Proučavanje kriški Cistanche Deserticola i proizvoda Cistanche Deserticola prerađenog parom

Razlika hemijskih komponenti i bioloških aktivnosti kriški sirovih proizvoda i proizvoda obrađenog parom vina iz Cistanchea

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Ying Zhang, 1,2 Yuewu Wang, 3 Song Yang, 1 Yunfeng Xiao, 3 Haibin Guan, 2 Xin Yue, 2 Xiaoqin Wang, 2 i Xiangri Li 1

Abstract

Kao dobro poznati kineski biljni lijek,Cistanche deserticolakoristi se za liječenje sindroma nedostatka bubrega u Kini hiljadama godina. Oba sirovi proizvodCistanche deserticola kriške(RCD) i njegoveProizvod prerađen parom vina(WSCD) se klinički koriste za različite efekte. U ovoj studiji uticaji procesa parenja sa vinom (SPW) izCistanche deserticolaistraženi su hemijski sastavi i biološki efekti. Analiza glavnih komponenti (PCA) i kvantitativna analiza korištene su za proučavanje razlika u hemijskom sastavu. Efekti hranjenja bubrega su također istraženi kako bi se uporedile razlike između RCD (kriške cistanche deserticola)i WSCD (Proizvod prerađen parom vina). Rezultati PCA su pokazali da je očigledno razdvajanje postignuto u RCD-u(kriške cistanche deserticola)i WSCD (Proizvod prerađen parom vina). Rezultati kvantitativne analize su pokazali da WSCD ima veće količine ukupnih polisaharida, ukupnih PhG, izoakteozida i osmantuzida B od RCD(kriške cistanche deserticola), dok se sadržaj 2′-acetilakteozida i akteozida smanjio nakon SPW. Poređenje RCD i WSCD na biološke aktivnosti pokazalo je da oba mogu obnoviti nivo polnih hormona u modelu nedostatka bubrega i janga i poboljšati antioksidativni efekat. WSCD(Proizvod prerađen parom vina)bio mnogo bolji u povećanju težine unutrašnjih organabubregi sjemenih mjehurića. Rezultati su pokazali da je SPW promijenio svoje hemijske komponente i poboljšao svoje biološke aktivnosti.

1. Uvod

Cistanche deserticolaje uobičajena tradicionalna kineska medicina i općenito se koristi kao tonik u Kini i Japanu dugi niz godina, poznatiji kao "pustinjski ginseng".Cistanche deserticolaje prvi put zabilježen kao vrhunski u "Shennongovom biljnom klasiku Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)" oko 100 godina prije Krista i korišten je za liječenje raznih bolesti uključujući nedostatak bubrega, impotenciju, žensku neplodnost, morbidnu leukoreju, obilje metroragije (bijelci) , osjećaj hladnoće u slabinama i kolenima i kronični zatvor kod starijih osoba [1]. Do sada je izolirano nekoliko glavnih sastojaka, kao što su polisaharidi [2, 3], feniletanoidni glikozidi (PhG) [1, 4], iridoidi [1] i lignanoidi [1, 5]. Među njima, PhGs i polisaharidi su se pokazali kao glavne biološki aktivne komponente uCistanche deserticola[6–9]. Moderni farmakološki eksperimenti su dokazali da Cistanche deserticola može poboljšati proizvodnju testosterona i zaštititi spermu, stimulirati proliferaciju stanica i povećati stopu preživljavanja stanica, pokazujući izražene aktivnosti za seksualnu potenciju, poboljšanje pamćenja, protiv starenja, uklanjanje slobodnih radikala i neuroprotekciju [10 –13].

Kako bi se smanjila toksičnost i/ili pojačali učinci, većinu tradicionalnih kineskih biljaka treba obraditi prije nego što se izdaju na recept. Tradicionalni procesi uključuju čišćenje, proces vode (mljevenje u vodi, kuhanje na pari i pečenje) i proces vatre (zagrijavanje s vinom, octom, solju ili medom) [14]. Tokom procesa hemijske komponente se mogu menjati: relativni sadržaj pojedinih komponenti može biti promenjen ili se mogu formirati nove komponente [15]. The Process ofCistanche deserticolaima dugu istoriju iCistanche deserticolatreba obraditi namakanjem u pirinčanom vinu, kuhanjem na pari kako je opisano u Kineskoj farmakopeji (izdanje 2015.) [16]. Dokazano je da SPW utječe na njihov učinak na meridijan bubrega prema teoriji tradicionalne kineske medicine (TCM) [17]. WSCD(Proizvod prerađen parom vina)je prvi put dokumentovano u "Lei Gongs Traktatu o pripremi i kuhanju Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)" u Sjevernoj i Južnoj dinastiji Kine. WSCD se bolje koristi za liječenje nedostataka bubrega i zaštitu sjemena kao što je zabilježeno u "Taiping Shenghui Fang" u kineskoj dinastiji Song. Međutim, nije bilo uporednih studija o hemijskim komponentama između RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)do sad.

