Efekat protiv starenja polipeptida baršunastog rogova zavisi od modulacije crevne mikrobiote i regulacije PPAR/APOE4 puta 1. DIO

Istraživali smo efekte protiv starenja polipeptida baršunastog rogova na miševe starenja izazvanog D-galaktozom (D-gal). Miševi izazvani starenjem D-gal su uspostavljeni i nasumično podijeljeni u pet grupa, kontrolnu, modelnu, grupu niske doze vitamina E (VE), polipeptida baršunastog rogova i visoke doze polipeptida baršunastog rogova. Morrisov test vodenog lavirinta korišten je za procjenu sposobnosti učenja i pamćenja ostarjelih miševa. Hipokampalni neuroni su uočeni bojenjem hematoksilin-eozinom i transmisijskom elektronskom mikroskopom. Biohemijske metode su korištene za otkrivanje aktivnosti superoksid dismutaze, malonaldehida i drugih enzima i procjenu utjecaja polipeptida baršunastog roga na antioksidativni kapacitet starenja miševa. Koristeći sekvenciranje gena 16S rRNA i tehnologiju meristema, procijenili smo učinak polipeptida baršunastog rogova na crijevnu floru i metabolizam masnih kiselina starenja miševa. Eksperimentalni rezultati su pokazali da polipeptid baršunastog roga može značajno poboljšati učenje i kognitivne sposobnosti starenja miševa, te povećati aktivnosti superoksid dismutaze, glutation peroksidaze i katalaze u serumu kako bi se smanjio sadržaj malonaldehida. Intestinalna mikroekološka analiza pokazala je da polipeptid baršunastog roga može značajno povećati brojnost korisnih bakterija roda lactobacillus. Western blot analiza je dalje pokazala da polipeptid baršunastog rogova može promovirati metabolizam masnih kiselina aktivacijom receptora aktiviranog proliferatorom peroksizoma (PPAR) i povećanjem ekspresije nizvodnih enzima karnitin-palmitoil transferaze-1 A i acil-CoA oksidaze 1 uz istovremeno smanjenje apolipoproteina E4 (APOE4), čime se smanjuje nakupljanje masnih kiselina i povećava proizvodnja adenozin-trifosfata (ATP). Stoga, polipeptid baršunastog roga poboljšava mikroekologiju crijeva i aktivira PPAR/APOE4 put za regulaciju metabolizma masnih kiselina.

Glikozid cistanche takođe može povećati aktivnost SOD u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, efikasno hvatajući različite reaktivne radikale kisika (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNK uzrokovanih od strane OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost uklanjanja slobodnih radikala, veću redukcijsku sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji sperme, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju spermatozoida. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnim tkivima eksperimentalno starenja miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina. dobar učinak čišćenja na DPPH, produžava vrijeme hipoksije kod starijih miševa, poboljšava aktivnost SOD u serumu i odlaže fiziološku degeneraciju pluća kod eksperimentalno starenja miševa. i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost uklanjanja slobodnih radikala DPPH i sposobnost uklanjanja reaktivnih vrsta kisika i sprječavanja degradacije kolagena izazvane slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravljanja oštećenja anjona slobodnih radikala timina.

Kliknite na Cong Rong Cistanche

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Ključne riječi

Polipeptid baršunastog roga; D-galaktoza; starenje; Intestinalna mikroekologija; učenje; Kognitivno oštećenje; PPAR /APOE4 put; Microbiota

1. Uvod

Polipeptid baršunastog roga (VAP) čini 50-60 posto vlažne težine baršunastog roga i jedan je od njegovih primarnih aktivnih sastojaka [1]. VAP je bogat proteinima, aminokiselinama, fosfolipidima, kolesterolom i jonima kalcija i ima različite efekte na zdravlje, pri čemu su zabilježeni efekti antioksidansa [2], otpornosti na osteoporozu [3] i imunološke regulacije [4]. Kako bismo bolje razumjeli ulogu VAP-a u prevenciji i liječenju neurodegenerativnih bolesti, prethodna istraživanja naše istraživačke grupe su također potvrdila da VAP može smanjiti nivoe glukokortikoidnog receptora, mineralokortikoidnog receptora i hormona koji oslobađa kortikotropin. Uočeni su i efekti VAP-a na osovinu talamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda i njegova sposobnost da inhibira neuronsku apoptozu [5].

