Preparativna izolacija i pročišćavanje četiri spoja iz cistanches Deserticola YC Ma brzom protivstrujnom hromatografijom

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

sažetak:

Nakon koraka obogaćivanja sastojaka na koloni silika gela, četirifeniletanoidni glikozidisu uspješno izolovani odCistanches deserticolai prečišćen preparativnom hromatografijom velike brzine protiv struje (HSCCC) sa dvofaznim sistemom rastvarača koji se sastoji od etil acetat-n-butanol-etanol-voda (40:6:6:50, v/v /v/v). Ukupno 30,9 mg akteozida, 13,0 mg izoakteozida, 12,5 mg siringalida A 3'- -L-ramnopiranozida i 7,2 mg 2'-acetilakteozida čistoće veće od 95 posto, kako je utvrđeno HPLC-ELSD dobijeno odvajanjem u jednom koraku od 297 mgEkstrakt cistanche deserticola, odnosno. Njihove strukture su identifikovane pomoću HR-MS, 1H-NMR i 13C-NMR.

Ključne riječi: brza protivstrujna hromatografija;Cistanches deserticola YC Ma;feniletanoidni glikozidi; acteoside; izoakteozid; siringalid A 3'- -L-ramnopiranozid; 2'-acetilakteozid.

Uvod

Cistanches deserticolaYC Ma, vrstaCistancheskoji pripada porodici Orobanchaceaef, je dobro poznata tradicionalna kineska medicina za liječenje nedostatka bubrega, ženske neplodnosti, morbidne leukoreje, neurapraksije i senilnog zatvora [1]. To je parazitska biljka koja je široko rasprostranjena na sjeverozapadu Kine. Do sada je iz ove vrste izolirano nekoliko spojeva, uključujući feniletanoidne glikozide (PhGs), iridoide i lignane [2]. Prijavljeno je da neki od PhG imaju antioksidativno, hepatoprotektivno i neuroprotektivno djelovanje [3-6]. Međutim, postupak izolacije i prečišćavanja PhG je težak i dugotrajan. Štaviše, klasične metode višestruke hromatografije ne samo da koriste veliki broj organskih otapala, već daju i manji oporavak uzorka. Protustrujna hromatografija velike brzine (HSCCC), tehnika particione hromatografije tekućina-tečnost bez podrške, nudi odličan oporavak uzorka u poređenju sa nekim konvencionalnim metodama i široko se koristi za odvajanje i pročišćavanje različitih prirodnih proizvoda [7–9] . Iako je nekoliko PhGs pročišćeno odCistanchesgenus i drugi od strane HSCCC [10–14], nijedan rad nije prijavio prečišćavanje akteozida, izoakteozida, siringalida A 3'- -L-ramnopiranozida i 2'-acetilakteozida u jednom dvofaznom sistemu.

U ovom radu izvještavamo o jednostavnoj metodi za odvajanje i prečišćavanje četiri PhG iz C. deserticola. Konačno, 30.9 mg akteozida, 13.0 mg izoakteozida, 12.5 mg siringalida A 3'- -L-ramnopiranozida i 7.2 mg 2'-acetilakteozida dobijeno je u jednom koraku odvajanje od 297 mg frakcije sa čistoćom od 99 procenata, 95 procenata, 99 procenata i 98 procenata, respektivno. Njihove strukture su okarakterisane na osnovu 1H- i 13C-NMR spektralnih podataka i HR-MS spektra. Strukture četiri PhG-a identificirane u ovom istraživanju prikazane su na slici 1.

Rezultati i diskusija

HPLC analiza sirovog ekstrakta

Sastavni dio obogaćen n-butanoičnim ekstraktom iz C. deserticola analiziran je HPLC-UV. Korištena je kolona Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm) (Thermo-Fisher Scientific Instruments, grad, skraćenica države, SAD), mobilna faza je bila metanol-voda (30:70, v/v). Brzina protoka je bila 1 mL/min. Talasna dužina detektora je postavljena na 254 nm. HPLC hromatogram je prikazan na slici 2. Vrhovi 1 do 4 odgovaraju akteozidu (1), izoakteozidu (2), siringalidu A 3'- -L-ramnopiranozidu (3) i 2'-acetilakteozidu (4), respektivno.

