Ekstrakt listova ocimuma gratisimuma bogat polifenolima spriječio je toksične efekte ciklofosfamida na funkciju bubrega Wistar štakora

Za više obratite se na:oscar.xiao@wecistanche.com

Abstract

Pozadina:Ciklofosfamid (CP) je jedna od moćnih i jeftinih kemoterapija koje se koriste u kliničkim uvjetima protiv raznih tumora. Međutim, njegova povezanost s nefrotoksičnošću ograničava njegovu terapijsku upotrebu. List Ocimum gratis simum je ljekovita biljka s brojnim farmakološkim i terapijskim djelotvornostima, poput antioksidativnih, protuupalnih i antiapoptotičkih svojstava.

Metode: Ova studija je osmišljena za procjenu zaštitnog efekta Ocimum gratissimum (OG) protiv CP-indukovane disfunkcije bubrega kod pacova. Štakori su prethodno tretirani sa 400 mg/kg t.m. ekstrakta lišća Ocimum gratissimum (Ocimum G.) tokom 4 dana, a zatim je 50 mg/kg t. i procijenjeni su oksidativni stres, unos hrane i vode, elektroliti, aldosteron, infltracija leukocita, upala i histopatološke promjene.

Rezultati:Očigledna upala bubrega i ozljede bubrega uočene su u grupama liječenim CP. Međutim, primjena ekstrakta lišća Ocimuma G. spriječila je oksidativni stres, ozljede bubrega, oslabljenu upalu, povećanu proizvodnju aldosterona i smanjen gubitak jona natrijuma i vode kod pacova. Koncentracija kreatinina u plazmi, ureje i albumina u urinu normalizirana je nakon primjene Ocimum G. ekstrakta kod pacova tretiranih CP. Ocimum G. je također smanjio koncentraciju interleukina-(IL)-6 u plazmi, C-reaktivnog proteina i aktivnost mijeloperoksidaze i malondialdehida kod pacova tretiranih CP.

Zaključak: Ocimum G. je spriječio ozljedu bubrega i poboljšao bubrežnu funkciju putem inhibicije upale i oksidansom izazvane CP toksičnosti. Efikasnost Ocimum G. povezana je sa prisustvom različitih fitokemikalija u biljci.

Ključne riječi:Antioksidans, kreatinin, ciklofosfamid, list Ocimum gratissimum, bubrezi, natrijum.

