Ultrazvučna ekstrakcija polisaharida iz Cistanche Tubulosa: optimizacija procesa, izolacija frakcija, strukturna karakterizacija i efekti protiv umora

 

sažetak:Ova studija imala je za cilj optimizaciju procesa ekstrakcije polisaharida (CP) Cistanche tubulosa i istraživanje njihovih strukturnih karakteristika i efekata protiv umora. Vođeni jednofaktorskim eksperimentima i optimizirani korištenjem metodologije površine odziva, optimalni uvjeti su bili ultrazvučna obrada od 20 minuta, omjer rastvarača i materijala od 20:1 i ultrazvučna snaga od 220 W, dajući 8,55% CP. Kromatografija na koloni celuloze je zatim proizvela jednu neutralnu frakciju (CPN) i tri kisele frakcije (CPA-1, CPA-2, CPA-3). Među njima, CPN je pokazao najveći oporavak (40,3%), najveći sadržaj ugljikohidrata (39,5%) i jaku antioksidativnu aktivnost uporedivu sa CPA‑2; stoga je CPN odabran za dubinsku karakterizaciju. Strukturne analize su otkrile karakteristične polisaharidne funkcionalne grupe, prevlast glukoze i manoze, te dokaze za dvije komponente s izrazito različitim molekularnim težinama. In vivo, CPN je značajno produžio vrijeme plivanja kod miševa, snizio azot uree i laktata u serumu i povećao glikogen u jetri, potvrđujući aktivnost protiv umora. Ovi nalazi pružaju naučnu osnovu za razvoj polisaharida Cistanche tubulosa u funkcionalne proizvode protiv umora i srodne komercijalne primjene.

Ključne riječi: Cistanche tubulosa polisaharidi; metodologija površine odgovora; proces ekstrakcije; strukturna karakterizacija; protiv umora; nove prednosti za CP u funkcionalnoj hrani i nutraceutici

 

Uvod

Cistanche tubulosa (Schenk) Wight,cijenjena ljekovita i jestiva homologna biljka poznata kao "pustinjski ženšen" ima dugu istoriju upotrebe u Kini [1]. Njegovi glavni bioaktivni sastojci uključuju polisaharide, feniletanoidne glikozide i iridoide; među njima, polisaharidi pokazuju važne fiziološke funkcije, kao što su imunomodulatorni [2], antioksidativni [3], protiv umora [4] i hipoglikemijski efekti [5], pokazujući široke izglede za primjenu u farmaceutskim proizvodima, zdravstvenim proizvodima i funkcionalnoj hrani [6]. Tradicionalne metode ekstrakcije polisaharida (npr. potapanje u toplu vodu i refluks) često pate od dugog trajanja, niske efikasnosti, velike potrošnje energije i potencijalnog oštećenja strukture i aktivnosti polisaharida [7–9]. Osim ekstrakcije tople vode [10] i refluksa [11], Teng et al. [12] upoređivali su ultrazvuk, mikrotalasnu i kombinovanu ultrazvuk-mikrotalasnu ekstrakciju, otkrivši da je sinergistička ultrazvuk-mikrotalasna metoda dala najbolji prinos (11,00%), 1,28% veći od ekstrakcije toplom vodom, nakon čega slede samo mikrotalasna pećnica i ultrazvuk.

Razdvajanje i prečišćavanje polisaharida ima za cilj dobivanje visoko čistih, strukturno definiranih i bioaktivnih monosupstanci ili specifičnih frakcija iz sirovih polisaharida koji sadrže proteine, nukleinske kiseline, lipide i druge nečistoće. Ailadan Maimaitiaili [11] je obezbojio i deproteinizirao sirove polisaharide Cistanche sa AB-8 makroporoznom smolom, zatim ih razdvojio DEAE-650M celulozom koristeći deioniziranu vodu i gradijent NaCl, dajući jedan neutralni i pet kiselih polisaharida; in vitro, neutralna frakcija je pokazala superiornu antioksidativnu aktivnost. Trenutno se studije bioaktivnosti Cistanche polisaharida fokusiraju uglavnom na antioksidativne, protuupalne i anti-age efekte [13], dok su istraživanja protiv umora relativno rijetka.

