Terapeutski efekat i mehanizam ekstrakcije Ligusticum Wallichii i recept za indukovanu testosteronom 57 HairL/6 B Cin C

SAŽETAK:

CILJ Uvidjeti efekte lokalne primjene ekstrakta Ligusticum wallichii i njegovog složenog ekstrakta (uključujući Ligusticum wallichii,Cistanche, Đumbir, Platycladus orientalis, Ginseng, Salvia miltiorrhiza, Polygonum multiflor/6 na C57Llorum) model miševa seboroične alopecije, a zatim istražite mehanizme uključene u to.

METODE Model seboroične alopecije kod miševa C57BL/ 6 indukovan je primjenomtestosteronrastvor na poleđini 21 dan. Nakon tretmana različitih koncepata ekstrakta Ligusticum wallichii i njegovog ekstrakta kontrakcije, procijenjena je dužina i pokrivenost nove dlake kod miševa. kosa gtr Koža Promjene vlage, ulja i temperature mjerene su kožnim testom. Histološke promjene kao što su debljina kože, oblik folikula dlake i veličina miševa u svakoj grupi mjerene su mikroskopom. Nivoi -MSN, TGF- 1 i VEGF u koži miševa nakon

Primjena je otkrivena ELISA-om.

REZULTATI Alkoholni ekstrakt Ligusticum wallichii podstakao je rast dlake kod miševa sa alopecijom, a efekat grupe sa niskim dozama bio je bolji od onog u grupi sa visokim dozama i grupi sa formulom jedinjenja. Rezultati vrijednosti vlage, ulja i temperature pokazali su da je vlažnost kože modela miševa smanjena, sadržaj ulja povećan, sljepoočnica je blago povećana. Nakon tretmana, sadržaj vode, sadržaj ulja i temperatura miševa su se vratili na normalne vrijednosti. Histološki rezultati su pokazali da Ligusticum wallichii i njegov složeni oblik mogu povećati debljinu kože i utrnuti

folikula dlake u fazi rasta miševa. Štaviše, visoke i niske doze Ligusticum wallichii i formula jedinjenja mogu u različitoj mjeri promovirati sadržaj -MSN, TGF- 1 i VEGF u koži miševa.

ZAKLJUČAK Lokalna primjenatradicionalne kineske medicineLigusticum wallichii može promovirati rast dlake kod miševa s androgenom alopecijom l obnavljanjem moi i temperature kod miševa modela alopecije i povećanjem kožnog VEGF-a, -MSN-a i TGF- 1.

KLJUČNE REČI: Ligusticum wallichii; C57BL/6mice; seboroična alopecija;testosteron

Tradicionalna kineska medicinavjeruje da je formiranje opadanja kose povezano sanedostatak jetre i bubregaislabost qi-ja krvi. Mnogi tradicionalni kineski lijekovi imaju funkcijehrani jetru i bubrege, hranljiva esencija i krv, hlađenje krvi i poticanje cirkulacije krvi, a često se koriste za alopeciju i leukoplakiju. Chuanxiong ima karakteristike tople prirode, oštrog okusa i blago gorkog okusa. Prvi put je zabilježen u "Shen Nong's Materia Medica", a može se koristiti u kombinaciji s drugim lijekovima za pospješivanje cirkulacije krvi, promoviranje qi-ja, izbacivanje vjetra i ublažavanje bolova [7]. Drugi tradicionalni kineski lijekovi kao što je đumbir imaju funkciju ublažavanja spoljašnjosti i raspršivanja hladnoće, zagrijavanja sredine i ublažavanja povraćanja, zagrijavanja pluća i kašlja [8]; Polygonum multiflorum hrani krv i obnavlja esenciju [9]

Arborvitae ostavlja hladnu krv i crnu kosu [9-10]; Salvia miltiorrhiza pospješuje cirkulaciju krvi, otklanja zastoj krvi i ublažava bol[11];

. Savremena istraživanja su otkrila da ih je mnogotradicionalne kineske medicinespojevi ili pojedinačni recepti mogu potaknuti rast folikula dlake i kose, te imaju značajan utjecaj na gubitak kose. Nekitradicionalni kineski lekovimože inhibirati aktivnost 5 -reduktaze, imati protuupalno, antibakterijsko, antioksidativno i druge fiziološke aktivnosti, a sve to pomaže u sprječavanju gubitka kose. Budući da aktivni sastojci tradicionalne kineske medicine imaju blage učinke i imaju nutritivno i ljekovito djelovanje, posljednjih godina se sve više koriste u kozmetici za rast kose [13].