Pozadina

Ciklofosfamid (CP) je antineoplastično jedinjenje koje je povezano sa dušičnim senfom. Koristi se u kliničkom okruženju za liječenje širokog spektra bolesti raka i u imunosupresivnoj terapiji nakon transplantacije organa, liječenju autoimunih poremećaja kao što su reumatoidni artritis, Wegenerova granulomatoza i nefritični sindrom kod djece [1]. Bez obzira na širok spektar kliničke upotrebe lijeka, poznato je da CP uzrokuje brojne ozljede organa ovisne o dozi, što, stoga, ograničava njegovu terapijsku primjenu u kliničkom okruženju. Kako je poznato da je koristan u liječenju nefrotskog sindroma kod djece [1], obrnuto je u nekim prethodnim studijama zabilježeno da izaziva oštećenje mokraćne bešike [2, 3] i uzrokuje renalnu toksičnost kada se koristi na neodgovarajući način zbog upotrebe CP. predoziranje [4–6]. CP aktivni metabolit, 4-Hydroxycyclophospha-mide, djelimično se tautomerizira u aldosfosfamid, koji se zauzvrat razlaže fosfatazom u cirkulaciji i živoj ćeliji i stvara dva citotoksična metabolita, fosforamidni senf i akrolein [6]. Ranije je prijavljeno da je terapeutsko djelovanje fosforamidne gorčice odgovorno za antitumorske efekte [6], dok je akrolein odgovoran za citotoksične efekte CP, kao što je hemoragični cistitis tokom primjene lijeka [2, 7]. Toksični metabolit CP oštećuje živa tkiva smanjujući endogeni antioksidativni sistem tkiva kroz stvaranje reaktivnih slobodnih radikala kisika koji su mutageni za žive stanice. Prijavljeno je da primjena visoke doze CP povećava peroksidaciju lipida i uzrokuje smanjenje endogenih enzimskih i neenzimskih antioksidanata [7, 8]. Prethodne studije su opisale korisnu upotrebu antioksidativnih supstanci zajedno s kemoterapijom u prevenciji nuspojava lijeka na tjelesna tkiva [7, 9, 10]. Antioksidansi poput kolavirona pokazali su se efikasnim u prevenciji kardiotoksičnosti CP kod pacova [11]. Dakle, kombinacija odantioksidativno sredstvozajedno s lijekovima za kemoterapiju može biti potencijalni terapijski pristup za sprječavanje ili zaustavljanje citotoksičnog razvoja CP. Ocimum gratissimum (Ocimum G.) je porodica Lamiaceae koja pripada zeljastim biljnim vrstama. Poznat je kao karanfilić ili afrički bosiljak u mnogim zemljama tropskih područja (Azija, Indija, Brazil i Zapadna Afrika, itd.). U velikoj mjeri se nalazi u Nigeriji [12]. Mnoge države ove zemlje (Nigerija) koristile su Ocimum G. kao sos i supu od povrća. Utvrđeno je da listovi i listovi Ocimum G. posjeduju polifenole i druga bioaktivna jedinjenja [13, 14]. Biljke Ocimum gratissimum koriste se za liječenje različitih bolesti poput dijareje, ulceroznog kolitisa, groznice i katara [14–17]. Biljka ima mnoge farmakološke prednosti zbog svojih protuupalnih, antioksidativnih, antibakterijskih, antidijabetičkih i antimalarijskih svojstava [14, 18–20]. Antimikrobna aktivnost ekstrakta Ocimum G. testirana je in vitro protiv različitih ljudskih patogena kao što su Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Escherichia, Vibro spp, Enterobacter spp, Enterococcus faecalis, itd. Antifungalna aktivnost eteričnog ulja Ocimum G .ekstrakti su zabilježeni in vitro [19, 21, 22], a Ocimum G. je korišten kao apelant protiv komaraca [23]. Nedavna studija na životinjama ukazuje na važnost zaštitnog efekta ekstrakta Ocimum G. u prevenciji nepravilnosti krvnog pritiska protiv toksičnosti kobalt-klorida [24], kao i na ublažavanje srčanih abnormalnosti povezanih s fibrozom jetre smanjenjem interleukina-6 signalnog puta [25] ili izazivanjem antioksidativnih efekata [26]. Vodeni ekstrakt listova Ocimum G. pokazao je antioksidativne efekte protiv kardio-renalne povrede izazvane kobalt hloridom [24] i spriječio je čir na želucu smanjenjem lučenja i ulceracije želučane kiseline [27]. Također, ursolna kiselina iz ekstrakata Ocimum G. pokazala je djelovanje protiv srpa [28] i protiv raka [29, 30]. Nadalje, pokazalo se da eterična ulja Ocimum G. pokazuju vazorelaksantna svojstva zavisna od endotela kod pacova [31]. In vivo i in vitro studije su procijenile da eugenol, medicinski sastojak Ocimum G., snižava nivoe glukoze u krvi putem inhibicije alfa-glukozidaze [32]. Štaviše, klinička studija je utvrdila farmakološku adekvatnost Ocimum G. da pokaže sličnu aktivnost kao klorheksidin protiv plaka i gingivitisa [33]. Uz sve ove karakteristike Ocimum G., pretpostavili smo da bi Ocimum G. mogao biti mogući terapeutik kada se koristi zajedno sa CP za prevenciju ili zaustavljanje štetnih efekata CP. Ova studija je stoga osmišljena da ispita korisne efekte polifenola bogatog ekstrakta listova Ocimum gratissimum na nefrotoksičnost izazvanu CP kod mužjaka Wistar štakora.

Molimo kliknite ovdje da saznate više

materijali i metode

Ciklofosfamid (200mg/10mL) injekcija je nabavljena od Celon Laboratory (Hyderabad, Indija); ketamin hidrohlorid (50mg/10mL) injekcija je kupljena od Popular Pharmaceuticals Ltd., (Gazipur, Bangladeš); Kompleti za analizu biohemijskih parametara nabavljeni su od Randox Laboratories Limited, (Crumlin, UK), itd. Kupljeni su 1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH), metanol, natrijum karbonat, Trolox i Folin-Ciocâlteu reagens iz Merck & Co., Kenilworth, NJ, SAD. Instrumenti koji se koriste uključuju gasnu hromatografiju-maseni spektrometar (GCMS-QP2010 SE, Shimadzu Corporation, Kjoto, Japan) i ultraljubičasto vidljivi spektrofotometar (Beckman, DU 7400, SAD), Soxhlet aparat, rotacioni isparivač, mikroskop (Olympus CH; , Tokio, Japan); kamera (Leica DM 750).