Starenje mozga je prirodni fiziološki proces karakteriziran oksidativnim stresom (OS), nakupljanjem molekula oksidativnog oštećenja i promjenama u strukturi i funkciji neurona, što u konačnici dovodi do kognitivnog pada i gubitka pamćenja [6]. Među ovim faktorima, OS se smatra primarnim uzrokom neurodegenerativnih bolesti povezanih sa starenjem [7]. Kada je tijelo podvrgnuto štetnim stimulansima, dolazi do neravnoteže između stvaranja i uklanjanja slobodnih radikala, što rezultira povećanjem slobodnih radikala do nivoa koji premašuje antioksidativni kapacitet u tijelu. Značajno je da su prekomjerni slobodni radikali citotoksični, uzrokujući direktno oštećenje centralnog nervnog sistema [8, 9]. Ljudski mozak čini samo 2-3 posto ljudske tjelesne težine. Ipak, centralni nervni sistem (CNS) čini 20 posto ukupne količine kiseonika u ljudskom tijelu. Stoga je sadržaj neuronskih slobodnih radikala u CNS-u značajan, što predstavlja visok rizik od OS [10].

Ljudska crijevna mikrobiota, koja se sastoji od više od 100 vrsta, sadrži približno 10-puto više bakterija od ljudskih ćelija [11]. Firmicutes su najzastupljenija vrsta unutar mikrobiote ljudskog crijeva, čineći 60 posto ukupnih bakterija, a slijede Bacteroidetes (15 posto) i druge komponente koje čine mali udio. Mikrobiota crijeva je u stanju dinamičke ravnoteže s ljudskim tijelom, a crijevni mikrobi imaju važnu ulogu u ljudskom metabolizmu, endokrinoj funkciji i imunološkoj regulaciji. Stoga, kada je struktura crijevne mikrobiote poremećena, mogu se pojaviti neurodegenerativne bolesti, kardiovaskularne bolesti i gojaznost [12]. Promjene u količini i raznolikosti crijevnih mikroorganizama također mogu utjecati na crijevni i centralni nervni sistem. Ove interakcije su poznate kao osa mikrobiota-crijevo-mozak, koja je važna za tjelesnu funkciju [13, 14]. Iako promjene u profilima crijevne mikrobiote ne utječu nužno na zdravlje, gubitak raznolikosti u jezgri mikrobiote povezan je sa smanjenom kognitivnom funkcijom i pamćenjem [15]. Zaista, sa povećanjem starosti, promjene u bakterijskoj flori prvenstveno karakterizira smanjenje raznolikosti, probiotika, fakultativnih anaerobnih tvari i ukupnih kratkolančanih masnih kiselina [16].

Iako su brojne studije potvrdile da antioksidativni i anti-aging efekti povezani s VAP-om ublažavaju starenje, tačan mehanizam koji leži u osnovi ove aktivnosti ostao je nejasan. Stoga je u ovom radu, efekat protiv starenja VAP-a procijenjen in vivo na miševima putem Morrisovog vodenog lavirinta (MWM), biohemijske analize, bojenja hematoksilin-eozinom (H&E) i transmisione elektronske mikroskopije (TEM). Nadalje, procijenili smo promjene u crijevnoj mikroekologiji kod starijih mišjih modela tretiranih VAP-om koristeći tehnologiju sekvenciranja gena 16S ribosomalne RNK (rRNA). Naš cilj je bio rasvijetliti mehanizam djelovanja VAP-a u kontekstu starenja i pružiti teorijsku osnovu za razvoj novih terapijskih pristupa protiv starenja.

2. Materijali i metode

2.1 Eksperimentalni materijali

VAP was provided by the Molecular Pharmacology Laboratory, Changchun University of Chinese Medicine. Dgalactose (D-gal) and VE (purity >90 posto) kupljeno je od Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd. (Šangaj, Kina). Komercijalni kompleti superoksid dismutaze (SOD), malonaldehida (MDA), katalaze (CAT) i glutation peroksidaze (GSH-Px) kupljeni su od Nanjing Jiancheng Technology Co., Ltd. (Nanjing, Kina). Sve hemikalije i reagensi su bili analitičke čistoće.

