Zaštitni efekti Kvercetina na oksidativnu stresno izazvanu tubularnu epitelnu štetu u eksperimentalnom pacov hyperoxaluria modelu

Za više informacija. Kontakttina.xiang@wecistanche.com

Apstraktno: Pozadina i ciljevi: Najčešćekamenje u bubregusu kamenje kalcija i kalcij-oksalat (CaOx) kamenje su najčešće vrste kalcija kamenja. Hiperoksalurija je bitan faktor rizika za formiranje ovih kamenja.Quercetinje polifonol sa antioksidansom, anti-upalnim, i mnogim drugim fiziološkim efektima. Cilj ove studije je bio istražiti zaštitni učinak quercetina u nefrolitiazi izazvanoj hiperoksalurijama. Materijali i metode: Mužjak Wistar-Albino pacova težak 250-300 g (n=24) su randomizirani u tri grupe: Control (n=8), etileinski glikol (EG)(n=8),i EG+kvercetin (n=8). Jedan posto EG-vodenog rastvora je dat svim štakorima osim kontrolne grupe kao vode za piće pet tjedana. Quercetin-vodeni rastvor je dat skupini EG+kvercetin oralnom gavagom u dozi od 10 mg/kg/dan. Malondialdehid (MDA), katalaza (CAT), ureja, kalcij i oksalat su analizirani u uzorcima krvi i urina. Histopatološke procjene i imunohistokemijske analize zaoksidativni stresiupalaindikatori p38 mitogen-aktivirane proteinske kinaze (p38-MAPK) i nuklearni faktor kappa B (NF-kB) su izvedeni na renalnim tkivima. Rezultati: MDA nivoi su bili znatno niži u skupini liječenim kvercetinom nego u skupini liječenim EG (p=0,001). Iako su nivoi CAT-a bili veći u skupini liječenoj quercetinom od EG-administrirana grupa, oni nisu bili značajno različiti među tim grupama. Izraz p38 MAPK bio je znatno manji u skupini liječenim quercetinom nego u EG grupi (p<0.004). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" the="" quercetin="" and="" eg="" groups="" in="" terms="" of="" nf-kb="" expression.="" conclusions:="" we="" conclude="" that="" hyperoxaluria="" activated="" the="" signaling="" pathways,="" which="" facilitate="" the="" oxidative="" processes="" leading="" to="" oxalate="" stone="" formation="" in="" the="" kidneys.="" our="" findings="" indicated="" that="" quercetin="" reduced="" damage="" due="" to="" hyperoxaluria.="" these="" results="" imply="" that="" quercetin="" can="" be="" considered="" a="" therapeutic="" agent="" for="" decreasing="" oxalate="" stone="" formation,="" especially="" in="" patients="" with="" recurrent="" stones="" due="" to="">

Ključne riječi: kalcij-oksalat; hiperoksalurija; oksidativni stres; quercetin

Kliknite ovdje da biste saznali više proizvoda

1. Uvod

Formiranje mokraćnog kamena uključuje nekoliko faktora, uključujući koncentraciju iona koji uzrokuju formiranje kamena, pH urina, stope protoka mokraćnih putova i anatomiju mokraćnog trakta[l]. Približno 75% kamenja bubrega su kalcijumski kamenci, a kalcij-oksalatni (CaOx)kamenci su najčešće naišli na kalcijaste kamenje [2,3]. Poznato je da je hiperoksalurija bitan faktor rizika za formiranje ovih kamenja. Rezultirajući porast koncentracije mokraćnih oksalata izaziva formiranje kamena putem kalcija i oksalatnih iona kako bi se formirali CaOx kristali na fiziološkom pH. Dokazano je da višak koncentracije oksalata oštećuje ćelije tubula bubrega putem slobodnih kiseonika radikala i povećane peroksidacije lipida i ovaj proces olakšava i formiranje CaOx kristala i njihovo pričvršćivanje za bubregov tubularni epitel [4,5].

Uprkos poboljšanjima liječenja bubrega, stope recitacije od 10% u jednoj godini, 35% u pet godina, a 50% u deset godina su prijavljene za kamenje kalcija oksalata [6,7]. Ove visoke stope ponovnog pojava navele su istraživače da istraže potencijalne preventivne metode za ponovno pojava CaOx kamenja [6-8].