Moderna farmakološka istraživanja su pokazala da WSCD može tonizirati bubreg kako bi osigurao esenciju stimulacijom osovine hipotalamus-hipofiza-gonada u različitim stupnjevima i koristi se u liječenju nedostatka bubrega kao što je nedostatak bubrega-yanga [18]. Međutim, do sada su razlike u biološkim aktivnostima između RCD-a(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)nisu istražene. Nedavno je, kako bi se olakšalo eksperimentalno istraživanje, životinjski model nedostatka bubrega-janga dupliciran ubrizgavanjem velike doze hidrokortizona pacovima, pri čemu će štakori pokazivati ​​simptome koji uvelike nalikuju onima opisanim u bubrežno-jang nedostatku TCM-a [19, 20]. . Štakori s nedostatkom janga bubrega uvijek imaju neke simptome kao što su gubitak težine, smanjenje potrošnje hrane, slabost, povećan unos vode i smanjena aktivnost. Na osnovu ovog životinjskog modela, otkrivene su razlike u nutritivnom efektu na bubrege između RCD i WSCD i čak su otkrile naučnu suštinu tradicionalnog kineskog procesa.

Cistanche deserticola ima mnogo funkcija

2. Materijali i metode

2.1. Materijali i hemikalije

Standardna supstanca kao što su akteozid, izoakteozid, ehinakozid, cistanozid A i 2′-acetilakteozid kupljena je od Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Šangaj, Kina). Cistanozid F, cistanozid C, osmantuzid B i tubulozid B kupljeni su od Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Chengdu, Kina). Čistoća svih standarda nije bila manja od 98 posto. HPLC grade metanol i acetonitril su nabavljeni od Aladdin Chemistry Inc. (Šangaj, Kina). Dejonizovana voda je dobijena korišćenjem MilliQ50 SP Reagent Water System (Bedford, MA, SAD) za pripremu uzoraka i mobilnih rastvora. Svi ostali organski rastvarači korišteni u ovoj studiji bili su analitičkog kvaliteta i kupljeni su od Shanghai Chemical Co. Ltd (Šangaj, Kina).

2.2. Zbirka uzoraka

Sve sirovoCistanche deserticola(7 serija uzoraka) prikupio je Medicinski univerzitet Unutrašnje Mongolije iz provincija Unutrašnja Mongolija i Ningxia. Svi su identifikovani kaocistanche deserticolaYC Ma od Xiao-qin Wanga, profesora odsjeka za farmakognoziju na Medicinskom univerzitetu Unutrašnje Mongolije. Uzorak vaučera deponovan je na Farmaceutskom fakultetu Medicinskog univerziteta Unutrašnje Mongolije. Nakon sakupljanja, cvatoviCistanche deserticolasu uklonjene, stabljike su narezane i osušene na sobnoj temperaturi na zraku, a zatim su kriške nasumično podijeljene u dvije grupe u svakoj seriji: jedna je RCD(kriške cistanche deserticola)a drugi se koristi za pripremu WSCD(Proizvod prerađen parom vina).

WSCD(Proizvod prerađen parom vina)pripremljeni su u laboratoriji prema kineskoj farmakopeji (izdanje 2015.) [16], što znači da je narezani RCD(kriške cistanche deserticola)natopljeni su u pirinčanom vinu sa zatvorenom posudom 6h dok ne omekšaju, pareni u vodenom kupatilu dodatnih 12h dok površina ne pocrni, i sušeni na sobnoj temperaturi na vazduhu.

2.3. Analiza glavnih komponenti (PCA)

Analiza glavnih komponenti (PCA) je sofisticirana tehnika koja se široko koristi za smanjenje dimenzija multivarijantnih problema. On smanjuje dimenzionalnost originalnog skupa podataka objašnjavajući korelaciju između velikog broja varijabli u smislu manjeg broja osnovnih faktora bez značajnog gubitka informacija. U ovoj studiji, razlike između RCD-a(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)su izvedene od strane nenadziranog PCA pomoću softvera SIMCA 13.0 na osnovu relativnih površina vrhova u HPLC hromatografiji. Uz pomoć PCA pronađeni su glavni uticaji hemikalija na klasifikaciju među različitim uzorcima.

2.4. Priprema uzorka

2.4.1. Priprema ekstrakta za životinje

RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)odabrani su iz uzoraka prikupljenih i pripremljenih kako je opisano u Odjeljku 2.2.

Zračno osušen i rezan RCD(kriške cistanche deserticola)je u prahu u prahu (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), tačne težine 1.0 kg, i natopljen u 50 posto etanola 30 minuta, a omjeri biljka/etanol korišteni su 1/ 10 (w/w). Zatim je ekstrahovan pod refluksom dva puta po 1 h svaki put. Dva ekstrakta su spojena i filtrirana, a etanol je rekuperiran pod sniženim pritiskom na 60 stepeni. Ukupni sirovi ekstrakt PhGs je osušen u vakuumu na 60∘C i prečišćen makroporoznom smolom. Konačno je dobijen PhGs ekstrakt RCD-a i precizno izmjeren.

PhGs ekstrakt WSCD(Proizvod prerađen parom vina)je dobijen po istom postupku gore.