Kao novija tehnika ekstrakcije prirodnog proizvoda, ekstrakcija uz pomoć ultrazvuka (UAE) nudi kratko vrijeme ekstrakcije, visoku efikasnost, operativnu jednostavnost i nema ili nisko zagrijavanje, čime se izbjegava termička degradacija komponenti osjetljivih na toplinu i poboljšava prinos i čistoća; široko se koristi za biljne polisaharide [14]. Međutim, uslovi UAE za ekstrakciju polisaharida Cistanche tubulosa (CP) zahtijevaju daljnju optimizaciju kako bi se maksimizirala efikasnost. Metodologija površine odgovora (RSM), efikasan pristup dizajnu i optimizaciji zasnovan na matematičkom modeliranju, omogućava sveobuhvatnu analizu više faktora i njihovih interakcija kako bi se odredili optimalni parametri.

U ovoj studiji, koristili smo RSM za optimizaciju procesa UAE za CP, odvojili i identificirali rezultirajuće sirove polisaharide, uporedili in vitro antioksidativne aktivnosti frakcija i na osnovu najjačih antioksidativnih efekata procijenjenih protiv umora in vivo. Cilj je pružiti naučnu i tehničku podršku za korištenje resursa Cistanche tubulosa s dodanom vrijednošću i ubrzati prevođenje u funkcionalne proizvode za wellness industriju.

Cistanche tubulosa polisaharidi: prednosti

 

 

 

Lista pogodnosti Cistanche

 

 

Nabavite visoke polisaharide Cistanche tubulosa

 

 

1 Materijali i metode

1.1 Materijali i instrumenti

Cistanche tubulosa was purchased from the Urumqi dried fruit market; polysaccharides were prepared in-house at Xinjiang Agricultural University. Absolute ethanol, acetone, and ether were analytical grade (Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd.). DPPH was from Shanghai Ruji Biotechnology Development Co., Ltd. ABTS and shiitake polysaccharide (purity >98%) je iz Solarbija (Peking).

Glavna oprema: XL‑02A brusilica (Yechang Machinery Co., Ltd.); HH‑S digitalno vodeno kupatilo konstantne temperature (Tvornica medicinskih instrumenata Jiangsu Jintan); JBT/C‑YCL400T/3P(D) ultrazvučni farmaceutski procesor (Jining Jinbait Special Engineering Machinery Co., Ltd.); VP50 jedinica za vakuumsku filtraciju (Beijing Labtech); RE‑52B rotacioni isparivač (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); 80‑1 centrifuga (Jintan Hengfeng Instrument Factory); UV‑2550 spektrofotometar (Shimadzu, Šangaj).

Životinje: Pedeset mužjaka SPF Kunming miševa, tjelesne težine 20,00±2,00 g, starosti 3-4 sedmice, kupljeno od Centra za laboratorijske životinje Medicinskog univerziteta Xinjiang (licenca SYXK‑Xin 2024‑0001).

 

Cistanche tubulosa polisaharidi: prednosti

 

 

1.2 Metode

1.2.1 Proces ekstrakcije polisaharida

Cistanche kriške su usitnjene i propuštene kroz sito od 50-mesh. Prašak je stavljen u tikvicu sa okruglim dnom, pomešan sa 8 zapremina 80% etanola, refluksovan na 90 stepeni 2 h i filtriran. Ostatak je osušen na vazduhu. U osušeni ostatak je dodana destilirana voda i ekstrahirana ultrazvukom; ekstrakt je filtriran, filtrat zadržan, a ostatak je jednom ponovo ekstrahovan. Dva filtrata su spojena i koncentrirana na jednu četvrtinu prvobitne zapremine. U koncentrat su dodana tri zapremine apsolutnog etanola, ostavljena da stoji na 4 stepena 12 h i vakuumski filtrirana da bi se sakupio talog. Precipitat je ispran uzastopno apsolutnim etanolom, acetonom i etrom, osušen i izvagan da bi se dobio sirovi CP.

 

Cistanche tubulosa polisaharidi: prednosti

 

1.2.2 Eksperimenti sa jednim faktorom

1.2.2.1 Utjecaj omjera rastvarača i materijala na prinos CP

Pripremljeno je pet porcija Cistanche praha (po 4 g). Vrijeme ekstrakcije i ultrazvučna snaga su fiksirani na 20 min i 175 W. Omjeri rastvarača i materijala od 10:1, 15:1, 20:1, 25:1 i 30:1 (mL:g) su testirani na njihov učinak na prinos CP. Svaki eksperiment je izveden u tri primjerka.

