Terapijski učinak Cistanche Deserticola na defekaciju u modelu pacova sa senilnom opstipacijom
Mar 27, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Xia Zhang, Fa-Juan Zheng, Zhen Zhang
Abstract
POZADINA
Zatvor je jedna od hroničnih gastrointestinalnih funkcionalnih bolesti. To ozbiljno utječe na kvalitetu života. Cistanche deserticola (C. deserticola) očito može liječiti zatvor, ali njegov mehanizam nije razjašnjen. Pretpostavili smo da je njegov mehanizam poboljšao pokretljivost crijeva stimulirajući intersticijalne Cajalcells (ICC). Aktivacija C-kit receptora na površini ICC-a usko je povezana sa funkcijom ICC-a, a signalni putevi faktora matičnih ćelija (SCF)/C-kit igraju važnu ulogu u tome. Da bi se istražio mehanizam kako C. deserticola liječi zatvor, ova studija je imala za cilj da uspostavi model opstipacije kod pacova i istraži ulogu signalnog puta SCF/C-kita u liječenju.
AIM
Istražiti SCF/C-kit signalne puteve u ulozi C. deserticola u liječenju opstipacije na modelu pacova sa opstipacijom.
METODE
Četrdeset i osam 8-mostarih Sprague-Dawley pacova podijeljeno je u 4 grupe metodom slučajne težine: normalna grupa (n=12), grupa modela (n=12), grupa C. deserticola (n=12) i bloker grupa (n=12). Normalna grupa je primila normalnu fiziološku otopinu; grupa modela primala je loperamid putem sonde; blokatorska grupa je primila loperamid i C. deserticola gavažom, a STI571 je ubrizgan intraperitonealno. Tokom tretmana, težina, fekalne granule i kvalitet fekalija su snimani svakih 10 dana. Dvadesetog dana nakon indukcije modela, uklonjena su tkiva debelog crijeva svake grupe. Bojenje hematoksilinom i eozinom korišteno je za promatranje patopatoloških promjena. Nivoi ekspresije gena SCF, C-kit i Aquaporin detektovani su imunohistohemijom, Western blottingom i kvantitativnom polimeraznom lančanom reakcijom u realnom vremenu. Mitohondrije epitela debelog crijeva i peharaste ćelije promatrane su transmisijskom elektronskom mikroskopom.
REZULTATI
U poređenju sa normalnom grupom, kako je tretman napredovao, težina pacova u grupi modela i blokatora se značajno smanjila, težina stolice se smanjila, a kvalitet stolice je bio suv (P < {{0}}.{{6}="" }5).="" c.="" deserticola="" je="" preokrenula="" smanjenje="" tjelesne="" težine="" i="" težine="" stolice="" i="" poboljšala="" kvalitet="" stolice.="" histopatološka="" analiza="" je="" pokazala="" da="" je="" epitel="" sluzokože="" debelog="" crijeva="" u="" grupi="" modela="" bio="" nekompletan,="" a="" raspored="" žlijezda="" nepravilan="" ili="" oštećen.="" tretman="" c.="" deserticola="" poboljšao="" je="" integritet="" i="" kontinuitet="" epitelnih="" ćelija="" i="" pravilan="" raspored="" žlijezda.="" blokatori="" su="" inhibirali="" efekte="" c.="" deserticola="" imunohistohemija="" i="" kvantitativna="" polimerazna="" lančana="" reakcija="" u="" realnom="" vremenu="" pokazala="" je="" da="" je="" ekspresija="" scf="" i="" c-kitproteina="" ili="" gena="" u="" tkivu="" debelog="" crijeva="" modelne="" grupe="" smanjena="" (p="">< 0,05),="" dok="" je="" tretman="" s="" c.="" deserticola="" je="" povećala="" ekspresiju="" proteina="" ili="" gena="" (p=""><0,05). western="" blotting="" je="" pokazao="" da="" je="" ekspresija="" akvaporina="" apq3="" povećana,="" dok="" je="" ekspresija="" cx43="" smanjena="" u="" grupi="" modela.="" tretman="" sa="" c.="" deserticolain="" je="" inhibirao="" ekspresiju="" apq3="" i="" promovirao="" ekspresiju="" cx43.="" transmisiona="" elektronska="" mikroskopija="" je="" pokazala="" da="" su="" mitohondrije="" epitela="" debelog="" crijeva="" u="" grupi="" modela="" natečene="" i="" neuredno="" raspoređene,="" a="" mikroresice="" rijetke.="" stanje="" je="" bilo="" bolje="" u="" grupi="" c.="" deserticola.="" miševi="" tretirani="" blokatorom="" sti571="" potvrdili="" su="" da="" blokiranje="" puta="" scf/c-kita="" inhibira="" poboljšanje="" opstipacije="" od="" strane="" c.="">
ZAKLJUČAK
C. deserticola je poboljšala defekaciju kod pacova sa konstipacijom, a signalni put SCF/C-kit-a, koji je ključna karika funkcije ICC, igrao je važnu ulogu u liječenju.
