4.6. Supstance reaktivne na tiobarbiturnu kiselinu (TBAR)

Sadržaj TBAR-a korišten je kao indeks lipoperoksidacije. U moždano tkivo je dodat 50 mM fosfatni pufer (pH 7,4) u koncentraciji od 25 mg/mL (w/v), a suspenzija je homogenizirana ultrazvukom 10 s. U 30 µL homogenata dodano je 250 µL 1 posto fosforne kiseline i 75 µL 0,6 posto tiobarbiturne kiseline (TBA). Smjesa reagensa je inkubirana na 100 ◦C u vodenom kupatilu 45 minuta, nakon čega je ohlađena u ledenom kupatilu i zatim centrifugirana na 3000×g 10 minuta na 4◦C. Iz svakog uzorka uzeta je zapremina od 150 µL supernatanta. Fluorescencija je mjerena korištenjem čitača mikroploča FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Njemačka) sa ekscitacionim filterom postavljenim na 485 nm (širina pojasa 5 nm) i emisionim filterom postavljenim na 530 nm (širina pojasa 5 nm). Kalibraciona kriva je pripremljena koristeći malondialdehid (MDA) kao standard. Rezultati su izraženi u pmol MDA/mg proteina.

Glikozid cistanche takođe može povećati aktivnost SOD u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, efikasno hvatajući različite reaktivne radikale kisika (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNK uzrokovanih od strane OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost uklanjanja slobodnih radikala, veću redukcijsku sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji sperme, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju spermatozoida. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnim tkivima eksperimentalno starenja miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina. dobar učinak čišćenja na DPPH, produžava vrijeme hipoksije kod starijih miševa, poboljšava aktivnost SOD u serumu i odlaže fiziološku degeneraciju pluća kod eksperimentalno starenja miševa. i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost uklanjanja slobodnih radikala DPPH i sposobnost uklanjanja reaktivnih vrsta kisika i sprječavanja degradacije kolagena izazvane slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravljanja oštećenja anjona slobodnih radikala timina.

Kliknite na Gdje mogu kupiti Cistanche

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Enzimska aktivnost glavnih antioksidativnih enzima

Za određivanje aktivnosti enzima u moždanom tkivu u koncentracija od 50 mg/mL (w/v). Zatim je suspenzija ultrazvučna 30 s u ledenom kupatilu, a homogenat je centrifugiran na 10,000× g 15 minuta na 4 ◦C. Supernatanti su sakupljeni za određivanje enzimske aktivnosti antioksidativnih enzima.

Aktivnost superoksid dismutaze (SOD) mjerena je praćenjem inhibicije autooksidacije pirogalola na 420 nm [69]. Jedna jedinica enzima je definirana kao količina enzima potrebna da inhibira brzinu autooksidacije pirogalola za 50 posto. Enzimska aktivnost SOD izražena je kao međunarodne jedinice (IU)/mg proteina. Aktivnost katalaze (CAT) mjerena je u supernatantima tretiranim Triton-X-100 (1 posto, v/v) praćenjem nestanka vodonik peroksida (H2O2) na 240 nm [70], a aktivnost enzima je prijavljena kao supstrat ( µmol H2O2) transformirani/min · mg proteina. Ukupna glutation peroksidaza (GPx) određena je nakon NADPH oksidacije na 340 nm u prisustvu viška GR, GSH i kumen hidroperoksida [71]. GPx aktivnost je izražena kao supstrat (nmol NADPH) transformisanog/min mg proteina. Aktivnost glutation reduktaze (GR) analizirana je nakon NADPH oksidacije na 340 nm u prisustvu GSSG [72] i izražena kao supstrat (nmol NADPH) transformisan/min · mg proteina. GR i obe aktivnosti GPx su korigovane za spontanu reakciju u odsustvu bioloških uzoraka (u odsustvu enzima).

4.8. BACE1 Test aktivnosti

Protokol BACE1 testa uključuje upotrebu supstrata (peptida) specifičnog za sekretazu koji je konjugiran sa dva reporterska molekula, naime EDANS i DABCYL, što rezultira oslobađanjem fluorescentnog signala [73,74]. Aktivnost BACE1 mjerena je i u lizatima korteksa i hipokampusa. Reakcija je izvedena na 37 ◦C tokom 1 h koristeći 10 µM supstrata u 50 mM natrijum acetatnom puferu (pH 4,5). Mjerenja intenziteta fluorescencije vršena su korištenjem FLUOSTAR čitača mikroploče (BMG LABTECH, Ortenberg, BadenWürttemberg, Njemačka) sa ekscitacionim filterom postavljenim na 360 nm (širina pojasa 5 nm) i emisionim filterom postavljenim na 530 nm (propusnost 5 nm). Nivo enzimske aktivnosti sekretaze proporcionalan je fluorometrijskoj reakciji, a podaci su izraženi kao x-struko povećanje fluorescencije u odnosu na pozadinske kontrole (reakcije u odsustvu supstrata ili tkiva). Aktivnost BACE1 normalizirana je koncentracijom proteina. BACE1 aktivnost miševa, tretiranih kvercetinom ili rutinom, izražena je kao procenat aktivnosti TgAPP kontrolnih miševa.

