Učinak oksidativnog stresa i interleukina-1 unakrsnog razgovora na kroničnu upalu kod EAP pacova i intervencija Anemone Tomentosa
Dec 09, 2025
Abstract
Ciljevi: Istražiti ulogu oksidativnog stresa i interleukina-1 (IL-1) unakrsnog razgovora u kroničnoj upali prostate kod eksperimentalnih pacova s autoimunim prostatitisom (EAP) i razjasniti mehanizam kojim Anemone tomentosa liječi EAP štakore. Metode: Trideset Wistar pacova je nasumično raspoređeno u pet grupa (n=6 svaka): normalna, model, Anemone tomentosa s niskom dozom, Anemone tomentosa sa srednjom dozom i Anemone tomentosa sa visokom dozom. Nakon intervencije lijeka, Western blotting je korišten za otkrivanje proteina TLR-4, IRAK1 i pNF-κB p65 u tkivu prostate. Serumska superoksid dismutaza (SOD), glutation peroksidaza (GSH‑Px) i malondialdehid (MDA) mjereni su pomoću kompleta za analizu. Inflamatorni citokini, uključujući interleukin-1 i interleukin-10, mjereni su ELISA-om. Rezultati: U poređenju sa normalnom grupom, ekspresija proteina TLR‑4, IRAK1 i pNF‑κB p65 u prostati modelne grupe je značajno povećana (P < 0,01). Nivoi SOD i GSH-Px u serumu su smanjeni (P < 0,01), dok su nivoi MDA i interleukina-1 povećani (P < 0,01). U poređenju sa modelnom grupom, intervencija Anemone tomentosa značajno je smanjila ekspresiju proteina TLR-4, IRAK1 i pNF-κB p65 u prostati EAP pacova (P < 0,01). Serumski SOD, GSH-Px i interleukin-10 su bili značajno povišeni (P < 0,01 ili P < 0,05), dok su MDA i interleukin-1 bili smanjeni (P < 0,01 ili P < 0,05). Histologija je pokazala da su ozljeda prostate i infiltracija upalnih stanica poboljšani nakon liječenja Anemone tomentosa. Zaključak: IRAK1 može biti ključni čvor koji posreduje u unakrsnom razgovoru između oksidativnog stresa i IL-1 tokom upale kod EAP pacova. Protuupalni mehanizam Anemone tomentosa kod EAP pacova može uključivati smanjenje oksidativnog stresa i IL-1 regulacijom TLR-4/IRAK1/NF-κB p65 signalnog puta.
Herb Cistanche suplementi
Ključne riječi
Hronični prostatitis; eksperimentalni autoimuni prostatitis (EAP); oksidativni stres; interleukin‑1 (IL‑1); IRAK1; TLR‑4/IRAK1/NF‑κB p65 signalni put; SOD; GSH‑Px; MDA; ELISA; Western blot; Anemone tomentosa; Dahuocao (Zhuang medicina); tradicionalna kineska medicina; TCM biljka za prostatitis; kineska etnomedicina; protuupalno; antioksidativna terapija
Hronični prostatitis (CP)jedna je od najčešćih bolesti u urologiji i andrologiji. U Kini, prijavljena prevalencija CP kreće se od 6,0% do 32,9% [1]. Klinički je karakteriziran uglavnom kroničnim bolom u karlici i može biti praćen različitim stupnjevima urinarnih simptoma i seksualne disfunkcije, što ozbiljno utječe na kvalitetu života pacijenata. Prema istraživačkim izvještajima [2], patogeneza CP može biti povezana s infekcijom patogenom, oksidativnim stresom, refluksom urina, promjenama nivoa polnih hormona, neuroendokrinom neravnotežom i imunološkim upalnim odgovorima. Aktuelne studije pokazuju da se u inflamatornom stanju prostate proizvodi velika količina reaktivnih vrsta kiseonika (ROS); mikrookruženje sa visokim ROS-om izaziva oksidativni stres i učestvuje u nastanku i razvoju CP [3]. Citokini su regulatorni proteinski polipeptidi koji igraju važnu ulogu u nastanku i razvoju CP; Ozbiljnost bolesti korelira sa nivoom interleukina-1 (IL-1) u sekretu prostate [4], pružajući potencijalni terapijski pristup. S obzirom na složenu patofiziologiju, savremeni medicinski tretmani za CP imaju određena ograničenja [5]. Posljednjih godina, tradicionalna kineska medicina (TCM) pokazala je povoljnu efikasnost u liječenju CP, ublažavanju boli i urinarnih simptoma, te demonstrirajući karakteristične prednosti.