Ključne riječi:Cistanche deserticola; Senilni zatvor; Faktori matičnih ćelija; C-kit
svježa cistanche sirovina
UVOD
Senilna konstipacija (SC) je jedno od čestih hroničnih gastrointestinalnih funkcionalnih bolesti kod gerijatrijskih pacijenata, koje izaziva ili pogoršava cerebrovaskularne događaje i druge bolesti i ozbiljno utiče na kvalitet života starije populacije[1,2]. Prema tradicionalnoj kineskoj medicini, glavna etiologija i patogeneza SCare gastrointestinalne vrućine, manjka Yin i Jin i crijevnog odvlaživanja[3,4], dok Cistanche deserticola (C. deserticola) može zagrijati bubrege i opustiti crijeva. Istraživači su izvijestili da učinak crijevnih poboljšanje motiliteta i liječenje SC je jasno, ali njegov mehanizam nije razjašnjen[5,6]. Intersticijalne Cajalcells (ICC) su posebna vrsta mezenhimskih ćelija u gastrointestinalnom traktu. Aktivacija C-kit receptora na površini ICC je usko povezana sa proliferacijom, diferencijacijom i funkcijom ćelija. ICC sudjeluju u patogenezi mnogih gastrointestinalnih motoričkih disfunkcija[7,8]. Aktivacija C-kita zavisi od vezivanja njegovog liganda faktora matičnih ćelija (SCF)[9]. Istražiti učinak i mehanizam djelovanja C. deserticola na SC, ova studija je imala za cilj da uspostavi model SC kod pacova induciranih loperidolom kako bi se istražila uloga signalnog puta SCF/C-kita u liječenju opstipacije od strane C. deserticola.
MATERIJALI I METODE
Eksperimentalni materijali
Eksperimentalne životinje:Eksperimentalne životinje su bile 48 mužjaka 8-mo-starih Sprague Dawley pacova težine 500-550 g; sve kupljeno od Changsha Tianqin BiotechnologyCo. Ltd. Pacovi su uzgajani u životinjskoj laboratoriji Chongqing Weisiteng BiomedicalTechnology Co. Ltd., uz normalno dnevno i noćno svjetlo, hranu i piće. Sve procedure su u skladu sa smjernicama za upravljanje koje je izdao Etički komitet Bolnice tradicionalne kineske medicine u Chongqingu.
Primarni reagensi:Primarni reagensi su uključivali loperamid (Sigma, St. Louis, MO, Sjedinjene Američke Države), C. deserticola iz Hubei Jurui Traditional Chinese Medicine DecoctionCo. Ltd., STI571 od Chinese Selleck Co. Ltd., i SCF, C-kit, connexin 43 (Cx43), akvaporin 3 (AQP3) i -aktin antitijela (Abcam, Cambridge, MA, Sjedinjene Države), PrimeScript II 1. lanac cDNA Synthesis Kit i Premix Taq™ (Ex Taq™ verzija 2.0) (Takara Co. Ltd., Japan).
dodaci ekstrakta bilja cistanche
Metode
Priprema i grupisanje SC modela:Da bi se izbjegao utjecaj zbunjujućih faktora kao što je tjelesna težina na eksperimentalne rezultate, pacovi su nasumično grupirani metodom blok slučajnog grupiranja. Četrdeset osam pacova je hranjeno adaptivno tokom 1 nedelje, a štakori su numerisani po redu težine od lakih do teških. Prema redoslijedu tjelesne težine, pacovi su podijeljeni u 12 zona (težina pacova u svakoj zoni je bila slična), sa po 4 štakora u svakoj zoni. 12 zona podijeljeno je u 4 grupe po 12 (normalna, model, C. deserticola i blokator). Pacovima u grupi modela je davan loperamid (0.0625/100 g, 10 mL/kg) putem sonde. Prva doza je udvostručena, a lijek je davan u 10:00 svaki dan, jednom dnevno tokom 20 uzastopnih dana. Normalnoj grupi je data ista količina normalnog fiziološkog rastvora putem sonde. Pored toga, modelna grupa je tretirana sa C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 ml/kg) putem sonde. Grupi blokatora dat je C. deserticola (0,156 g/100 g, 10 mL/kg) gavažom, a STI571 (25 mg/mL, 1 mL/kg) intraperitonealnom injekcijom. Tokom eksperimenta, tjelesna težina, težina stolice i stanje stolice bilježeni su svakih 10 dana. Ni kod jednog pacova nije došlo do slučajne smrti. Dvadeset dana kasnije, pacovi su ubijeni, a tkivo debelog creva je uklonjeno radi pregleda i čuvanja tečnog azota. Preostali dijelovi su fiksirani i ugrađeni.