Cistanche protiv starenja

U ovom eksperimentu, AGA model je uspostavljen na C57BL/6 miševima primjenomtestosteronna leđima, te su proučavani učinci ekstrakta Chuanxiong i formule spoja (uključujući Chuanxiong, đumbir, list orijentalnog orijentalisa, ginseng, Salvia miltiorrhiza, Polygonum multiflorum) i njegovo djelovanje. mehanizam u cilju davanja novih ideja za razvoj novih preparata i novih formulacija za prevenciju opadanja kose.

1 Materijali

1.1 Reagensi i lijekovi

Chuanxiong, Ginger, Cistanche, Arborvitae, Panax ginseng, Salvia miltiorrhiza i Polygonum multiflorum su kupljeni od CHENGDU WECISTANCHE BIOTECH; Testosteron (Lot: 58-22-0) je kupljen od kompanije Ron Reagent; Minoksidil tinktura (Lot: 20210615) kupljena je od Zhejiang Wansheng Pharmaceutical Co., Ltd.; bezvodni etanol (serijski broj: 2021-12-1) je kupljen od Jindong Tianzheng fabrike finih hemijskih reagensa; hloral hidrat (broj serije: 302-17-0) je kupljen od McLean Reagent Company; - Komplet melanocit-stimulirajućeg hormona (-MSH) kupljen je od CUSABIO Reagent Company (serijski broj: N20016218); Transformirajući faktor rasta- 1 (TGF- 1) komplet je kupljen od Signalway Antibody Reagent Company (br. serije: 211230); Komplet za faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF) kupljen je od kompanije Signalway Anti-body Reagent Company (broj serije: 211230).

Cistanche Snack

1.2 Instrumenti

Čitač mikroploča (Thermo Fisher Scientific), mašina za ugradnju EG1160 (Leica, Njemačka); Tissue-Tek® GlasTM 6410 automatska mašina za zatvaranje zatvorenog tipa (Sakura, Japan); YD-AB posipač (Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd.); 1/100,000 analitička vaga (sartorius, MSX), ultrazvučna mašina za čišćenje (tip KQ-100), tester kože (Fuxi), grijaći omotač (PTHW HEAT-ER), optički mikroskop (BX53 , Olympus), rotacioni isparivač, homogenizator tkiva (KFBIO), centrifuga (Cence, H1650R).

1.3 Životinje

C57BL/6 miševi (SPF klasa), mužjaci, stari 5-6 sedmica, fizički

Količinu od 18-22 g obezbijedio je Centar za eksperimentalne životinje Southern Medical University, broj licence: SCXK (Guangdong) 2016-0041.

2 Eksperimentalna metoda

2.1 Priprema medicinskog rastvora

Za ekstrakt Chuanxionga (pojedinačni lijek), izvažite ljekovite materijale Chuanxionga, dodajte 4 puta veću količinu 75 posto etanola (v/v) i zagrijavajte pod refluksom za ekstrakciju 4 h. Za složeni ekstrakt izvažite Chuanxiong, đumbir, listove arborvitae, ginseng, Salvia i Polygonum multiflorum (omjer je 1:1:1:1:1:1) i dodajte 4 puta veću količinu 75 posto etanola (v/v) refluksovati za ekstrakciju 4 sata. Ekstrakti pojedinačnih lijekova i spojeva filtrirani su gazom kako bi se uklonili ostaci lijeka i koncentrirani u rotacionom isparivaču. Ekstrakt Chuanxionga je koncentrisan na 1 g·mL-1 (uključujući sirovi lijek), kao grupa visokih doza Chuanxionga; prije upotrebe, grupa s visokim dozama je razrijeđena na 0.5 mg·mL-1 kao grupa s niskom dozom Chuanxionga. Za Chuanxiong, Ginger, Arborvitae, Panax ginseng, Danshen i Polygonum multiflorum grupu jedinjenja, koncentrisanih na 1 g·mL

-1 (uključujući ukupnu količinu sirovih droga). Pripremljeni ekstrakt čuvajte u frižideru na 4 stepena.

Cistanche poboljšava testosteron

2.2 Modeliranje

Osim slijepe grupe, miševi C57BL/6 u drugim grupama su anestezirani intraperitonealnom injekcijom hloral hidrata (4 posto, w/v), a stražnja dlaka je uklonjena kremom za depilaciju u dozi od 10 mg·kg.

-1 doza testosterona mazana je po leđima miševa 21 dan. Nakon 21 dana, kada je stražnja strana miša bila glatka i ružičasta, a dlaka više nije rasla, modeliranje se smatralo uspješnim.