Quercetinje flavanol koji se može naći u raznim jelima, uključujući orahe, vino, semenke, i nešto voća i povrća [8]. Pored svog potentnog antioksidanta, radikalnog skalvenginga i anti-upalnih aktivnosti, ima i antibakterijske, antivirusne, gastroprotektivne i imunološko-modulirajuće aktivnosti [8-10].

Povećanje oksidativnog stresa je prikazano kod pacijenata sa kamenjem u bubregu [11]. Kao takav, manji rizik od nefrolitiaze je prijavljen u bolesnika sa visokim nivoom antioksidansa od onih sa niskim nivoima antioksidasa [12]. Pokazalo se da Randallove plakete, za koje se smatra da su formirane zbog oksidativnog stresa, imaju bitnu ulogu u CaOx kamenom ponovnom pojavom [13]. Stoga, inhibicija nastanka randall plaka i oksidativni stres mogu biti od koristi za sprečavanje ponovnog nastanka kamena.

Ova studija je istraživala mogući zaštitni efekat quercetina u nefrolitiazi i nefrokalcinozi određivanjem njegovog uticaja na oksidativni stres i upalu u modelu hiperoksalurije štakora.

2. Materijali i metode

2.1.Životinje

Mužjak Wistar-Albino štakora težak 250-300 g (n =24) korišteni su u ovoj eksperimentalnoj studiji, sprovedenoj u eksperimentalnoj laboratoriji univerziteta Süleyman Demirel. Štakori su bili u sobi održavanoj na 25±1°C sa 55% relativne vlažnosti. Dali su im hranu i vodeni ad libitum. Studija je sprovedena nakon uzimanja odobrenja od Süleymana Demirel University Animal Experiments Ethical Review Committee (broj odobrenja: 33/01). Svi eksperimenti su izvedeni na osnovu etičkih principa prijavljenih u Direktive Evropske unije 2010/63/EU za eksperimente na životinjama.

2.2. Hemikalije

Etilin glikol (EG) je kupljen od Merck Chemicals (Darmstadt, Njemačka), dok je quercetin kupljen od Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA).

2.3. Hyperoxaluria-Induced Nephrolithiasis Model i Quercetin Administration

Štakori su bili nasumično podijeljeni u tri grupe; kontrola (n=8), EG(n =8),i EG + kvercetin (n =8)grupa. Svi štakori osim kontrolne grupe dobili su 1% EG-vodenog rastvora kao vodu za piće pet sedmica[14]. Doza od 10 mg/kg/dan otopine kvercetina-vode je dat štakorima u EG+ kvercetin grupi oralnom gavažom. 24-satni uzorci urina prikupljeni su od životinja na dan prije davanje EG-a ili quercetina i dana 15. i 30. Štakori su anestezisani na kraju perioda petonedeljnog eksperimenta, a uzorci krvi su prikupljeni iz inferiornog cava žilice. Onda su pacovi bili žrtvovani, i oba bubrega su brzo ekscised. Desna bubrega su ugrađena u 10% neutralno-buferiran formaldehid. Lijevi bubregi su oprani hladnom 0,9% otopinom natrijevog hlorida i čuvani na -80 °C do homogenizacije.

2.4.Biohemičke analize

Analiza nivoa oksalata u plazmi izvršena je tehnikom koju je ranije opisao Ladwig et al. [15]. Nivo mokraćnog oksalata određen je enzimom Trinity Biotech Oxalate kit (Trinity Biotech pic, St. Louis, MO, USA). Katalazo (CAT) je antioksidantni enzim [10,16]. Aktivnost katalaze mjerena je metodom Aebi [16]. Nivo supernatantnih proteina analiziran je od strane serumskog albumina goveda koristeći Lowry metodu kao što je opisano u standardnom protokolu[17]. Malondialdehyde (MDA)nivoi su također ana-lyzed budući da se MDA smatra biomarker oksidativnog stresa [9]. Malondialdehyde nivoi su mjereni spektrofotometrijski kao po metodi koju je predložio Ohkawa et al. [18]Otkrivanje proteina je izvršeno metodom koju je opisao Lowry et al. [17]. Nivo kreatinina u plazmi i mokraći mjeren je colorimetrijom po Jaffe metodi; Koncentracije ureje u plazmi analizirane su kinetičko-colorimetrijskim metodama i ureazom i reakcijama glutamat dehidrogenaze. Za suprotno, nivo kalcija u urinu je izmjeren autoanalizerom preko Schwarzenbacha i o-Cresolphthalein kompleksnom metodom. Tajmiran urin i uzorci krvi su prikupljeni za izračun očiscenosti kreatinina. Volumen urina(V)je izražen u mL, dok su nivoi kreatinina u serumu i urinu izraženi u mg/dl. Prohodnost kreatinina je izračunata prema formuli:

Klirint kreatinina (mL/min)=U(mg/dL)× V(mL/min)/S (mg/dL)[V:Volumen urina (mL/min), U:Kreatinin u urinu (mg/dL), S: Serum kreatinin (mg/dL)]

2.5. Histopatološke analize

Desna bubrega su ugrađena u 10% neutralno-buferiran formaldehid (Merck-KGaA, Darmstadt, Njemačka). Obrada tkiv je pokrenuta nakon perioda fiksacije od 24-48 h.Bubregtkivima su bili obojeni hematoksilin i eozin (H&E) i ispitani pod svjetlosnim mikroskopom. Histopatološke preglede obavili su 10××, 20× i 40× uvećanja, posebno za procijenu vaskularne začepljenosti kako u meduli tako i u kortikalnim glomerulima, intenzivnosti infiltracije mononuklearnih ćelija, te veličinama i oblicima cjevaste lumina.

2.6. Imunohistohemijske analize

Nuklearni transkripcioni faktor-kB(NF-kB) i p38 mitogen-aktivirana proteinska kinaza (p38-MAPK) su dva glavna signalna puta na razini proteina u proinflammatory citokin biosintezi [19]. Osim toga, oksalat selektivno aktivira put signalizacije p38-MAPK [20]. Slajdovi su uneti u posudu za inkubaciju nakon blokade. NF-kB/p65 antitijelo (Santa Cruz, sc-109) je dodano u prvi dio, MAPK/p38 antitijelo (Santa Cruz, sc-7149)u drugi dio, a sekundarno protutijelo (Kozje anti-polivalentno, Thermo) je dodano u kasnije sekcije u svrhu kontrole i čuvano na +4°Covernight. AbcStaining Kit (Santa Cruz, sc-2018)je korišten za ostatak protokola za mrljanje. Tkivo prekriveno lamelom koristeći Entella je uskladišteno i sušeno za ispitivanje laganim mikroskopom. Sekcije su bile ocenjene kako slijedi, u zavisnosti od intenzivnosti mrljanja u svjetlosnoj mikroskopiji, kao u studiji Liu HS et al. [19]:(a)rezultat (negativan rezultat)∶ nema mrljanja;

(+) rezultat (1 pozitivan rezultat): blagi;

(++)rezultat (2 pozitivna rezultata): umjeren;

(+++) rezultat (3 pozitivna rezultata): prisutna je potpuna mrlja.

2.7.Statistika

Statistička analiza je izvršena pomoću statističkog paketa za društvene nauke 11.0 (SPSS 11.0) softvera. Vrijednosti su dane kao ± standardne devijacije. Normalna raspodjela varijabli je testirana jednim uzorkom Kolmogorov-Smirnov test. Sprovedena je jednosmjenska ANOVA i, ako se pokaže da je značajna, Duncanov post hoc test je korišten za procjenu i utvrđivanje razlika između grupa. P-vrijednost se smatrala značajnom kada je bila ispod<>

3. Rezultati

3.1. Biokemijski rezultati

Podaci iz grupe studija prikazani su u tabeli 1. Srednja MDA razina EG grupe bila je višu od kontrolne grupe, dok je srednja MDA razina kvercetin grupe bila znatno niža od EG grupe(p= 0,001). Nije bilo statistički značajne razlike između grupa po pitanju CAT aktivnosti. U našoj studiji, MDA nivoi su smanjeni za quercetin, dok cat aktivnost nije bila pogođena quercetin. Razina mokraćnih oksalata bila je znatno višu u EG skupini nego u drugim grupama (p<0.001). however,="" the="" urinary="" oxalate="" levels="" of="" the="" quercetin="" group="" were="" significantly="" lower="" than="" the="" eg="" group=""><0.001). these="" results="" indicated="" that="" quercetin="" reduced="" the="" urinary="" oxalate="" levels,="" which="" were="" increased="" by="" eg="" administration.="" while="" the="" plasma="" urea="" concentration="" increased="" significantly="" in="" the="" eg="" group="" compared="" to="" in="" the="" control="" group,="" a="" statistically="" significant="" decrease="" was="" observed="" in="" the="" quercetin="" group="" compared="" to="" the="" eg="" group=""><0.05). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" in="" terms="" of="" creatinine="" clearance="" and="" plasma="" oxalate="" levels="" (p="">0.05). Iako se quercetin snize nivo oksalata u plazmi to nije bilo statistički značajno. Koncentracija urinara kalcija bila je znatno niža u drugim grupama nego u kontrolnoj skupini (p<0.05). however,="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" eg="" and="" quercetin="" groups="" in="" terms="" of="" mean="" urinary="" calcium="" concentrations.="" altogether="" these="" findings="" indicate="" that="" eg="" increased="" urinary="" oxalate="" excretion="" and="" plasma="" urea="" concentration="" and="" decreased="" urinary="" calcium="">