4.9. RT-PCR genska ekspresija glavnih antioksidativnih enzima, APP, BACE1, ADAM10, kaspaze-3 i kaspaze-6 i inflamatornih citokina

4.9.1. Ekstrakcija i prečišćavanje ukupne RNK

Analizirali smo različite oblasti mozga, odnosno korteks i hipokampus, pohranjene na -80 ◦C. Poznatoj količini moždanog tkiva, Triomol® pufer za lizu je dodat u omjeru 1:10 (w/v). Uzorci su homogenizovani 30 s pomoću akumulatorskog motora (Pellet pestle, Sigma-Aldrich) i inkubirani 5 minuta na 25 ◦C da bi se omogućila potpuna disocijacija nukleoproteinskih kompleksa. Zatim je dodato 0,2 mL hloroforma za svaki mL upotrebljenog Triomol® pufera za lizu. Epruvete su snažno mućkane 15 s i inkubirane na 25 ◦C 3 min. Zatim su centrifugirani na 11,000× g 15 minuta na 4 ◦C. Nakon centrifugiranja dobijene su tri faze, sa RNK u gornjoj fazi.

Da bi se izolovala RNK, gornja faza je prebačena u drugu epruvetu i precipitirana dodavanjem 0.5 mL izopropanola. Nakon temeljnog miješanja izopropanola i vodenog rastvora inverzijom, smjesa je inkubirana na sobnoj temperaturi 10 minuta da bi se podstakla taloženje, i centrifugirana na 12,000× g 10 minuta na 4 ◦C. Supernatanti su uklonjeni, a pelete su isprane sa 75 posto etanola i centrifugirane na 7500 × g 5 minuta na 4 ◦C. Pelete su osušene na sobnoj temperaturi i rastvorene u 50 µL vode tretirane DEPC-om. Da bi se uklonili tragovi DNK, dodano je 2,5 µL DNaze (bez RNaze) i inkubirano na 37 ◦C 30 min. Konačno, uzorci su inkubirani na 64 ◦C tokom 5 minuta da bi se inaktivirala DNaza.

Nakon toga, koncentracije RNK su izmjerene u UV-VIS spektrofotometru (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Njemačka) na 260 nm, a čistoća je procijenjena uzimajući u obzir omjer apsorpcije na 260 i 280 nm (A260/A280).

Određivanje integriteta i čistoće RNK izvršeno je elektroforezom u 1-postotnom agaroznom gelu obojenom GelRed-om i vizualiziranom pod UV svjetlom, gdje su, ako je RNK netaknuta, dvije gornje trake koje odgovaraju ribosomalnoj RNK (28S i 18S) i dvije donje trake koje odgovaraju transfernoj RNK (tRNA) i 5S ribosomalnoj RNK moraju se posmatrati.

4.9.2. Sinteza komplementarne DNK (cDNK).

cDNA je mnogo stabilnija od RNK i stoga omogućava praktičnije i sigurnije rukovanje uzorcima. cDNK je sintetizirana iz mRNA retrotranskripcijom koristeći First Strand cDNA Synthesis Kit za RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

Da bi se izvršila retrotranskripcija za sintezu cDNK na 2 µg RNK, dodano je 11 µL DEPC-tretirane vode i 1 µL 10X Random prajmera. Zatim je smeša inkubirana na 65 ◦C 10 minuta da bi se denaturirala RNK. Nakon ovog vremena, epruvete su odmah dovedene na 4 ◦C u trajanju od 5 minuta kako bi se izbjegla renaturacija RNK. Mješavina reagensa za sintezu cDNK prikazana je u tabeli S1 (dodatni podaci).

U svaki uzorak dodano je osam µL reakcione smjese. Cela zapremina je dovedena na dno epruveta i inkubirana na 42 ◦C 60 min. Konačno, reakcija je zaustavljena inaktivacijom reverzne transkriptaze zagrijavanjem na 70 ◦C tokom 10 min.

