Učinci Xiaoyaosana na CAMP signalni put u moždanoj kori kod depresivnih pacova

 

Abstract

Cilj:Za procjenu promjena u serumu prostaglandina E2 (PGE2) i supstance P (SP) i ekspresije mRNA cikličkog adenozin monofosfata (cAMP) i proteina 1 koji veže element odgovora na cAMP (CREB1) u moždanoj kori depresivnih pacova, te istražiti molekularni mehanizam kojim Xiaoyaosan djeluje antidepresivno.

Metode: Četrdeset osam mužjaka SD pacova nasumično je raspoređeno u četiri grupe (n=12 svaka): normalna, model, Xiaoyaosan i fluoksetin. Model depresije je uspostavljen korištenjem hroničnog imobilizacijskog stresa (CIS). Xiaoyaosan je davan gavažom 30 minuta prije dnevnog modeliranja tokom 21 dana. Efekti slični antidepresivima procijenjeni su makroskopskim posmatranjem ponašanja, testom preferencije saharoze, testom na otvorenom terenu i testom prisilnog plivanja. Nivoi kortikalne cAMP i CREB1 mRNA su kvantifikovani pomoću qPCR fluorescencije u realnom vremenu. PGE2 i SP u serumu su mjereni enzimskim imunosorbentnim testom (ELISA).

Rezultati: U poređenju sa modelnom grupom, i Xiaoyaosan i fluoksetin značajno su oslabili ponašanje nalik depresiji; povećana potrošnja saharoze, broj vertikalnog uzgoja, horizontalna križanja i dotjerivanje u testu na otvorenom terenu; i smanjeno kumulativno vrijeme nepokretnosti u testu prisilnog plivanja. Oba tretmana su poboljšala kortikalnu histopatologiju, povećanu ekspresiju cAMP i CREB1 mRNA u moždanoj kori i smanjila nivoe PGE2 i SP u serumu (P < 0,01).

zaključak:Xiaoyaosan ispoljava jasne antidepresivne efekte kod depresivnih pacova, potencijalno putem regulacije kortikalnog cAMP signalnog puta.

Ključne riječi: Xiaoyaosan; Depresija; cAMP; CREB1; prostaglandin E2 (PGE2); Supstanca P (SP)

 

Uvod

Depresija je vodeći uzrok morbiditeta i invaliditeta u cijelom svijetu, koji duboko narušava kvalitetu života. Xiaoyaosan, klasična multi-biljna formula tradicionalne kineske medicine (TCM), pokazala je kliničku korisnost u svim uobičajenim depresivnim prezentacijama, podržavajući njen kontinuirani razvoj kao botaničke terapije.

Mehanički, cAMP–protein kinaza A (PKA)–CREB signalna kaskada je centralna za regulaciju raspoloženja i afektivnog ponašanja. Smanjenje regulacije ovog puta može izazvati depresivne fenotipove. CREB je uključen u patofiziologiju depresije, a aktivacija cAMP-om pojačava transkripciju nizvodnih gena; polimorfizmi i funkcionalne redukcije ove ose smatraju se faktorima podložnosti depresiji.

Inflamatorni medijatori također doprinose depresiji. Prostaglandin E2 (PGE2) posreduje u inflamatornim odgovorima, a povišeni PGE2 može izazvati depresivno ponašanje. Supstanca P (SP), neuropeptid povezan sa stresom i afektom, često je povišen u serumu pacijenata sa depresijom. Prema tome, izmijenjena ekspresija cAMP i CREB1 mRNA u kortiksu zajedno sa povišenim serumskim PGE2 i SP može predstavljati molekularni mehanizam koji leži u osnovi kortikalne povrede u depresiji.

Iako su brojne formule spojeva TCM-a istražene za antidepresivne mehanizme, utjecaj većine formula na cAMP put ostaje nejasan. Koristeći paradigmu kroničnog imobilizacijskog stresa (CIS) za induciranje ponašanja nalik depresiji kod štakora, ova studija dalje istražuje antidepresivni mehanizam Xiaoyaosana i uspoređuje ga s fluoksetinom, s ciljem informiranja o budućem razvoju botaničke terapije i pružanja praktičnih uvida za ljude koji traže pomoć za depresiju.

KAKO TCM BILJNI DODATKI UBLAŽAVAJU SIMPTOME PROSTATITISA

Materijali

 

Životinje

Četrdeset osam zdravih odraslih mužjaka Sprague–Dawley pacova SPF razreda (starih 8 sedmica, 200–220 g) kupljeno je od Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [Broj licence: SCXK (Peking) 2016-0006]. Pacovi su smešteni u objektu za životinje sa barijerom na Univerzitetu tradicionalne kineske medicine Guizhou na 22 ± 2 stepena, relativna vlažnost 35%-55%, 12 h svetla/12 h tame (7:00-19:00), četiri pacova po kavezu, sa 7 dana aklimatizacije. Etičko odobrenje: Univerzitet Guizhou TCM (br.. 20210142).

