Dendritske ćelije tipa 1 (DC) u bolestima bubrega

za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Konvencionalne dendritske ćelije tipa 1 (cDC1) u ljudskim bubrežnim bolestima: kliničko-patološke korelacije

Titi Chen, Qi Cao i dr.

SAŽETAK

Pozadina: Dendritske ćelije tipa 1(cDC1) je podskup konvencionalnih DC, čija je najpoznatija funkcija unakrsna prezentacija CD8 plus T ćelijama. Proveli smo ovu studiju kako bismo istražili broj i lokacijuDendritske ćelije tipa 1(cDC1) kod raznih ljudibolesti bubregakao i njihova korelacija sa kliničko-patološkim karakteristikama i CD8 T ćelijama.

Metode: Analizirali smo 135bubreguzorci biopsije.Bolesti bubregauključeno: akutna tubularna nekroza (ATN), akutni intersticijski nefritis (AIN), proliferativni glomerulonefritis (GN) (IgA nefropatija, lupus nefritis, pauci-imuni GN, anti-GBM bolest), neproliferativni GN (bolest minimalnih promjena, membranozna nefalna bolest ) i dijabetička nefropatija. Indirektno imunofluorescentno bojenje korišteno je za kvantifikaciju cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1), CD1ct DC i CD8 plus T ćelije.

Rezultati:Dendritske ćelije tipa 1(cDC1) su rijetko bili prisutni u normalnom stanjububrezi. Njihov broj se značajno povećao u ATN i proliferativnom GN, proporcionalno mnogo više od CD1ct DC. cDC1s (Dendritske ćelije tipa 1)su uglavnom pronađeni u intersticijumu, osim u lupus nefritisu, pauci-imunom GN i anti-GBM bolesti, gdje su bili istaknuti u glomerulima i periglomerularnim regijama. Broj cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)u korelaciji sa ozbiljnošću bolesti kod ATN, brojem polumjeseca u pauci-imunom GN, intersticijskom fibrozom kod lgA nefropatije i lupus nefritisa, kao i prognozom kod IgA nefropatije. Broj CD8 plus T ćelija se takođe značajno povećao u ovim uslovima i cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj je u korelaciji sa brojem CD8 plus T ćelija u lupus nefritisu i pauci-imunom GN, pri čemu su mnogi od njih blisko ko-lokalizovani. Zaključci: cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj u korelaciji sa različitim kliničko-patološkim karakteristikama i prognozom koja odražava moguću ulogu u ovim stanjima. Njihova povezanost sa CD8 plus T ćelijama sugeriše kombinovani mehanizam u skladu sa rezultatima na životinjskim modelima.

UVOD

Dendritske ćelije(DC) su centralni orkestratori efektivnog imuniteta. Ove ćelije su heterogene i mogu se podeliti u različite podskupove na osnovu njihovog fenotipa i funkcije. Dendritske ćelije se mogu široko kategorisati u plazmacitoidne DC (Dendritske ćelije)(pDC) i konvencionalni DC (Dendritske ćelije)(cDC).cDC se sastoji od dva glavna podskupa: cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)(CD141* DC-ovi (Dendritske ćelije) kod ljudi i CD103t ili CD8ot DC kod glodavaca) i cDC2 (CD1c DC kod ljudi i CD1 lbt DC kod glodara) (1).cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)otkriveni su prvo kod miševa, a zatim i kod ljudi i karakteriziraju ih superiorna sposobnost fagocitoze nekrotičnih stanica putem receptora Clec9A povezanog s molekularnim uzorkom (DAMP) i unakrsne prezentacije CD8 plus T stanica. Nasuprot tome, cDC2 su efikasni aktivatori CD4* T ćelija, ali su inferiorni u aktivaciji CD8t T ćelija (2).

