Hlapljivi konstituenti Cistanche Tubulosa i njihovi antioksidansi i antimikrobni potencijali

Kontakt: Tinatina.xiang@wecistanche.com

Arafa Musa 1.2*, Khaled F.El-Massry3.4, Ahmed H.ElL-Ghorab34, Amr

Farouk◎4,Hazim M.Ali3, Mohamed A Abdelgawad(5)5.6,

Ibrahim A.Naguib◎7 i Ehab M. Mostafa◎1,2

Odjel za farmakognoziju, Koledž apoteke, Univerzitet Jouf, Sakaka, Aljouf72341, saudijski arapski

Odjel za farmakognoziju, Farmaceutski fakultet, Al-Azhar Univerzitet, Kairo,1137I, Odsjek za kemiju Egipta, Koledž za nauku, Univerzitet Jouf, Sakaka, Aljouf 72341, Saudijska Arabija 'Odjel za okus i aromu, Nacionalni istraživački centar, Dokki, Giza, Egipat

Odjel za farmaceutsku hemiju, Koledž ljekarne, Univerzitet Jouf, Sakaka, Aljouf 72341, Saudijska Arabija

Odsjek za farmaceutsku organsku hemiju, Farmaceutski fakultet, Univerzitet Beni-Suef, Beni-Surf 62514, Egipat

'Department of Pharmaceutical Chemistry, College of Pharmacy, Taif University, P.O.Box 11099, Taif 21944, Saudijska Arabija

(Primljeno 02.11.2020; Revidirano 13.12.2020; Prihvaćeno 19.12.2020)

Apstraktno: Hidrodistilnih hlapovanih sastojakaCistanche tubulosa(obično poznat kao Desert Ginseng)su hemijski i biološki istražene. Na osnovu vremena retencije i masovne fragmentacije dobijenog GC-MS hromatograma, identificirano je 106 pojedinačnih komponenti koje predstavljaju ≈ 99,29 % od ukupno nestabilnih sastojaka. Glavni spojevi (66,57% ukupnog sastava) identificirani su kao heksanalni (15,98%), trans-sabinilacetat (12,22%), aloaromadendren (9,30%),nonanojska kiselina (6,22%). 66%),3Z-hekseny-2-metil butanoat (6,09%), valeranone (5,25%),(E,E)-α-Farnesene (3,18%),α-pinen (3,06%), linalool izovalerat (3,03%) i α-humulene (1,8%). Procjenaantioksidantna aktivnostod EO je pokazao obećavajući efekat pri koncentraciji od 80 μg/mL, on je u odnosu na TBHO pokazao 62,40,863,29 i 62,72 % inhibicije u odnosu na TBHO koja je pokazala 78,62. 77,56 i 79,23 % inhibicije koristeći DPPH, ABTS, odnosno β-karotenu/linolejsku kiselinu. Uantioksidantna aktivnostje izgovarana pri 80 ug/mL od drugih koncentracija. Hlapljeni sastavnici su pokazali inhibitornu aktivnost protiv gram-pozitivnih bakterija u rasponu od 2,23 mg/100 mL (za stafilokok aureus ), i 15,68 mg/100 mL (za Bacillus cereus)u odnosu na ciprofloksacin koji je pokazao inhibitornu aktivnost 0,185, odnosno 0,182 mg/100 mL. Štoviše, MIC hlapljivaca prema gram-negativnim bakterijama kreće se od 18,35(Escherichia coli) do 31,61 mg/100 mL(Klebsiella pneumonija) u odnosu na ciprofloksacin sa 0,184 do 0,188 mg/mL. Osim toga, antifungalna aktivnost protiv candida Albicans je bila prilično obećavajuća (4,36 mg/mL).