4.9.3. PCR u realnom vremenu

Glavna karakteristika PCR-a u realnom vremenu je da se analiza proizvoda odvija tokom procesa amplifikacije određivanjem fluorescencije. Na ovaj način, procesi amplifikacije i detekcije se odvijaju istovremeno u istoj epruveti ili bočici bez potrebe za daljim djelovanjem. Za PCR u realnom vremenu koriste se termalni ciklusi koji mogu istovremeno pojačati i detektirati fluorescenciju. Koristili smo termocikler u realnom vremenu LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Njemačka).

Tabela S2 (Dopunski podaci) navodi reagense potrebne za PCR u realnom vremenu, koristeći prajmere specifične za sekvencu i DNK-vezujuću boju (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Švicarska) kao sistem za detekciju.

Za dizajn prajmera za različite kvantificirane markere korišten je bioinformatički program Primer3Plus, za koji smo uzeli cDNK sekvence gena od interesa iz Medline baze podataka otvorenog pristupa. Prajmere je isporučio Merck (Sigma-Aldrich). Temperatura hibridizacije i redoslijed različitih korištenih prajmera prikazani su u Tabeli S3 (Dopunski podaci).

Uslovi reakcije za amplifikaciju gena od interesa prikazani su u tabeli S4 (dodatni podaci).

Konačno, uzorci su podvrgnuti programu topljenja: 95 ◦C tokom 15 s, 65 ◦C tokom 30 s, i do 98 ◦C brzinom od 0,1 ◦C/s uz kontinuirano snimanje fluorescencije.

Za kvantifikaciju nivoa cDNK korišćena je metoda poređenja praga ciklusa (Ct) [75], koristeći GADPH kao kućnu pomoćnicu. Paralelno sa analiziranim genom urađena je i amplifikacija domaćice. Ct vrijednosti su izračunate korištenjem softvera 4.0 koji obezbjeđuje LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Njemačka). Softver omogućava razlikovanje fluorescencije zbog pojačanja uzorka i pozadine. Snimljene su i krive topljenja. Određivanje temperature topljenja amplificiranog fragmenta omogućilo je karakterizaciju amplificiranog proizvoda. Veličina traka je provjerena na 1,5 postotnom agaroznom gelu.

Varijacija ekspresije ispitivanog gena uz tretman s kvercetinom ili rutinom izražena je kao funkcija kontrolnog TgAPP (miševi bez tretmana) i normalizacije ove ekspresije sa nivoima GADPH. Promjenjivi nabor (2−∆∆Ct) predstavlja broj puta da je gen od interesa modificiran pod određenim tretmanom koji se odnosi na kontrolne miševe.

4.10. Statističke analize

Svi testovi su obavljeni najmanje u duplikatu iu tri različita eksperimenta. Dobijeni rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna greška. Jednosmjerna analiza varijanse (ANOVA) je obavljena nakon što su podaci testirani i pokazano da se uklapaju u normalnu distribuciju. Provedeni su post-hoc testovi višestrukih poređenja Newman-Keuls, ispitujući srednje razlike između grupa. Vrijednosti p < 0.05 smatrane su značajnim. Za statističke analize korišten je softver SigmaPlot 11.0.

5. Zaključci

Navike u ishrani i suplementacija mogu uticati na redoks status ćelije. Na osnovu toga, imali smo za cilj da poboljšamo ćelijsku redoks homeostazu u AD mišjem modelu sa flavonoidnom ishranom koja sadrži kvercetin ili rutin kako bismo ublažili amiloidnu patologiju, uzimajući u obzir međusobnu interakciju između ćelijskog redoks statusa i karakteristika amiloida zavisnih od proteazoma u asimptomatskoj AD. Naši skupovi podataka su relevantni jer su efekti flavonoida prikazani u modelu miša TgAPP u skladu s onima koji su ranije prijavljeni u našim in vitro i ex vivo modelima.

Zaključno, naši nalazi pokazuju da započinjanje dijetetskog tretmana u asimptomatskoj fazi ili na početku simptoma sličnih AD može obnoviti ćelijski redoks status i fiziološku obradu APP kroz istodobnu regularizaciju ekspresije APP i aktivnosti BACE1.

Iako je teško ekstrapolirati naše nalaze na stanje ljudi, oni mogu imati široke implikacije na ljudski odgovor na buduće terapije. Od dva flavonoida, rutin, sa sveukupno izraženijim in vivo efektima, čini se da je najpogodniji za uključivanje u svakodnevnu ishranu kao pomoćna terapija u AD, na osnovu povećanja intracelularne redoks homeostaze mozga.