 

1.2.2.2 Utjecaj ultrazvučne snage na prinos CP

Pet porcija praha (svaka po 4 g) ekstrahovano je pri optimalnom omjeru rastvarača prema materijalu određenom u 1.2.2.1, s vremenom ekstrakcije fiksiranim na 20 min. Testirani su nivoi ultrazvučne snage od 125, 150, 175, 200 i 225 W. Izvedeni su trostruki eksperimenti.

 

1.2.2.3 Utjecaj ultrazvučnog vremena na prinos CP

Pet porcija praha (svaka po 4 g) ekstrahovano je pri optimalnom omjeru rastvarača i materijala (iz 1.2.2.1) i optimalnom ultrazvučnom snagom (iz 1.2.2.2). Testirana su ultrazvučna vremena od 10, 15, 20, 25 i 30 minuta. Svaki uslov je izveden u tri primjerka.

 

1.2.3 Metodologija površine odgovora (RSM)

Na osnovu rezultata sa jednim faktorom, korišten je Box-Behnken dizajn sa CP prinosom kao odgovorom i ultrazvučnim vremenom, omjerom otapala i materijala i ultrazvučnom snagom kao faktorima. RSM optimizacija je sprovedena u Design-Expert 8 sa trofaktorskim dizajnom na tri nivoa (vidi tabelu 1). Eksperimenti su izvedeni u tri primjerka.

 

Cistanche tubulosa polisaharidi: prednosti

 

1.2.4 Određivanje sadržaja polisaharida

Sadržaj polisaharida mjeren je kolorimetrijskom metodom sumporna kiselina-antron [15]. Anthrone (20 g) je otopljen u koncentrovanoj sumpornoj kiselini i dopunjen do 100 mL da se pripremi rastvor od 0,2 g/mL. Odgovarajuća količina CP je otopljena i razrijeđena do 100 mL. Alikvot od 1 mL je pomešan sa 5 mL 0,2 g/mL antron-sumporne kiseline, promešan, ostavljen na sobnoj temperaturi 5 minuta, zagrevan u vodenom kupatilu od 90 stepeni 15 minuta, ohlađen, a apsorbanca je izmerena na 585 nm. Glukoza je korištena za pripremu standardne krive: Y=0.0081X + 0.0176 (R²=0.9991). Apsorbanca uzorka je zamijenjena u krivulju da bi se izračunao sadržaj polisaharida.

 

1.2.5 Proračun prinosa polisaharida

Prinos polisaharida izračunat je prema standardnoj formuli (masa dobijenog polisaharida u odnosu na masu sirovine), koristeći izmjereni sadržaj polisaharida.

 

1.2.6 Prečišćavanje polisaharida

Crude CP extract was prepared under the optimized conditions. Following Wang et al. [16], Sevag reagent (chloroform:n‑butanol = 4:1, v/v) was used for deproteinization with vigorous shaking for 10 min, followed by centrifugation; the supernatant was collected and the process repeated three times. Eight volumes of 95% ethanol were added to the filtrate and left at 4 °C for 24 h. After centrifugation (8000 r/min, 10 min), the precipitate was collected and freeze‑dried to obtain crude CP. A 10 mg/mL solution was prepared by dissolving 100 mg crude CP in 10 mL distilled water, centrifuged at 7000 r/min for 10 min to remove insolubles, and filtered through a 0.45 μm membrane. The solution was loaded onto a DEAE‑52 cellulose column and eluted stepwise with distilled water and 0.1, 0.3, and 0.5 mol/L NaCl. Eluates were monitored by anthrone–sulfuric acid assay; fractions with absorbance >1,0 su spojeni, koncentrirani, dijalizirani, osušeni smrzavanjem i izvagani da bi se dobile različite frakcije polisaharida. Prinos (Y) je izračunat na sljedeći način:
Y = (C × V × D) / (m × P)
gdje je C koncentracija polisaharida (mg/mL) pročišćenog ciljnog rastvora, V je zapremina (mL), D je faktor razblaženja, m je masa sirovog CP (g), a P je sadržaj polisaharida sirovog CP.