Histopatološka analiza:Pacovi koji su gladni preko noći su anestezirani intraperitonealnom injekcijom sa 7 posto hloral hidrata (5 mL/kg) sljedećeg dana. Abdomen je otvoren kako bi se odvojilo tkivo debelog crijeva i uklonjeno je 8-10 mm debelog crijeva. Crijevni sadržaj je uklonjen laganim mućkanjem u prethodno ohlađenom polibutilensukcinatu i fiksiran 24 h u 4-postotnom rastvoru paraformaldehidnog fiksatora. Izvršeno je konvencionalno ugrađivanje parafina. Presjeci tkiva (5 μm) su uklonjeni radi bojenja hematoksilinom i eozinom, a histopatološka morfologija je promatrana pod mikroskopom.
Detekcija ekspresije SCF i C-kita imunohistohemijskim bojenjem:Parafinska tkiva ispitana histopatološkim pregledom iznad su isječena, rehidrirana sa etanolom sa gradijentom devoskaranog ksilenom, antigenom popravljenim toplinom i zapečaćena 1 h kozjim serumom na sobnoj temperaturi. SCF i C-kit primarna antitijela su dodavana u kapima, a tkiva su držana preko noći na 4 stepena. Nakon ispiranja polibutilensukcinatom, peroksidaza hrena je ukapana da označi sekundarno antitijelo, isprana polibutilen sukcinatom 5 minuta, kap 2,4-kromogena otopine diaminomaslačne kiseline, ponovno bojenje hematoksilinom, reverzni gradijent dehidratacije alkohola, transparentan neutralnim ksilenom pečat od smole. Mikroskopski, jezgre su bile ljubičasto-plave, a pozitivni rezultati bili su smeđe žute ili žute čestice.
Detekcija ekspresije C-kit mRNA u tkivu debelog crijeva kvantitativnom lančanom reakcijom polimeraze u realnom vremenu (RT-qPCR):Smrznuto tkivo debelog crijeva štakora je mljeveno homogenizatorom i dodano je 1 mL RNAiso Plus. Ukupna RNK tkiva debelog crijeva ekstrahirana je metodom hloroform/izopropanol, a kvalitet RNK detektovan je gel elektroforezom. Nakon što je identificiran Bio-Rad gel snimačem, 1 ug RNK je reverzno transkribovan u cDNK pomoću kompleta za sintezu cDNK 1. lanca Takara PrimeScript II. Prema NCBI bazi podataka Gen ID: 64030, CDS regija C-kit gena je pronađena i kombinovana sa NCBI Primer-Blast dizajn Prajmer sekvenca, koju je sintetizirao Sangon Biotech Co. Ltd, C-kit sekvencija prajmera 5'-AGGT GTACCGTTCCTGTCCC-3', antisense lanac 5'-GGCTGGATTTGCTCTTTGCTGT-3', - aktin osjetilni lanac 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', antisens lanac 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'. PCR amplifikacija je izvedena na Bio-RadCFX90 PCR instrumentu u realnom vremenu. Uslovi za PCR test su bili početna denaturacija na 95 stepeni u trajanju od 5 minuta, 30 ciklusa od 95 stepeni u trajanju od 30 s, 60 stepeni tokom 30 s i 72 stepena u trajanju od 1 minuta, nakon čega je usledilo konačno produženje na 72 stepena tokom 10 minuta. 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct vrijednost - -actin Ctvalue) je uzet za analizu relativne ekspresije gena.