Dodatni materijali:Sljedeće prateće informacije mogu se preuzeti na web stranici. Referenca [76] je citirana u dodatnim materijalima.

Doprinosi autora:PB-B. i SM-A. osmislio ideju i dizajn eksperimenta, pomogao u eksperimentima, interpretirao dobijene rezultate i napisao rukopis. KLJ-A. sproveo eksperimente, izvršio analizu podataka i interpretirao dobijene rezultate. JB je pomogao u analizi podataka i reviziji rukopisa. Svi podaci su generisani u kompaniji, a nije korištena fabrika papira. Svi autori su saglasni da budu odgovorni za sve aspekte rada osiguravajući integritet i tačnost. Svi autori su pročitali i pristali na objavljenu verziju rukopisa.

finansiranje:Ovo istraživanje je finansirala Fondacija za medicinska istraživanja «Mutua Madrileña» (četvrto izdanje grantova za projekte medicinskog istraživanja), špansko Ministarstvo obrazovanja i nauke (Ref. AGL2008-04892-C03-02) i Špansko Ministarstvo nauke i inovacija (Ref. CTQ2010-16170).

Izjava institucionalnog odbora za reviziju:Protokole o životinjama odobrio je Institucionalni komitet za negu i upotrebu životinja (IACUC) na Univerzitetu Complutense u Madridu i u potpunosti su u skladu sa Evropskom direktivom 2010/63/o zaštiti životinja koje se koriste u naučne svrhe i španskim zakonodavstvom o dobrobiti životinja ( Kraljevski dekret 53/2013, 1. februar 2013.).

Izjava o informiranom pristanku:Nije primjenjivo.

Izjava o dostupnosti podataka:Podaci koji podržavaju nalaze ove studije dostupni su od odgovarajućeg autora na razuman zahtjev.

Priznanja:Zahvaljujemo Fondaciji Folch na preddoktorskom grantu KLJA.

Sukobi interesa:Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Skraćenice

AD, Alchajmerova bolest; ADAM-10, A protein koji sadrži disintegrin i metaloproteinazu 10; APP, Amiloidni prekursorski protein; APPswe, švedska mutacija amiloidnog prekursora proteina; A, amiloid-; BACE1, -mesto APP cijepajućeg enzima 1; CAT, Catalase; GPx, glutation peroksidaza; GR, Glutation reduktaza; GSH, redukovani glutation; GSSG, Oksidirani glutation; SOD, superoksid dismutaza.

Reference

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; van den Bosch, KA; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Prins, ND; Barkhof, F.; et al. Povezanost markera likvora, plazme i slike neurodegeneracije sa kliničkom progresijom kod ljudi sa subjektivnim kognitivnim padom. Neurology 2022, 98, e1315–e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Dominguez, LJ; Veronese, N.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Salemi, G.; Barbagallo, M. Ishrana, fizička aktivnost i drugi faktori načina života u prevenciji kognitivnog pada i demencije. Nutrients 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Tsarbopoulos, A. Alchajmerova bolest: Istraživanje prirodnog 'liječničkog sanduka' za nove terapeutske agense. Biomol. Koncepti 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Ashe, KH; Zahs, KR Ispitivanje biologije Alchajmerove bolesti kod miševa. Neuron 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Zahs, KR; Ashe, KH 'Previše dobrih vijesti'—Da li Alchajmerovi mišji modeli pokušavaju da nam kažu kako da spriječimo, a ne izliječimo Alchajmerovu bolest? Trends Neurosci. 2010, 33, 381–389. [CrossRef]

6. Foley, AM; Ammar, ZM; Lee, RH; Mitchell, CS Sistematski pregled odnosa između nivoa amiloida i mjera kognitivnog deficita transgenih miševa kod Alchajmerove bolesti. J. Alchajmerova bolest. 2015, 44, 787–795. [CrossRef]

7. Anand David, A.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Pregledi biološke važnosti kvercetina: bioaktivni flavonoid. Pharm. Rev. 2016, 10, 84–89.