 

1.2.7 Poređenje antioksidativnih aktivnosti frakcija

1.2.7.1 Čišćenje DPPH radikala

Nakon Jianga et al. [17] sa modifikacijama, svježe je pripremljen radni rastvor DPPH od 0,2 mmol/L. Frakcioni rastvori od 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 i 1,0 mg/mL (svaki po 1 mL) su pomešani sa 2 mL DPPH, vorteksirani i inkubirani u mraku na sobnoj temperaturi 30 min. Apsorpcija je izmjerena na 517 nm (Ai). Svaki test je utrostručen, a vitamin C (Vc) u odgovarajućim koncentracijama služio je kao pozitivna kontrola. Brzina čišćenja je prikazana u zavisnosti od koncentracije i izračunata prema:
DPPH čišćenje (%)=[1 − (Ai − Aj) / (A0)] × 100
gdje je Ai A(2 mL DPPH + 1 mL uzorka/Vc), Aj je A(2 mL etanola + 1 mL uzorka/Vc), a A0 je A(1 mL vode + 2 mL DPPH).

 

1.2.7.2 Čišćenje radikala ABTS

Nakon Xua et al. [18] sa modifikacijama, 1 mL uzorka pri 0,2–1,0 mg/mL pomiješan je sa 4 mL ABTS rastvora, vorteksiran i inkubiran u mraku 6 minuta na sobnoj temperaturi. Apsorpcija je izmjerena na 734 nm, u tri primjerka. Vc pri odgovarajućim koncentracijama bila je pozitivna kontrola. Brzina čišćenja je prikazana u zavisnosti od koncentracije i izračunata prema:
ABTS čišćenje (%)=[1 − (Ai − Aj) / (A0)] × 100
gdje je Ai A(1 mL uzorka/Vc + 4 mL ABTS), Aj je A(1 mL uzorka/Vc + 4 mL vode), a A0 je A(1 mL vode + 4 mL ABTS).

 

1.2.8 Strukturna analiza frakcija polisaharida

1.2.8.1 Fourier-transformska infracrvena spektroskopija (FTIR)

Prateći Zhang WenChao et al. [19] uz modifikacije, 2 mg prethodno obrađenog polisaharida pomiješano je sa 200 mg osušenog KBr, samljeveno i presovano u pelete. Spektri su prikupljeni od 400–4000 cm⁻¹ pri rezoluciji 4 cm⁻¹ sa 32 skeniranja.

 

1.2.8.2 Određivanje molekulske težine

Nakon Zhang Jiayuana [20] sa modifikacijama, 5 mg uzorka je rastvoreno u 0,05 mol/L NaCl do 5 mg/mL, centrifugirano i filtrirano kroz membranu od 0,22 μm. Molekularna težina je određena pomoću HPGPC sa dvije vodorastvorne SEC kolone na bazi polimera (8 mm × 300 mm) u seriji, detektor: Waters RI; mobilna faza: 0,05 M NaCl; protok: 0,50 mL/min; temperatura kolone: ​​40 stepeni; injekcija: 30 μL. Kalibracione krive su bile:
Lg Mp–RT: y=−0,1359x + 9.4523 (R²=0.9974)
Lg Mw–RT: y=−0,1375x + 9.5035 (R²=0.9976)
Lg Mn–RT: y=−0,1368x + 9.4749 (R²=0.9971)
U skladu s tim su izračunate molekularne težine.

 

1.2.8.3 Sastav monosaharida

Prateći Naxin S et al. [21], uzorci su obrađeni i analizirani ionskom hromatografijom/HPLC. Standardi (5 mg ramnoze, arabinoze, galaktoze, glukoze, ksiloze, manoze, galakturonske kiseline, glukuronske kiseline, glukozamina HCl, galaktozamina HCl; 10 mg fukoze) su otopljeni i napravljeni do 10 mL, zatim razrijeđeni do serije. Kromatografija je koristila Thermo U3000 sistem sa Agilent ZORBAX Eclipse XDB‑C18 kolonom (4,6 mm × 250 mm, 5 μm); mobilna faza: acetonitril:fosfatni pufer (12 g/L KH2PO4, pH podešen na 6,8 sa 2 M NaOH)=17:83 (v/v), izokratski; protok 0,8 mL/min; stub 30 stepeni; detekcija 250 nm; injekcija 10 μL.