Sedimenti iz ekstrakcije PhG-a su osušeni na vazduhu i dva puta decoktovani po 1,5 h svaki put sa 20 puta vode. Dva ekstrakta su spojena i centrifugirana na 4000 rpm tokom 10 minuta, a supernatant je koncentriran i precipitiran sa 95% etanola. Nakon centrifugiranja, talog je osušen u vakuumu na 60 stepeni. Konačno, polisaharidni ekstrakt RCD(kriške cistanche deserticola)je dobijen i tačno izmeren.

Ekstrakt polisaharida WSCD(Proizvod prerađen parom vina)je dobijen po istom postupku gore.

PhG i polisaharidni ekstrakti RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)su pomiješane suspenzije u vodi, odnosno kada su pacovi tretirani oralno.

2.4.2. Priprema uzoraka za određivanje PhGs

Ekstrakti PhGs u Odjeljku 2.4.1 su precizno izmjereni kao 0.15 g i ekstrahirani ultrazvučnom obradom sa 50mL 50 posto vodene otopine metanola tokom 40 minuta. Nakon hlađenja, gubitak težine je nadoknađen 50 posto metanola. Svi uzorci i rastvarači su filtrirani kroz membranu od 0,45 μm prije analize. Sadržaj četiri PhG u RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)određen je HPLC-om, a ukupni PhG su određeni UV spektrofotometrijom.

2.4.3. Priprema uzorka za određivanje polisaharida

Ekstrakti polisaharida u Odjeljku 2.4.1 su precizno izmjereni kao 0.10 g i ekstrahirani ultrazvučnom obradom sa 50 mL vruće vode tokom 40 minuta; nakon hlađenja, gubitak težine je nadoknađen vodom. Svi uzorci i rastvarači su filtrirani kroz membranu od 0,45 μm prije analize.

2.5. Kromatografsko stanje HPLC i određivanje četiri PhG

Kromatografsko odvajanje je obavljeno u UltiMate 300{{4{43}}}} HPLC sistemu (Thermo Fisher Scientific, SAD), opremljenom sa dual-gradient pumpom, odjeljkom za kolonu i DAD detektor. Podaci su prikupljeni i obrađeni pomoću ChromeLeon Chromatography Data System. Uzorci su razdvojeni na Agilent Zorbax SB-C18 (250mm×4,6 mm, 5 μm) sa C18 zaštitnom kolonom (4,6 mm×12,5 mm, 5 μm). Mobilna faza se sastojala od acetonitrila (A) i 0.1 posto rastvora fosforne kiseline (B) pri brzini protoka od 1 mL/min. Gradijent eluacije je sljedeći: početni 0-13 min, linearna promjena od AB (5:95, v/v) do AB (15:85, v/v); 13–25 min, linearna promjena u AB (20:80, v/v); 25–43 min, linearna promjena u AB (25:75, v/v). Talasna dužina detektora je praćena na 330 nm. Temperatura kolone je postavljena na 30 stepeni, a zapremina ubrizganog uzorka bila je 10 μL [21]. Osnovni rastvor koji sadrži četiri referentna standarda pripremljen je otapanjem referentnih standarda u 50 posto metanola do konačne koncentracije od 0,20 mg/mL za 2-acetilakteozid, 0,20 mg/mL za akteozid, 0,05 mg/mL za osmantuzid B, i 0,10 mg/mL za izoakteozid. Otopina je zatim razrijeđena na pet različitih koncentracija u tri ponavljanja da bi se uspostavile kalibracijske krive. Sadržaj uzorka izražen je u g/kg sirove težine.

Proučavanje kriški Cistanche deserticola i proizvoda obrađenog parom vina iz Cistanche deserticola

2.6. Određivanje ukupnih PhGs

Ukupni PhG su određeni metodom UV spektrofotometrije na talasnoj dužini od 330nm u UV1000 spektrofotometru (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Matična otopina je pripremljena otapanjem standarda ehinakozida u 50 posto metanola do konačne koncentracije od 0,10 mg/mL i zatim razrijeđena u pet različitih koncentracija u tri ponavljanja da bi se uspostavile kalibracijske krive.

2.7. Određivanje polisaharida

Određivanje polisaharida je izvršeno metodom fenol-sumporna kiselina. 1 mL rastvora uzorka stavljeno je u epruvetu od 20 mL sa staklenim čepom i dodato 1 mL 6% rastvora fenola i 5 mL koncentrovane sumporne kiseline i mućkano 5 min. Smjesa je prebačena u kipuću vodenu kupelj na 10 minuta i ohlađena na sobnu temperaturu radi ultraljubičaste detekcije. Apsorpcija ultraljubičastog zračenja je praćena na 480 nm u UV1000 spektrofotometru. Referentni standard bezvodne D-glukoze je precizno izmjeren i otopljen u destilovanoj vodi do konačne koncentracije od 0,10 mg/mL. Zatim je otopina razrijeđena na pet različitih koncentracija u tri ponavljanja da bi se uspostavile kalibracijske krive.