Izbor dvofaznog sistema rastvarača

Uspješno odvajanje pomoću HSCCC-a u velikoj mjeri ovisi o odabiru odgovarajućeg dvofaznog sistema rastvarača, dvofazni sistem otapala je odabran prema vrijednostima koeficijenta podjele (K) svake ciljne komponente, a optimalni raspon K bi trebao biti od {{ 2}}.5 do 2.

U eksperimentu, vrijednosti K za ciljne komponente nekoliko dvofaznih sistema rastvarača prikazane su u tabeli 1 (iako su malo više za pik 4, rezultati su se pokazali prihvatljivim). Među njima, etil acetat–n-butanol–etanol–voda (40:6:6:50, v/v/v/v) je dao odgovarajuće koeficijente raspodjele za ciljna jedinjenja. Na kraju, sistem rastvarača sastavljen od etil acetat–n-butanol–etanol–voda (40:6:6:50, v/v/v/v) je korišten za izolaciju i prečišćavanje četiri jedinjenja C. deserticola, kao što je prikazano u Slika 3. Kao što je prikazano na slici 2, HPLC analiza svake HSCCC frakcije otkrila je da četiri čista PhG (akteozid, 99 procenata; izoakteozid, 95 procenata; siringalid A 3′- -L-ramnopiranozid 99 procenata i 2′- acetilakteozid 98 posto) može se dobiti iz sirove frakcije.

Eksperimentalno

Aparat

HSCCC oprema korišćena u ovoj studiji bio je TBE-300B sistem brze protivstrujne hromatografije (Shanghai Tauto Biotech Co., Šangaj, Kina) sa tri preparativne višeslojne kolone za odvajanje zavojnica povezane u seriju (prečnik cevi=2.6 mm, ukupna zapremina=300 mL) i petlja za uzorke od 20 mL. Polumjer okretaja ili razmak između ose držača i središtaosa centrifuge (osa centrifuge (R) bila je 5 cm, a vrijednost je varirala od 0.5 na internom terminalu do 0.8 na vanjskom terminalu (= r/R, gdje je r je udaljenost od zavojnice do osovine držača). Za kontrolu temperature u eksperimentu korišten je HX 105 uređaj za cirkulaciju konstantne temperature (Beijing Changliu Lab Instrument Company, Peking, Kina). HSCCC sistem je bio opremljen modelom TBP-5002 pumpom sa stalnim protokom srednjeg pritiska, modelom TBP-2000 UV detektorom koji radi na 254 nm i modelom V4.0 radnom stanicom (Jinda Biochemistry Instrument Company, Šangaj, Kina).

Korištena oprema za tečnu hromatografiju (HPLC) visokih performansi je Agilent 1200 sistem koji se sastoji od G1312A binarne pumpe, G1329A autosamplera, G1314A detektora varijabilne talasne dužine (VWD), G1316A termostatirane kolone i9B de G13LC gassera, radna stanica. Za detekciju čistoće korišten je Alltech 3300 ELSD. Agilent 6520 Q-TOF i Bruker AVANCE III 500-NMR spektrometri su korišteni za strukturnu identifikaciju jedinjenja. 1H i 13C-NMR spektri (na 500 i 125 MHz, respektivno) su izmjereni na sobnoj temperaturi (22 stepena /295,1 K).