DC (Dendritske ćelije)su proučavani na ljudimabolest bubregaa utvrđeno je da je njihov broj povećan kod glomerulonefritisa(GN)(3, 4). Nakon otkrića cDCl-a, nagomilane studije na životinjama pokazale su da oni igraju ključnu ulogu ubolesti bubrega, kao što je adriamicin nefropatija i polumjesečni GN, kroz interakciju s T ćelijama (5-8). Međutim, takva istraživanja nedostaju na ljudimabolest bubrega, sa samo jednom studijom koja je pokazala povećan broj CDK-a (KonvencionalnoDendritske ćelije)u GN (9). Proveli smo ovu studiju kako bismo pružili analizu ključnih CDK podskupova, cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1), i cDC2, u širokom rasponu ljudibolesti bubregauključujući ne-glomerularne bolesti [akutna tubularna nekroza (ATN), akutni intersticijski nefritis (AIN)], proliferativni GN (IgA nefropatija, lupus nefritis, pauci-imuni GN, anti-GBM bolest), neproliferativni GN (bolest minimalnih promjena ( MCD), membranozna nefropatija) i dijabetička nefropatija. Otkrili smo da je cDC u značajnoj korelaciji s patološkim karakteristikama uključujući ozbiljnost ATN, formiranje polumjeseca u pauci-imunom GN i intersticijalnu fibrozu u imunološki posredovanom GN. Osim toga, u skladu s njihovom specijaliziranom sposobnošću da aktiviraju CD8 plus T stanice kod životinja modela, takođe smo pokazali njihovu korelaciju sa CD8t T ćelijama u ovim uzorcima. Ovi nalazi daju poticaj za istraživanje novih terapijskih ciljeva koji manipuliraju ovim stanicama za liječenjebubregbolesti.

Click to Cistanche stem za bolest bubrega

MATERIJAL I METODE

Pacijenti i uzorci tkiva

Studija je sprovedena u skladu sa principima Helsinške deklaracije i odobrena je od strane Odbora za etiku istraživanja ljudi lokalnog zdravstvenog okruga Zapadnog Sidneja. Dobiven je informirani pristanak pacijenata. Analizirali smo 176 smrznutih dijagnostikabubregbiopsy samples taken from non-pregnant adult patients(>18 godina) između 18. juna 2016. do 30. juna 2017. godine u bolnici Westmead, Sydney, Australija.Bubregtkiva su brzo zamrznuta u OCTkompoundu (Tissue-Tek Sakura, SAD) i pohranjena na -80 stepenu . Četrdeset i jedan (41) uzorak je imao loš kvalitet tkiva i isključeni su iz studije. Osnovni podaci o pacijentu, uključujući dob, spol, procijenjenu brzinu glomerularne filtracije (eGFR) i stepen proteinurije, prikupljeni su u vrijemebubregbiopsija.eGFR je izračunata pomoću formule CKD-EPI. Dijagnozu je postavio bubrežni patolog na osnovu svetlosti, imunofluorescencije (IF) i elektronske mikroskopije, kao i kliničke anamneze.

Analizirane su različite bolesti uključujući ne-glomerularne bolesti (ATN, AIN), proliferativna GN (IgA nefropatija, lupus nefritis, pauci-imuni GN, anti-GBM bolest), neproliferativna GN (MCD, membranozna nefropatija) i dijabetička nefropatija. Za ATN smo uključili samo neseptičke slučajeve jer septički ATN ima drugačiju patofiziologiju. ATN je dalje kategoriziran u blage-umjerene bolesti (definirane kao<50%cortical tubules="" showing="" injury)and="" severe="" disease="" (="">=50 posto kortikalnih tubula koji pokazuju povredu). IgA nefropatija je klasifikovana prema Oxford MEST skoru (M mezangijalna hipercelularnost, E endokapilarna hipercelularnost, S segmentna glomeruloskleroza, T tubularna atrofija/intersticijalna fibroza). Također smo analizirali korelaciju između cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1) number and prognosis (defined a priori as >20% reduction in eGFR on or before 31t December 2019)in IgA nephropathy by dividing patients into 2 groups according to cDC number with a cut-off point at the upper quartile(>=15). Lupus nefritis je dalje klasifikovan u 2 grupe prema nivou intersticijalne fibroze (<25%,>=25 posto zahvaćenosti kortikalnog intersticija). Pauci-imune GN je klasifikovan u 2 grupe prema procentu glomerula sa polumjesecima (<40%,>=40 posto ).