 

1.2.9 Eksperimenti protiv zamora frakcija polisaharida

1.2.9.1 Grupisanje životinja i administracija

Etičko odobrenje br.. 2023048. Nakon 3 dana aklimatizacije, 50 miševa je randomizirano u pet grupa (n=10): prazna kontrola; pozitivna kontrola (shiitake polisaharid 300 mg/kg); frakcija niske doze (150 mg/kg); frakcija srednje doze (300 mg/kg); frakcija visoke doze (600 mg/kg). Frakcije i kontrole davane su gavažom 15 dana; miševi su imali slobodan pristup hrani i vodi.

 

1.2.9.2 Test plivanja s opterećenjem

Pet sati nakon posljednje sonde, olovna težina jednaka 7% tjelesne težine bila je pričvršćena za svaki mišji rep. Miševi su plivali u rezervoaru dubine 60 cm na 30±2 stepena. Vrijeme od uranjanja do kada je glava ostala potopljena 10 s bez ponovnog izrona zabilježeno je kao iscrpno vrijeme plivanja.

 

1.2.9.3 Azot uree u krvi (BUN)

Nakon plivanja, krv je sakupljena preko orbitalnog sinusa u heparinizirane epruvete i centrifugirana na 3000 o/min 10 min. BUN je mjeren striktno prema uputama za komplet.

 

1.2.9.4 Laktat u krvi

Serum (20 μL) je obrađen prema uputama za komplet. Apsorpcija je očitana na 530 nm (1 cm dužine puta) sa dvostruko destilovanom vodom kao nula, i izračunata je koncentracija laktata.

 

1.2.9.5 Hepatičan glikogen

Odmah nakon uzimanja krvi, miševi su eutanazirani dislokacijom grlića materice. Jetre su izrezane, isprane u fiziološkom rastvoru, osušene i 80 mg tkiva stavljeno je u epruvetu sa 3 zapremine lužine (pH 8,0). Uzorci su kuhani 20 minuta, ohlađeni, a glikogen je kvantificiran prema uputama za komplet.

 

1.2.10 Analiza podataka

Podaci su analizirani pomoću SPSS 17.1 i prikazani kao srednja vrijednost ± SD (X±S). Korištena je jednosmjerna ANOVA sa testiranjem homogenosti varijanse; P < 0,05 smatra se statistički značajnim. Slike su pripremljene u Origin 2021 i GraphPad Prism 9.

Komercijalni prijevod i naglasci na primjeni

Novo pozicioniranje prednosti: Optimizirani neutralni polisaharid Cistanche (CPN) pokazao je dvostruke antioksidativne i anti-umorne efekte - produženu izdržljivost, smanjeni BUN i laktat, te povišene tvrdnje koje podržavaju glikogen u jetri, kao što su "podržava izdržljivost", "pomaže u smanjenju potpore vježbanjem," i "antioksidansa".

Formati proizvoda: napitci za izdržljivost spremni za miješanje, gel shotovi, funkcionalne gumene gume i kapsule. Kombinujte CPN sa elektrolitima, B-vitaminima i ugljenim hidratima sa niskim GI za sportske formulacije; ili sa tradicionalnim Cistanche feniletanoidnim glikozidima za sinergističke SKU-ove "energija + oporavak".

Smjernice za obradu: Uslovi UAE (20 min, omjer rastvarača 20:1, 220 W) su prilagodljivi i energetski efikasni; DEAE-52 frakcionisanje daje neutralnu frakciju olova (CPN) sa većim sadržajem i aktivnošću ugljenih hidrata, omogućavajući doslednu standardizaciju (npr. veći od ili jednak 39% ugljenih hidrata, HPGPC otisak prsta sa bimodalnom Mw).

Usklađenost i potkrepljenje: Koristite sadašnje rezultate in vivo da potkrijepite tvrdnje o strukturi/funkciji; proširiti pokusima na ljudskim pilotima koji mjere vrijeme do iscrpljivanja, kinetiku laktata i percipirani napor. Primijenite čistu ekstrakciju i izjave o rastvaraču.

Kontrola kvaliteta: Usvojiti FTIR markerske trake, omjere monosaharida (prevladavajući glukoza/manoza) i HPGPC profil molekularne težine kao kriterije oslobađanja. Antioksidativni testovi (DPPH/ABTS) kao provjere aktivnosti u procesu.