Iz perspektive TKM-a, etiologija i patogeneza ove bolesti uključuju nedostatak bubrega, vlažnu toplinu i zastoj krvi [6]. Zhuang etnomedicinska biljka Dahuocao (Anemone tomentosa; opor, blago gorak, neutralan u svojstvu) ima funkciju čišćenja vrućine i raspršivanja vlage, promicanja diureze za ublažavanje strangurije, toniziranja Qi-ja i jačanja bubrega [7]. Klinička zapažanja sugeriraju da Dahuocao može poboljšati simptome CP [8] i regulirati lučenje upalnih citokina kod pacova modela CP [9]. Njegov mehanizam može biti vezan za put mikroRNA-146a/Toll-like receptor-4 (TLR-4)/nuklearni transkripcioni faktor-κB (NF-κB) koji potiče iz amilacea prostate [10]. Na osnovu ovoga, ova studija je promatrala ulogu unakrsne interakcije između oksidativnog stresa i IL-1 u kroničnoj upali prostate u eksperimentalnom modelu autoimunog prostatitisa (EAP) pacova i istraživala intervencijski učinak Dahuocao dekocije.
Materijali
1.1 Pokusne životinje
Trideset mužjaka pacova Wistar kupljeno je od Changsha Tianqin Biotechnology Co., Ltd. (br. licence: SCXK2019‑0013), starosti 8 sedmica, tjelesne težine 200 ± 17 g. Odobrenje za etiku životinja br.: DW20220926‑202, Guangxi Univerzitet kineske medicine. Životinje su bile smještene u ključnoj laboratoriji za molekularnu biologiju za prevenciju i liječenje u TCM-u, Guangxi.
1.2 Glavni instrumenti i reagensi
Aparat za elektroforezu (Beijing Liuyi, DYCZ‑24DN), kvantifikator nukleinske kiseline/proteina (Denovix DS‑11), polusuhi transfer sistem (ATTO WSE‑4040, AE6675L). Kompletan Freundov adjuvans (Sigma-Aldrich, F5881). TLR-4 antitijelo (Afinitet, AF7017), antitijelo povezano s kinazom-1 (IRAK1) receptorom interleukina-1 (Affinity, AF4742), fosfo-NF-κB p65 antitijelo (Affinity, AF2006). GSH‑Px komplet (Nanjing Jiancheng, A005‑1), SOD komplet (Nanjing Jiancheng, A001‑1), MDA komplet (Nanjing Jiancheng, A003‑1). IL‑1 ELISA (Lianke Bio, EK301BHS), IL-10 ELISA (Lianke Bio, EK310).
Metode
2.1 Priprema EAP modela štakora
Priprema pročišćenih proteina prostate pacova je prema prethodnim metodama [10]. Modeliranje imunizacije [10–11] je provedeno prema utvrđenim protokolima. Uspješno modeliranje je indicirano nestankom mukoznih nabora u kanalima prostate, nepotpunim acinusima, stromalnim edemom i infiltracijom inflamatornih stanica [12].
2.2 Priprema Dahuocao dekocije
Dekocija Dahuocao (Anemone tomentosa) pripremljena je prema prethodnim eksperimentalnim postupcima [10].
2.3 Grupisanje i administracija lijekova
Trideset štakora je nasumično dodijeljeno tabelom slučajnih brojeva u normalne, modelne i grupe Dahuocao s niskim, srednjim i visokim dozama (n=6 po grupi). Nakon uspješnog modeliranja, grupe sa niskim, srednjim i visokim dozama primile su Dahuocao dekokciju putem sonde u koncentracijama od 1,46 g/mL, 2,92 g/mL, odnosno 5,84 g/mL (4 mL/kg·d). Grupe normalne i modelne grupe primale su fiziološku otopinu (4 mL/kg·d). Tretmani su davani jednom dnevno tokom 4 sedmice.
2.4 Histopatologija prostate (H&E bojenje)
Tkiva prostate su fiksirana, ugrađena i isječena; preseci su obojeni hematoksilin-eozinom i pregledani svetlosnom mikroskopijom da bi se procenile acinarne strukturne promene i infiltracija upalnih ćelija.
2.5 Serumski markeri oksidativnog stresa: SOD, MDA, GSH‑Px
Nivoi SOD, MDA i GSH‑Px u serumu mjereni su striktno prema uputama odgovarajućeg kompleta.
2.6 ELISA detekcija serumskih IL‑1 i IL‑10
Koncentracije IL-1 i IL-10 u serumu mjerene su striktno prema protokolima ELISA kompleta.
2.7 Western blot detekcija TLR-4, IRAK1 i pNF-κB p65 u prostati
Otprilike 50 mg tkiva prostate je mljeveno u fini prah u tečnom dušiku, podijeljeno na alikvote i lizirano u RIPA puferu. Proteini su razdvojeni elektroforezom, prebačeni, blokirani, inkubirani sa primarnim antitelima, isprani, inkubirani sa sekundarnim antitelima, isprani i snimljeni. Ekspresija proteina je kvantificirana kao ciljne/domaćinske sive vrijednosti.
2.8 Statistička analiza
Podaci su analizirani pomoću SPSS 22.0. Normalno raspoređeni podaci sa homogenošću varijanse predstavljeni su kao srednja vrednost ± SD i analizirani jednosmernom ANOVA sa LSD‑t post hoc testovima. Nenormalni ili heteroskedastični podaci su predstavljeni kao M (QR) i analizirani neparametarskim testovima. Dvostrani P < 0,05 smatran je statistički značajnim.