Ključne riječi: Cistanche tubulosa; nepostojani birači; antioksidans; antimikrobno; Orobanchaceae.,

1. Uvod

Cistanche tubulosa, porodica Orobanchaceae, je višegodišnja parazitska biljka, raste u sušnim područjima Azije i Afrike, otkrivena je u Kini, Indiji, Japanu, Saudijskoj Arabiji (pustinja Sakaka, Aljouf, KSA)[1]. Posjeduje različita uobičajena imena u kineskoj medicini kao Desert Hyacinth, Desert ginseng, i Rou Cong Rong, petelja je sočan i mesnati sa visokim sadržajem vode [1-6]. Cistanche je upoznat sa nestabilnim i nehlapavim sastojaka koji mogu uključivati lignane, fenilethanoidne glikoze, oligo- i polisaharide, alkaloide i iridoide. Zbog velike raznolikosti fitokemijskih sadržaja i bioloških aktivnosti, Cistanche je stekao visoku ljekovitu vrijednost u kineskim narodnim i tradicionalnim lijekovima. Prema tome, korišten je kao afrodizijak u slučaju impotencije i neplodnosti, laksativ u senilnom zatvoru, i otkriveno je da ima neuroprotektivne efekte, posebno u slučaju Alchajmera. Parkinsonova i depresija, anti-starenje, antineoplastika, agregacija antiplateta, antifungalna i antibakterijska, hepatoprotektivna, imunostimulantna,antioksidans, podrška bubrega, i antitumor u colorectal ezogealnom karcinomu [1, 7-13]. Također se koristi u liječenju psihoalgije koljena i leđa, poboljšanju imuniteta i kognitivnih aktivnosti i kao antidepresiv [14-17]. Pronađeno je da ima hipoholesterolemski efekat kao što su prijavili Shimoda et al [18]. Istraživanje literature proglasilo je sigurnu upotrebu Cistanchea kao ne-otrovne biljke na duge staze [19]. Iako je C.tubulosa bila renomirana visokim ljekovitim vrijednostima, posebno u kineskoj tradicionalnoj medicini, od kojih su nestabilni sastavi malo proučavani, a njihove hemijske kompozicije nisu u potpunosti okarakterizirane. Prethodna istraga je otkrila karakterizaciju 38 komponenti iz C. Esencijalno ulje salse, 25 spoja iz C. deserticola ulja, sa tri glavne komponente poznate kao metil 14-metil pentadekanoat (13,60%)etil palmitat (12,40%), i 2,5,6-trimetiloletan (7,61%). Istraživanje je također otkrilo identifikaciju 21 spoja samo iz nestabilnog ulja C, tubulosa [1.20-22]. Nadalje, biološka aktivnost nestabilnih sastojaka nije u potpunosti istražena. Dakle, naš cilj je da identifikujemo hemijske sastave nestabilnih sastojaka C.tubulosa cveća i procenimo njihoveantioksidansiantimikrobniAktivnosti.

2. Materijali i metode

2.1.Biljni materijal

Cistanche tubulosa(Schenk) Kuka. f.(Orobanchaceae)je prikupljena u martu 2019. godine iz pustinje Sakaka, Aljouf, KSA. Identifikaciju postrojenja napravio je g. Hamdan Al-Hassan, M.Sc. (Centar za istraživanje kamila i raspona), Aljouf, KSA. Primjerak vaučera (59-CPJU) je arhiviran u herbarijumu Odjela za farmakognoziju, Farmaceutskog koledža, Univerziteta Jouf.

2.2. Vađenje nepostojanih konstituenta

Cvjetovi C.tubulosa su prikupljeni u martu 2019. godine, pažljivo oprani tekućom vodom, a hlapljivi konstituenti su ekstrahirali standardnom metodom hidro-destilacije s Clevengerovom aparaturom. Svježi cvjetovi od 500 g su izrezani na male komadiće i podvrgnuti hidro-destilaciji 5 sati dok više nije proizveden prinos. destilati su bili odvojeni od vodne faze odvajajućim lijenom volumena 500 mL . NaCl je iskoriљtena za izbacivanje ostataka nestabilnih sastojaka iz voиnog sloja mehanizmom za slanje. Voćna faza je bila potresena nekoliko puta sa CHC-om kako bi se dobili svi destilati. Kombinovani ekstrakti su zatim filtrirani kroz Whatman filter papir (no.40) nakon što su prosleđeni preko bezazlenog Na2SO- a, radi dehidacije. Proizvod je izračunat kao 0,36 % ukupno nepostojanja. Dobiveni birači su bili blije žuta tekućina ugodnog mirisa. Bio je pakiran u suho čistu i čvrsto zatvorenu neprozirnu bocu i držao se u mraku na 4°C za analizu.