 

Povezanost i reference autora (autoritativni izvor)

DUAN Jihua1, HAN Haixia2,+, ZHAO Wenyan3, JIA Mingxi2, SUN Jingjing2, ZHOU Jixiang2, SONG Suqin4, ZHU Dongliang3*, BAO Xiaowei2*
(1. Xinjiang Sikai Food R&D Center (Co., Ltd.), Changji, Xinjiang 831100; 2. College of Food Science and Pharmacy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, Kina; 3. Farmaceutski i instrumentalni institut za testiranje, odjel za logistiku Xi Uniqi u regiji Xi Uniqi 830052 4. Sveobuhvatna eksperimentalna stanica Urumqi, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Xinjiang, Urumqi 830052)

Reference
[1] ZHAO Hongting, XIN Guoxiong, GUO Yuan. Napredak istraživanja Cistanchis sinensis, tradicionalne kineske medicine s istim izvorom hrane i lijeka. Kineska herbalna medicina, 2025, 56(09): 3316–3329.
[2] YANG MH, CHEN RH, ZHOU X, et al. Napredak istraživanja farmakoloških efekata i mehanizama polisaharida. Starch-Stärke, 2024, 76(9–10): 2300168.
[3] MU S, YANG WJ, HUANG G L. Antioksidativna aktivnost i mehanizmi polisaharida. Chem Biol Drug Des, 2021, 97(3): 628–632.
[4] ZHANG SS, LIU B, YAN GY, et al. Hemijska svojstva i učinak polisaharida protiv umora. J Food Biochem, 2022, 46(1): e14015.
[5] FU Y, WANG LW, JIANG GCA, et al. Antidijabetičko djelovanje polisaharida iz var. Li. Hrana, 2022, 11(10): 1464.
[6] CHEN Changmao, GAZANG Zhaxi, WANG Jie, et al. Napredak istraživanja aktivnih komponenti i farmakološkog mehanizma Cistanchiakisa. Kineska herbalna medicina, 2025, 56(12): 4464–4477.
[7] WANG Wenli, ZHANG Jinling, WEI Yaning, et al. Napredak ekstrakcije, pročišćavanja i bioaktivnosti prirodnih polisaharida. Nauka i tehnologija prehrambene industrije, 2022, 43(22): 470–480.
[8] GONG P, WANG SY, LIU M, et al. Metode ekstrakcije, hemijske karakterizacije i biološke aktivnosti polisaharida gljiva: mini-pregled. Carbohydr Res, 2020, 494: 108037.
[9] CHEN X, LIU YB, DENG Y, et al. Primarna studija o uticaju metoda ekstrakcije na svojstva i aktivnosti polisaharida. Molecules, 2025, 30(1): 148.
[10] JIANG Huabin, LIU Lisha, ZHANG Qing, et al. Simultano odvajanje i prečišćavanje tubularnih Cistanche feniletanoidnih glikozida i polisaharida tehnologijom membranske separacije. Nauka o hrani i tehnologija, 2019, 44(07): 229–234.
[11] MAIMAITIAILI Ailadan. Studija o ekstrakciji, odvajanju i prečišćavanju polisaharida iz Herba Cistanche i njihovoj in vitro imunološkoj aktivnosti. Urumqi: Medicinski univerzitet Xinjiang, 2021.
[12] TENG Liping, MU Long, LUO Feng, et al. Metoda ekstrakcije sirovih polisaharida iz Cistanche tubulosa i njen učinak na uklanjanje difenil radikala. Guizhou Agricultural Sciences, 2011, 39(01): 66–68.
[13] BAI Dongwen. Efekti ekstrakta cvijeta Pedicularis i Cistanche na hipokampus i crijevnu mikrobiotu pod hipoksijom na velikim visinama. Urumqi: Poljoprivredni univerzitet Xinjiang, 2023.
[14] JING YS, ZHANG SL, LI MS, et al. Ekstrakcija, struktura i bioaktivnost polisaharida. Hrana, 2022, 11(14): 2126.
[15] GUO Xiaolei, ZHU Sichao, ZHAI Xufeng, et al. Poređenje metoda antron sulfata i fenol sulfata za određivanje polisaharida Ganoderme. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2010, 28(09): 2000–2002.
[16] WANG Senzheng, SUN Yongfang, ZHOU Ye, et al. Optimizacija ekstrakcije, strukturna karakterizacija i efekti na funkcionalnu konstipaciju Wen Curcuma polisaharida. Istraživanje i razvoj prirodnih proizvoda: 1–17.