Morris water maze (MWM) video sistem za praćenje i analizu kupljen je od Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd. (Chengdu, Kina). Transmisioni elektronski mikroskop je kupljen od Tecnai Corporation (Hillsboro, OR, SAD). Platformu za sekvencioniranje visoke propusnosti (MiSeq PE300) obezbijedila je Illumina (San Diego, Kalifornija, SAD).

2.2 Eksperimenti na životinjama

Šezdeset zdravih ICR miševa (SPF razreda, pola mužjaka i pola ženke, težine 22-26 g) kupljeno je od Changchun Yisi Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (sertifikat br. SCXK(Ji) -2018-0007). Miševi su uzgajani u odvojenim kavezima u ciklusima od 12 h svjetlo/mrak i na standardnoj temperaturi (22 ± 2 ◦C), uz hranu i vodu davani ad libitum. Svi miševi su adaptirani na ove uslove najmanje nedelju dana pre početka eksperimenata. Svi miševi su podijeljeni u pet grupa, kontrolnu, modelnu, grupu vitamina E (VE), VAP niske doze (VAP1) i VAP visoke doze (VAP2). Grupe VE, VAP1 i VAP2 su primale VE (100 mg/kg), VAP (200 mg/kg) i VAP (400 mg/kg), respektivno, tokom 10 dana, dok su kontrolna i model grupa primale destilovanu vodu. (isti volumen i istim intragastričnim putem). Počevši od 11. dana, kontrolnoj grupi je subkutano ubrizgan normalni fiziološki rastvor. D-gal (1000 mg/kg) je supkutano ubrizgan u stražnji dio vrata miševa u drugim grupama, a primjena modela je nastavljena 60 dana.

2.3 Morrisov vodeni labirint

MWM test je izveden 1 h nakon primjene D-gal 57. dana. Ukratko, platforma je postavljena u sredinu vodenog lavirinta. Voda je dodavana na platformu dok nije prešla 1 cm i održavana na približno 25 ◦C. Miševi su trenirani kontinuirano 1 sedmicu, a MWM test je formalno izveden prema standardnoj operacijskoj proceduri vodenog lavirinta. Prije službenog početka eksperimenta, u vodu je dodan titanov dioksid kako miševi ne bi mogli uočiti specifičan položaj platforme. Glave miševa su obojene u žuto za praćenje i prikupljanje podataka. Softver za video praćenje Morris vodenog lavirinta zabilježio je put plivanja miševa, postotak vremena boravka u srednjem prstenu i postotak udaljenosti kretanja srednjeg prstena.

2.4 H&E bojenje

Cijeli mozgovi miševa su fiksirani u 4 posto otopine paraformaldehida i stavljeni u parafin. Nakon 24 h, moždana tkiva su isječena, deparafinizirana, rehidrirana i obojena H&E. Isječke su zatim promatrane pod optičkim mikroskopom kako bi se zabilježile patološke promjene.

2.5 STAVKA

Nakon perfuzije, tkiva hipokampusa su odsječena, fiksirana s 2 posto paraformaldehida i 2,5 posto glutaraldehid fosfatnog pufera, dehidrirana korištenjem gradijenta alkohola, očišćena etoksi propanom, ugrađena, narezana i obojena uranil acetatom i olovnim citratom. Ultrastruktura neurona hipokampusa posmatrana je pod transmisijskim elektronskim mikroskopom.

2.6 Biohemijske analize

Uzorci mišje krvi su sakupljeni i centrifugirani na 3000 rpm tokom 15 minuta na 4 ◦C, nakon čega je sakupljen supernatant. Određivanje sadržaja MDA u serumu i aktivnosti SOD, GSH-Px i CAT izvršeno je prema uputama za komplet.