2.3.Gasna hromatografija i gasna hromatografija-Masena spektrometrija (GC-MS)

Model 6890 agilentnog plinskog kromatografa isporučenog sa 120 m ×0,25 mm i.d.(df=0.25 um)zacementiranom fazom HP-5MS zaglavljenim silicijskim kapilarnim stupom(Agilent, Folsom, CA) i detektorom ionizacije plamena (FID)je primijenjen za hlapljivu analizu ekstrakta. Temperatura pećnice je bila podešena od 60 do 240°CC na 3°CC/min.i čuvana 50 min. Plin nosača linearnog omjera dohvaćanja helija bio je 20 cm/sek. Temperatura ubrizgavača i detektora je bila 250°C.

Nestabilne sastavnice analizirao je Agilent Technologies model 7890B GC interfejsiran na Agilent 7000D GC/TQ detektor mase (GC/MS), i Agilent 7693A autosampler. Ionizacija na 70 eV, STUB HP-5MS(120m x0,25 mm i.d). Cijeli proces je sproveden na 30 cm/s konstantnim brzinama pokretne faze (He) i stalnom temperaturom na 250°CC i za ubrizgavač i detektor. Temperatura pećnice je programirana od 60 do 240 °C pri 3 °C/min i zadušena 50 min.

Istovremeno ubrizgavanje uzorka s otopinom homolognih n-ugljikovodika (Cg-C26)serije pod istim uvjetima je izvedeno kako bi se utvrdile vrijednosti Kovatsova indica. Identifikacija izoliranih hlapa je urađena poklapajući se sa podacima niSTmass-spektralne biblioteke, poređenjem Kovatsova indicija sa onima autentičnih komponenti, i sa objavljenim podacima. Kvantitativno određivanje je izvršeno prema vršnim integracijama područja.

2.4.Antioksidantna aktivnost

2.4.1. DPPH Radikalni Scavenging Assay

Potencijalantioksidantna aktivnostod dobivenih hlapnih sastojaka je evaluiran standardnom DPPH metodom, tert-butil hidrokinon (TBHQ) je primijenjen kao standardni antioksidativan lijek. Mjerenje apsorpcije obavljeno je na λmax 517 nm na UV-spektrofotometru (HP 8452, UV-VIS), sva ispitivanja su obavljena u triplikatima i prosjek rezultata je izračunat [23, 24].

2.4.2. β-Carotene Izbjeljivač Assay

Standardna metoda β-karotenske/linoleinske kiseline primijenjena je za određivanje antioksidativne aktivnosti C. tubulosa hlapnih sastojaka kao što je prethodno opisano, u odnosu na standardni antioksidant tert-butil hidrokinon(TBHQ). Svi testovi su izmjereni u triplikatima pri λmax470 nm preko 60 minuta počevši od O minute, a prosjek rezultata je izračunat [23,24].

2.4.3.ABTS Slobodan Radikalni Assay

ABTS [2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonska kiselina), primijenjen je za antioksidacijsko određivanje C. Tubulosa hlapljivi sastavi kao što je opisano u literaturi [25], u poređenju sa standardnim antioksidantom tert-butil hidrokinon (TBHQ). Svi testovi su izmjereni u triplikatima pri λax734 nm preko 60 minuta počevši od 0 minuta, a prosjek rezultata je izračunat [26]. Sljedeća jednadžba je primijenjena za izračunavanje efekta slobodnog radikalnog skalvenginga u svim metodama % inhibicije = A (kontrola)-A (test ili standard)/ A (kontrola)× 100, Where, A = Absorbance