Detekcija nivoa ekspresije proteina Cx43 i AQP3 u tkivu debelog creva Western blottingom:Sakupljeno je oko 1 cm smrznutog tkiva debelog crijeva i lizirano RIPA jakom piroliznom tekućinom (100 μL). Tkivo je homogenizovano staklomogenizatorom 20 puta i prebačeno u epruvetu za centrifugu od 1,5 mL. Supernatant je ekstrahiran nakon centrifugiranja na 12000 rpm na 4 stepena u trajanju od 5 minuta, a koncentracija ukupnog proteina u supernatantu određena je BCA metodom. Uklonili smo 25 ug denaturiranog proteina da bismo izvršili elektroforezu natrijum dodecil sulfat-poliakrilamid gela, a zatim prebacili proteine u gelu na poliviniliden fluoridnu membranu pri konstantnoj struji od 200 mA, a zatim zatvorili 5-postotnom tekućinom za obrano mlijeko na sobnoj temperaturi 2 h. Odgovarajuća primarna antitijela su razrijeđena tečnošću za zaptivanje, inkubirana na 4 stepena preko noći, zatim isprana otpornost membrane i dodana druga antitijela. Nakon dodavanja ECL tečnosti, stavljeni su pod merač ekspozicije radi ispitivanja analizom optičke gustine.
Transmisiona elektronska mikroskopija:Uzeli smo oko 1 cm proksimalnog tkiva debelog crijeva, fiksirali ga u 2,5 posto glutaraldehida na 24 h, dehidrirali ga gradiranim acetonom, ugradili u Epon812 i izrezali ultratanke rezove od 50 nm na ultramikrotomu. Isječci su obojeni tekućinom za bojenje uran dioksid acetatom i olovo citratom na sobnoj temperaturi 10 min. Posmatrali smo resice debelog crijeva, mitohondrije epitelnih ćelija i peharaste ćelije pod Philips Tecnai{7}} transmisionim elektronskim mikroskopom.
Statistička analiza
Za analizu podataka korišten je softver SPSS 19.0, a za crtanje rezultata korišten je softver GraphPad Prism8.4. Za testiranje normalnosti korišten je Shapiro-Wilkov test. Podaci sa normalnom distribucijom predstavljeni su srednjom vrijednosti ± SD. Stavke greške su korištene za predstavljanje srednje vrijednosti ± SD hemoglobina nakon tretmana. Studentov t-test je korišten za poređenje između dvije grupe. Analiza varijanse korištena je za poređenje između više grupa. Student-Newman-Keulsova metoda je korištena za poređenje između više grupa u parovima, a Dunnettov test je korišten za mjerenje razlika između svake eksperimentalne grupe i kontrolne grupe u nizu. Povezani podaci mjereni su u više vremenskih tačaka, a ponovljena analiza podataka mjerenja varijanse je bila sprovedeno. Ako je test sferičnosti pokazao P > 0.{{10}}5, korištena je analiza varijanse ponovljenih mjernih podataka. Ako je P < 0,05,="" uzeta="" je="" jednačina="" generalizirane="" procjene.="" podaci="" koji="" nisu="" odgovarali="" normalnoj="" distribuciji="" predstavljeni="" su="" sa="" m="" (p25,="" p75),="" a="" za="" poređenje="" između="" grupa="" korišten="" je="" kruskal-wallis="" h="" rank-sum="" test.="" χ2="" test="" je="" korišten="" za="" poređenje="" između="" grupa="" kada="" su="" podaci="" bili="" neuređeni="" podaci,="" a="" pearsonov="" χ2="" test="" je="" korišten="" ako="" je="" udio="" ćelija="" sa="" teoretskom="" frekvencijom="">< 5="" bio="">< 20="" posto.="" ako="" je="" udio="" ćelija="" sa="" teoretskom="" frekvencijom="">< 5="" bio="" veći="" ili="" jednak="" 20="" posto,="" korišten="" je="" fisherov="" egzaktni="" test.="" p="">< 0,05="" je="" korišteno="" da="" se="" utvrdi="" da="" je="" razlika="" statistički="">
Slika 1. Histopatološke promjene debelog crijeva.