Reagensi i materijali

Etil acetat, n-butanol i etanol su bili analitičke čistoće, a metanol HPLC kvaliteta. Svi rastvarači su nabavljeni od Tianjin Concord Technology Company (Tianjin, Kina). Za sve rastvore i razblaženja korišćena je Milli-Q voda (18,2 MΩ) (Millipore, Bedford, MA, SAD). Rizom C. deserticola je sakupljen iz provincije Unutrašnja Mongolija, Narodna Republika Kina, u junu 2009. Biljku je identifikovao prof. Lijuan Zhang, a uzorak vaučera (br. 20091001) je deponovan u našoj laboratoriji.

Priprema sirovog uzorka

U prahu osušene mesnate stabljike C. deserticola (1 kg) refluksovane su dva puta sa vodenim etanolom (8 L, 60 procenata v/v) svaki put po 2 h. Ekstrakt je uparen pod sniženim pritiskom i na temperaturi od 60 stepeni do potpunog isparavanja etanola. Ostatak je suspendovan u vodi i ekstrahovan sukcesivno tri puta sa hloroformom, etil acetatom i n-butanolom, dajući 5,16 g n-butanoičnog ekstrakta nakon isparavanja do suva pod sniženim pritiskom. Ekstrakt n-butanske kiseline je zatim odvojen na koloni silika gela (200-300 mesh) korišćenjem progresivnog gradijenta eluacije (CHCl3–MeOH, 10:1→1:1) da bi se dobilo osam frakcija. Frakcija 6 (297 mg) je korištena za daljnju izolaciju i odvajanje HSCCC.

Izbor dvofaznih sistema otapala

Dvofazni sistemi rastvarača odabrani su prema koeficijentu raspodjele (K) ciljnih komponenti u frakciji C. deserticola. Vrednosti K su određene LC analizom na sledeći način: Odgovarajuća količina praha sirovog ekstrakta (frakcija 6) rastvorena je u donjoj fazi sistema rastvarača i analizirana pomoću HPLC. Područja vrhova zabilježena su kao A1. Zatim je jednaka zapremina gornje faze dodana u rastvor i dobro promešana da bi se postigla ravnoteža podele. Donja faza je zatim ponovo analizirana HPLC. Posljednje vršne površine zabilježene su kao A2. K-vrijednosti su izračunate prema sljedećoj jednadžbi: K=(A1 − A2)/A2 [15,16].

Priprema dvofaznog sistema rastvarača i rastvora uzorka

U ovoj studiji, dvofazni sistem rastvarača sastavljen od etil acetat–n-butanol–etanol-voda (40:6:6:50, v/v/v/v) je korišten za odvajanje HSCCC. Svaki rastvarač je dodan u lijevak za odvajanje i temeljno uravnotežen na sobnoj temperaturi. Gornja i donja faza su razdvojene i degazirane sonikacijom 30 minuta neposredno prije upotrebe. Rastvor uzorka je pripremljen rastvaranjem 297 mg Frakcije 6 u 15 ml donje faze etil acetat–n-butanol–etanol–voda (40:6:6:50, v/v/v/v).

HSCCC procedura razdvajanja

HSCCC je izveden na sljedeći način. Višeslojna namotana kolona je prvo ispunjena gornjom organskom stacionarnom fazom. Donja vodena mobilna faza je zatim pumpana u glavni kraj kolone pri brzini protoka od 1,5 mL/min, a istovremeno je HSCCC aparat radio pri brzini okretaja od 900 rpm. Nakon što je uspostavljena hidrodinamička ravnoteža, na šta ukazuje bistra mobilna faza koja eluira na izlaznom otvoru (oko dva sata kasnije), 15 mL rastvora uzorka koji sadrži 297 mg sirovog ekstrakta (frakcija 6) je ubrizgan kroz injekcioni ventil. Efluent kolone je kontinuirano praćen pod 254 nm. Četiri vršne frakcije su sakupljene prema hromatogramu i zatim uparene pod sniženim pritiskom. Temperatura aparata je podešena na 25 stepeni.