2.5. Antimikrobni assay

2.5.1. Priprema mikrobnih suspenzija

Devet sova patogenih mikroorganizama koji se smatraju glavnim izvorom nekoliko bolesti i opijenost hranom odabrani su zaantimikrobniaureus, B. cereus E. fecalis, i L. monocytogenes su bili zaposleni kao G+ve bakterije, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumonija, i Salmonella Typhimurium kao G-ve bakterije. Osim toga, C.albicanci su bili zaposleni kao gljivična naprezanja. Metoda kvantitativne minimalne inhibitorivne koncentracije (MIC) primijenjena je zaantimikrobniprocjena nestabilnih sastojaka C. tubulosa. Bakterijske i gljivične suspenzije su pripremljene u pogodan

broth media for each (Muller Hinton Sabaroud Dextrose for bacteria and gljivice, respectively). Inkubacija svakog soja sa odgovarajućim medijima je urađena za 24 h na 37°CC za bakterije i 28°C za gljivice. Nakon perioda inkubacije i serijskih razlučivanja pripremljenih suspenzija, odabrana su određena razlučivanja prema 0,5 Mc-Farlandscale standardima za atentat. Standardni ciprofloksacin i flukonazol su pripremljeni u 100μg/mL i primijenjeni kao antimikrobni i antimikrobni lijekovi, odnosno [28-30].

2.5.2.Metoda minimalne inhibitoriske koncentracije (MIC)

Primijenjena je kvantitativna metoda mikrotiterske ploče razrjeđivanja, gdje je primijenjena metoda minimalne inhibicione koncentracije (MIC)za procjenu antimikrobne aktivnosti C. tubulosa hlapnih konstituenta, protiv određenih mikroorganizama kao što je spomenuto. Korišten je sterilni izvor 96 mikro ploča, gdje je 100μL odgovarajućih mikroorganizama u koncentracijama (0,5 Mc-Farland, oko 1×108cfu/mL)odvojeno pomiješano sa dobivenim destilatom u različitim koncentracijama(100 %, a nakon toga su slijedila dvokratna serijska razrijeđenja). Ciprofloksacin i flukonazol su primijenjeni kao pozitivni antibakterijski, odnosno antimikoloski standardi, dok je DMSO primijenjen kao negativna kontrola. Mikroplata sa miješanim sadržajem u svakom zlionu inkubirao se 24 h na ≈37 °CC za bakterije i 28°C za gljivice. Tablice su tada vizualizirane za bilo kakve padavine rasta testiranih organizama. Svi eksperimenti su sprovedeni u triplikatima i MIC je izračunat kao najniža koncentracija koja je inhibirala ili omela rast testiranih mikroorganizama [27].

3. Rezultati i diskusija

3.1.Analiza nepostojanih konstituenta

U našoj studiji hidrodistilacija C. tubulosa cvijeća proizvela je 0,36 % bledožute destilat, sa

