokazao je protonske signale koji odgovaraju aD-Glcp (C-1 na 98,6 ppm) i ad-Map (C-1 na 98,4 ppm). Izvještava se da mannoglukani imaju 1,4-povezani glukopiranan i 1,4-povezani manopiranan kičmu (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 ima neke različite strukturne karakteristike svojim a-1,6-povezanim Glcp-om i b-1,6-povezanim okosnicama mape, i zamijenjen je granama mannoglukana (Sl.). Kako bi se istražila upotrebaCistanche deserticolau narodnoj medicini procijenjen je efekat CDP-6 na T i B ćelijske sisteme. Utvrđeno je da blago stimulira proliferaciju T i B limfocita izazvanu mitogenom.

Eksperimentalno

1. Opće procedure

Optička rotacija je mjerena automatskim polarimetrom W22-1S. IR spektri su određeni na Perkin-Elmer 599B spektrometru. GC analiza je izvršena na Agilent HP6890N instrumentu, opremljenom FID detektorom. GC-MS je izveden na Finnigan Trace GC-MS instrumentu. Homogenost i Mr CDP-6 procijenjeni su iz kalibracione krive zapremine eluiranja standardnih dekstrana, koja je izvedena na

Agilent aparat serije 1100 sa Shodex KS-805 kolonom. 1 H NMR i 13C NMR spektri su snimljeni instrumentom INOVA-500. Sadržaj proteina je analiziran po Bradfordovoj metodi (Andre et al. 1975). Monosaharidi su analizirani na njihov alditol acetat nakon što su hidrolizovani (2 M TFA, 2 h, 110 C), redukovani i acetirani. Hidrolizati su analizirani pomoću TLC na ploči od silika gela koja sadrži 5 posto natrijum dihidrogen fosfata u BuOH-EtOAc-izopropil alkohol-HOAC––H2Opiridin (3,5:10:6:3,5:3:3) i šećeri su detektovani prskanjem ili cinolom. -H2SO4. Dobijeni alditol acetati su analizirani GLC pomoću HP-5 kapilarne kolone (30 m 0,32 mm). CDP-6 je metiliran Ciucanu metodom, nakon čega je uslijedila hidroliza, a analiziran je kao djelomično metilirani alditol acetati pomoću GC-MS. Nakon djelomične hidrolize, proizvodi su dijalizirani i odvojeni, čime su dobijena dva polimera, CDP-6-1 i CDP-6–2.

2. Biljni materijal

Biljka je sakupljena iz provincije Unutrašnja Mongolija u Kini u avgustu 2001. godine, a identifikovala ju je Hu-Biao Chen, Odeljenje za prirodnu medicinu, Fakultet farmaceutskih nauka, Centar za zdravstvene nauke Univerziteta u Pekingu. Uzorak vaučera [E-1-(9)] ove biljke deponovan je na Fakultetu farmaceutskih nauka Univerziteta u Pekingu. 3. Ekstrakcija, izolacija i prečišćavanje polisaharida CDP-6 StabloCistanche deserticolaYC Ma (1500 g) ekstrahovani su sa 95 posto etanola (6 L) pod refluksom. Osušeni ostatak nerastvorljiv u etanolu maceriran je tri puta hladnom destilovanom vodom po 12 h. Ekstrakt hladne vode je filtriran, a filtrat centrifugiran. Nakon taloženja sa četiri zapremine EtOH (mešanje i stajanje 24 h na 4 C), dobijen je talog (35,5 g). Protein iz taloga je uklonjen Savageovom metodom. Nakon rastvaranja u destilovanoj vodi, ostatak (25,5 g) je dijalizovan i liofilizovan (prinos: 10,6 g). Sirovi polisaharid (8 g) je otopljen u destilovanoj vodi (100 mL, 8 posto w/v) i odvojen pomoću DEAE kolone (70 5 cm, gradijent od 0-2 M NaCl, po 1,5 L). Dobijena je frakcija eluirana vodom (600 mg). Uzorak (250 mg) je pročišćen kolonskom gel-permeacionom hromatografijom na koloni Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 mL, 5 mL po frakciji). Frakcije CDP-6 (1500–1600 mL) su objedinjene, dijalizirane i osušene zamrzavanjem. Nakon odslanjavanja Sephadexom G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) je dobijen i određen kao pojedinačni pik pomoću HPSGC.

Priznanje:Autor zahvaljuje dr. Baomei Shaou i prof. Xiaoming Gaou, Fakultetu osnovnih medicinskih nauka, Pekinški univerzitetski zdravstveni naučni centar, na mjerenju imunomodulirajuće aktivnosti CDP-6.