2.8. Eksperimenti na životinjama

2.8.1. Životinje i smeštaj

Mužjaci SD štakora seksualne zrelosti (180-200 g) kupljeni su od eksperimentalne životinjske farme Xinglong (Peking) (starost: 6 sedmica) i dozvola za laboratorijske životinje bila je SCXK (Jing):2016-0003. Sve procedure na životinjama odobrene su od strane Komiteta za istraživanje životinja Medicinskog univerziteta Unutrašnje Mongolije i sprovedene u skladu sa smjernicama Nacionalnog instituta za zdravlje u vezi sa principima brige o životinjama (2004). Sve životinje su držane u sistemu barijere sa regulisanom temperaturom od 21-23 stepena i relativnom vlažnošću vazduha od 40-65 procenata i u ciklusu tamno/svetlo od 12 sati. Pacovima je davana hrana i voda ad libitum i aklimatizovani su na gore navedeno okruženje nedelju dana.

2.8.2. Doziranje i uzorkovanje

Pacovi su prebačeni u pojedinačne metaboličke kaveze i nasumično podijeljeni u 6 grupa (= 10 u svakoj grupi). Dobili su intramuskularnu injekciju od 15 mg/kg hidrokortizon natrijum sukcinata (kupljeno od Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, Kina) tokom 2 nedelje osim za grupu 1 kojoj je ubrizgana jednaka zapremina fiziološkog rastvora. 14. dana prikupljeni su tjelesna težina, potrošnja hrane, unos vode, zapremina urina i spontana aktivnost u roku od 5 minuta kako bi se utvrdilo da li je model nedostatka bubrega i janga uspješno napravljen. Od 15. dana tretirano je 6 grupa na sledeći način: grupa 1 i grupa 2 (model grupa, M) tretirana je jednakom zapreminom destilovane vode, grupa 3 (PhGs ekstrakt RCD).(kriške cistanche deserticola)grupa, PR) tretirani su sa 0.42 g/kg PhG ekstrakta RCD, što je bilo jednako oko 1,8 g/kg sirovogCistanche deserticolaa ostale grupe su bile iste, grupa 4 (PhGs ekstrakt WSCD(Proizvod prerađen parom vina)grupa, PW) tretirani su dozom od 0.49 g/kg PhG ekstrakta WSCD(Proizvod prerađen parom vina), grupa 5 (polisaharidni ekstrakt RCD(kriške cistanche deserticola)grupa, SR) tretirani su sa 0.18 g/kg polisaharidnog ekstrakta RCD, a grupa 6 (polisaharidni ekstrakt WSCD(Proizvod prerađen parom vina)grupa, SW) tretirani su dozom od 0.22 g/kg polisaharidnog ekstrakta WSCD. Svi pacovi su tretirani gastričnom perfuzijom dnevno. Nakon mjesec dana tretmana, pacovima je uskraćivana hrana 12 sati prije uzimanja krvi. Sljedećeg dana svi pacovi su anestezirani i žrtvovani. Tokom testiranja, pacovi su vagani jednom sedmično radi prilagođavanja doze i ponovo vagani prije žrtvovanja. Uzorci krvi su sakupljeni u Eppendorf epruveti sa 10 posto EDTA-2Na rastvora. Serum je odvojen centrifugiranjem na 2000 rpm u trajanju od 15 minuta i pohranjen na -80 stepeni za dalju upotrebu. Osim toga, uklonjeni su i brzo izmjereni bubrezi, testisi, epididimis, prostata i sjemeni mjehurići. Nakon vaganja, testisi su zamrznuti u tečnom azotu za određivanje SOD i MDA.

2.9. Analiza hormonskih i antioksidativnih efekata

Nivo testosterona (T) i estradiola (E2) određivan je u Qingdao Kechuang centru za inspekciju kvaliteta radioimunitetom i kolorimetrijskom metodom. Smrznuti testisi su izvagani i pomiješani sa 20 puta hladnom fiziološkom otopinom (W/W). Homogenat testisa dobijen homogenatom tkiva u ledenom kupatilu centrifugiran je da se dobije supernatant. Sadržaj SOD i MDA testisa određen je SOD i MDA kompletima prema uputstvima.

2.10. Statistička analiza

Značajnost razlika među grupama je upoređena putem jednosmjernog ANOVA testa praćenog Scheffeovim testom sa granicom značajnosti od 0.05 korištenjem SPSS softvera 25.0. Svi podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD) (n=3).

3. Rezultati

3.1. Analiza promjena PhGs nakon SPW korištenjem PCA

Za poređenje PhGs promjena nakon SPW, 9 kromatografskih pikova je odabrano kao karakteristični pikovi i identificirani su. Njihove strukture su prikazane na slici 1, čije su relativne površine vrhova izračunate za kvantitativni izraz. HPLC hromatogram kao što je prikazano na slici 2, koji ukazuje da je relativni sadržaj glavnih PhGs promenjen tokom SPW. PCA analiza na relativnim površinama pikova 9 komponenti je dobijena za diskriminaciju različitih uzoraka. RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)su bili udaljeni jedan od drugog u dijagramu rezultata (Slika 3(a)), što ukazuje da su uzorci klasifikovani u dva klastera. Stoga se vjeruje da je sadržaj hemijskih sastojaka bio različit. Da bi se dalje pronašli potencijalni hemijski markeri za diskriminaciju, izvršena je proširena statistička analiza da bi se generisao Bi dijagram opterećenja (Slika 3(b)). Vrhovi 2, 3, 4, 6 i 7 će se smanjiti nakon SPW-a, dok će se vrhovi 5, 8 i 9 povećati, a svi su oni bili najvažnije komponente za razlikovanje RCD-a.(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina). Relativni sadržaj pika 1 nije mnogo varirao nakon SPW.

