Efikasna metoda za liječenje bubrežne fibroze
Mar 17, 2022
za više informacija:ali.ma@wecistanche.com
Dio Ⅰ: Protein endoplazmatskog retikuluma TXNDC5 potiče fibrozu bubrega potičući TGF-signalizaciju u fibroblastima bubrega
Yen-Ting Chen, Pei-Yu Jhao i dr.
Uvod
Bubrežna fibroza, karakteriziran tubulointersticijalnimfibrozai glomerularna skleroza, uobičajena je patološka manifestacija većine, ako ne i svih tipovahroničnobubregbolesti(CKD)(1). Napredovanjebubrežnifibrozakod pacijenata sa CKD dovodi do postepenog gubitkabubregfunkcija, što bi u konačnici moglo rezultirati završnom bubrežnom bolešću (ESRD) koja zahtijeva dijalizu ilibubregtransplantacija (2). Dok se pokazalo da višestruke molekularne determinante i putevi doprinose procesufibroza bubrega, transformirajući faktor rasta-beta (TGF-) se općenito smatra glavnim regulatorom renalne fibrogeneze (3). Nakon povrede nabubreg, oštećene tubularne epitelne ćelije (TEC) se zaustavljaju u G2/M fazi i luče velike količine TGF- , pokrećući aktivaciju i transformaciju susjednih bubrežnih fibroblasta u miofibroblaste (4-6). Aktivirani miofibroblasti, karakterizirani ekspresijom aktina glatkih mišića (SMA), visoko su proliferativni i proizvode proteine ekstracelularnog matriksa (ECM) poput fibrilarnog kolagena, elastina, fibronektina i CCN2 (obično poznat kao faktor rasta vezivnog tkiva, CTGF)(7,8). U ranim fazama oštećenja bubrega,fibrozazapočet je kao adaptivni i samoograničeni fiziološki odgovor koji pomaže popravljanju tkiva i održavanju strukturnog integriteta(9). Međutim, nakon kronične, ponovljene ozljede bubrega, aktivacija i proliferacija miofibroblasta perzistiraju, što rezultira prekomjernom proizvodnjom i akumulacijom ECM, što dovodi do gubitka funkcionalnog parenhima bubrega i konačno, zatajenja bubrega (1O,11).
Click to Cistanche para que sirve za bolest bubrega
Uprkos napretku moderne medicine, malo je kliničkih terapija dokazano djelotvornimfibroza bubrega. Pokazalo se da inhibitori angiotenzin konvertujućeg enzima (ACEI) i blokatori angiotenzinskih receptora (ARB), na primjer, smanjuju proteinuriju, poboljšavajububrežnifibrozai usporavaju progresiju CKD (12,13). Pentoksifilin, nespecifični inhibitor fosfodiesteraze, s druge strane, pokazalo se da inhibira TGF- 1-indukovanu ekspresiju ECM i CCN2, što dovodi do oslabljene tubulointersticijalnefibroza(14). Upotreba ACEI i ARB-a, međutim, ograničena je njihovim hipotenzivnim efektima i potencijalnim štetnim efektima poput hiperkalemije. Osim toga, ni ACEl/ARB ni liječenje pentoksifilinom nisu mogli zaustaviti napredovanjebubrežnifibrozai CKD(15,16). Stoga je imperativ identificirati nove medijatore ili puteve koji su kritični za patogenezububrežnifibrozarazviti efikasne terapije protiv CKD(hronične bolesti bubrega).
Nedavno smo identifikovali domen tioredoksina koji sadrži 5 (TXNDC5), ER-rezident, protein obogaćen fibroblastima sa enzimskom aktivnošću protein disulfid izomeraze (PDI), kao kritičnog medijatora srčanogfibroza(17). Pokazali smo da prekomjerna TXNDC5 potiče razvoj srcafibrozakroz redoks zavisnu aktivaciju srčanih fibroblasta i proizvodnju ECM. Genetska delecija Txndc5 poboljšava rad srcafibrozai kontraktilna disfunkcija izazvana agonistom kod miševa (17). Na osnovu uočene suštinske uloge TXNDC5 u fibrogenezi miokarda, pretpostavili smo da bi TXNDC5 takođe mogao kritički doprineti razvoju tkivafibrozau nesrčanim organima, posebnofibroza bubrega.