HPLC analiza i identifikacija vršnih frakcija HSCCC

Frakcije pikova iz HSCCC analizirane su pomoću HPLC-ELSD. Korištena je kolona Accurasil C18 (250 mm × 4,6 mm, id 5 μm), mobilna faza je bila metanol-voda (30:70, v/v). Brzina protoka je bila 1 mL/min. ELSD je radio pod sledećim uslovima: Temp 45 stepeni, gas 1,6 L/min. Strukturna identifikacija četiri HSCCC vršne frakcije izvršena je HR-ESI-MS, 1H i 13C-NMR spektroskopijom.

Strukturna identifikacija

Frakcija I: HR-ESI-MS posmatrano na m/z 623,2001 (M−H)−, izračunato za C29H35O15, 623,1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 ramnoze), 2,79 (2H, t, J=7, 5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoze), 5,18 (1H, d, J=1 Hz, H{{34} } od ramnoze), 6,27 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar -CH=CH-), 6,5–7,1 (6H, aromatični H).13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C{{65} }), 146.2 (C-3), 144.7 (C-4), 116.4 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C- ), 36.6 (C- ), 127.7 (Caf-1), 115.3 (Caf-2), 146.9 (Caf-3), 149.8 (Caf-4), 116.6 (Caf{{ 98}}), 123.2 (Caf-6), 168.3 (Caf- ), 114.8 (Caf- ), 148.1 (Caf- ), 104.3 (G-1), 76.1 (Glc{{116} }), 81,7 (Glc-3), 70,5 (Glc-4), 76,3 (Glc-5), 62,4 (Glc-6), 103,1 (Rha{{131} }), 72,3 (Rha-2), 72,1 (Rha-3), 73,9 (Rha-4), 70,7 (Rha-5), 18,5 (Rha{{146} }). U poređenju sa podacima datim u literaturi [17], frakcija I odgovara akteozidu.

Frakcija II: HR-ESI-MS posmatrano na m/z 623,1987 (M−H)−, izračunato za C29H35O15, 623,1981. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,25 (3H, d, J=6,5 Hz, CH3 ramnoze), 2,78 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4.33 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoze), 5.17 (1H, d, J {{ 33}} Hz, H-1 od ramnoze), 6,28 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7,56 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatični H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,5 (C-1), 117,2 (C-2), 146,2 (C-3), 144,7 (C-4 ), 116.5 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C- ), 36.7 (C- ), 127.8 (Caf-1), 115.2 (Caf{{89 }}), 146.8 (Caf-3), 149.7 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 169.2 (Caf- ), 115,0 (Caf- ), 147,3 (Caf- ), 104,5 (G-1), 75,5 (Glc-2), 84,2 (Glc-3), 70,1 (Glc-4 ), 75,7 (Glc-5), 64,7 (Glc-6), 102,8 (Rha-1), 72,4 (Rha-2), 72,4 (Rha-3 ), 74,1 (Rha-4), 70,5 (Rha-5), 17,9 (Rha-6). 1H-NMR i 13C-NMR spektralni podaci su bili u saglasnosti sa onima izoakteozida kao što je objavljeno u literaturi [18].

Frakcija III: HR-ESI-MS posmatrano na m/z 6{{108}}7,2032 (M−H)−, izračunato za C29H35O14, 607,2032. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 ramnoze), 2,84 (2H, t, J=7, 5 Hz, Ar-CH 2-), 4,37 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoze), 5,19 (1H, d, J=1,5 Hz, H{{ 35}} ramnoze), 6,27 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 7,59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,6–7,1 (7H, aromatični H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 130,8 (C-1), 116,2 (C-2), 130,9 (C-3), 156,8 (C-4 ), 130.8 (C-5), 116.2 (C-6), 72.4 (C- ), 36.4 (C- ), 127.8 (Caf-1), 114.8 (Caf{{88 }}), 149.8 (Caf-3), 146.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168.3 (Caf- ), 115,4 (Caf- ), 148,0 (Caf- ), 104,3 (G-1), 76,3 (Glc-2), 81,7 (Glc-3), 70,4 (Glc-4 ), 76,1 (Glc-5), 62,5 (Glc-6), 103,0 (Rha-1), 72,3 (Rha-2), 72,2 (Rha-3 ), 73,9 (Rha-4), 70,7 (Rha-5), 18,4 (Rha-6). Prema literaturi [18], frakcija III odgovara siringalidu A 3'- -L-ramnopiranozidu.