2.3 Grupisanje životinja i administracija

C57BL/6 (SPF stepen) mužjaci miševa su nasumično podijeljeni u 6 grupa, sa po 6 miševa u svakoj grupi, koji su pohranjeni u odvojenim kavezima i označeni brojevima [prazna grupa, grupa modela, grupa pozitivna na minoksidil, grupa sa niskim dozama chuanxionga i visoka -doza chuanxiong grupe. , Složena grupa (Chuanxiong: Đumbir: Arborvitae: Ginseng: Salvia: Polygonum multiflorum=: 1: 1: 1: 1: 1)].

Nakon uspješnog modeliranja, miševi u grupi modela nisu dobili primjenu; druge grupe miševa su premazane sa 0.3 mL rastvora minoksidila (2 procenta), visokim i niskim dozama Chuanxiong ekstrakta i formulacije jedinjenja na leđima, respektivno. 12 dana, jednom dnevno. Nakon primjene, leđa miševa su prekrivena plastičnom folijom odgovarajuće veličine kako bi se spriječio gubitak otopine lijeka s leđa. Tokom perioda davanja, rast dlake na leđima miševa u svakoj grupi je posmatran i beležen svaki dan.

2.4 Određivanje nove dužine i pokrivenosti kose

Osmog, 10. i 12. dana primjene, iz svakog miša je nasumično izvučeno 10 dlaka, a dužina dlake (mm) je mjerena ravnalom. Efekat promocije EE1 (Efekat poboljšanja) izračunava se prema sljedećoj formuli:

Efekat pojačanja (dužina kose) =

Dužina kose (primijenjena grupa)

Dužina kose (skup modela)

Formula (1)

U formuli (1), dužina dlake (grupa za davanje) je srednja vrijednost novorođene dužine dlake miševa u svakoj grupi lijekova (n=6); dužina dlake (modelna grupa) je srednja vrijednost novorođene dužine dlake miševa u kontrolnoj (modelskoj) grupi (n=6).

4., 8. i 12. dana primjene, površina pokrivena tek rođenom dlakom na leđima miševa izračunata je softverom imageJ, a pokrivenost dlakama ( posto ) i promotivni efekat EE2 izračunati su prema sljedećoj formuli :

Pokrivenost kose ( posto )=Područje kose Područje stražnje depilacije

Formula (2)

Promotivni efekat (stopa pokrivenosti dlačicama)=stopa pokrivenosti kose (administrativna grupa) stopa pokrivenosti kose (grupa modela)

U formuli (3), područje dlake u formuli (2) je područje koje pokriva novorođena dlaka na zadnjoj strani miša, a depilirano područje na leđima je područje cijelog obrijanog područja na stražnjoj strani miša. miš; u formuli (3), pokrivenost kose (administrativna grupa) je površina svake Prosječni postotak pokrivenosti novim dlačicama u administrativnoj grupi (n=6), a pokrivenost kose (kontrolna grupa) je prosječna vrijednost postotka nove kose u kontrolnoj (modelnoj) grupi (n=6).

2.5 Određivanje vlažnosti kože, ulja i temperature

Nakon 12-dnevnog tretmana miševa, tester kože (Fuxi) je korišten za mjerenje i snimanje vrijednosti vlage, ulja i temperature kože leđa miševa, kako bi se istražili različiti efekti testosterona i lijekova na ove indikatore kože i procijeniti učinak lijekova na miševe AGA modela. terapeutski efekat.

2.6 Histološko posmatranje kože miša

Nakon 12 dana tretmana, miševi su žrtvovani, koža leđa je odmah uklonjena, fiksirana 4-postotnom otopinom paraformaldehida, dehidrirana, stavljena u parafin, isječena, obojena hematoksilin-eozinom (HE), a obojene kriške su stavljene u potpuno automatski Struktura kože, promjene debljine i rast folikula dlake kod miševa u različitim grupama promatrani su skeniranjem na skeneru slajdova (KFBIO).

2.7 Određivanje faktora -MSH, TGF- 1 i VEGF u koži miša

-MSH, TGF- 1 i VEGF faktori su funkcionisali prema relevantnim uputstvima za Miš -MSH kit, Miš TGF- 1 komplet i Miš VEGF kit, respektivno.

2.8 Metoda statističke obrade

Za statističku analizu korišten je statistički softver SPSS 21.0, a eksperimentalni podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (x ± s).

Podrška:

wallence.suen@wecistanche.com