KAKO TCM BILJNI DODATKI UBLAŽAVAJU SIMPTOME PROSTATITISA

 

 

 

 

TCM DODATNE BILJE NA PRODAJU

Listing Details

 

 

 

Droge

Formula Xiaoyaosan slijedila je proporcije Taiping Huimin Heji Ju Fang. Sirovo bilje kupljeno je od Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.: Bupleurum (Chaihu), Bijeli božur (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), Prženi Atractylodes (Baizhu), Poria (Fuling), Med prženi Licorice (Zhia Bohue), i Men (Shengjiang), kombinovano u omjeru 5:5:5:5:5:4:1:5. Dekocija i koncentracija pripremljeni su u skladu sa izdanjem Farmakopeje Narodne Republike Kine iz 2020. od strane Hunan Jiuzhitanga, služeći kao intervencija TCM. Doze su konvertovane za pacove, rastvorene u dejonizovanoj vodi i pripremljene kao suspenzija.

Fluoksetin hidrohlorid kapsule (Patheon Francuska; pakovanje Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd.; serija br.. 6663B; 20 mg/kapsula) korištene su kao referentni antidepresiv.

Reagensi

ExTaq (TAKARA, kat. DRR100A); SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×) (Fermentas, Kat. #K0242); prajmeri (Qingke Bio); Pacov PGE2 i SP ELISA kompleti (Shanghai Yuanju Biotechnology Center, Cat. CK-E30697 i CK-E30122).

 

Instrumenti

7900 qPCR sistem za fluorescenciju u realnom vremenu (Applied Biosystems, SAD); mikropipete (Eppendorf); parafinski mikrotom (HY1508, Jinhua Huiyou); Aquapro sistem ultračiste vode (AJY-0501, Aikepu).

Metode

 

Grupisanje i modeliranje
Pacovi su nasumično raspoređeni u normalne, modelne, Xiaoyaosan i fluoksetin grupe (n=12 svaka). Osim normalne grupe, sve grupe su bile podvrgnute CIS-u u trajanju od 3 h dnevno u randomiziranim vremenima tokom 21 dana. Normalni pacovi nisu bili sputani, ali su bili uskraćeni za hranu i vodu tokom istog vremenskog perioda kako bi odgovarali rukovanju.

 

Administracija lijekova

Na osnovu prethodnih studija, Xiaoyaosan je davan gavažom u količini od 2,22 g sirovog lijeka·kg-1·dan-1; fluoksetin u dozi od 2,0 mg·kg-1·dan-1. Lekovi su rastvoreni u dejonizovanoj vodi. Doze su izračunate konverzijom tjelesne površine; zapremina sonde je bila 10 mL/kg, davana 30 minuta prije svake dnevne sesije ograničavanja. Normalne i modelne grupe dobile su jednake količine dejonizovane vode.

 

Mjere i procedure ishoda

 

3.1 Makroskopska zapažanja

Dnevna opažanja bilježe mentalni status, kretanje i opći izgled.

 

3.2 Test preferencije saharoze

Pacovi su trenirani 3 dana. Dan 1: dvije boce 1% saharoze po kavezu. Dan 2: jedna boca zamijenjena dvostruko destilovanom vodom jednake zapremine. Nakon 24 sata bez hrane i vode, svaki štakor je dobio jednu bocu 1% saharoze i jednu dvostruko destilovanu vodu u trajanju od 1 sata. Boce su izvagane da bi se izračunala preferencija saharoze (%): unos saharoze / (saharoza + unos vode) × 100%.

 

3.3 Test na otvorenom terenu

Otvoreno polje crnih zidova (125 cm × 125 cm × 50 cm) korišteno je u mirnoj prostoriji. Pacovi su postavljeni u centar; u toku 5 minuta, zabilježeni su vertikalni brojevi uzgoja, horizontalni ukrštanja mreže i događaji dotjerivanja. Arena je između pokušaja očišćena sa 75% etanola i vode.

 

3.4 Test prisilnog plivanja

Pacovi su pojedinačno stavljeni u staklene cilindre sa 35 cm vode na 20 ± 2 stepena. Od uranjanja, ponašanje je zabilježeno 5 minuta kamerom visoke rezolucije. Izmjereno je kumulativno vrijeme nepokretnosti u trajanju od 5 minuta (nepokretnost definirana kao minimalno kretanje kako bi se nos držao iznad vode, blago savijanje tijela radi ravnoteže). Voda se mijenjala između životinja.