REZULTATI
Opšti uslovi
Dan nakon davanja loperamida u poređenju sa normalnom grupom, tjelesna težina i težina stolice u grupi modela su značajno smanjene (P < {{0}}.05),="" ali="" nije="" bilo="" značajne="" razlike="" u="" kvalitetu="" stolice="" rezultat="" (p=""> 0,05). Liječenje C. deserticola u grupi modela usporilo je smanjenje tjelesne težine i težine stolice (P< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">
Histopatologija debelog crijeva
Bojenje tkiva debelog crijeva pacova hematoksilinom i eozinom prikazano je na slici 1. U normalnoj grupi crijevne resice su bile intaktne, crijevna sluznica je bila netaknuta i kontinuirana, ćelije i žlijezde su raspoređene uredno. Sluzokoža i submukoza nisu infiltrirane inflamatornim stanicama, a struktura tkiva je normalna. U modelnoj grupi, crijevne resice i sluznica su u velikoj mjeri uništene, lokalne resice su odlijepljene i labavo raspoređene, a dio strukture žlijezde je nestao. U grupi C. deserticola, histopatološko bojenje je bilo manje nego u grupi modela, ali je postojala nekroza u nekim peharastim ćelijama. Nakon intraperitonealne injekcije u blokatorskoj grupi, u poređenju sa grupom C.deserticola, i dalje je postojao lokalni gubitak crijevnih resica, a došlo je i do prijeloma i gubitka crijevne sluznice.
Slika 2. Ekspresija faktora matičnih ćelija i omjera relativne optičke gustoće u tkivu debelog crijeva imunohistohemijskom detekcijom.
Detekcija ekspresije faktora matičnih ćelija i C-kit proteina imunohistohemijskim bojenjem
Imunohistohemijsko bojenje je pokazalo da su SCF i C-kit eksprimirani u debelom crijevu kontrolne grupe. U poređenju sa kontrolnom grupom, ekspresija SCF-a i C-kita u grupi modela je značajno smanjena (P < 0.05).="" u="" poređenju="" sa="" modelnom="" grupom,="" ekspresija="" scf="" i="" c-kita="" u="" grupi="" c.="" deserticola="" je="" značajno="" povećana="" (p="">< 0.05).="" nije="" bilo="" razlike="" u="" ekspresiji="" scf="" i="" c-kita="" između="" blokatora="" i="" grupe="" modela="" (p="">< 0,05,="" slike="" 2="" i="">
RT-qPCR
RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05). Ovi rezultati su pokazali da je ekspresija C-kita koju je prilagodila C. deserticola učestvovala u poboljšanju opstipacije, a blokatori su inhibirali efikasnost C. deserticola.
prednosti cistanche salse
Western blotting
Western blotting je pokazao da je AQP3 protein izražen na niskom nivou u normalnoj kontrolnoj grupi, dok je značajno povećan u modelskoj grupi u poređenju sa kontrolnom grupom (Slika 5) (P < 0.05)="" .="" ekspresija="" aqp3="" proteina="" je="" smanjena="" nakon="" tretmana="" sa="" c.="" deserticola,="" a="" inhibitorni="" efekat="" c.deserticola="" na="" ekspresiju="" aqp3="" je="" inhibiran="" tretmanom="" blokatorima="" (p="">< 0,05).="" ekspresija="" cx43="" je="" bila="" suprotna="" od="" one="" kod="" aqp3.="" ovi="" rezultati="" sugeriraju="" da="" je="" farmakološki="" učinak="" c.="" deserticola="" na="" pacove="" sa="" sc="" postignut="" promoviranjem="" ekspresije="" cx43="" i="" inhibicijom="" ekspresije="" aqp3="" (slike="">
Transmisiona elektronska mikroskopija
Nakon indukcije loperamidom, došlo je do oticanja mitohondrija i autofagije u nekim epitelnim stanicama sluznice debelog crijeva u grupi modela. Smanjio se broj i dužina crijevnih mikroresica, a došlo je i do piknoze peharastih stanica (Slika 8). Nakon tretmana C. deserticola, povećao se broj crijevnih mikroresica. Themikrovilli su bili uredno raspoređeni, a struktura je bila kompletna. Peharaste ćelije kraće dužine, nepravilne morfologije mitohondrija i izražene piknoze peharastih ćelija.
Slika 3. Ekspresija C-kita i omjera relativne optičke gustoće u tkivu debelog crijeva imunohistohemijskom detekcijom.
DISKUSIJA
Konstipacija je česta pojava u starijoj populaciji i jedan je od čestih simptoma koji utječu na zdravstveno stanje i kvalitetu života starijih osoba[10,11]. U smislu tradicionalne kineske medicine, Bai et al [12] vjerovali su da je osnovna patogeneza SC disfunkcija provodne funkcije debelog crijeva, senilna tjelesna insuficijencija, postepeni gubitak funkcija jetre i bubrega, nedostatak qi-ja i krvi i gubitak tjelesne tekućine. ,što je dovelo do suhe stolice, što je rezultiralo zatvorom[13]. SC vrši pritisak na pacijente i njihove porodice u mnogim aspektima, te je važno istražiti njegovu patogenezu.