Slika 1 Hemijske strukture PhG uCistanche deserticolaYC Ma.

Slika 2 HPLC hromatogram standardne supstance (a), RCD(kriške cistanche deserticola)(b) i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)(c). Vrhovi: (1) cistanozid F, (2) ehinakozid, (3) cistanozid A, (4) akteozid, (5) izoakteozid, (6) cistanozid C, (7) 2′-acetilakteozid, (8) osmantuzid B i (9) tubulozid B.

Slika 3 Grafikon PCA rezultata (a) i dijagram Bi opterećenja (b) RCD-a(kriške cistanche deserticola)(zeleni krug) i WSCD (crveni krug). RCD i WSCD su klasifikovani u dva klastera. Vrhovi 2, 3, 4, 6 i 7 su najvažnije komponente za razlikovanje RCD i WSCD, koji će se smanjiti tokom SPW; vrhovi 5, 8 i 9 su takođe najvažnije komponente za razliku između RCD i WSCD(Proizvod prerađen parom vina), koji će se povećati tokom SPW.

3.2. Sadržaj ukupnih polisaharida i PhG promijenjen nakon SPW

Kao što je prikazano na slici 3(b), 8 komponenti (5, 8 i 9 su se povećale, a 2, 3, 4, 6 i 7 smanjile) značajno su se promijenile i imale veliki utjecaj na grupiranje uzorka. Među njima su se najviše povećali izoakteozid i osmantuzid B, dok su se najviše smanjili 2′-acetilakteozid i akteozid. Dakle, sadržaj izoakteozida, osmantuzida B, 2′-acetilakteozida i akteozida određen je HPLC. Kao što je prikazano na slici 1, pik 4 je bio akteozid, pik 5 je bio izoakteozid, pik 7 je bio 2′-acetilakteozid, a vrh 8 je bio osmantuzid B. Ukupni PhG u RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)Određeni su UV metodom, a ukupni polisaharidi su rađeni metodom fenol-sumporna kiselina, rezultati su prikazani u tabeli 1, izoakteozid, osmantuzid B, ukupni polisaharidi i PhG u WSCD su značajno povećani u odnosu na RCD. 2′-acetilakteozid i akteozid su značajno smanjeni.

Tabela 1 Sadržaj polisaharida i PhG u RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)(mg/g) (n=3).

Bilješka. Značajne razlike sa RCD(kriške cistanche deserticola)su označeni kao *p < 0.05.

3.3. Napravljen je model nedostatka bubrega-Yanga izazvanog hidrokortizonom

U poređenju sa normalnom grupom, nakon 2 nedelje intramuskularne injekcije 15 mg/kg hidrokortizon natrijum sukcinata, telesna težina, potrošnja hrane i spontana aktivnost su značajno smanjeni (P<0.05) and="" the="" water="" intake="" and="" urine="" volume="" were="" increased;="" the="" results="" were="" shown="" in="" table="" 2.="" the="" t="" and="" e2="" levels="" in="" the="" serum="" of="" the="" model="" group="" were="" lower="" than="" the="" normal="" group="" as="" shown="" in="" figure="" 4.="" from="" the="" above,="" the="" kidney-yang="" deficiency="" model="" was="" successfully="">

Tabela 2 Pokazatelji su se promijenili nakon intramuskularne injekcije hidrokortizon natrijum sukcinata, (n=10).

Bilješka. Značajne razlike sa N grupom su označene kao^# p<>

Slika 4 Nivoi T i E2: (a) nivo T i (b) nivo E2. Značajne razlike sa M grupom označene su kao^∗p < 0.05.="" značajne="" razlike="" sa="" n="" grupom="" su="" označene="">^#p < 0.05.

3.4. Utjecaj ekstrakata na prosječnu težinu i indeks unutrašnjosti

Svi pacovi i njihovi iznutrici su izvagani, a zatim je izračunat prosječni indeks unutrašnjosti.

U poređenju sa N grupom, M grupa je značajno smanjila težinu unutrašnjosti bubrega, sjemenih mjehurića, epididimisa i testisa, što je također ukazivalo da je uspješno napravljen model nedostatka bubrega izazvanog hidrokortizonom. U poređenju sa M grupom, svi posmatrani utrobe su povećane u PW i SR grupi, PR grupa je imala povećanu težinu testisa, epididimisa, sjemenih vezikula i prostate, a SW grupa imala je povećanu težinu bubrega, testisa, epididimisa, i sjemenih mjehurića. U poređenju sa PR grupama, PW grupa je bila bolja u bubrezima, sjemenim mjehurićima i prostati. Nije bilo značajne razlike između SR i SW grupa u težini testisa, epididimisa, sjemenih vezikula i prostate. Rezultati su prikazani u tabeli 3.

Tabela 3 Težina iznutrica (g) (n=10).

Bilješka. Značajne razlike sa M grupom označene su kao^∗p < 0.05.="" značajne="" razlike="" sa="" n="" grupom="" su="" označene="">^#p < 0.05.