aromatičan miris mirisa i 106 nestabilnih komponenti(tabela 1)koja predstavlja 99,29 % nestabilnog sadržaja. Ove komponente su kategorizirane kao 5 monoterpena, 15 seskviterpena, 62 svjetlosna oksigenirana spoja koji predstavljaju najveće grupe spojeve, i 24 teška oksigenirana spoja. Glavne komponente nestabilnih sastojaka identificirane su kao heksanalne (15,98%), Trans-sabinil acetat (12,22%), aloaromadendren (9,30%), nonanojska kiselina (6,66%),3Z- heksenil-2-metil butanoat (6,09%), valeranone (5,25%),(E,E)-α-Farnesene (3,18%o), α-pinen(3,06%),linalool izovalerat (3,03%),α-humulene (1,8%),, Jasminol (1,58%), 4-hidroksi benzaldehid (1,56%), Geosmin (1,44%), 3Z-heksenil izobutanoat (1,39%), i geranil aceton (1,38%). Ali u prethodnim studijama literature rezultati, koje su objavili Jiang i Tu 2009, U esencijalnom ulju C. tubulosa utvrđena je samo 21 hlapna komponenta, od 38 komponenti je okarakterisano i iz esencijalnog ulja C. salse, dok je iz ulja C. deserticola identifikovano 25 spoja, sa tri glavne komponente (metil 14-metil pentadekanoat;13,60%, etil palmitat;12,40%, i 2,5,6-trimetilloletana;7,61%)[22,28]. Identifikacija izoliranih hlapljivaca urađena je providentalno podudarajući se sa podacima nist masovno-spektralne biblioteke, što je dodatno potvrđeno usporedbom Kovatsova indikata s onima autentičnih komponenti kao i sa objavljenim podacima [29-31]. Nađeno je da izračunati KI identificiranih spoja spada u ki raspon onih objavljenih u literaturi. Na primjer, Izračunati i objavljeni KI za trans sabinil acetat (1287& 1273-1289),aromadendrene (1444& 1430-1450),valeranone (1678,1668-1679),alo-aromadendrene(1459& 1458-1470), α-Farnesene (1508& 1505-1520), heksenil-2-metil butanoat (1230& 1210-1231),α -humulene(1455& 1452-1570),α-pinen (971& 933-982)[32-36]. Prema pomenutim vrijednostima KI, identificirani spojovi su bili u skladu s onima iz literature [37-40].

3.2.Rezultati antioksidantnog testa

DPPH, ABTS, i β-karotenski testovi su primijenjeni za istraživanje antioksidantne aktivnosti C. tubulosa hlapnih sastojaka, rezultati su izlagali pouzdanu antioksidativnu aktivnost testiranih hlapljivaca (Tabela 2). Trenutna studija je ukazala da se sposobnost raspršivanja C. tubulosa hlapljivih sastojaka u različitim koncentracijama(ug/mL) u rasponu od 26,08 % do 62,40 % za DPPH test, dok je od 25,71 do 63,29% i 27,31 do 62,72% na(20-80)μg/mL za sisteme testiranja ABTS i β-karotena, odnosno, U odnosu na standardni TBHQ antioksidatni lijek, koji je pokazao 43,15 do 78,62%, 41,32 do 77,56% i 42,21 do 79,23% na (20-80)ug/mL za DPPH, ABTS odnosno β-karotene. Obećavajuća antioksidantna aktivnost može se pripisati prisutnosti visoko aktivne kompleksne smjese u destilat kao aloaromadendren (9,3%), valeranone (5,25%),(E, E)-α-Farnesene (3,18%), i α-pinen (3,06%) koji su trebali imati izgovaran utjecaj na antioksidacijsku aktivnost. Prema istraživanju literature, ciljna biološka aktivnost nestabilnih sastojaka može se pripisati postojeća mješavina terpenoidnih i fenoličkih komponenti, za koje je poznato da imaju antimikrobne i antioksidativne aktivnosti i mogu poboljšati ili sinergiju ciljnih aktivnosti [32].

3.3. Rezultati antimikrobne assay

Metoda MIC(minimalna inhibiciona koncentracija)primijenjena je za ispitivanje antimikrobne aktivnosti nestabilnih sastojaka C. tubulosa protiv devet patogenih mikroorganizama životinjskog porijekla. Destilat je izlagao snažnu aktivnost protiv S. aureus sa MIC 2,23 mg/100mL i umjerenim efektom protiv C. Albicans (MIC=4,36 mg/100mL), tablica 3.