Kao normalnobubregkontrole, koristili smo 5 normalnih bubrežnih korteksa iz uzoraka nefrektomije kao i 2 donorabubrezinije pogodno za transplantaciju. Za tumorske nefrektomije uzorci su uzeti sa pola suprotnog od tumora i najmanje 5 cm od ivice tumora. Ova tkiva su imala normalan makroskopski izgled. Mikroskopski, ništa od ovogabubreguzorci su imali dokaze o značajnoj glomerularnoj ili tubulointersticijskoj upali ili ozljedi. Koristili smo normalno tkivo slezene odraslog donora kao pozitivnu kontrolu za testiranje antitijela.

Imunofluorescentno bojenje

Serijski kriostatski preseci su izrezani na 5 μm i postavljeni na Superfrost Ultra Plus staklene pločice (Thermo Scientific, SAD). Slajdovi su pohranjeni na -80 stepeni. Presjeci tkiva su fiksirani sa 100 posto metanola na -20 stepeni 10 minuta, a zatim sušeni na zraku. Indirektno imunofluorescentno bojenje izvedeno je sljedećom metodom: sekcije tkiva su isprane u DPBS (Lonza, SAD) i blokirane sa 2 procenta goveđeg serumskog albumina (Sigma-Aldrich, SAD) 15 minuta; zatim su obojeni primarnim antitelom na 4 stepena preko noći, a zatim sekundarnim antitelima 40 minuta na sobnoj temperaturi. Tabela 1 je lista korištenih primarnih i sekundarnih antitijela i njihovih razrjeđenja. Nukleusi su obojeni DAPI (1:250,000, ThermoFisher, USA) prije nego što su uzorci postavljeni na pokrovne stakalce sa medijumom za montažu fluorescencije (Dako, SAD). Nespecifično bojenje i unakrsna reaktivnost između različitih primarnih i sekundarnih antitijela su provjereni i isključeni.

TABELA 1|Primarna i sekundarna antitijela korištena u studiji

cDCl su identifikovani bojenjem za marker Clec9A. Kod ljudi, ekspresija Clec9A je visoko ograničena na cDCl u krvi i tkivima (10, 11). Da biste to potvrdili ububrezi, izvršili smo dvostruko bojenje Clec9A i HLA-DRB1 kao i Clec9A i CD1lc u odabranim normalnim i bolesnim stanjima. Većina, ako ne i svi Clec9A se preklapaju sa HLA-DRB1 (dodatna slika 1) i CD1lc (dodatna slika 2).

SLIKA 1|Normalan bubreg cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1), cDC2 i CD8 plus T ćelije.

DC (Dendritske ćelije)bili su rijetko prisutni u normalnom stanjububrezii cDC2 brojevi su bili otprilike 7 puta veći od broja cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1). (Šipka=100 mm).

REZULTATI

Osnovne karakteristike pacijenta.Osnovne karakteristike pacijenata u kontrolnoj i bolesti kohorti su sažete u tabeli 2. Ukupno 135 pacijenata je uključeno u studiju.bubregbolestianalizirane su uključujući ne-glomerularne bolesti[ATN (22), AIN (10)], proliferativnu GN[gA nefropatiju (44), lupus nefritis (12), pauci-imuni GN(12), anti-GBM bolest(4)] , neproliferativna GN[MCD(5), membranozna nefropatija(5)] i dijabetička nefropatija (21). U grupi oboljelih od lupus nefritisa bilo je više žena i njihova starost je bila mlađa u poređenju sa ostalimabubregbolesti, što je u skladu sa literaturom(12). Pacijenti sa pauci-imunim GN i anti-GBM bolešću imali su najniži eGFR. Nivo proteinurije bio je najviši kod MCD i membranske nefropatije.

TABELA 2|Osnovne karakteristike.