8. Habtemariam, S. Rutin kao prirodna terapija za Alchajmerovu bolest: uvid u njene mehanizme djelovanja. Curr. Med. Chem. 2016, 23, 860–873. [CrossRef]

9. Martín-Aragón, S.; Jiménez-Aliaga, K.; Benedí, J.; Bermejo-Bescós, P. Neurohormetički odgovori kvercetina i rutina u ćelijskoj liniji koja prekomjerno eksprimira amiloidni prekursorski protein (APPswe ćelije). Fitomedicina 2016, 23, 1285–1294. [CrossRef]

10. Zhou, W.; Qing, H.; Tong, Y.; Song, ekspresija gena W. BACE1 i degradacija proteina. Ann. NY Acad. Sci. 2004, 1035, 49–67. [CrossRef]

11. Gutbier, S.; Spreng, AS; Delp, J.; Schildknecht, S.; Karreman, C.; Suciu, I.; Brunner, T.; Groettrup, M.; Leist, M. Prevencija neuronske apoptoze od strane astrocita kroz modulaciju odgovora na stres posredovanu tiolom i ubrzani oporavak od proteotoksičnog stresa. Cell Death Differ. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Aoyama, K. Glutation u mozgu. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Scholey, A. Nutrienti za neurokogniciju u zdravlju i bolesti: mjere, metodologije i mehanizmi. Proc. Nutr. Soc. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Apelt, J.; Bigl, M.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Povećanje oksidativnog stresa povezano sa starenjem korelira s razvojnim obrascem aktivnosti beta-sekretaze i formiranja beta-amiloidnog plaka kod transgenih Tg2576 miševa sa patologijom sličnom Alchajmeru. Int. J. Dev. Neurosci. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Howlett, DR; Richardson, JC Patologija APP transgenih miševa: model Alchajmerove bolesti ili jednostavno prekomjerna ekspresija APP? Histol. Histopathol. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Cencioni, C.; Spallotta, F.; Martelli, F.; Valente, S.; Mai, A.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Oksidativni stres i epigenetska regulacija kod starenja i bolesti povezanih sa starenjem. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 17643–17663. [CrossRef]

17. Tsang, AH; Chung, KK Oksidativni i nitrozativni stres kod Parkinsonove bolesti. Biochim. Biophys. Acta 2009, 1792, 643–650. [CrossRef]

18. Mandal, PK; Saharan, S.; Tripathi, M.; Murari, G. Nivoi glutationa u mozgu—novi biomarker za blago kognitivno oštećenje i Alchajmerovu bolest. Biol. Psihijatrija 2015, 78, 702–710. [CrossRef]

19. Chen, JJ; Thiyagarajah, M.; Song, J.; Chen, C.; Herrmann, N.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Crna, SE; Ramirez, J.; Andreazza, AC; et al. Izmijenjeni centralni i krvni glutation kod Alchajmerove bolesti i blagog kognitivnog oštećenja: meta-analiza. Alchajmerova rez. Ther. 2022, 14, 23. [CrossRef]

20. Pocernich, CB; Butterfield, DA Povišenje glutationa kao terapijska strategija kod Alchajmerove bolesti. Biochim. Biophys. Acta (BBA)-Mol. Basis Dis. 2012, 1822, 625–630. [CrossRef]

21. Raza, A.; Xie, W.; Kim, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Vince, R.; Nadalje, SS dipeptid ψ-GSH inhibira oksidativni stres i neuroinflamaciju u mišjem modelu s Alchajmerovom bolešću. Antioksidansi 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, H.; Xie, Z.; Wei, L.; Ding, M.; Wang, P.; Bi, J. Glutation-mimetic D609 ublažava nedostatak memorije i smanjuje taloženje amiloida u A PP/PS1 transgenom modelu miša. Neuroreport 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Guerrero-Gómez, D.; Mora-Lorca, JA; Sáenz-Narciso, B.; Naranjo-Galindo, FJ; Muñoz-Lobato, F.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, Á.; Link, CD; Neri, C.; et al. Gubitak redoks homeostaze glutationa narušava proteostazu inhibirajući degradaciju proteina zavisnu od autofagije. Cell Death Differ. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Lefaki, M.; Papaevgeniou, N.; Chondrogianni, N. Redox regulacija funkcije proteasoma. Redox Biol. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Bonet-Costa, V.; Pomatto, LC; Davies, KJ Proteasomski i oksidativni stres kod Alchajmerove bolesti. Antioksid. Redox Signal. 2016, 25, 886–901. [CrossRef]

26. Belkacemi, A.; Ramassamy, C. Vremenski slijed oksidativnog stresa u mozgu iz transgenih mišjih modela Alchajmerove bolesti povezanih s amiloidnom kaskadom. Slobodni Radic. Biol. Med. 2012, 52, 593–600. [CrossRef]

27. Tanigawa, S.; Fujii, M.; Hou, DX Akcija Nrf2 i Keap1 u ARE-posredovanoj NQO1 ekspresiji kvercetinom. Slobodni Radic. Biol. Med. 2007, 42, 1690–1703. [CrossRef]