3.5 Histopatologija

Pacovi su anestezirani sa 3% natrijum pentobarbitala (0,15 mL/100 g). Šest štakora po grupi je podvrgnuto transkardijalnoj perfuziji sa 4% paraformaldehida, a zatim 0,9% fiziološkom otopinom za fiksaciju, dekapitaciju i ekstrakciju mozga. Mozak je uronjen u 4% paraformaldehida (4 stepena) tokom 72 h, umotan u parafin, obrezan i izrezan na ~5 μm. Sekcije su plutane na 48 stepeni, montirane, pečene na 60 stepeni 4 h, deparafinizovane i rehidrirane, obojene hematoksilinom, diferencirane, isprane, kontraobojene eozinom, dehidrirane, očišćene i prekrivene za mikroskopski pregled. Preostalih šest pacova po grupi je eutanazirano; cerebralni korteks je brzo seciran na ledu i pohranjen na -80 stepeni za ekstrakciju RNK.

 

3.6 Kvantifikacija mRNA

Ciljne sekvence su preuzete iz NCBI i prajmera dizajniranog sa Primerom 6.0.

cAMP: Naprijed 5′-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3′; Revers 5′-AGTCTCCTTCACTCCGGAACCTCA-3′; 133 bp.

CREB1: Naprijed 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Revers 5′-GGATACCTGGGCTAATGTGGCA-3′; 105 bp.

GAPDH: Naprijed 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Revers 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 bp.

qPCR uslovi: pre-denaturacija 90 stepeni tokom 30 s; 45 ciklusa od 95 stepeni 10 s, 60 stepeni 30 s, 72 stepena 30 s. Analiza krive topljenja: 95 stepen 1 min, 55 stepen 1 min, 95 stepen 1 min.

 

3.7 Serumski inflamatorni faktori

Za ELISA: (i) postaviti standarde i uzorke; dodati 50 μL standarda u graduiranim koncentracijama u standardne jažice; (ii) dodati 40 μL razblaživača uzorka u slijepu probu i jažice za uzorke, zatim 10 μL uzorka i promiješati; (iii) dodati 100 μL enzimskog konjugata u sve osim praznih uzoraka; (iv) zatvoriti i inkubirati na 37 stepeni 1 h; (v) razrijeđeni koncentrovani pufer za pranje 1:20; (vi) oprati 5 puta i osušiti; (vii) dodati 50 μL supstrata A zatim 50 μL supstrata B, inkubirati na 37 stepeni zaštićeno od svetlosti 15 minuta; (viii) dodati otopinu za zaustavljanje; (ix) očitati apsorbanciju na 450 nm sa praznim mjestima postavljenim na nulu.

 

Statistička analiza

Podaci su analizirani u SPSS 26.0 i izraženi kao srednja vrijednost ± SD. Nakon potvrde normalnosti i homogenosti varijanse, korištena je jednosmjerna ANOVA. P < 0,05 se smatra statistički značajnim.

Napomena čitaoca za praktičare i ljude koji traže pomoć

Za programere botaničkih/TCM antidepresiva: Studija povezuje klasičnu formulu sa specifičnim neurobiološkim putem (cAMP-CREB) i inflamatornim medijatorima (PGE2, SP). Takva dvostruka modulacija – signalizacija neuroplastičnosti plus upala – usklađena je sa suvremenom biologijom depresije i može voditi optimizaciju formule, odabir biomarkera i strategije kombinacije sa SSRI kao što je fluoksetin.

Za pojedince koji istražuju pomoć za depresiju: ​​Pretklinički rezultati ne mogu zamijeniti medicinsku skrb, ali sugeriraju da Xiaoyaosan može poboljšati depresivno ponašanje normalizacijom moždanih signala i smanjenjem upalnih signala. Ako razmatrate biljne opcije, konsultujte se sa kvalifikovanim kliničarom, posebno ako uzimate antidepresive, kako biste izbegli interakcije i osigurali doziranje i kontrolu kvaliteta.

 

Transitional takeaway

Xiaoyaosan je poboljšao ponašanje, histologiju mozga i molekularne markere kod depresivnih pacova izazvanih CIS-om, vjerovatno kroz povećanje kortikalne cAMP/CREB signalizacije uz snižavanje perifernih PGE2 i SP. Nadovezujući se na ovo, sljedeća studija će secirati uzvodne regulatore cAMP-a (npr. izoforme adenilil ciklaze i fosfodiesteraze) i utvrditi da li Xiaoyaosan direktno modulira ove ciljeve ili djeluje prvenstveno kroz protuupalne puteve koji konvergiraju na CREB.