3.2. Histopatološke rezultate

Histopatološki pregledi bubrega kontrolne grupe štakora pod svjetlosnom mikroskopijom otkrili su normalne nalaze(Nacisti 1-Kontrola). Nalazi, uključujući zagušenja u glomerularnim posudama, mononuklearnu ćelijsku infiltraciju, i sužavanje tubularne lumene, posebno u proksimalnim tubulama, otkriveni su u EG grupi (sliku 1-EG). Slični histopatološki nalazi su uočeni u grupi quercetin, ali su svi bili blaži (figura 1-EG+ kvercetin). Međutim, nije korišten sistem za ocjenjivanje da li je ta razlika statistički značajna.

3.3. Imunohistokemijski rezultati

Utjecaj kvercetina na p38 mitogen-aktiviranu proteinsku kinazu (p38-MAPK) i nuklearni faktor kappa B(NF-kB) istražen je imunohistohemijskim bojenjem bubrega (na 2. Usporedba grupa u smislu p38-MAPK je elucidirala da su renalna tkiva pacova EG grupe zatamnjana znatno intenzivnije od onih štakora kontrolne grupe(p<0.001). on="" the="" other="" hand,="" p38-mapkstaining="" was="" significantly="" less="" intense="" in="" the="" quercetin="" group="" than="" in="" the="" eg="" group.="" the="" statistical="" analysis="" revealed="" that="" quercetin="" reduced="" p38-mapk="" activity="" significantly="" compared="" to="" the="" eg="" group=""><>

Usporedba grupa koje se tiču NF-kB immunostaininga je otkrila da su renalna tkiva štakora iz EG grupe umrljana znatno intenzivnije od onih štakora iz kontrolne grupe (p<0.001). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" the="" other="" groups="" in="" terms="" of="" the="" intensity="" of="" nf-kb="" staining.="" altogether,="" these="" findings="" pointed="" out="" that="" eginduced="" the="" p38-mapk="" and="" nf-kb="" activities="" in="" renal="" tissues.="" additionally,="" quercetin="" significantly="" reduced="" p38-mapk="" activity="" while="" it="" had="" no="" significant="" effect="" on="" nf-kb="" activity.="" the="" relevant="" data="" are="" displayed="" in="" table="">

4. Diskusija

Uprkos napretku u minimalno invazivnim metodama za liječenje nefrolitijaze, visoke stope zaostatka kamena i stope rekurencije i dalje predstavlja teške probleme za pacijente i urologe [21]. Stoga su potrebni efikasni strategije medicinskog liječenja.

Taèni mehanizmi formiranja kamena nisu identificirani; Međutim, poznato je da oko 80% kamenca u bubregu sadrži CaOx, a jedan od najčešćih uzroka CaOx kamenja je hyperoxaluria [1,22]. Oksalat je nuzbud normalnog metabolizma, eliminisan iz tijela u normalnim uslovima [20]. U hiperoksalurija. Višak mokraćnog oksalata se kombinira sa kalcijem u fiziološkim pHand formira CaOxcrystals, akumuliraju u bubrege. Pokazalo se da kristali CaOx oštećuju cjevaste ćelije bubrega i vode do bolesti bubrega [14,20]. Stoga su modeli hiperoksalurija štakora naširoko korišteni za imitiranje nastanka kamena u bubregu kod ljudi. U tim studijama, EG se koristio kao indukcijom hiperoksalurija, kao što je to bio slučaj u našoj studiji [14,20].