28. Chondrogianni, N.; Kapeta, S.; Chinou, I.; Vassilatou, K.; Papassideri, I.; Gonos, ES Anti-ageing i podmlađujući efekti kvercetina. Exp. Gerontol. 2010, 45, 763–771. [CrossRef]

29. Bodendorf, U.; Danner, S.; Fischer, F.; Stefani, M.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Ekspresija ljudske beta-sekretaze u mozgu miša povećava stabilan nivo beta-amiloida. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [CrossRef]

30. Yamakawa, H.; Yagishita, S.; Futai, E.; Ishiura, Potencija inhibitora beta-sekretaze S. je smanjena aberantnom lokacijom beta-cijepanja "švedskog mutantnog" amiloidnog prekursorskog proteina. J. Biol. Chem. 2010, 285, 1634–1642. [CrossRef]

31. Keller, D.; Erö, C.; Markram, H. Gustoće ćelija u mozgu miša: Sistematski pregled. Front. Neuroanat. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Mladenović Đorđević, AN; Kapetanou, M.; Lončarević-Vasiljković, N.; Todorović, S.; Athanasopoulou, S.; Jović, M.; Prvulović, M.; Taoufik, E.; Matsas, R.; Kanazir, S.; et al. Farmakološka intervencija na modelu transgenog miša poboljšava patološki fenotip povezan s Alchajmerom: Uključivanje aktivacije proteasoma. Slobodni Radic. Biol. Med. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Tamagno, E.; Bardini, P.; Guglielmotto, M.; Danni, O.; Tabaton, M. Različita stanja agregacije beta-amiloida 1-42 posreduju različitim efektima na oksidativni stres, neurodegeneraciju i ekspresiju BACE-1. Slobodni Radic. Biol. Med. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Jorissen, E.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Schwanbeck, R.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Thathiah, A.; Tesseur, I.; et al. Dezintegrin/metaloproteinaza ADAM10 je neophodna za uspostavljanje moždane kore. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [CrossRef]

35. Kuhn, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Colombo, A.; Zeitschel, U.; Ellwart, JW; Kremmer, E.; Roßner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 je fiziološki relevantna, konstitutivna sekretaza amiloidnog prekursora proteina u primarnim neuronima. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [CrossRef]

37. Postina, R.; Schroeder, A.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Schmitt, U.; Kojro, E.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Blessing, M.; et al. Dezintegrin-metaloproteinaza sprečava stvaranje amiloidnog plaka i defekte hipokampusa u mišjem modelu Alchajmerove bolesti. J. Clin. Investig. 2004, 113, 1456–1464. [CrossRef]

37. Elfiky, AM; Mahmoud, AA; Elreedy, HA; Ibrahim, KS; Ghazy, MA Kvercetin stimuliše ne-amiloidogeni put putem aktivacije ekspresije gena ADAM10 i ADAM17 u modelu pacova Alchajmerove bolesti izazvane aluminijum hloridom. Life Sci. 2021, 285, 119964. [CrossRef]

38. Copanaki, E.; Chang, S.; Vlachos, A.; Tschäpe, JA; Müller, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha antagonizira dendritsku degeneraciju i smrt neurona izazvanu proteasomskim stresom. Mol. Cell Neurosci. 2010, 44, 386–393. [CrossRef]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Kundu, A.; Kins, S.; Kogel, D.; Behl, C.; Hajieva, P. Produkt cijepanja prekursora amiloid-beta proteina sAbetaPPalpha modulira formiranje agresoma ovisno o BAG3- i pojačava ćelijsku proteazomalnu aktivnost. J. Alchajmerova bolest. 2015, 44, 879–896. [CrossRef]

40. Livingstone, RW; Elder, MK; Singh, A.; Westlake, CM; Tate, WP; Abraham, WC; Williams, JM izlučeni amiloidni prekursor protein-alfa pojačava LTP kroz sintezu i promet Ca2 plus -permeabilnih AMPA receptora. Front. Mol. Neurosci. 2021, 14, 660208. [CrossRef]