2.7 Profiliranje mikrobiote fekalnih uzoraka

Ukupna DNK je ekstrahirana iz fekalnih uzoraka i korištena kao šablon za PCR amplifikaciju V3-V4 regije bakterijskog 16S rRNA gena. Neobrađeni skup podataka pohranjen je u NCBI BioProject PRJNA731623 pod BioSample pristupnim brojevima SAMN19291644 do SAMN19291668. PCR proizvodi su kvantitativno analizirani, a sekvenciranje gena 16S rRNA je izvedeno na Illumina MiSeq platformi (Illumina, San Diego, SAD). Sirovi podaci su zasnovani na minimalnoj dužini preklapanja od 10 bp, sa maksimalnim dozvoljenim omjerom neusklađenosti u području preklapanja od 0,2 (podrazumevano). Očitavanja svakog uzorka su spojena, a oznake dužine manje od 75 posto dužine oznake nakon kontrole kvaliteta su filtrirane. Himere (to jest, ako dva roditelja imaju sekvencu koja je više od 80 posto slična sekvenci upita, onda se procjenjuje da je upit himera) su uklonjene kako bi se dobile visokokvalitetne sekvence oznaka. Istraživački softver (Sonoma, SAD) [17] korišten je za grupisanje oznaka na nivou sličnosti od 97 posto, klasifikaciju operativnih taksonomskih jedinica (OTU), dobijanje klasifikacije vrsta na osnovu sastava OTU sekvence i crtanje razrjeđenja uzorka [18] i krivulje Shanonovog indeksa . PICRUSt (Halifax, CAN) [19] je korišten za određivanje funkcionalnog sastava gena svakog uzorka putem poređenja informacija o sastavu vrsta prema rezultatima sekvenciranja gena 16S rRNA. Na taj način bi se mogle utvrditi funkcionalne razlike između različitih uzoraka ili grupa. Obilje, putevi, EC informacije i OTU izobilje u kontekstu svake funkcionalne kategorije dobijeni su korištenjem Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes [20] baze podataka.

2.8 Western blotting

Ukupni proteini su ekstrahovani iz moždanog tkiva, a Coomassie brilliant blue metoda je korištena za procjenu koncentracije proteina. Zatim, nakon SDS-PAGE elektroforeze, proteini su prešli na membranu, koja je potom inkubirana sa primarnim antitelima protiv ciljnih proteina apolipoproteina E (APOE4), acil-CoA oksidaze 1 (ACOX1), receptora aktiviranog proliferatorom peroksizoma (PPAR), karnitin-palmitoil transferaza-1 A (CPT1A) i gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza (GAPDH) preko noći na 4 ◦C. Nakon toga, membrana je isprana, a zatim inkubirana sa sekundarnim antitijelom na sobnoj temperaturi 1 h. Nakon ispiranja membrane sa Tris-puferiranim fiziološkim rastvorom i Tween 20 (TBST), dodan je poboljšani hemiluminiscentni (ECL) rastvor. Za skeniranje fotografije koristi se potpuno automatski sistem za snimanje u gelu (Aplegen, Pleasanton, SAD).

2.9 Detekcija nivoa slobodnih masnih kiselina (FFA) u moždanom tkivu

Tkivo mozga miša je sakupljeno i dodana je odgovarajuća količina fiziološkog rastvora. Zatim su uzorci centrifugirani na 4 ◦C pri 3000 rpm tokom 10 minuta, a supernatanti su sakupljeni. Nivoi FFA u moždanim tkivima određeni su uputstvima za komplet.

2.10 Detekcija sadržaja ATP-a u moždanom tkivu

Tkiva mozga miša su sakupljena i lizirana u moždanom tkivu: omjer pufera za lizu 1:5. Zatim su uzorci centrifugirani na 12,000×g na 4 ◦C tokom 5 minuta, a supernatanti su sakupljeni. Sadržaj ATP-a u moždanim tkivima određen je uputama za komplet.

2.11 Statistička analiza

Za analizu podataka korišten je SPSS 19.0 (Chicago, IL, USA). Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (x ± s). Studentov t-test je korišten za poređenje grupa, a razlike su smatrane značajnim pri P < 0.05 ili P < 0,01.

3. Rezultati

3.1 Poboljšanje kognicije, učenja i pamćenja kod starijih miševa tretiranih VAP-om

MWM test se oslanja na instinkt preživljavanja životinja da pronađu platformu za bijeg i uključuje traženje prostorne pozicije povezane s pamćenjem. Slika 1 prikazuje reprezentativne tragove miševa kojima je primijenjen MWM test posljednjeg dana. Dijagram putanje ponašanja miša grupe modela bio je složeniji i nepravilniji, a miševi nisu pronašli platformu. Treba napomenuti da je dijagram putanje ponašanja miševa u VAP1 i VAP2 grupama bio jednostavan i pronađena je platforma. U poređenju sa kontrolnom grupom, procenat vremena zadržavanja u srednjem prstenu i procenat udaljenosti koju je srednji prsten pomjerio u grupi modela su značajno smanjeni (P < 0.01). U poređenju sa grupom Model, procenat vremena zadržavanja u srednjem prstenu i procenat udaljenosti koju srednji prsten pomera su značajno povećani u grupama VE, VAP1 i VAP2 (P < 0.05, P < 0,01). Ovi nalazi ukazuju da je primjena VAP-a poboljšala kognitivne sposobnosti miševa koji stare D-gal.