Prijavljeno je da se koncentracija oksalata u mokraći povećala u roku od dva dana, hiperoksalurija se razvila u roku od tri dana, CaOx kristalurija se razvila u roku od dvije sedmice, a CaOx nefrolitiaza je uočena unutar 4-6 sedmica kada je 0,75-1% EG primješteno za induciranje hiperoksalurije [14,22]. Na kraju ovog procesa, ostali urinarni faktori i očisćivanje kreatinina ostali su u normalnim granicama, dok su urinske pH i citratno izmetanje značajno smanjeni [14,22]. U našoj studiji, mi smo inducirao hiperoksalurija dajući 1% EG, što je naknadno dovelo do ćelijskog oštećenja u cevastim ćelijama.

U hiperoksaluriju, nakupljanje CaOx kristala u renal papila kolekcionar lumina i rezultantne kamenolike naslaga dovesti do opstrukcije, što utiru put za propadanje bubrega. Kao rezultat ovog procesa, nivoi dušikovog otpada u krvi, kao što su mokraćna kiselina, dušik ureje u krvi i kreatinin, mogu se povećati [22,23]. U našoj studiji, disfunkcija bubrega je demonstrirana označenim povećanjem razine ureje u serumu kod životinja liječenih EG-om. Međutim, liječenje quercetinom značajno je smanjilo nivo ureje u serumu.

Quercetin je molekula sa potentnim antioksidantnim i anti-upalnim efektima [24]. Ima ga u povrću, voću, čaju i brojnim vrstama hrane. Pored toga što je jak strvinar reaktivnih vrsta kisika (ROS), quercetin povećava ukupan plazma antioksidativni kapacitet [25,26]. Bilo je prijavljeno u nekim studijama da flavonoidi smanjuju oksidativni stres u cjevastim ćelijama bubrega, sprječavaju nakupljanje CaOx kristala i smanjuju peroksidaciju lipida izazvanu oksalatom u kulturama ćelija [27,28].

Široko je prihvaćeno da oksidativni stres igra značajnu ulogu u formiranju kamenca u bubregu [12,22]. CaOx kristali akumulirani u tkivu bubrega što dovodi do sinteze nekoliko makromolekula koji pokreću upalne i fibrogene procese. Reaktivne vrste kisika su najvjerovatnije uključene u različite signalne događaje u ovom periodu [14]. I u studijama kulture životinjskih i bubrega epitela ćelija, slobodna radikalna formacija je prikazana kao odgovor na hiperoksalurija i caOx formiranje kristala [20,22]. Budući da su lipidi najosetljiviji biomolekuli u ćelijskom membranu protiv slobodnih radikala, lipid peroksidacija se javlja u ćelijskih membrana [27,28]. Peroksidacija lipida je primarni događaj ćelijskih oštećenja budući da remeti strukturu membrane i naknadno uzrokuje oštećenje ćelija. MDA je pokazatelj peroksidacije lipida; također ukazuje na to da je ROS preprodukiran [22,29]. Stoga se koristi u procjeni peroksidacije lipida. Poznato je da se oštećenja uzrokovana taloženjem CaOxcrystala i formiranjem ROS-a mogu spriječiti ili smanjiti endogenim antioksidansima kao što su superoksid dismutaze (SOD), CAT i glutation peroksidaze (GSH-Px) [20,22,29]. U sadašnjoj studiji, MDA nivoi su pronađeni da se povećavaju u eksperimentalnom životinjskom modelu hiperoksaluricne nefrolitijaze, koja je uspješno stvorena od strane etilenskih glikola administracije. Naša studija je takođe pokazala da je quercetin smanjio oksidativni efekat za pojačavanje stresa hiperoksalurije, što pokazuju i biohemijski i histopatološki parametri.

Poznato je da ROS aktivira molekule signala kao što su protein kinaza C (PKC), c-Jun N-terminal kinaza (JNK), i p38-MAPK [21]. Aktivacija ovih molekula signala dovodi do indukcije NF-kB i aktivnih faktora transkripcije proteina-1(AP-1). Kao rezultat ovih događaja, ekspresija proteina kao što su monocitni hemoattractant protein-1 (MCP-1), osteopontin (OPN), fibronektin i transformacija faktora rasta-beta 1 (TGF-β1)povećavaju [20]. Ovi proteini olakšava prianjanje CaOx kristala i relevantne upalne procese [20]. Peerapen et al. je izvijestio da su p38-MAPK signalni putevi posredovali poremećajem uskih veza između epitelnih ćelija [30]. Također su pokazali da se izraz proteina uključenih u put signalizacije p38-MAPK povećao tokom formiranja kalcij-oksalatnog kamena. Također je dokazano da je oksalat selektivno aktivirao signalni put p38-MAPK, koji je imao bitnu ulogu u nefrotoksičnosti oksalata u ljudskim epitelnim ćelijama bubrega [31]. Shiyong Qi et al. je dokazao da su CaOx kristali inducirali poboljšanje adhezija molekula u proksimalnim tubularnim epitelnim ćelijama, a taj proces je posredovan putem signalizacije p38-MAPK [31]. Naša studija je pokazala da je oksalat inducirao p38-MAPK i NF-kB aktivaciju. Osim toga, pokazali smo da je quercetin značajno smanjio aktivnost p38-MAPK. Na osnovu ovih informacija, može se predložiti da quercetin može spriječiti ponovno pojava CaOx kamenja.