41. Crawford, HC; Dempsey, PJ; Brown, G.; Adam, L.; Moss, ML ADAM10 kao terapeutska meta za rak i upalu. Curr. Pharm. Des. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Saftig, P.; Lichtenthaler, SF Alfa sekretaza ADAM10: metaloproteaza s višestrukim funkcijama u mozgu. Prog. Neurobiol. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Borreca, A.; Gironi, K.; Amadoro, G.; Ammassari-Teule, M. Suprotna disregulacija fragile-X proteina mentalne retardacije i heteronuklearnog ribonukleoproteina C proteina povezani s poboljšanom translacijom APP u Alchajmerovoj bolesti. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Augustin, S.; Rimbach, G.; Augustin, K.; Schliebs, R.; Wolffram, S.; Čermak, R. Učinak kratkotrajnog i dugotrajnog tretmana ekstraktom Ginkgo bilobe na nivoe proteina prekursora amiloida u modelu transgenog miša relevantnog za Alchajmerovu bolest. Arch. Biochem. Biophys. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Borreca, A.; Valeri, F.; De Luca, M.; Ernst, L.; Russo, A.; Nobili, A.; Cordella, A.; Corsetti, V.; Amadoro, G.; Mercuri, NB; et al. Prolazna regulacija translacijske efikasnosti kod prodromalnih i ranih simptomatskih Tg2576 miševa doprinosi A patologiji. Neurobiol. Dis. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​D'Amelio, M.; Sheng, M.; Cecconi, F. Kaspaza-3 u centralnom nervnom sistemu: izvan apoptoze. Trends Neurosci. 2012, 35, 700–709. [CrossRef]

47. Ertürk, A.; Wang, Y.; Sheng, M. Lokalno obrezivanje dendrita i bodlji pomoću mehanizama zavisnih od kaspaze-3-i proteazom-ograničenih mehanizama. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [CrossRef]

48. D'Amelio, M.; Cavallucci, V.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni, S.; Ferri, A.; Diamantini, A.; De Zio, D.; Carrara, P.; Battistini, L.; et al. Kaspaza-3 izaziva ranu sinaptičku disfunkciju na mišjem modelu Alchajmerove bolesti. Nat. Neurosci. 2011, 14, 69–76. [CrossRef]

50. Gervais, FG; Xu, D.; Robertson, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Smith, D.; Rigby, M.; Shearman, MS; et al. Učešće kaspaza u proteolitičkom cijepanju Alchajmerovog amiloid-beta prekursorskog proteina i formiranju amiloidogenog A beta peptida. Cell 1999, 97, 395–406. [CrossRef]

50. Park, G.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Navarro, M.; Koo, Aktivacija EH kaspaze i cijepanje APP posredovano kaspazom povezano je s gubitkom sinapse izazvanim amiloidom proteinom kod Alchajmerove bolesti. Cell Rep. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Lu, DC; Rabizadeh, S.; Chandra, S.; Shayya, RF; Ellerby, LM; Ye, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Drugi citotoksični proteolitički peptid izveden iz amiloidnog beta-proteina prekursora. Nat. Med. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 kao nova rana meta u liječenju Alchajmerove bolesti. EUR. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [CrossRef]

53. Albrecht, S.; Bogdanović, N.; Ghetti, B.; Winblad, B.; LeBlanc, AC aktivacija kaspaze-6 u mozgu porodične Alchajmerove bolesti koji nosi amiloidni prekursor proteina ili presenilin I ili presenilin II mutacije. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Morihara, T.; Teter, B.; Yang, F.; Lim, GP; Boudinot, S.; Boudinot, FD; Frautschy, SA; Cole, GM Ibuprofen potiskuje interleukin-1beta indukciju pro-amiloidogenog alfa1-antihimotripsina kako bi se poboljšala beta-amiloidna (Abeta) patologija u Alchajmerovim modelima. Neuropsychopharmacology 2005, 30, 1111–1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Niu, YL; Zhang, WJ; Wu, P.; Liu, B.; Sunce, GT; Yu, DM; Deng, JB Ekspresija proteina kaspaze-3 i NF-kappaB vezanih za apoptozu u hipokampusu Tg2576 miševa. Neurosci. Bik. 2010, 26, 37–46. [CrossRef]

56. Fuller, S.; Steele, M.; Munch, G. Aktivirana astroglija tokom hronične upale kod Alchajmerove bolesti – da li zanemaruju svoju neuro potpornu ulogu? Mutat. Res. 2010, 690, 40–49. [CrossRef]

57. Lee, M.; Cho, T.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL Smanjenje GSH u glijalnim ćelijama izaziva neurotoksičnost: Relevantnost za starenje i degenerativne neurološke bolesti. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [CrossRef]

58. Hensley, K. Neuroinflamacija u Alchajmerovoj bolesti: Mehanizmi, patološke posljedice i potencijal za terapijsku manipulaciju. J. Alchajmerova bolest. 2010, 21, 1–14. [CrossRef]

59. Lu, J.; Wu, DM; Zheng, YL; Hu, B.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Quercetin aktivira protein kinazu aktiviranu AMP smanjujući ekspresiju PP2C štiteći stari mišji mozak od neurotoksičnosti uzrokovane visokim holesterolom. J. Pathol. 2010, 222, 199–212. [CrossRef]