U poređenju sa N grupom, u M grupi su smanjeni visceralni indeksi bubrega, testisa, epididimisa i sjemenih mjehurića. U poređenju sa M grupom, PW i SR grupa imale su povećan indeks bubrega, testisa, prostate i sjemenih mjehurića, PR grupe su povećale indeks testisa, prostate i sjemenih mjehurića, a SW grupa je imala povećan indeks bubrega, testisa i sjemenih vezikula. U poređenju sa PR grupama, PW grupa je bila bolja u bubrezima, sjemenim mjehurićima i prostati. SW i SR grupe su imale sličan indeks bubrega, testisa, sjemenih vezikula i epididimisa. Rezultati su prikazani u tabeli 4.

Tabela 4 Prosječni indeks unutrašnjih organa (g/100g) (n=10).

Bilješka. Značajne razlike sa M grupom označene su kao^∗p < 0.05.="" značajne="" razlike="" sa="" n="" grupom="" su="" označene="">^#p < 0.05.

3.5. Uticaj ekstrakta na nivo hormona (T i )

Kao što je prikazano na slici 4, u poređenju sa M grupom, nivoi T i E2 u svim tretiranim grupama (PW, PR, SW i SR grupa) su značajno porasli (P<0.05). however,="" the="" pw="" group="" was="" better="" than="" the="" pr="" group="" at="" levels="" t="" and="" e2.="" the="" sr="" and="" sw="" groups="" had="" no="" significant="">

3.6. Utjecaj ekstrakata na antioksidativni učinak

SOD je važan antioksidativni enzim. MDA je proizvod peroksidacije lipida koji je indikator koji odražava stepen oštećenja oksidansa. Sadržaj SOD i MDA odražava stepen oksidativne i antioksidativne sposobnosti. Kao što je prikazano na slici 5, u poređenju sa M grupom, antioksidativni efekat u svim tretiranim grupama (PW, PR, SW i SR) je bio pojačan. SW grupa je imala najvećeantioksidansefekat.

Slika 5. Sadržaj MDA i SOD: (a) sadržaj MDA i (b) sadržaj SOD. Značajne razlike sa M grupom označene su kao^∗p< 0.05.="" significant="" differences="" with="" the="" n="" group="" were="" designated="" as=""><>

4. Diskusija

Prije kliničke primjene, sirove materijale treba podvrgnuti tradicionalnim kineskim procesnim tehnikama. Kuvanje na pari je jedan od tradicionalnih pristupa preradi nekih kineskih ljekovitih biljaka, koji daje crnu boju proizvedenu Maillardovom reakcijom [22], povećavajući količine nekih bioaktivnih komponenti [23] i farmakološke aktivnosti. WSCD(Proizvod prerađen parom vina)kao jedan od proizvodnih procesa je bolji u pogledu ishrane bubrega u odnosu na RCD(kriške cistanche deserticola)kako je dokumentirano u izdanju kineske farmakopeje iz 2015. U ovoj studiji, rezultati PCA su pokazali da je SPW promijenio hemijski profil RCD(kriške cistanche deserticola). Štaviše, 8 komponenti u PhGs se značajno promijenilo. Ukupni PhG, ukupni polisaharidi, izoakteozid i osmantuzid B su se najviše povećali, dok su 2′-acetilakteozid i akteozid smanjeni nakon SPW. Rezultati su pokazali da SPW može promijeniti hemijske sastojke RCD-a(kriške cistanche deserticola). Sadržaj PhG s 1,3,4-trisupstituiranim glukopiranozilnim dijelovima (kao što su akteozid, 2′-acetilakteozid i cistanozid C) smanjen je u WSCD(Proizvod prerađen parom vina)međutim, koncentracije njihovih izomera sa 1,3,5-trisupstituiranim glukopiranozilnom ostatkom (kao što su izoakteozid i tubulozid B) su se povećale, što ukazuje da se transformacija hemijskih sastojaka može desiti tokom SPW-a, te da će reakcija hidrolize biti jedna od razloga. Predloženi putevi transformacije prikazani su na slici 6. Povećanje polisaharida nakon SPW također je zabilježeno u ginsengu [24].

Slika 6 Predloženi putevi transformacije PhG u Cistanche deserticola YC Ma tokom SPW.

Cistanche deserticoladokumentirano je da oživljava bubrege i preokreće smanjenje nivoa testosterona i posjeduje antioksidativno i protuupalno djelovanje [25], a PhG i polisaharidi su dvije glavne biološki aktivne komponente u Cistanche deserticola. Kao PhGs, izoakteozid i osmantuzid B imali su antioksidativno i protuupalno djelovanje [26, 27]. Dakle, poređenje farmakoloških efekata na nivo testosterona i antioksidativno dejstvo RCD i WSCD(Proizvod prerađen parom vina)je proučavan. U modelu deficijencije bubrega-yang izazvanog hidrokortizonom, endokrini je bio poremećen i nivo polnih hormona je bio značajno smanjen u krvi. U ovoj studiji, rezultati analize polnih hormona pokazali su da oba RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD mogu značajno povećati nivo T i E2, a i PhG i polisaharidi su pokazali poboljšanje polnih hormona. WSCD je bio bolji od RCD-a(kriške cistanche deserticola), posebno u grupama ekstrakta PhGs. Rezultati indeksa unutrašnjih organa pokazali su da i PhG i polisaharidi mogu poboljšati težinu unutrašnjosti i njihove indekse težine. U grupama ekstrakata PhGs, WSCD(Proizvod prerađen parom vina)je bolji od RCD u povećanju težine i indeksa bubrega i sjemenih vezikula. Osim toga,Cistanche deserticolaima značajno antioksidativno dejstvo, posebno grupe ekstrakata polisaharida sa WSCD. Kao što je gore objašnjeno, oba RCD-a(kriške cistanche deserticola)i WSCD bi mogli poboljšati sindrom nedostatka bubrega i janga; međutim, WSCD je bolji od RCD u povećanju nivoa T, E2, težine i indeksa epididimisa i testisa. Rezultati istraživanja farmakoloških efekata pokazali su da je SPW promijenio hemijske komponente PhGs i povećao sadržaj polisaharida, što je zauzvrat povećalo nivo polnih hormona i poboljšaloantioksidansefekat.