Broj i lokacija DC-ova (Dendritske ćelije)u kontroli i bolestima.cDCl su rijetko bili prisutni u normalnom stanjububrezi(Slika 1) i cDC2 brojevi su bili približno 7 puta veći od broja cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1).Broj cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)značajno se povećao u ATN i proliferativnom GN (Slika 2A), dok je njihov broj ostao nepromijenjen u odnosu na kontrolu u AIN-u, membranskoj nefropatiji, MCD-u i dijabetičkoj nefropatiji (dopunska slika 3). Broj cDC2 se takođe značajno povećao u ATN i proliferativnom GN (Slika 2B). Došlo je do smanjenja cDC2 (Dendritske ćelije tipa 2)/cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)omjer koji ukazuje na cDCl (Dendritske ćelije tipa 1)povećana proporcionalno više od cDC2 (slika 2C).

SLIKA 2|Broj cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)i cDC2, omjer cDC2/cDC1 i CD8 plus T ćelije u kontroli i odabranim bolestima.

P-vrijednost se izračunava za svaku bolest u odnosu na kontrolu. Oba cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)i cDC2 se značajno povećao kod ATN, IgA, lupus nefritisa, pauci-imune GN i anti-GBM bolesti (A, B)

sa cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)povećan proporcionalno više od cDC2 kod ATN, lupus nefritisa, pauci-imunog GN i anti-GBM bolesti (C).

CD8 plus T ćelije su značajno povećane kod ATN, IgA, lupus nefritisa, pauci-imunog GN i anti-GBM bolesti (D).

Većina cDCl-a nalazi se u intersticijumu, osim kod lupus nefritisa, pauci-imune GN i anti-GBM bolesti gdje su također pronađeni u peri-glomerularnim i intra-glomerularnim regijama (slika 3A). Osim toga, pronašli smo i značajan broj CD8t T ćelija u peri-glomerularnim i intra-glomerularnim regijama (Slika 3A), a mnoge od njih ko-lokalizirane sa cDCl-ovima (Slika 3B). S druge strane, cDC2 su rijetko pronađeni u intra-glomerularnim regijama i minimalna ko-lokalizacija sa CD8 plus T ćelijama.

SLIKA 3|(A) cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)i CD8 plus T ćelije u intra-glomerularnim regijama. (B) ko-lokalizacija cDC1 sa CD8 plus T ćelijama. (Šipka=100 mm). * P < 0.05,="" **="" p=""><>

Povezanost između cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)Sa kliničko-patološkim karakteristikama i CD8 plus T ćelijama Analizirali smo korelaciju između cDCl (Dendritske ćelije tipa 1)i kliničkopatološke karakteristike kao i CD8 plus T ćelije. Zabilježena su 22 slučaja ATN (blage bolesti n=12, teške bolesti n=10). Teža bolest bila je povezana s većim brojem cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)(p=0.032), ali ne i cDC2 (Slika 4A).cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)povećao proporcionalno više od cDC2 (cDC2/cDC1 omjer 2,5, p=0.019). Broj CD8 plus T ćelija se također značajno povećao u ATN(p=0.005) (Tabela 3, Slika 2D). Broj cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)nije korelirao sa brojem CD8* T ćelija u ATN.

TABELA 3|CD8 plus broj T ćelija i koeficijent korelacije između cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)i broj CD8 plus T ćelija u kontrolnim i bolesnim bubrezima.

Analizirana su 44 slučaja IgA nefropatije. Koristeći MEST skor Oksfordske klasifikacije (M mezangijalna hipercelularnost, E endokapilarna hipercelularnost, S segmentna glomeruloskleroza, T tubularna atrofija/intersticijska fibroza), veći broj cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)je bio povezan sa višim T skorom (p=0.008), ali ne i MES rezultatima (Slika 4B). Bilo je 7 slučajeva sa polumjesecima i broj cCD1 nije bio povezan s brojem polumjeseca. BrojbubregCD8* T ćelije su bile značajno veće kod IgA nefropatije nego u kontroli (str<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d).="" there="" was="" no="" correlation="" between=""> (Dendritske ćelije tipa 1) and CD8+ T cell numbers. Thirty-five(35)patients had follow-up data on or before 31sf December 2019, of whom9experienced>20 posto smanjenje eGFR. Podjela pacijenata u 2 grupe prema cDCl (Dendritske ćelije tipa 1) number with a cut-off point at the upper quartile(>=15), viši cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)brojčana grupa je bila povezana sa lošijim ishodima (Slika 4E).