Frakcija IV: HR-ESI-MS posmatrano na m/z 665.21{{20}} (M−H)−, izračunato za C31H37O16, 665.2087. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm: 1,09 (3H, d, J=6.5 Hz, CH3 ramnoze), 2,00 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J { {25}}.5 Hz, Ar-CH2-), 4.55 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoze), 4.90 (1H, d, J { {37}} Hz, H-1 ramnoze), 6.29 (1H, d, J=15.5 Hz, Ar-CH=CH-), 7.62 (1H, d, J=15,5 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5–7,0 (6H, aromatični H). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131,9 (C-1), 117,3 (C-2), 146,1 (C-3), 144,7 (C-4 ), 116.4(C-5), 121.4 (C-6), 72.7 (C- ), 36.4 (C- ), 127.7 (Caf-1), 115.4 (Caf{{93 }}), 146.9 (Caf-3), 149.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168.1 (Caf- ), 114,7 (Caf- ), 148,2 (Caf- ), 101,8 (G-1), 75,3 (Glc-2), 80,3 (Glc-3), 70,8 (Glc-4 ), 76,2 (Glc-5), 62,3 (Glc-6), 103,3 (Rha-1), 72,0 (Rha-2), 71,8 (Rha-3 ), 73,7 (Rha-4), 70,8 (Rha-5), 18,5 (Rha-6), 171,5 (C=O), 20,9 (OAC). 1H-NMR i 13C-NMR spektralni podaci su bili u saglasnosti sa onima za 2'-acetilakteozid [17].

Zaključci

HSCCC metoda za preparativno odvajanje i pročišćavanje akteozida, izoakteozida, siringalida A 3'- -L-ramnopiranozida i 2'-acetilakteozida izCistanches deserticola YC Maje osnovana. Ova studija ukazuje da je HSCCC veoma moćna tehnika za preparativno odvajanje i prečišćavanje bioaktivnih komponenti iz biljnih materijala. Takođe, jedinjenja se mogu izolovati u dovoljno velikom obimu sa visokom čistoćom i zatim se mogu koristiti kao referentne supstance za hromatografiju ili studije bioaktivnosti. Metoda je izvodljiva, ekonomična i efikasna tehnika za brzu preparativnu izolaciju složenih prirodnih proizvoda.

Priznanja

Ovaj rad je podržan od strane Programa za naučnike i inovativni istraživački tim na Univerzitetu Changjiang (PCSIRT), Projekat Plana međunarodne saradnje Ministarstva nauke i tehnologije Kine (2008DFB30070) i ​​Naučni program Levog barjaka Alašana ({{2 }}).

Reference

1. Kineska farmakopejska komisija. Farmakopeja Narodne Republike Kine; Narodna medicinska izdavačka kuća: Peking, Kina, 2010; Tom 1, str. 126.

2. Jiang, Y.; Tu, PF Analiza hemijskih sastojaka u vrstama Cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979.

3. Morikawa, T.; Pan, Y.; Ninomiya, K.; Imura, K.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M.; Yuan, D.; Muraoka, O. Acilirani feniletanoidni aminoglikozidi sa hepatoprotektivnim djelovanjem iz pustinjske biljke Cistanche tubulosa. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1882–1890.

4. Chen, H.; Jing, FC; Li, CL; Tu, PF; Zhang, QS; Wang, ZH Echinacoside sprječava smanjenje strijatalnih ekstracelularnih nivoa monoaminskih neurotransmitera kod 6-pacova sa hidroksidopaminskim lezijama. J. Ethnopharmacol. 2007, 114, 285–289.