U ovoj studiji, pokazali smo da je TXNDC5 bio visoko reguliran i u ljudskim i u mišjim fibrotičnim bubrezima, posebno u bubrežnim fibroblastima koji luče kolagen. Globalno brisanje Txndc5 značajno je umanjilo opsegbubrežnifibrozakod višestrukih mišjih modela oštećenja bubrega. Mehanički, pokazali smo da prekomjerni TXNDC5, izazvan TGF- 1 putem ATF6-zavisnog ER puta stresa, povećavabubrežnifibrozapromicanjem aktivacije/proliferacije fibroblasta bubrega i proizvodnje ECM-a kroz posttranslacijsku stabilizaciju i regulaciju TGF- receptora tipa I (TGFBR1). Važno je da smo pokazali da izazivanje fibroblast-specifične delecije Txndc5 efikasno poboljšava razvoj i napredovanjefibroza bubregaizazvan raznim vrstama ozljeda kod miševa, što sugerira da bi ciljanje TXNDC5 moglo biti nov i moćan pristup liječenjububrežnifibrozai sačuvatibubregfunkcija.
Slika 1. TXNDC5 je značajno povećan u fibrotičnim bubrezima miševa i uzorcima bubrega pacijenata sa CKD( hronične bolesti bubrega).
(A) IHC bojenje (n=3) i (B) imunoblotovi (n=6) pokazali su da je ekspresija proteina TXNDC5 povećana u fibrotičnim bubrezima miša izazvanim UUO ili uIRI, u poređenju sa kontralateralnim bubrezima (CL) . Skala bar: 50 μm.
(C) Kvantitativni RT-PCR je pokazao da je transkript Txndc5 povećan u fibroznim bubrezima miša induciranih UUO i uIRI (n=4–7).
(D) Reanaliza podataka mikromreža na uzorcima bubrega kod pacijenata sa CKD (GSE66494) pokazala je da su TXNDC5, COL3A1 i FN1 značajno pojačani u tkivima bubrega pacijenata sa CKD (zdrava kontrola n=8, CKD n {{ 6}}). Za A–C, podaci su reprezentativni za 3 ili više nezavisnih eksperimentalnih replika.
Za sve panele, podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM. *P < {{0}}.05,="" **p="">< 0,01,="" ***p="">< 0,001="" po="" 2-bočnom="" t-testu="" (a–c)="" ili="" mann-="" whitney="" test="">
Rezultati
TXNDC5 je značajno povećan u fibroznim bubrezima ljudi i miša. Istražiti potencijalno učešće TXNDC5 u patogenezifibroza bubrega, prvo smo odredili nivoe ekspresije proteina u fibrotičnom mišjem bubrežnom tkivu izazvanu jednostranom opstrukcijom uretera (UUO), jednostranom ishemijsko-reperfuzijskom povredom (uIRI) ili davanjem folne kiseline (FA). Imunohistohemijske studije otkrile su značajno povećanje intenziteta bojenja TXNDC5 u presecima bubrega kod sva 3 mišja modelabubrežnifibroza(Slika 1A i Dodatna slika 1A; dodatni materijal dostupan na internetu uz ovaj članak; https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1). Imunoblotiranje i kvantitativna reverzna transkripcija PCR (RT-PCR) također su pokazali značajno povećanje nivoa ekspresije proteina (Slika 1B) i transkripta (Slika 1C i Dodatna Slika 1B) TXNDC5 u fibrotičnim bubrezima miša. U skladu sa ovim rezultatima, ponovna analiza podataka mikromreža dobijenih iz uzoraka biopsije bubrega pacijenata sa CKD(GSE66494)(18) pokazala je da nivoi ekspresije TXNDC5 (za 2,24 puta, P<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">fibroza bubregakao što su COL3A1 i FN, takođe su značajno povećane u uzorcima bubrega pacijenata sa CKD u poređenju sa onima iz zdravih kontrola (Slika 1D i Dodatna Slika 1C). Uzeto zajedno, uočena pojačana regulacija ekspresije TXNDC5/Txndc5 u fibrotičnim bubrezima čovjeka/miša i njegova pozitivna korelacija s fibrogenim genima ECM proteina sugeriraju potencijalnu ulogu TXNDC5 u patogenezifibroza bubrega.
Slika 2. TXNDC5 je bio visoko regulisan u bubrežnim fibroblastima, ali ne i u TEC, endotelnim ćelijama ili podocitima fibrotičnih bubrega.