Studija ima neka ograničenja. Prvi je da nije bilo kontrolne grupe koja je apsorbirala samo kvercetin, stoga, učinak oralno danog kvercetina na proizvodnju i intestinalnu apsorpciju oksalita nije jasno evaluiran. Drugo, učinak kvercetina na apsorpciju etilena glikola također nije ocjenjivan. Prema tome, potrebna su daljnja istraživanja kako bi se razjasnio mehanizam djelovanja kvercetina na hiperoksalurija.

5. Zaključci

Zaključujemo da je quercetin inhibirao upalne i oksidativne procese izazvane hiperoksalurije u bubregu. Pošto ovi procesi vode do formiranja CaOx kamena, quercetin se može razmotriti u preventivnom medicinskom liječenju reverrentnog CaOx kamenja. Ipak, potrebna su daljnja eksperimentalna i klinička istraživanja kako bi se validirali naši nalazi.

Reference

1. Gambaro, G.; Vezzoli, G.; Casari, G.; Rampoldi, L.; D'Angelo, A.; Borghi, L. Genetics of hypercalciuria and calcium nephrolithiasis: From the rare monogenic to common polygenic forms. Am. J. Kidney Dis. 2004, 44, 963–986. [CrossRef]

2. Coe, F.L.; Parks, J.H.; Asplin, J.H. Patogeneza i liječenje kamenja u bubregu. N. Engl. J. Med. 1992, 327, 1141–1152. [CrossRef] [PubMed]

3. Khan, S.R.; Pearle, M.S.; Robertson, W.G.; Gambaro, G.; Canales, B.K.; Doizi, S.; Traxer, O.; Tiselius, H.G. Kamenje u bubregu. Nat. Rev. Dis. Primers 2016, 2, 16008. [CrossRef]

4. Sun, X.Y.; Xu, M.; Ouyang, J.M. Effect of Crystal Shape and Aggregation of Calcium Oxalate Monohydrate on Cellular Toxicity in Renal Epithelial Cells. ACS Omega 2017, 2, 6039–6052. [CrossRef] [PubMed]

5. Jonassen, J.A.; Kohjimoto, Y.; Scheid, C.R.; Schmidt, M. Oxalate toksičnost u renalnim ćelijama. Urol. Res. 2005, 33, 329–339. [CrossRef] [PubMed]

6. Hess, B.; Ryall, R.L.; Kavanagh, J.P.; Khan, S.R.; Kok, D.J.; Rodgers, A.L.; Tiselius, H.G. Metode za mjerenje kristalizacije u istraživanju urolitiaze: Zašto, kako i kada? Eur. Urol. 2001, 40, 220–230. [CrossRef]

7. Menon, M.; Koul, H. Clinical review 32: Calcium oxalate nephrolithiasis. J. Clin. Endokrinol. Metab. 1992, 74, 703–707. [CrossRef]

8. Anand David, A.V.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Overviews of Biological Importance of Quercetin: A Bioactive Flavonoid. Farmakogn. Rev. 2016, 10, 84–89. [PubMed]

9. Abdelhalim, M.A.K.; Moussa, S.A.A.; Qaid, H.A.Y. Zaštitna uloga quercetina i arginina na zlatnim nanočesticima je inducirala hepatotoksičnost kod štakora. Int. J. Nanomed. 2018, 13, 2821–2825. [CrossRef] [PubMed]

10. Yarahmadi, A.; Zal, F.; Bolouki, A. Protective effects of quercetin on nicotine-induced oksidativ stress in 'HepG2 cells'. Toksikol. Mech. Methods 2017, 27, 609–614. [CrossRef]