5. Zaključak

Studija je trebala otkriti promjenu PhGs, ukupnih polisaharida i farmakološkog efekta u RCD(kriške cistanche deserticola)i WSCD na pacovima s nedostatkom bubrega-janga, posebno na nivou hormona i antioksidativnom dejstvu. Ova studija je pokazala da proces tradicionalnih kineskih biljaka može promijeniti njihove kemijske sastojke i utjecati na njihovu bioaktivnost. Također se podržava da su sirovi i prerađeni proizvodi različito propisivani u klinici.

Dostupnost podataka

Podaci koji se koriste kao podrška nalazima ove studije dostupni su od odgovarajućeg autora na zahtjev.

Sukobi interesa

Autori izjavljuju da nemaju sukoba interesa.

Prilozi autora

Ying Zhang i Song Yang su osmislili eksperimente. Ying Zhang, Yuewu Wang i Yunfeng Xiao vodili su prikupljanje i pripremu uzoraka. Ying Zhang je analizirao podatke i sastavio rad. Xiangri Li i Xiaoqin Wang bili su odgovorni za nadzor studija. Svi autori su učestvovali u pisanju i davanju povratnih informacija o radu. Svi autori su pročitali i odobrili završni rad.

Priznanja

Ovaj rad je podržan grantovima iz Procedura obrade pripremljenih komadića kineske sirove droge (br. YP-PZ-2014). Posebno hvala Wenjia Qu i Tianying Jia na njihovoj velikoj pomoći u prikupljanjuCistanche deserticola.

Reference

1. Y. Jiang i P.-F. Tu, "Analiza hemijskih sastojaka u vrstama Cistanche", Journal of Chromatography A, vol. 1216, br. 11, str. 1970–1979, 2009.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

2. W. Zhao, H. Yan, Z.-Y. Liang, Y.-J. Zhang i X.-Q. Jiao, "Strukturna analiza vodotopivog polisaharida SPA izoliranog iz stabljikeCistanche deserticolaMa," Chemical Journal of Chinese Universities, vol. 26, br. 3, str. 461–463, 2005.

Pogledajte na: Google Scholar

3. Q. Dong, J. Yao, J.-N. Fang i K. Ding, "Strukturna karakterizacija i imunološka aktivnost dva polisaharida koja se ekstrahuju hladnom vodom izCistanche deserticolaYC Ma,“ Carbohydrate Research, vol. 342, br. 10, str. 1343–1349, 2007.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

4. X.-M. Wu i P.-F. Tu, "Izolacija i karakterizacija -(1→6)-glukana izCistanche deserticola," Journal of Asian Natural Products Research, vol. 7, br. 6, str. 823–828, 2005.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

5. B. Košíková, A. Ebringerová i R. Naran, „Karakterizacija frakcija lignin-ugljikohidrata izolovanih iz drvnog parazitaCistanche deserticolaYC Ma.," Holzforschung, vol. 53, br. 1, str. 33–38, 1999.

Pogledajte na: Google Scholar

6. G. Sheng, X. Pu, L. Lei, P. Tu i C. Li, "Tubulozid B iz Cistanche salsa spašava PC12 neuronske ćelije od 1-metil-4-fenilpiridinijum izazvanih jona apoptoza i oksidativni stres“, Planta Medica, vol. 68, br. 11, str. 966–970, 2002.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

7. M. Deng, J.-Y. Zhao, X.-D. Ju, P.-F. Tu, Y. Jiang i Z.-B. Li, "Zaštitni efekat tubulozida B na TNF alfa-indukovanu apoptozu u neuronskim ćelijama", Acta Pharmacologica Sinica, vol. 25, br. 10, str. 1276–1284, 2004.