SLIKA 4|Korelacija između cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1), cDC2 i CD8 plus broj T ćelija i težina bolesti (A-D).

Kaplan Meierova kriva preživljavanja IgA nefropatije (E). T rezultat 0 odnosi se na postotak područja koje pokazuje tubularnu atrofiju/intersticijalnu fibrozu <=25>

T skor 1 odnosi se na postotak područja koje pokazuje tubularnu atrofiju/intersticijalnu fibrozu 26 - 50 posto, T skor 2 se odnosi na postotak područja koje pokazuje tubularnu atrofiju/intersticijalnu fibrozu > 50 posto.

Preživljavanje je definirano kao > 20 posto smanjenja eGFR na dan ili prije 31. decembra 2019. NS, nije značajno.

Bilo je 12 slučajeva lupus nefritisa. Kao i kod IgA nefropatije, veći broj cDCl je bio povezan sa ozbiljnijom fibrozom (p=0.020) (Slika 4C). Osim toga, broj CD8 plus T ćelija se također značajno povećao (P<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d)="" and="" this="" correlated="" with="" the="" number="" of="" cdcl="" cells="" (r="0.614," p="0.034)" (table="" 3).a="" significant="" number="" of=""> (Dendritske ćelije tipa 1)i CD8t T ćelije pronađene su u peri-glomerularnim kao i intra-glomerularnim, što ukazuje da mogu igrati ulogu u ovom stanju. Drugo, u imuno-posredovanoj bolesti povezanoj s intersticijskom fibrozom (IgA nefropatija i lupus nefritis), otkrili smo da cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj je korelirao sa težinom fibroze, kao i prognozom kod IgA nefropatije, dok takva korelacija nije pronađena kod neimunski posredovane fibrozne bolesti (dijabetička nefropatija). Treće, postojala je jaka korelacija između broja cDCl i formiranja polumjeseca u pauci-imunom GN, a cDCl su bili prisutni u velikom broju u peri-glomerularnim i intra-glomerularnim regijama što ukazuje na njihovu moguću ulogu u formiranju polumjeseca. Četvrto, broj cDC1 je u korelaciji sa CD8 plus brojem T ćelija u lupus nefritisu i pauci-imunom GN, sa brojnim cDCl-ovima ko-lokalizovanim sa CD8 plus T ćelijama što ukazuje na njihovu moguću interakciju. Ovo je u skladu s našim nalazima na životinjskim modelimabubregbolestkoji pokazuju mišje homologe cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)ćelije prvenstveno aktiviraju CD8t T ćelije. Uzeti zajedno, ovi nalazi sugeriraju da cDCl igra važnu ulogu u nizububregbolestiuključujući ATN, intersticijalnu fibrozu kod imunološki posredovane bolesti i formiranje polumjeseca i da potencijalno mogu djelovati kroz aktivaciju CD8t T ćelija.

cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)Broj u korelaciji sa ozbiljnošću bolesti u ATN. Kod neseptičkog ATN-a po prvi put smo pokazali značajno povećan broj DC-a (Dendritske ćelije), posebno cDCl u poređenju sa cDC2. Važno je da cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj u korelaciji sa težinom bolesti. Pored toga, povećan je i broj CD8 plus T ćelija. ATN je obično uzrokovan ishemijsko-reperfuzijskom ozljedom (IRI), nefrotoksinima ili sepsom. Tradicionalno, IRI i toksini uzrokuju sterilnu upalu, a smatralo se da urođeni imunitet, gdje su DC i T-ćelije manje važne, igra dominantnu ulogu. Međutim, sve veći dokazi iz studija na životinjama pokazuju da su i cDCl i CD8 plus T ćelije važni igrači. Prethodne studije IRI na životinjama i nefrotoksičnosti cisplatina otkrile su povećanje ukupnog broja DC i T ćelija (13-17). Naše prethodne studije su pokazale da se kod Adriamicin nefropatije broj cDCl značajno povećao (5). Kod IRI, podskup aktiviranih dendritskih ćelija pokazuje povećan kapacitet za unakrsno prisustvo antigena CD8t T ćelijama(18). Kod Adriamicin nefropatije, također smo otkrili da cDCl izazivaju CD8 plus T ćelijski odgovor koji dovodi do ozljede (5). Nedostatak korelacije između cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)i CD8* T ćelije u humanom ATN, za razliku od nalaza na životinjskim modelima, mogu odražavati različite neimunološke puteve ozljede u humanom ATN u poređenju sa IRI u mišjim modelima gdje cDCl igraju značajnu ulogu kroz CD8* T ćelije. Pored toga, kod glodara je pokazano da se cDCl regrutuje u tkivo hemoatraktantom XCLl koji proizvode prirodne ćelije ubice (19). Stoga bi moglo biti vrijedno da se ovo dodatno proučibubregbolest.

cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)Broj u korelaciji sa imuno posredovanom intersticijskom fibrozom. Drugi značajan nalaz u ovoj studiji je da je broj cDCl u korelaciji s ozbiljnošću intersticijske fibroze povezane s imunološki posredovanom bolešću (IgA nefropatija i lupus nefritis), ali ne i sa neimunom posredovanom fibrotičnom bolešću (dijabetička nefropatija), pokazala je prethodna studija. povećan broj cDCl i cDC2 u intersticijskoj fibrozi(9). Po prvi put smo pokazali da je to tačno samo kod imunološki posredovanih bolesti i cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj se povećao proporcionalno više od cDC2. Pored toga, demonstrirali smo i cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj u korelaciji sa prognozom i broj CD8* T ćelija se takođe značajno povećao kod IgA nefropatije. Ovo potvrđuju studije na životinjama koje pokazuju DC (Dendritske ćelije)direktno doprinose fibrozi. Na primjer, DC-izveden amfiregulin je podstakao fibrozu(20). Također je moguće da su cDCl doprinijeli fibrozi preko CD8 plus T ćelija, za koje se zna da doprinose fibrozi u drugim organima (21-23). Budući da je intersticijska fibroza povezana s napredovanjem kroničnebubregbolest, nije iznenađujuće što smo pronašli cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj da bude dobar prognostički marker kod IgA nefropatije. Druge studije su pokazale da su CD8t T ćelije u korelaciji s prognozom IgA nefropatije (24), koja može biti rezultat unakrsne prezentacije cDCl-a. Kod lupus nefritisa, pokazali smo korelaciju između cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj i intersticijalna fibroza kao i broj CD8t T ćelija. Prethodne studije su takođe pokazale povećanjebubregcDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj oboljelih od lupus nefritisa(25), posebno lupus nefritisa III i VI klase, uz odgovarajuće smanjenje njihovog broja u cirkulaciji (26). Proširili smo ove nalaze pokazujući da su također u korelaciji s kroničnim promjenama. Dobro je poznato da intersticijska upala, koja se sastoji od T ćelija, B ćelija, dendritskih ćelija i makrofaga, ima dominantnu ulogu u napredovanju lupus nefritisa (27). cDCls mogu doprineti napredovanju lupus nefritisa u različitim načina. Prvo, aktivacija interferona igra ključnu ulogu u patogenezi lupus nefritisa (28-30) i cDCl su istaknuti proizvođači IFN-入. (31) Drugo, cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)može doprinijeti progresiji lupus nefritisa kroz CD8t T ćelije (32-37), a naš nalaz o korelaciji između cDCl i CD8 plus T dodatno podržava njihovu moguću interakciju. Uloga CD8 plus T ćelija u lupus nefritisu je ranije dokazana. CD8 plus T ćelije kontrolišu autoreaktivni imunitet oslobađanjem citotoksičnih molekula. Otkriveno je da CD8 plus T ćelije u lupus nefritisu imaju oslabljenu citotoksičnu funkciju, što može izazvati autoimunost(38). Pored toga, ove ćelije mogu da generišu i autoantigene lupusa(39). Postoje brojni dokazi da CD8* T ćelije u obabubreg(32,33) i urin (34-36) koreliraju sa aktivnošću bolesti i histološkom ozljedom kod lupus nefritisa. Osim toga, pokazalo se da iscrpljenost CD8* T-ćelija predviđa povoljnu prognozu(37).

cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)Broj u korelaciji sa brojem polumjeseca u Pauci-Immune GN. U pauci-imunom GN, pronašli smo cDCl agregirane u peri-glomerularnim i intra-glomerularnim regijama, a njihov broj je u korelaciji s brojem polumjeseca i CD8 plus T ćelija. Prethodne studije su pokazale da DC (Dendritske ćelije)su rijetko prisutne unutar glomerula(3,4,9) ili samo u vrlo malom broju(40). S druge strane, T ćelije su bile istaknute u intersticijumu, peri-glomerularnom i intra-glomerularnom dijelu({{6} }). Otkrili smo da su i cDCl i CD8* T ćelije istaknute u peri-glomerularnim i intra-glomerularnim regijama, pri čemu su mnoge od njih ko-lokalizirane. Osim toga, cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)broj u korelaciji sa brojevima polumjeseca i CD8 plus T ćelija. Svi ovi nalazi ukazuju na ulogu cDCl u formiranju polumjeseca kroz interakciju sa CD8* T ćelijama. Patogena uloga CD8t T ćelija u pauci-imunom GN i formiranju polumjeseca već je demonstrirana na životinjskim modelima (45,46). U skladu s našim nalazima kod ljudi, kod životinjskog polumjesecnog GN, cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)i CD8* T ćelije su nađene posebno u periglomerularnoj regiji(47,48). Pokazalo se da Bowmanova kapsula pruža zaštićenu imunološku nišu sprečavanjem pristupa DC i citotoksičnih CD8 plus T ćelija u Bowmanov prostor, a time i podocitima(45,47). Međutim, kada je Bowmanova kapsula probijena, ove inflamatorne ćelije su dobile pristup i uništile podocite što je rezultiralo brzo progresivnim GN(47).

Jedno od ograničenja ove studije je da tehnika bojenja IF dozvoljava korištenje samo ograničenog broja markera. Bilo bi korisno proširiti naše nalaze koristeći tehnologiju kao što je protočna citometrija, koja može kombinirati više markera za daljnju analizu fenotipa ovih DC-a. (Dendritske ćelije)i njihovi relevantni profili citokina i hemokina. Međutim, informacije o lokaciji će biti izgubljene. Druge tehnike kao što su multipleksna imunohistohemija i Nanostring se također mogu uzeti u obzir u budućim studijama kako bi se ove ćelije dalje ispitale ububregbolest. Osim toga, kada se boje cDC2 pomoću CD1c, HLA-DRB1 i CD1lc, može postojati mali postotak B ćelija koje također eksprimiraju ove markere, što nije isključeno.

ZAKLJUČCI

Iako cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1)sastoji se od manjeg podskupa DC-a (Dendritske ćelije)u homeostatskim uslovima, ova studija pokazuje značajnu korelaciju između ove stanične populacije i kliničkopatoloških karakteristika kod ljudibubregbolest. Ovo odražava njihovu vjerovatnu važnost u procesima bolesti kao što je ATN, formiranje polumjeseca u proliferativnom GN i intersticijska fibroza u imunološki posredovanom GN. Osim toga, njihova ko-lokalizacija i korelacija sa CD8t T ćelijama mogu pružiti objašnjenje za njihov mehanizam djelovanja, potvrđujući podatke sa životinjskih modela. Ovi nalazi daju poticaj za istraživanje novih terapijskih ciljeva koji manipuliraju ovim stanicama za liječenjebubregbolesti, kao što smo uradili u studijama na životinjama(6), i da istražimo njihovu upotrebu kao prognostičkog markera. Potrebne su daljnje studije i na ljudima i na životinjama kako bi se ispitala uloga cDC1 (Dendritske ćelije tipa 1), njihov mehanizam djelovanja i kako ih najbolje terapijski ciljati.