(A i C) IF bojenje TXNDC5 (crveno) na dijelovima fibroznih bubrega induciranih UUO kod Col1a1-GFPTg miševa pokazalo je da je TXNDC5 uglavnom eksprimiran u bubrežnim fibroblastima koji luče kolagen (zeleni), kako u korteksu bubrega tako iu meduli (n=6). Ćelijska jezgra su obojena DAPI (plavo). Skala bar: 100 μm.
(B) IF bojenje TXNDC5 (zeleno) na dijelu fibroznih bubrega izazvano UUO kod miševa Cdh16-Cre, NPHS2-Cre i Tie2-Cre/ERT2 tdTomato. Ćelijska jezgra su obojena DAPI (plavo). Skala bar: 100 μm.
(D) Kružni dijagram za ilustraciju udjela TXNDC5 plus ćelija u različitim tipovima bubrežnih stanica u UUO-induciranim fibrotičnim bubrezima.
Podaci su reprezentativni za 3 ili više nezavisnih eksperimentalnih replika. Podaci u C su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM.
TXNDC5 je bio visoko obogaćen bubrežnim fibroblastima koji luče kolagen u fibrotičnim bubrezima. Više tipova bubrežnih ćelija je uključeno u proces fibrogeneze bubrega. Nakon ozljede bubrega, pokazalo se da se rezidentni (19) i perivaskularni (20) bubrežni fibroblasti diferenciraju u aktivne miofibroblaste i rezultiraju akumulacijom ECM. TEC i endotelne ćelije takođe doprinose razvojufibroza bubregakroz epitelnu i endotelnu-mezenhimsku tranziciju, respektivno (10,21). Odrediti tipove ćelija u kojima je TXNDC5 eksprimiran tokom procesa bubrežne funkcijefibroza, višestruke reporterske linije miša koje omogućavaju fluorescentno označavanje bubrežnih fibroblasta (Colla1-GFP', GFP pokretan pojačivačem/promotorom Collal, ref.22), TECs (Cdh16-Cre ROSA26- tdTomato), endotelne ćelije (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato) i podociti (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) podvrgnuti su UUO, uIRI ili FA tretman za indukcijufibroza bubrega. Imunofluorescentno (IF) bojenje bubrežnih odjeljaka ovih životinja otkrilo je da je TXNDC5 značajno pojačan i visoko kolokaliziran s GFP-pozitivnim bubrežnim fibroblastima koji luče kolagen u fibrotičnim bubrezima miša induciranim UUO (81 posto) (slika 2, A) , uIRI (76,8 posto ) i tretman FA (73,4 posto ) (dodatna slika 2, A i B). U UUO induciranim fibrotičnim bubrezima, TXNDC5 je samo sporadično izražen u TEC (5,94 posto), podocitima (0.63 procenat ), i endotelne ćelije (2,05 procenata ) (Slika 2, B i D). Analiza protočne citometrije fibroblasta izolovanih iz mišjih bubrega podvrgnutih UUO otkrila je značajno proširenje TXNDC5* fibroblasta bubrega kao i značajnu regulaciju TXNDC5 u ovim ćelijama, u poređenju sa onima iz kontralateralnih kontrolnih bubrega (dodatna slika 2C). Uočeno snažno obogaćivanje TXNDC5 u bubrežnim fibroblastima u fibrotici sugerira da bi TXNDC5 mogao doprinijetifibroza bubregaregulacijom aktivnosti/ponašanja ovih fibrogenih ćelija koje luče kolagen.
TXNDC5 je bio i bitan i dovoljan da izazove aktivaciju, proliferaciju i proizvodnju ECM fibroblasta bubrega. Zatim smo odredili funkcionalnu ulogu TXNDC5 u fibroblastima bubrega. Primarni humani fibroblasti bubrega (HKF) stimulirani sa TGF- 1 (10 ng/mL) pokazali su snažnu regulaciju nivoa ekspresije proteina (Slika 3A) i transkripta (Slika 3B) TXNDC5, kao i periostina markera aktivacije fibroblasta i ECM proteini (COL1Al, fibronektin i CCN2). Nokdaun TXNDC5 sa shRNA značajno je atenuirao TGF- 1-protein/mRNA indukovanu regulaciju periostina i višestrukih ECM proteina u HKF (Slika 3, A i B). Osim toga, tretman TGF1 je pojačao proliferativnu aktivnost HKF-a, koja je potpuno poništena TXNDC5 nokaunom (slika 3D). Ovi rezultati sugeriraju da je TXNDC5 neophodan za TGF- 1-indukovanu aktivaciju HKF, proliferaciju i proizvodnju ECM. Prekomjerna ekspresija TXNDC5, s druge strane, rezultirala je značajnom regulacijom periostina, COL1A1 i fibronektina (Slika 3C), kao i povećanom proliferativnom aktivnošću (Slika 3E) u HKF. Zajedno, ovi rezultati pokazuju da je TXNDC5, nizvodno od TGF- 1, neophodan i dovoljan da promovira aktivaciju, proliferaciju i ECM proizvodnju fibroblasta bubrega.