[17] JIANG Zhixuan, CAI Zifu, DONG Sisi, et al. Hemijska modifikacija polisaharida bodljikave kruške i analiza antioksidativnog i hipoglikemijskog djelovanja. Nauka i tehnologija prehrambene industrije: 1–20. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025020006.
[18] XU Qing, YANG Jiang, LI Anding. Poređenje glavnih funkcionalnih komponenti i antioksidativnih aktivnosti marakuje različitog porijekla. Moderna prehrambena nauka i tehnologija, 2023, 39(08): 94–102.
[19] ZHANG CW, ZOU YF, ZOU Y, et al. Ultrazvučna ekstrakcija polisaharida iz Paeoniae Radix alba: optimizacija ekstrakcije, strukturna karakterizacija i antioksidativni mehanizam in vitro. Int J Biol Macromol, 2024, 268: 131816.
[20] ZHANG Jiayuan. Izolacija i prečišćavanje polisaharida koprive, identifikacija strukture i hipoglikemijska aktivnost. Xi'an: Univerzitet nauke i tehnologije Shaanxi, 2021.
[21] SUN NX, ZHAO YN, YIN M Y. Ekstrakcija, prečišćavanje, struktura i bioaktivnost polisaharida iz maitakea: Pregled. J Food Meas Charact, 2023, 17(6): 6200–6213.
[22] WAN Yue, QI Jiying, ZENG Hong, et al. Optimizacija ultrazvučne ekstrakcije shiitake polisaharida metodologijom površine odgovora. Biotehnološki bilten, 2015, 31(01): 79–85.
[23] LI Li, ZHANG Sai, HE Qiang, et al. Primjena metodologije odzivne površine u eksperimentalnom dizajnu i optimizaciji. Laboratorijska istraživanja i istraživanja, 2015, 34(08): 41–45.
[24] MA Qvhuan, SHI Xiaofeng, SHEN Wei, et al. Optimizacija ekstrakcije polisaharida iglica cedrovine analizom površine odgovora. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2018, 33(03): 1106–1110.
[25] ZHAO Jinsong, PENG Jingjing, ZHANG Liang, et al. Komparativna studija o poboljšanju neugodnog okusa u baijiuu korištenjem različitih aktivnih ugljika. China Brewing, 2025, 44(09): 179–186.
[26] WU Huiqiong, WU Hailian, XIAO Nan, et al. Pickering emulzije Mosla chinensis hlapljivog ulja sinergijski stabiliziranog nanokristalnom celulozom/kompozitnim česticama kukuruznog škroba. Nauka i tehnologija prehrambene industrije: 1–27. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025060255.
[27] WU Shuang. Utjecaj fukoidana na stabilnost Pickering emulzija na bazi proteina. Dalian: Politehnički univerzitet Dalian, 2022.
[28] LIN Ying, ZHENG Meixia, CHEN Changmei, et al. Dvofazna ekstrakcija polisaharida crnog čaja jasmina i antioksidativno djelovanje uz pomoć ultrazvuka. Hemija i bioinženjering, 2025, 42(09): 35–42.
[29] WANG Yihan, XIE Qingyun, TENG Jianwen, et al. Efekti izolacije i pročišćavanja na strukturu polisaharida Tremella i in vitro aktivnost na snižavanju lipida. Tehnologija prehrambene industrije, 2025, 46(05): 81–90.
[30] BAN Shidong, ZONG Chunyang, WANG Xiaodan, et al. Optimizacija Lactobacillus plantarum fermentacije Polygonatuma za povećanje prinosa polisaharida i in vitro prebiotičke aktivnosti. Nauka i tehnologija prehrambene industrije: 1–18. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025030047.
[31] MO Yunfeng, CHEN Zixuan, PENG Junying, et al. Utjecaj procesa sušenja na svojstva praha bundeve i antioksidativni kapacitet. Nauka i tehnologija prehrambene industrije: 1–19. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025040072.