5. Muraoka, O.; Ninomiya, K.; Morikawa, T.; Wakayama, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Hepatoprotektivni sastojci iz stabljike Cistanche tubulosa. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49–51.

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, OH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotektivne aktivnosti feniletanoidnih glikozida iz Callicarpa dihotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780.

7. Li, M.; Liu, RM; Sun, AL; Wu, SJ; Liu, NN Odvajanje i pročišćavanje rutina i akacija iz kineske ljekovite biljke Herba Cirsii kombinacijom makroporozne adsorpcijske smole i brze protustrujne hromatografije. J. Chromatogr. Sci. 2009, 47, 329–332.

8. Yin, H.; Zhang, S.; Luo, XM; Liu, YH Preparativna izolacija i prečišćavanje dva benzoksazinoidna glukozida iz Acanthus ilicifolius L. brzom protivstrujnom hromatografijom. J. Chromatogr. 2008, 1205, 177–181.

9. Peng, AH; Li, R.; Hu, J.; Chen, LJ; Zhao, X.; Luo, HD; Ye, HY; Yuan, Y.; Wei, YQ Gradijent brzine protoka brza protivstrujna hromatografija odvajanje pet diterpenoida iz Triperygium wilfordii i povećanje. J. Chromatogr. 2008, 1200, 129–135.

10. Xie, J.; Deng, J.; Tan, F.; Su, J. Odvajanje i prečišćavanje ehinakozida iz Penstemon barbatus (Can.) Roth reciklažom brze protivstrujne hromatografije. J. Chromatogr. B2010, 878, 2665–2668.

11. Li, L.; Tsao, R.; Yang, R.; Liu, C.; Young, JC; Zhu, H. Izolacija i prečišćavanje feniletanoidnih glikozida izCistanche deserticolabrzom protivstrujnom hromatografijom. Food Chem. 2008, 108, 702–710.

12. Li, L.; Tsao, R.; Liu, ZQ; Liu, SY; Yang, R.; Young, JC; Zhu, HH; Deng, ZY; Xie, MY; Fu, ZH Izolacija i pročišćavanje akteozida i izoakteozida iz Plantago psyllium L. brzom protivstrujnom hromatografijom. J. Chromatogr. 2005, 1063, 161–169. Molekuli 2012, 17 8284

13. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Ito, Y. Preparativna izolacija i pročišćavanje akteozida i 2'-acetil akteozida iz Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck brzom protivstrujnom hromatografijom. J. Chromatogr. 2001, 912, 181–185.

14. Lei, L.; Yang, FQ; Zhang, TY; Tu, PF; Wu, LJ; Chen, FK; Ito, Y. Preparativna izolacija i pročišćavanje feniletanoidnih glikozida iz ekstrakta fecesa pasa beagle brzom protivstrujnom hromatografijom. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2001, 24, 2187–2195.

15. Gao, SY; Feng, B.; Zhu, RN; Ma, JK; Wang, W. Preparativna izolacija tri antrakinona iz Rumex japonicus pomoću hromatografije velike brzine protiv struje. Molecules 2011, 16, 1201–1210.

16. He, F.; Bai, YH; Wang, J.; Wei, J.; Yu, CY; Li, S.; Yang, WL; Han, CH Izolacija i prečišćavanje oridonina iz cijele biljke Isodon rubescens brzom protivstrujnom hromatografijom. Molecules 2011, 16, 7949–7957.

17. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Novi feniletanoidni glikozidi iz cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. I. Chem. Pharm. Bik. 1987, 35, 3309–3314.

18. Yoshizawa, F.; Deyama, T.; Takizawa, N.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Sastojci cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. II. Izolacija i strukture novog feniletanoidnog glikozida i novog neolignan glikozida. Chem. Pharm. Bik. 1990, 38, 1927–1930.