Slika 3. Obaranje TXNDC5 atenuirane TGF- 1-indukovane aktivacije HKF i proizvodnje ECM; prekomjerna ekspresija TXNDC5 bila je dovoljna da pokrene HKF aktivaciju i proizvodnju ECM.
(A) Nivoi ekspresije proteina i (B) transkripta markera aktivacije fibroblasta (periostina) i ECM proteina (COL1A1, fibronektin i CCN2) su povećani u kontrolnim (Scramble) HKF nakon TGF- 1 (10 ng/mL) tretman. Nokdaun TXNDC5 je oslabio regulaciju ovih fibrogenih markera izazvanu TGF- 1 u HKF (n=5–10).
(C) Prekomjerna ekspresija TXNDC5 bila je dovoljna da indukuje povećanje regulacije markera aktivacije fibroblasta (Periostin) i ECM proteina (COL1A1, fibronektin) u HKF (n=3-10).
(D) Tretman TGF- 1 (10 ng/mL) povećao je aktivnost ćelijske proliferacije HKF-a, što je poništeno srušenjem TXNDC5.
(E) Prekomjerna ekspresija TXNDC5 povećala je aktivnost ćelijske proliferacije HKF-a. U D i E, n=10. Podaci su reprezentativni za 3 ili više nezavisnih eksperimentalnih replika.
Za sve panele, podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM. Statistička značajnost razlika za 2 grupe određena je 2-stranim t-testom, a među 3 ili više grupa je određena korištenjem 1-način ANOVA, nakon čega su slijedili Sidakovi post hoc testovi. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p=""><>
Globalna delecija Txndc5 zaštićena od bubrega b. Odrediti zahtjeve TXNDC5 u razvojufibroza bubregain vivo, WT i Tndc5-/miševi su podvrgnuti UUO, uIRI i FA tretmanu. Picrosirius crvena i Massonova trihromna boja na presecima bubrega pokazala su ekstenzivnububrežnifibrozakod WT miševa nakon UUO (slika 4A), uIRI (slika 5A) i primjene FA (dopunska slika 3A). Globalno brisanje Txndc5 značajno je smanjilo opsegbubrežnifibrozau sva 3 modela ozljede bubrega (Slika 4A, Slika 5A i Dodatna slika 3A).
Slika 4. Brisanje Txndc5 atenuirane renalne fibroze izazvane UUO.
(A) Picrosirius crveno bojenje (gornja 2 panela) i Massonovo trihromno bojenje (donja 2 panela) odsječaka bubrega WT i Txndc5-7 miševa 10 dana nakon UUO. Stupasti grafikoni kvantitativnih rezultata Picrosirius crvenog i Massonovog trihromskog bojenja područja prikazani su na desnoj strani (n=5-10). Bar skale∶ 100 μm.
(B)SHG slike odjeljaka bubrega iz WT i Txndc5-/miševi 10 dana nakon UUO. Kvantitativni rezultati SHG-pozitivnih područja pokazali su povećanu akumulaciju fibrilarnog kolagena (zeleno) u WT, ali ne i u bubrezima Txndc5 miševa nakon ozljede.
Za svaki od sekcija bubrega snimljenih za SHG, TPEF snimak je dobijen kako bi se prikazao profil skeniranog tkiva (crvena boja na donjim panelima) (n=3). Skala trake: 50 um. (C) Imunoblotovi su pokazali nivoe ekspresije proteina markera aktivacije fibroblasta (Periostin) i ECM (COL1A1) u ekstraktu cijelog bubrega iz WT i Txndc5-/miševa 10 dana nakon UUO (n= 3-6). Podaci su reprezentativni za 3 ili više nezavisnih eksperimentalnih replika.