4. Zaključak

Hlapne komponente C. tubulosa ili obično poznate kao Desert Ginseng su uglavnom sačinjene od heksanala (15,98%), Trans-sabinil acetat (12,22%), alo-aromadendren (9,30%), nonanojska kiselina (6,66%),3Z-heksenil-2-metil butanoat (6,09%), valeranone (5,25%),(E, E)-α-Farnesene (3,18%),α-pinen(3,06%), linalool isovalerat (3,03%) i α-humulene (1,8%), koje su karakterizirali njihovo vrijeme čuvanja i uzorak fragmentacije za svaku, u GC-MS hromatogramu, kao i usporedba s literaturom. Ove komponente su pokazale obećavajuće antioksidativne efekte u koncentracijama od 80 ug/mL i relativno slične rezultate po upotrebi tri metode testa. Također je izlagao snažne antimikrobne i antimikrobne aktivnosti protiv S. aureus L. monocytogenes i C. Albicans u odnosu na ciprofloksacin i flukonazol.

Priznanja

Autori proširuju zahvalnost na Dekanstvo naučnih istraživanja na Univerzitetu Jouf za finansiranje ovog rada putem istraživačkog granta br. (DSR2020-04-453), te na Taif University Researchers Supporting Project number (TURSP-2020/56), Taif University, Taif, Saudijska Arabija.

Sukob interesa

Autori izjavljuje da nema sukoba interesa.

Reference

[1]Y. Jiang i P.-F.Tu (2009). Analiza hemijskih sastojaka u cistanche vrsti, J. Chrom. A.1216(11),1970-1979.

[2]L. Zhiming, L. Huinuan, G. Long, G. Jingwen i T. Chi-Meng (2016). Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jedan od najboljih farmaceutskih poklona tradicionalne kineske medicine, Front. Pharmacol.7,41.

[3]C. Gu, X. Yang i L.Huang (2016). Cistanches Herba: a neuropharmacology review, Front.Pharmacol. 7,289.

[4]E. M. Abdallah (2017). Antimikrobna procjena cvjetnih stablji cistanche violacea, holoparasitic plant collected from the arid region in Qassim, Saudi Arabia, Pharma.Biol. Eval.4(6),239-244.

[5] K.Zwe-Ling, J.Athira, K. Fan-Chi, H.Jia-Ling and C. Shu-Chun (2018). Efekt Cistanche tubulosa ekstrakta na mušku reproduktivnu funkciju u streptozotocin-nikotinamid-inducirani dijabetički štakori, Nutrients 10(10),1562.

[6] W.Lin-lin, D.Hui, Y.He-shui, L.Qing-hai, Z. Li-juan i S. Xin-bo (2015). Cistanches Herba: chemical constituents and pharmacological effects, Chin. Herb. Medicinski.

7(2),135-142.

[7] F.Changshuang, L.Jinyu, A. Adila, X.Lijie, Y.Yi, C.Qiuyan, L. Jie, W.Xinhui and L.Jinyao (2019). Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides inducira apoptozu u Eca-109 ćelijama putem mitohondrija-zavisni put, Oncol. Lett.17(1),303-313.

[8] Q.Xu, W.Fan, S.-F.Ye, Y.-B.Cong, W.Qin, S.-Y.Chen and J.Cai (2016). Cistanche tubulosa štiti dopaminergike neurone regulacijom apoptoze i glijalnog neurotrofnog faktora: in vivo i in vitro, Front. Ostarjeli Neurosci. 8,295.

[9]N.Wang, S.Ji, H. Zhang, S.Mei, L. Qiao i X. Jin (2017). Herba Cistanches: anti-aging, Aging Diseas.8(6), 740.

[10]A. Bougandoura, B.D'Abrosca, S. Ameddah, M. Scognamiglio,R. Mekkiou, A. Fiorentino, S.Benayache i F. Benayache(2016). Hemijski sastavi i in vitro anti-upalna aktivnost Cistanche violacea Desf. (Orobanchaceae) extract, Fitoterapia 109,248-253.

[11] Z.Jiang, J. Wang, X. Li and X. Zhang (2016). Echinacoside i Cistanche tubulosa (Schenk)R, wight ameliorate bisphenol A-induced testisa i sperma oštećenja kod štakora kroz gonad osi regulira steroidogenih enzima, J. Ethnopharmacol.193,321-328.