60. Chen, JC; Ho, FM; Chao, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Lee, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW Inhibicija ekspresije iNOS gena pomoću kvercetina je posredovana inhibicijom IkappaB kinaze, nuklearnog faktora-kappa B i STAT1, i zavisi od indukcije hem oksigenaze-1 u BV-2 mikroglije miša. EUR. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [CrossRef]

61. Dwivedi, D.; Megha, K.; Mishra, R.; Mandal, PK Glutation u mozgu: Pregled njegovih konformacija, funkcija, biohemijskih karakteristika, kvantitacije i potencijalne terapeutske uloge u poremećajima mozga. Neurochem. Res. 2020, 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Rossner, S.; Sastre, M.; Bourne, K.; Lichtenthaler, SF Transkripcijska i translacijska regulacija ekspresije BACE1 – implikacije za Alchajmerovu bolest. Prog. Neurobiol. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Westerman, MA; Cooper-Blacketer, D.; Mariash, A.; Kotilinek, L.; Kawarabayashi, T.; Younkin, LH; Carlson, GA; Younkin, SG; Ashe, KH Odnos između Abete i pamćenja u Tg2576 mišjem modelu Alchajmerove bolesti. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

65. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, BT ekspresija mRNA enzima cijepajućeg enzima na beta mjestu kod APP transgenih miševa: Anatomsko preklapanje sa ekspresijom transgena i statički nivoi sa starenjem. Am. J. Pathol. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Hsiao, K.; Chapman, P.; Nilsen, S.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Younkin, S.; Yang, F.; Cole, G. Korelativni deficiti memorije, elevacija Abeta i amiloidni plakovi kod transgenih miševa. Science 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Transgeni miševi koji eksprimiraju Alchajmerove amiloidne prekursorske proteine. Exp. Gerontol. 1998, 33, 883–889. [CrossRef]

68. Simon, AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Cuadrado-Tejedor, M.; Escribano, L.; López de Maturana, R.; Del Río, J.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Prekomjerna ekspresija divljeg tipa humanog APP kod miševa uzrokuje kognitivne deficite i patološke karakteristike koje nisu povezane sa nivoima Abeta. Neurobiol. Dis. 2009, 33, 369–378. [CrossRef]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Određivanje glutationa i glutation disulfida pomoću fluorescentne sonde oftalaldehida. Anal. Biochem. 2000, 280, 80–86. [CrossRef]

69. Marklund, S.; Marklund, G. Učešće superoksidnog anjonskog radikala u autooksidaciji pirogalola i pogodan test za superoksid dismutazu. EUR. J. Biochem. 1974, 47, 469–474. [CrossRef]

70. Aebi, H. Catalase in vitro. Metode Enzymol. 1984, 105, 121–126.

71. Barja de Quiroga, G.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Antioksidativna odbrana i peroksidacija u jetri i mozgu starijih pacova. Biochem. J. 1990, 272, 247–250. [CrossRef] [PubMed]

72. Massey, V.; Williams, CH, Jr. O mehanizmu reakcije glutation reduktaze kvasca. J. Biol. Chem. 1965, 240, 4470–4480. [CrossRef]

73. Jash, K.; Gondaliya, P.; Sunkaria, A.; Kalia, K. MicroRNA-29b modulira aktivnost sekretaze u ćelijskoj liniji SH-SY5Y i mozgu dijabetičkog miša. Cell Mol. Neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Jimenez-Aliaga, K.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Kvercetin i rutin pokazuju antiamiloidogeni i fibrilni dezagregirajući efekti in vitro i snažno antioksidativno djelovanje u APPswe ćelijama. Life Sci. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Ramos, CA; Bowman, TA; Boles, NC; Merchant, AA; Zheng, Y.; Parra, I.; Fuqua, SA; Shaw, CA; Goodell, MA Dokazi za raznolikost u transkripcijskim profilima pojedinačnih hematopoetskih matičnih ćelija. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Stowers, CC; Scallet, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C rezultira ultravisokom rezolucijom i kontrastnim označavanjem degenerirajućih neurona. Brain Res. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Odricanje od odgovornosti/Napomena izdavača:Izjave, mišljenja i podaci sadržani u svim publikacijama su isključivo oni pojedinačnih autora i saradnika, a ne MDPI i/ili urednika. MDPI i/ili urednik(i) odriču se odgovornosti za bilo kakvu povredu ljudi ili imovine koja je rezultat ideja, metoda, uputstava ili proizvoda navedenih u sadržaju.

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】