C. deserticola ima funkciju toniziranja Yang bubrega, koristi krvi i reguliše imunitet tijela[14]. C. deserticola i kineski biljni izvarak koji sadrži C. deserticola se naširoko koristi u liječenju zatvora, a klinički učinak je izvanredan. Du i saradnici [15] su na štakorskom modelu Jang deficita i zatvora otkrili da C. deserticola poboljšava amplitudu kontrakcije izolovanog debelog crijeva, pojačava kontraktilnost crijevnog trakta i vraća nivo gastrointestinalnih hormona na normalu. Osim toga, dijetalna vlakna C. deserticola, nusproizvod C. deserticola, poboljšavaju kapacitet zadržavanja vode u fecesu, a prednost imaju niske doze i dobar učinak na ishranu crijeva i poboljšanje defekacije[16]. Naša studija je otkrila da liječenje C. deserticola poboljšava fekalnu vlagu i histopatologiju debelog crijeva pacova sa zatvorom.
ICC se nalaze u cijelom crijevnom traktu i igraju vitalnu ulogu u neuralnoj kontroli crijevnog pokreta kao pejsmejkeri i prijenos crijevnih živaca[17]. Protoonkogen kodirajući receptor tirozin kinaze, C-kit, eksprimiraju ICC, a SCFi je ligand C-kit[18]. SCF/C-kit sistem je ključan u razvoju ICC-a. SCF/C-kit signalni put je analiziran tokom tretmana sporog transfera konstipacije kod pacova akupunkturom[19]. Elektroakupunktura na Tianshu tački povećala je broj ICC-a debelog crijeva kod miševa tretiranih ACK2-, povećala je ekspresiju SCF i C-kit proteina i preokrenula fenotip ICC-a. Recept za osnažujući qi i slezinu može povećati ekspresiju ICC-a u tkivu debelog crijeva i povećati ekspresiju C-kita i SCF mRNA, čime se poboljšavaju simptomi opstipacije[20]. U našoj studiji, imunohistohemija je pokazala da C. deserticola značajno pojačava ekspresiju SCF i C-kit proteina u pacovskom modelu SC, a RT-qPCR je pokazao da C. deserticola značajno povećava ekspresiju C-kitmRNA. C-kit blokator inhibirao je regulaciju ekspresije SCF-a i C-kita izazvanu C. deserticola.
Sadržaj fekalne vode i transport vode u debelom crijevu usko su povezani s AQP, koji igraju važnu ulogu u metabolizmu crijevne vode[21]. U studiji na štakorima sa konstipacijom sporog transporta, dekokcija defekacije je značajno poboljšala simptome zatvora regulacijom crevne apsorpcije vode kroz smanjenje AQP3 i AQP4[22]. U modelu funkcionalne konstipacije kod pacova, mehanizam tretmana oralne Xiaofu Tongjie tečnosti za funkcionalnu konstipaciju može se realizovati regulacijom ekspresije vazoaktivnog intestinalnog polipeptida i AQP3 u debelom crevu[23]. Gapjunkcije igraju bitnu ulogu u posredovanju sinhrone kontrakcije glatkih mišića. Cx43 je najvažniji protein tokom tog procesa[24]. Gubitak ekspresije Cx43 može biti djelimično odgovoran za motoričku disfunkciju glatkih mišića[25]. Popravak strukture mreže crijevnog nervnog sistema kod pacova sa sporom tranzitnom konstipacijom može poboljšati ekspresiju Cx43 itd. i simptome opstipacije[26]. ekspresija AQP3 smanjuje sadržaj fekalne vode, što dovodi do zatvora, što može biti važan mehanizam konstipacije. Ekspresija Cx43 može biti povezana sa kontrakcijom glatkih mišića crijeva i smanjiti pojavu zatvora. U našoj studiji, western blotting je pokazao da je ekspresija Cx43 povećana, a ekspresija AQP3 inhibirana tretmanom C.deserticola, što je rezultiralo povećanom kontrakcijom glatkih mišića i smanjenom apsorpcijom vode, a tretman blokatorima je preokrenuo ove efekte.
Za više informacija kliknite ovdje.
ZAKLJUČAK
U zaključku, C. deserticola može inhibirati ekspresiju AQP3 i promovirati ekspresiju Cx43 putem SCF/C-kit puta, čime se poboljšava konstipacija izazvana byloperaminom i smanjuje oštećenje tkiva debelog crijeva kod starijih pacova. Ova studija je pružila dobru teorijsku osnovu za kliničku upotrebu C. deserticola.