REFERENCE

1. Pakalniskyte D, Schraml BU. Specifična raznolikost tkiva i funkcije konvencionalnih dendritskih ćelija. Adv Immunol(2017)134:89-135.doi:10.1016/bs.ai.2017.01.003

2. Merad M, Sathe P, Helft J, Miller J, Mortha A. Linija dendritskih ćelija: Ontogenija i funkcija dendritskih ćelija i njihovih podskupova u stabilnom stanju i upaljenom okruženju. Annu Rev Immunol (2013)31:563-604.doi:10.1146/annual immunol-020711-074950

3. Segerer S, Heller F, Lindenmeyer MT, Schmid H, Cohen CD, Draganovići D, et al. Specifična ekspresija markera dendritskih ćelija kod humanog glomerulonefritisa.BubregInt (2008)74(1):37-46.doi:10.1038/ki.2008.99

4. Woltman AM, de Fiter JW, Zuidwijk K, Vlug AG, Bajema IM, van der Kooij SW, et al. Kvantifikacija podskupova dendritskih ćelija u ljudskom bubrežnom tkivu u normalnim i patološkim uslovima.BubregInt (2007)71(10):1001-8. doi: 10.1038/sj.ki.5002187

5. Cao Q, Lu J, LiQ, Wang C Wang XM, Lee VW, et al. Cd103 plus dendritske ćelije izazivaju reakcije Cd8 plus T ćelija na ubrzanjeBubregPovredau Adriamycin Nefropatija. J Am Soc Nephrol (2016) 27(5):1344-60.doi: 10.1681/ASN.2015030229

6. Wang R, Chen T, Wang C, Zhang Z, Wang XM, Li Q, et al. Flt3 inhibicija ublažavaHroničniBubregBolestsuzbijanjem CD103 plus aktivacije T ćelija posredovane dendritičnim ćelijama. Nephrol Dial Transplant(2019)34(11):1853-63. DOI: 10.1093/gfy385

7. Evers BD, Engel DR, Bohner AM, Tittel AP, Krause TA, Heuser C, et al Cd103 plusBubregDendritske ćelije štite od polumjesecnog GN tako što održavaju Il-10-proizvodnju regulatornih T ćelija. J Am Soc Nephrol (2016)27(11):3368-82. DOI: 10.1681/ASN.2015080873

8. Kitching AR, Ooi JD. Bubrežne dendritske ćelije: Dug i krivudavi put. J Am Soc Nephrol (2018)29(1):4-7.doi: 10.1681/ASN.2017101145

9. Kassianos AJ, Wang X, Sampangi S, Muczynski K, Healy H, Wilkinson R. Povećana tubulointersticijalna regrutacija ljudskih CD141(hi)CLEC9A( plus ) i CD1c( plus ) podskupova mijeloidnih dendritskih ćelija u bubrežnoj fibrozi i BBubregB. Am J Physiol Renal Physiol (2013)305(10): F1391-401. doi:10.1152/adrenal.00318.2013

10. Guilliams M, Dutertre CA, Scott CL, McGovern N, Sichien D, Chakaro S, et al. Nenadzirana visokodimenzionalna analiza poravnava dendritske ćelije u različitim tkivima i vrstama. Imunitet (2016)45(3):669-84.doi: 10.1016/j.immuni.2016.08.015

11. Villani AC, Satija R, Reynolds G, Sarkizova S, Shekhar K, Fletcher J, et al. Jednoćelijska RNA-seq otkriva nove tipove dendritskih ćelija ljudske krvi, monocita i progenitora. Science(2017)356(6335):4-6. DOI: 10.1126/science.aah4573

12. Almaani S, Meara A, Rovin BH. Ažuriranje o Lupus nefritisu. Clin I Am Soc Nephrol (2017)12(5):825-35.doi: 10.2215/CJIN.05780616

Bilješka:gore navedeno nije potpuna lista referenci