Rezultati (sažeto ponavljanje radi jasnoće)
U odnosu na normalu: TLR-4 prostate, IRAK1 i pNF-κB p65↑ (P < 0,01); serum SOD i GSH‑Px↓ (P < 0,01); MDA i IL‑1 ↑ (P < 0,01).
U odnosu na model: Anemone tomentosa (Dahuocao) je smanjio TLR‑4/IRAK1/pNF‑κB p65 (P < 0,01); povećan SOD, GSH‑Px i IL‑10 (P < 0,01 ili P < 0,05); smanjen MDA i IL-1 (P < 0,01 ili P < 0,05). Histologija je pokazala olakšanu ozljedu žlijezde i inflamatornu infiltraciju.
Zaključak
IRAK1 može predstavljati ključni čvor u unakrsnom razgovoru između oksidativnog stresa i IL-1 tokom hronične upale prostate kod EAP pacova. Anemone tomentosa (Dahuocao), TCM/Zhuang etnomedicinska biljka za prostatitis, može inhibirati kroničnu upalu smanjenjem oksidativnog stresa i IL-1 kroz regulaciju TLR-4/IRAK1/NF-κB p65 signalnog puta.
Napomene o ovlaštenjima i izvorima
Epidemiologija i biomedicinski kontekst utemeljeni su u nacionalnoj urološkoj/androloškoj literaturi [1–6].
Identitet, svojstva i TCM indikacije Anemone tomentosa (Dahuocao) upućuju na kineski kompendijum Materia Medica Državne uprave TCM-a [7], autoritativni izvor.
Klinička opservacija i mehaničke studije na životinjama na Dahuocaou za CP/CNP su podržane recenziranim kineskim časopisima i standardiziranim eksperimentalnim smjernicama [8–12], čime se povećava kredibilitet upotrebe TCM biljke za prostatitis.
Reference
[1] Mi H, Chen K, Mo ZN. Epidemiološke karakteristike kroničnog prostatitisa u Kini. Chin J Androl. 2012;18(7):579‑582.
[2] Zheng XT, Chen SH, Yao WL, et al. Napredak u etiologiji i patogenezi kroničnog prostatitisa. Moderna dijagnoza i liječenje. 2019;30(11):1810-1813.
[3] Paulis G. Upalni mehanizmi i oksidativni stres kod prostatitisa: moguća uloga antioksidativne terapije. Res Rep Urol. 2018;10:75‑87.
[4] Kang SW, Park JH, Seok H, et al. Učinci korejskog crvenog ginsenga na inflamatorne citokine i apoptozu u modelu kroničnog nebakterijskog prostatitisa kod štakora. Biomed Res Int. 2019;2019:2462561.
[5] Xue Y, Duan Y, Gong X, et al. Tradicionalna kineska medicina za hronični prostatitis/sindrom kronične karlične boli: sistematski pregled i meta-analiza. Medicina (Baltimore). 2019;98(26):e16136.
[6] Sun ZX, Li PC. TCM dijagnostičko i terapijsko razmišljanje za kronični prostatitis. Liaoning J Tradit Chin Med. 2019;46(2):268-269.
[7] Uredništvo Kineske Materia Medica, Državna uprava TCM. Kineska Materia Medica. Šangaj: Shanghai Science and Technology Press; 1999: 1768, 3166.
[8] Lu LX, Wu JY, Huang ZM, et al. Kliničko promatranje retencione klistire s Dahuocao (Zhuang medicina) u 60 slučajeva kroničnog prostatitisa. Hunan J Tradit Chin Med. 2019;35(6):55‑56. doi:10.16808/j.cnki.issn1003‑7705.2019.06.024.
[9] Wang WJ, Shi H, Zhang J, et al. Dahuocao inhibira upalne odgovore u modelu štakora s nebakterijskim prostatitisom. Moderna imunologija. 2021;41(6):504-508. doi:10.35541/cjd.20201030.
[10] Lu LX, Shi H, Huang ZM, et al. Uloga miRNA‑146a/TLR‑4/NF‑κB puteva prostate corpora amylacea u kroničnoj upali EAP pacova i Dahuocaoova intervencija. Chin Gen Pract. 2023;26(20):2518‑2524.
[11] Qian Y, Qian XQ, Gong DW, et al. Intervencija resveratrola na citokine u tkivu prostate modela prostatitis pacova. Chin J Androl. 2017;31(3):14‑18.
[12] Stručni odbor za eksperimentalnu farmakologiju TCM, Kinesko udruženje kineske medicine. Nacrt specifikacije za pripremu životinjskih modela kroničnog prostatitisa. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2018;24(19):10‑14.
Opcione autorske ključne riječi za indeksiranje (za vidljivost)
tradicionalna kineska medicina; Zhuang etnomedicina; Dahuocao; Anemone tomentosa Maxim.; prostatitis; sindrom kronične karlične boli; TLR4; IRAK1; NF‑κB; oksidativni stres; antioksidativni enzimi; citokini; ELISA; Western blot; model pacova; EAP; biljni protuupalni; TCM biljka za prostatitis.