Za sve panele, podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost± SEM. Statistička značajnost razlika između 3 ili više grupa je određena korištenjem 1-način ANOVA, praćenog Sidakovim post hoc testovima.**P<><>
Za kvantificiranje patogenog fibrilarnog kolagena (tip I i II) posebno i izbjegavanje precjenjivanja fibrotičnih područja tradicionalnim metodama bojenja, mikroskopija druge harmonske generacije (SHG), novi sistem optičkog snimanja tkiva koji omogućava vizualizaciju fibrilarnog, ali ne i nefibrilarnog, kolagena u fibroznim organima (23,24), korišten je za procjenu obimafibrozau WT i Tndc5 plus mišjim bubrezima nakon ozljede. U skladu sa gore navedenim rezultatima, SHG mikroskopija je pokazala značajno povećanje taloženja fibrilnog kolagena u WT bubrezima nakon UUO (slika 4B), uIRI (slika 5B) i FA tretmana (dodatna slika 3B), čiji je opseg značajno smanjen u Txndc{{ 4}}/ miševi (slika 4B, slika 5B i dodatna slika 3B).
U skladu sa oslabljenim fibroznim odgovorom nakon ozljede u bubrezima Txndc5 miša koji je uočen u studijama slikanja, brisanje Tendc5 je također ublažilo regulaciju ECM proteinskih gena, uključujući Collar, Eln, Fnl i Ccn2 u bubrezima miša nakon ozljede (dopunska slika 3, CE). Imunoblotovi lizata tkiva cijelog bubrega također su pokazali smanjeni nivo proteina ECM(COLIA1) i markera aktivacije fibroblasta (periostina) kod Txndc5-/miševa u poređenju sa WT miševima nakon UUO i uIRI (Slika 4C i Slika 5C).
Slika 5. Brisanje Txndc5 poboljšalo je renalnu fibrozu izazvanu ulRI.
(A) Picrosirius crveno bojenje (gornja 2 panela) i Massonovo trihromsko bojenje (donja 2 panela) preseka bubrega od WT i Txndc5-7 miševa 28 dana nakon ulRI. Trakasti grafikoni kvantitativnih rezultata Picrosirius crvenog i Massonovog trihroma područja bojenja su prikazana na desnoj strani (n=6). Skala bar∶ 100 μm.
(B) SHG slike preseka bubrega kod WT i Txndc5- miševa 28 dana nakon ulRI. Kvantitativni rezultati SHG-pozitivnih područja pokazali su povećanu akumulaciju fibrilarnog kolagena (zeleno) u WT, ali ne i u bubrezima Txndc5 miševa nakon ozljede. Za svaki od sekcija bubrega snimljenih za SHG, TPEF snimak je dobijen kako bi se prikazao profil skeniranog tkiva (crvena boja u donjim panelima) (n=3). Bar skale∶50 μm.
(C) Imunoblotovi su pokazali nivoe ekspresije proteina markera aktivacije fibroblasta (Periostin) i ECM (COL1A1) u ekstraktu cijelog bubrega iz WT i Txndc5/miševa 28 dana nakon ulRI (n=5-9). Podaci su reprezentativni za 3 ili više nezavisnih eksperimentalnih replika.
Za sve panele, podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM. Statistička značajnost razlika između 3 ili više grupa je određena korištenjem1-način ANOVA, praćen Sidakovim post hoc testovima.*P<><><>
Kako bi se isključila mogućnost da TXNDC5 eksprimiran u drugim tipovima bubrežnih stanica, kao što su TEC, podociti i endotelne stanice, može još uvijek doprinijeti razvojububrežnifibroza, generirali smo Txndc5 uslovno nokaut miševe specifične za TEC (Cdh16-cre*Txcndc5i, ili Txndc5Epeko), podocite (NPHS2-cre*Txndc5/n, ili Tendc5Podxko) i endotelne ćelije (Tie{{ 7}}cre/ERT2*Tendc5/, ili Txndc5Endo.eko). U eksperimentima sa Txndc5Pieko i Txndc5 Poio-cko miševima, Txndc5Wmice su korišteni kao kontrole; u eksperimentima na Txndc5EMio-eko miševima, Txndc5 delecija je indukovana upotrebom tamoksifena kao što je opisano na slici 9A, gdje su miševi tretirani tamoksifenom Tie2-Cre/ERT2 korišćeni kao kontrole. Ciljano brisanje Txndc5 u TEC-ima, podocitima ili endotelnim stanicama, međutim, nije utjecalo na opsegfibroza bubregaizazvan UUO ili FA (dodatna slika 6, BE). Ovi rezultati sugeriraju da TXNDC5 eksprimiran u TEC-ima, podocitima i endotelnim stanicama malo doprinosi, ako uopće ima, patogenezibubregfibroza.