3.2 Zaštitni učinak VAP-a na hipokampalne neurone kod ostarjelih miševa

H&E bojenje je korišteno za promatranje patološke morfologije moždanog tkiva kod starijih miševa kako bi se istražilo može li VAP poboljšati patološko oštećenje neurona izazvano D-gal (Slika 2A). CA1 ćelije u hipokampu iz kontrolne grupe bile su u izobilju, sa normalnom ćelijskom strukturom, kompletnom morfologijom i očiglednim jezgrama. Nasuprot tome, broj CA1 ćelija u hipokampu iz grupe modela se smanjio i pokazao je nepravilnu morfologiju, bez očiglednih jezgrica uočenih pod mikroskopom. Neuroni u CA1 području hipokampusa bili su relativno normalni, a skupljanje jezgre je smanjeno u VE grupi u odnosu na modelsku grupu. Zanimljivo je da se područje CA1 u hipokampuima iz VAP1 i VAP2 grupa značajno razlikovalo od one uočene u modelnoj grupi i slično kao u kontrolnoj grupi. Struktura je bila relativno normalna, ćelije su bile usko raspoređene i pravilne, a morfologija kompletna.

TEM je dalje korišten za promatranje ultrastrukture hipokampalnih neurona kod ostarjelih miševa i za razumijevanje da li je povratni učinak VAP-a na smanjenje učenja i pamćenja povezan s regulacijom mikrostrukture neurona u mozgu (slika 2B). Neuroni hipokampusa su pokazali netaknutu morfologiju, ujednačenu distribuciju hromatina i obilne organele u citoplazmi u kontrolnoj grupi. Pri velikom povećanju, mitohondrije su bile eliptične, sa jasnom dvostrukom vanjskom membranom i netaknutim kristama. Nasuprot tome, neuroni u hipokampalnoj regiji modelne grupe bili su abnormalni; uočene su rane apoptotske promjene kao što je kondenzacija hromatina; lipofuscina su bila češća; sinaptička struktura je bila nejasna; lipidne kapljice su raspršene, a otkrivena je ekspanzija Golgijevog kompleksa poput vezikula i smanjeni grubi endoplazmatski retikulum. Zanimljivo je da su u poređenju sa modelnom grupom, grupe VAP1 i VAP2 imale hipokampalne neurone koji su imali tendenciju da budu normalne strukture i morfologije, sa glatkim nuklearnim membranama, normalnim nukleolima i obiljem organela. Zapaženo je više sinapsi, sinaptičke vezikule u prednjoj membrani nisu imale abnormalnu agregaciju, morfologija intracitoplazmatskog Golgijevog tijela i mitohondrija je bila normalna, a lipofuscin je bio rijedak.

3.3 Učinci VAP-a na enzime povezane s oksidativnim oštećenjem

Negativan učinak OS je proizvodnja slobodnih radikala u tijelu, jedan od primarnih uzroka starenja i bolesti (slika 3). U poređenju sa kontrolnom grupom, aktivnosti SOD, CAT i GSH-Px u serumu modela miševa kojima je davan D-galad su značajno smanjene (P < 0.01, P < {{7 }}.{{10}}5), a sadržaj MDA je značajno povećan (P < 0.05), što ukazuje na uspješno modeliranje. U poređenju sa modelnom grupom, aktivnosti SOD, CAT i GSH-Px u VE grupi su značajno povećane (P < 0.01, P < 0.05) . U poređenju sa modelnom grupom, aktivnosti SOD i GSH-Px u VAP1 grupi su značajno povećane (P < 0,05, P < 0,01). Nasuprot tome, CAT je malo povećan, ali se nije značajno razlikovao. U poređenju sa modelnom grupom, aktivnosti SOD, CAT i GSH-Px u grupi VAP2 su značajno povećane (P < 0,05, P < 0,01). U poređenju sa modelnom grupom, sadržaj MDA u serumu miševa u grupama VAP1 i VAP2 je značajno smanjen (P < 0,05). Gore navedeni rezultati ukazuju da je učinak VAP-a protiv starenja povezan s povećanjem aktivnosti serumskih antioksidativnih enzima kod starenja miševa i smanjenjem peroksidacije lipida.