Pogledajte na: Google Scholar

8. X. Geng, L. Song, X. Pu i P. Tu, "Neuroprotektivni efekti feniletanoidnih glikozida iz Cistanches salsa protiv 1-metil-4-fenil-1,2,3 ,6-dopaminergička toksičnost izazvana tetrahidropiridinom (MPTP) kod C57 miševa," Biological & Pharmaceutical Bulletin, vol. 27, br. 6, str. 797–801, 2004.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

9. H. Chen, FC Jing, CL Li, PF Tu, QS Zheng, i ZH Wang, "Echinacoside sprečava smanjenje strijatalnih ekstracelularnih nivoa monoaminskih neurotransmitera kod 6- hidroksidopaminskih lezija pacova," Journal of Ethnopharmacology, vol. . 114, br. 3, str. 285–289, 2007.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

10 J. Pan, C. Yuan, C. Lin, Z. Jia i R. Zheng, "Farmakološke aktivnosti i mehanizmi prirodnih fenilpropanoidnih glikozida", Die Pharmazie, vol. 58, br. 11, str. 767–775, 2003.

Pogledajte na: Google Scholar

11. G. Fu, H. Pang i YH Wong, "Feniletanoidni glikozidi koji se javljaju u prirodi: potencijalni vodi za nove terapeutike", Current Medicinal Chemistry, vol. 15, br. 25, str. 2592–2613, 2008.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

12. X.-W. Wang, X.-F. Wang i L.-Y. Wu, "Poboljšanje pamćenja miševa na feniletanoidne glikozideCistanche deserticola," Kineski farmakološki bilten, br. 19, str. 41-42, 2002.

Pogledajte na: Google Scholar

13. J.-X. Xie i C.-F. Wu, "Učinak etanolnog ekstraktaCistanche deserticolao sadržaju monoaminskih neurotransmitera u mozgu pacova,“ Kineski tradicionalni i biljni lijekovi, br. 24, str. 417–419, 1993.

Pogledajte na: Google Scholar

14. H. Wu i C.-J. Hu, Procesna disciplina kineske medicine, Narodna medicinska izdavačka kuća, Peking, Kina, 2012.

15. ZZ Zhao, ZT Liang, K. Chan et al., "Jedinstveno pitanje u standardizaciji kineske materia medica: obrada", Planta Medica, vol. 76, br. 17, str. 1975–1986, 2010.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

16. Komisija Kineske farmakopeje, Farmakopeja Narodne Republike Kine 2015, vol. IV, Farmakopeja Narodne Republike Kine, Peking, Kina, 2015.

17. J.-M. Chen, Enlightening Primer of Materia Medical, Tradicionalna kineska medicina Ancient Books Press, Peking, Kina, 2009.

18. B.-R. Li i Y.-C. Ona, "Efekti tonizirajućih lijekova za bubrege na osovinu hipotalamus-hipofiza-gonada (HPG)," Journal of Traditional Chinese Medicine, br. 7, str. 63–65, 1984.

Pogledajte na: Google Scholar

19. M. Chen, L. Zhao i W. Jia, "Metabonomska studija o biohemijskim profilima životinjskog modela izazvanog hidrokortizonom", Journal of Proteome Research, vol. 4, br. 6, str. 2391–2396, 2005.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

20. Q. Chen i N.-Y. Yi, "The animal models and drugs for Yin-deficiency and Yang-deficiency," u Eksperimentalnoj metodologiji farmakoloških istraživanja u tradicionalnoj kineskoj medicini, People's Health Publishing House, Peking, Kina, 1993.

Pogledajte na: Google Scholar

21. Z.-G. Ma, Z.-L. Yang, P. Li i C.-H. Li, "Istovremeno određivanje osam feniletanoidnih glikozida u različitim vrstama roda Cistanche tečnom hromatografijom visokih performansi", Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, vol. 31, br. 18, str. 2838–2850, 2008.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

22. Z. Liu, Z. Chao, Y. Liu, Z. Song i A. Lu, "Maillardova reakcija uključena u proces parenja korijena Polygonum multiflorum", Planta Medica, vol. 75, br. 1, str. 84–88, 2009.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

23. W.-T. Chang, YH Choi, R. Van Der Heijden, et al., "Tradicionalna obrada snažno utiče na sastav metabolita hidrolizom u korijenima Rehmannia glutinosa", Chemical & Pharmaceutical Bulletin, vol. 59, br. 5, str. 546–552, 2011.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

24. Y. Jin, Y.-J. Kim, J.-N. Jeon et al., "Uticaj bijelog, crvenog i crnog ginsenga na fizičko-hemijska svojstva i ginsenozide", Biljna hrana za ljudsku ishranu, vol. 70, br. 2, str. 141–145, 2015.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

25. T. Wang, X.-Y. Zhang i W.-Y. Xie, "Cistanche deserticolaYC Ma, 'pustinjski ginseng': Pregled," American Journal of Chinese Medicine, vol. 40, br. 6, str. 1123–1141, 2012.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

26. S.-Y. Nam, H.-Y. Kim, M.-S. Yoou et al., "Anti-inflamatorni efekti izoakteozida iz Abeliophyllum distichum," Immunopharmacology and Immunotoxicology, vol. 37, br. 3, str. 258–264, 2015.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

27. S. Chae, JS Kim, KA Kang, et al., "Antioksidativna aktivnost izoakteozida iz Clerodendron trichotomum," Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. Current Issues, vol. 68, br. 5, str. 389–400, 2005.

Pogledaj na: Sajt izdavača|Google Scholar

Iz: Komplementarna i alternativna medicina zasnovana na dokazima / 2019. / Članak

Volumen 2019 |ID članka 2167947|https://doi.org/10.1155/2019/2167947