Brisanje Txndc5 u bubrežnim fibroblastima štiti od TEC apoptoze kao odgovora na ozljedu bubrega. U procesu odbubrežnifibroza, ozlijeđeni TEC gube mitohondrijalnu funkciju i apikobazalni polaritet, nakon čega slijedi apoptoza i ćelijska smrt(30). Da bismo istražili da li brisanje Txndc5 utječe na apoptozu TEC-a kao odgovor na ozljedu, izvršili smo TUNEL bojenje na WT i Txndc{2}} bubregu miša sekcije 10 dana nakon UUO. Broj apoptotičkih TEC-a značajno se povećao u UUO-indukovanim fibrotičnim bubrezima WT miševa, dok je delecija Txndc5 oslabila opseg TECapoptoze. Prijavljeno je da aktivirani fibroblasti bubrega mogu indukovati TEC apoptozu kroz parakrine efekte (31). Budući da je Tendc5 jedva izražen u TEC-ima, vjerovatno je da smanjena apoptoza TEC-a uočena kod Txndc5-7 miševa nakon UUO nije bila ćelijski autonomni efekat, već sekundarna zbog smanjene intersticijalnefibrozaa time i manje proapoptotičkih signala iz okolnih bubrežnih fibroblasta. U skladu s ovom hipotezom, fibroblast-specifična delecija Txndc5 (Tendc5kO) je oslabila TEC apoptozu do mjere koja je slična onoj uočenoj kod Txndc5-/miševi 10 dana nakon UUO (Supplemental). Za razliku od uočenog smanjenja TECapoptoze, broj F4/80-pozitivnih makrofaga i CD31-pozitivnih endotelnih ćelija bio je uporediv u WT i Txndc5-mišjim bubrezima, sa ili bez UUO, što sugerira da brisanje Txndc5 ne utiče na infiltraciju makrofaga ili peritubularne kapilarne gustine u bubrezima miša. Uzeti zajedno, ovi podaci sugeriraju da su reno-protektivni efekti delecije Txndc5 rezultat smanjenog tubularnog intersticijafibrozai TEC apoptoza, bez uticaja na gustinu bubrežnih kapilara ili makrofage.
Indukovana delecija Tendc5 u bubrežnim fibroblastima smanjila je progresiju ustanovljenogfibroza bubrega. Da bi se utvrdilo da li ciljanje Txndc5 u bubrezima može biti od koristi u ustanovljenimbubrežnifibroza, delecija Txndc5 u bubrežnim fibroblastima indukovana je kod miševa Txndc5eko 10 dana nakon UUO, vremenske tačke kada je ekstenzivnabubrežnifibrozamože se posmatrati. U ovim eksperimentima, Colla2-Cre miševi tretirani tamoksifenom su korišteni kao kontrola. Kao što je prikazano, miševi Colla2-Cre i Tcndc5eko imali su sličan stepenbubrežnifibroza10 dana nakon UUO prije liječenja tamoksifenom. Jedanaest dana nakon injekcije tamoksifena, međutim, stepen renalne fibroze je nastavio napredovati kod kontrolnih miševa (fibrozno područje se povećalo sa 5,1 posto na 10,6 posto), dok je progresijabubregfibrozaje skoro zaustavljen (fibrozno područje se promijenilo sa 5,3 posto na 6,9 posto) kod miševa Txndc5eko. Imunobloting je takođe pokazao značajno oslabljenu regulaciju CCN2, periostina i TGFBR1 kod Txndc5eko miševa u poređenju sa kontrolnim miševima između D10 i D21 nakon UUO. Ovi rezultati pokazuju da interventna delecija Txndc5 u bubrežnim fibroblastima značajno smanjuje progresijufibroza bubrega, što sugerira da bi in vivo ciljanje TXNDC5 moglo biti nov i moćan terapijski pristup za poboljšanjebubregfibrozai da uspori napredovanje CKD.