3.4 Učinci VAP-a na sastav i raznolikost crijevne mikrobiote kod miševa

Rezultati sekvenciranja gena 16S rRNA dali su 1,999,460 PE Reads, a nakon filtriranja i uklanjanja himera, dobijeno je 1,776,708 efektivnih oznaka. Prosječne dužine sekvenci uzoraka u kontrolnoj, modelnoj, VE, VAP1 i VAP2 grupi bile su 417,2, 416,2, 418,2, 421,0 i 420,4 bp, respektivno. Odnos čitanja sa Phred ocenom kvaliteta preko 30 (Q30) kretao se od 94,15 do 95,71 procenata.

Nakon toga, odredili smo sastav crijevne mikrobiote pomoću očitavanja gena 16S rRNA. Oznake dobijene sekvenciranjem visoke propusnosti grupisane su na nivou sličnosti od 97 procenata i generisan je Venov dijagram (slika 4A). Svaka grupa je imala 490 OTU-a, a u suštini nije bilo specifičnih OTU-a po grupi. Da bismo potvrdili da li dubina sekvenciranja ispunjava zahtjeve za identifikaciju vrste, nacrtali smo Shannon i krivulje razrjeđivanja za sve uzorke (Slika 4B, C). Obje krivulje u svim uzorcima bile su blizu platoa zasićenja, otkrivajući visoku pokrivenost (99 posto). Ovi podaci sugeriraju da je velika većina informacija o mikrobnoj raznolikosti u uzorcima izvučena i da se struktura i raznolikost bakterijske zajednice mogu precizno odrediti.

Alfa raznolikost odražava obilje vrsta (bogatstvo) i raznolikost vrsta. Shannon i Simpson indeksi se koriste za mjerenje raznolikosti vrsta i na njih utiče obilje vrsta u uzorku zajednice i ujednačenost vrsta (ujednačenost zajednice). Što je veća vrijednost Shanonovog indeksa, to je manja vrijednost Simpsonovog indeksa, što ukazuje da je raznolikost vrsta u uzorku veća [21]. Rezultati prikazani na slici 4D ne pokazuju značajne razlike u vrijednostima Shannon indeksa mišje flore između grupa.

U poređenju sa kontrolnom grupom, vrijednost Simpsonovog indeksa grupe modela nema značajnu razliku. Nije uočena značajna razlika između grupe modela i svake tretirane grupe. Ovi rezultati ne pokazuju značajnu razliku u raznolikosti crijevne flore miševa između grupa.

PCA je izvedena na crijevnoj flori miša (slika 4E), gdje su PC1 i PC2 dvije karakteristične vrijednosti koje uzrokuju najveću razliku između uzoraka. Rezultati su pokazali da 32,94 i 19,74 posto stepena uticaja imaju PC1 i PC2, respektivno. Što su tačke dalje, razlika je veća. Pet grupa uzoraka grupisano je u tri kategorije, pri čemu su uzorci grupe modela raspoređeni u gornjem levom uglu slike, daleko od ostalih grupa. Kontrolne, VE i VAP2 grupe pokazale su više preklapanja, a tri grupe uzoraka bile su blizu jedna drugoj. Gornja sredina slike 4E pokazuje da je nakon intervencije VAP-a poboljšana sličnost crijevne flore VAP2 grupe miševa sa onom kontrolnih miševa.

Razlike u zastupljenosti bakterija u kontrolnom modelu, VE, VAP1 i VAP2 grupama procijenjene su za prvih 20 rodova (slika 4F). Brojnost Lachnospiraceae_NK4A136_grupe i Lactobacillusa bila je različita između kontrolnih i modelnih životinja, pri čemu je brojnost Lactobacillusa u modelnoj grupi bila značajno smanjena. Nasuprot tome, brojnost preostalih rodova je značajno povećana. Značajno je da su Lactobacillus članovi probiotici sa anti-aging i protuupalnim efektima [22, 23]. Stoga ovi rezultati nisu bili iznenađujući. Zanimljivo je da je brojnost Lactobacillusa značajno povećana u VAP1 i VAP2 grupama u poređenju sa modelnom grupom, što sugerira da VAP može povećati sadržaj korisnih bakterija u crijevima, sprečavajući starenje.

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】