[12] CJ. Wu, M.Y. Chien, N.H. Lin, Y.C.Lin, W.Y.Chen, C.H.Chen i J.T.C. Tzen (2019). Echinacoside izoliran iz Cistanche tubulosa putatively stimulira izlučivanje hormona rasta putem aktivacije ghrelin receptora, Molekule 24(4),720.

[13]X.Wang i Y. Guo (2017). Brzo simultano određivanje šest efektivnih komponenti u Cistanche tubulosa po skoro infracrvenoj spektroskopiji, Molekule 22(5), 843.

[14]A.E.Al-Snafi (2020). Bioaktivni metaboliti i farmakologija Cistanche tubulosa-A review. IOSR J. Pharm.10(1), 37-46.

[15]D. Wang, H. Wang and L. Gu(2017). Antidepresiv i kognitivne aktivnosti poboljšanja tradicionalnog kineskog bilja Cistanche, Evid. Bazirani Kompleks.Altern. Med.2017,3925903.

[16]A. E. Al-Snafi(2016). Immunological effects of medicinal plants: A review(part 2), Immun.Endocr. Metab.Agenti Med. Chem.16(2), 100-121.

[17]A.S. Al-Menhali, S. A. Jameela, A.A. Latiff, M.A. Elrayess, M.Alsayrafi i M. Jaganjac(2017). Cistanche tubulosa induces reaktivne vrste kisika posredovane apoptoze primarne i metastatske humane ćelije raka debelog crijeva, J.Applied Pharm.Sci.7(5), 039-045.

[18]H. Shimoda, J. Tanaka, Y.Takahara, K. Takemoto,S.J. Shan i M.H. Su(2009). Hipoholesterolemski efekti cistanche tubulosa ekstrakta, kineske tradicionalne sirove medicine, kod miša, Amer.J. Chin.Med.37(6),1125-1138.

[19]X.Y. Wang, R. Xu, J.Chen, J.Y. Song, S.G. Newmaster, J.P.Han, Z.Zhang, and S.L.Chen (2018). Otkrivanje cistanches herba (Rou Cong Rong) lijekova koristeći vrste specifične nukleotidne potpise, Front. Plant Sci.9,1643.

[20] N.S.Du, S.H.Qu, X.D. Re, J.T. Ni, H.O.Zhang i HJ. Yan(1988). Studija o sastavu esencijalnog ulja iz Cistanche salse G, Youji Huax. 8, 522-525.

[21]C. Formisano, D. Rigano, F. Senatore, M. SJ Simmonds, A.Bisio, M.Bruno i S.Rosselli (2008). Esencijalno ulje sastav i antifeedant svojstva Bellardia trixago(L.) Sve. (grijeh. Bartsia trixago L.) (Scrophulariaceae), Biochem. Sistema. Ecol.36(5-6), 454-457.

[22]S.J. Roudbarak and D. Nori-Shargh(2016). The volatile constituent analysis of Orobanche alba Stephan from Iran, Current Anal. Chem. 12(5), 496-499.

[23] A.Baran, E. Karaklic, O.Faiz and F.Ozen (2020). Sinteza cinka i kobalt metalnih phthalocyanina koji sadrže chalcone; istraga njihovih fotokemijskih, DPPH radikalnih scavenging i metal chelating likova, Org.Commun.. 13(2), 65-78.

[24]A. Musa, N.S. Al-muaikel and M.S. Abdel-Bakky (2016). Phytochemical and pharmacological evaluations of ethanolic extract of Bassia eriophora, Der Pharm Chem.8(12),169-178.

[25]M. M. Ramadan, M. M.Ali, K.Z. Ghanem and A. H. El-Ghorab(2015). Esencijalno ulje iz egipatskih aromaticnih biljaka kao antioksidans i nove antitumonske agense u ljudskim linijama ćelija raka, Gras.y Aceites 66(2), e080.

[26]Z.Q. He, X.Y. Shen, Z.Y.Cheng, R.L. Wang, P.X. Lai, and X. Xing(2020). Hemijski sastav, antibakterijski, antioksidans, i cistotoksične aktivnosti esencijalnog ulja Dianella ensifolig, Rec, Nat. Prod 14(2), 160-165.

[27]A. Hamed, B. Mahmoud, M. Samy,E. M. Mostafa.A. Wanas. M.Radwan, M. Elsohly and M. Kamel (2019). Fitokemske i antimikrobne studije Markhamia platycalyx(Baker) Sprague lišće, Trop.J. Pharm. Res.18,2623-263.

[28]M. M. Ghoneim, A. Musa, A. A.El-Hela and K. M.Elokely(2018). Evaluacija i razumijevanje molekularne osnove antimeticilin-otporne Staphylococcus aureus aktivnosti sekundarnih metabolita izoliranih iz Lamij ampleksicaule, Pharmacog. Mag. 14(55), S3-S7.

[29] M.A Abdelgawad,A.M.Mohamed,A.Musa, E. M.Mostafa and H.M.Awad (2018). Synthesis, chromatographic separation and antimicrobial evolution of new isoquinoline-8-ol, J.Pharm. Sci. Res. 10(6),1314-1318.

[30]A. Musa(2019). Hemijski sastavi, antimikrobne i antiinflammatonske procjene različitih ekstrakta suaeda vera viljice. raste u Saudijskoj Arabiji, Int.J. Pharm. Res. 11(4),962-967.

[31] R.P, Adams(2017). Identifikacija komponenti esencijalnih ulja po plinskoj hromatografiji/spektrometriji mase, ed. 4.1., Allured publishing corporation, Carol Stream.

[32]B.F.M. T, Andrade. L.N.Barbosa. Probst and A.F.Junior (2014). Antimikrobna aktivnost esencijalnih ulja, J. Essent. Oil Res. 26(1), 34-40.

[33] V, Babushok, P.Linstrom and I. Zenkevich(2011). Retention indices for frequently reported compounds of plant essential oils, J. Phys. and Chem. Ref. Data 40(4), 043101.

[34] J.Alencar, A. Craveiro and F.d.A. Matos(1984). Kovats's indices as a preselection routine in mass spectra library searches of volatiles, J. Nat. Prod. 47(5),890-892.

[351M.Y. Tian, X.G. Zhao, X.H. Wu, Y.Hong, Q. Chen, X.L.Liu and Y.Zhou(2020). Hemijski sastav, antibakterijske i cistotoksične aktivnosti esencijalnog ulja iz Ficus tikoua Bur, Rec.Nat.Prod. 14,219-224.

[36]A. Judzentiene, F. Tomi and J. Casanova(2009). Analiza esencijalnih ulja Artemisia absinthium L. from Lithuania by CC, GC(RI), GC-MS and13C NMR.Nat. Prod. Comm. 4(8),1934578X0900400820.

[37]P.H. Ribeiro, L. M. Santos, C.AG. Camara,F. S.Born and C. W.Fagg(2016). Sezonski hemijski sastavi esencijalnih ulja dvije vrste eugenije i njihovih akaricidnih svojstava, Ouim. Nova.39, 38-43.

[38] J.Calva, J.M.Castillo, N.Bec, J.Ramirez,J.M.Andrade, C.Larroque and C. Armijos(2019). Hemijski sastav, enantiomeric distribution, and AChE-BChE aktivnosti esencijalnih ulja Myrteola phylicoides (Benth)Landrum iz Ekvadora, Rec. Nat. Prod. 13,355-362.

[39]E. M. Mostafa (2020). Istraživanje aurora B i cyclin-dependent kinaze 4 inhibitora izoliranih iz scorzonera tortuosissima Boiss. i njihove studije prisipanja, Farmaceuta. Mag.16(96),258-263.

[40] J.Yan, X.B.Liu, W.-W.Zhu, X.Zhong, Q. Sun, and Y.-Z.Liang(2015). Indeksi retencije za identifikaciju aroma spoja od strane GC: Razvoj i primjena baze podataka indeksa retencije, Chromatographia 78(1-2), 89-108.