Priprema polifenolnog ekstrakta Ocimum gratissimumleaves

Listovi Ocimum gratissimum sakupljeni su iz vrta u Usiju, država Ekiti, Nigerija. Pribavljene su relevantne institucionalne dozvole za prikupljanje Ocimum gratissimum. Ova studija je u skladu sa međunarodnim, nacionalnim i/ili institucionalnim smjernicama za korištenje različitih dijelova biljke. Uzorke biljke je ovjerio gospodin Omole, kustos herbarijuma Odsjeka za botaniku Univerziteta Obafemi Awolowo, Ile-Ife, gdje je vaučerski primjerak (1945) deponovan u herbarijum Univerziteta. Ekstrakt bogat polifenolima dobijen je iz listova Ocimum G. (900g) prema našim prethodnim metodama ekstrakcije biljke [14]. Za dobijanje finalnog produkta ekstrakcije, polifenola bogatog ekstrakta listova Ocimum gratissimum (PREOG) korišćen je metanol pod sniženim pritiskom na 40 stepena pomoću rotacionog isparivača. Dobiveni koncentrat ekstrakta osušen je zamrzavanjem uz pomoć liofilizatora. Ostatak (8{{40}}.85 g) je držan u Petrijevim posudama sa dobro pričvršćenim poklopcem i čuvan na -20 stepena dok nije bio potreban za istraživanje. Dobijeni ekstrakt OG rastvoren je u vodi (0,2 mL/davanje) i dat pacovima prema projektovanoj dozi. Analiza gasnom hromatografijom-masenom spektrometrijom (GC‑MS) OG ekstrakta Hemijski sastav dobijenog ekstrakta proveren je pomoću gasne hromatografije-masene spektrometrije (GC–MS). Chavez i dr. [34] metoda je usvojena uz neznatne izmjene. Za određivanje jedinjenja korišćena je kapilarna kolona fuzionisanog silicijum-dioksida (debljina filma 30×0,25 HP-5Ms, 0,25 μm) koja sadrži helijum kao gas nosač (brzina protoka 1/mL). Temperatura pećnice je podešena na 40 stepeni i držana 5 minuta, a zatim se postepeno povećavala za 3 stepena/min do 270 stepeni. 60:1 je postavljen kao omjer podjela. Za priključne dijelove i izvore jona postavljena je temperatura od 180 stepeni, a za maseni spektrometar postavljena je temperatura interfejsa od 240 stepeni. Za količinu energije ionizacije korišteno je 70 eV, dok je način rada elektronskog udara (EI) odabran da dobije stabilne i ponovljive masene spektre, a raspon vrijednosti od 50–650m/z korišten je za vođenje uzoraka. Vrijeme kašnjenja MS prije skeniranja bilo je 5 minuta. Dobijeni spojevi prikazani su u Tabeli 2. Određivanje ukupnog sadržaja fenola. Ukupan sadržaj fenola (TPC) u ekstraktima je procijenjen korištenjem Folin-Ciocâlteu tehnike kako su opisali Gulcin et al. [35], uz nekoliko modifikacija. Ukratko, 100 μL (0,5 mg/mL) ekstrakata Ocimum G. bogatih polifenolima stavljeno je u odvojene obične epruvete. Oko 500 μL (1 posto v/v) Folin-Ciocâlteu fenolnog reagensa dodano je u svaku epruvetu koja sadrži ekstrakt Ocimum G. i epruvete su ostavljene da stoje 5 minuta. a zatim vrtložni. Nakon stajanja 5 minuta, oko 400 μL (20 posto w/w) natrijum karbonata je dodano alikvotima, koji su zatim inkubirani u mraku na sobnoj temperaturi 90 minuta. Za razvoj boje. Apsorbancija svake mješavine je procijenjena ultraljubičastim vidljivim spektrofotometrom (Beckman, DU 7400, SAD) na 765 nm. Kao slijepa proba korištena je otopina natrijevog karbonata bez dodatka Folin-Ciocâlteu fenolnog reagensa. Za kalibracijsku krivu korišteni su standardi galne kiseline. TPC uzoraka određivan je linearnom regresijom standarda galne kiseline. Rezultati su predstavljeni kao ekvivalent galne kiseline (GAE) po gramu suve težine ekstrakta Ocimum gratissimum (mg GAE/g). Postupak je proveden u tri primjerka (n=3). DPPH test uklanjanja slobodnih radikala Te aktivnost ekstrakta uklanjanja slobodnih radikala određena je metodom koju su opisali RakMai et al. [36], uz neznatne izmjene. Dodano je oko 2 mL rastvora DPPH-metanola (180 μmol/L) i pomešano sa ekstraktom pri 0,1 mg/mL. Alikvoti su inkubirani u mraku na 25 stepeni. Apsorbancija uzorka određena je spektrofotometrom na 517 nm u različitim vremenskim intervalima između 0 i 60 min. Alikvoti ekstrakta bez dodatka rastvora DPPH–metanola korišćeni su kao slepci. Trolox, sintetički analogvitaminE, korišten je kao pozitivna kontrola. Donja jednadžba je korištena za procjenu svojstva čišćenja ekstrakata. Postupak je izveden u tri primjerka (n=3). Tamo gdje je uzorak ekstrakt plus DPPH, prazna oznaka je samo ekstrakt, kontrola je apsorpcija kontrolne otopine (koja sadrži samo DPPH). Briga o životinjama Dvadeset osam (28) mužjaka Wistar pacova težine 120-180 g je korišteno za istraživanje. Nabavljeni su od Animal Holding-a Koledža zdravstvenih nauka Univerziteta Obafemi Awolowo, Ile-Ife. Svi pacovi su držani u konvencionalnim kavezima 1 sedmicu kako bi se aklimatizirali na uslove okoline na 28-32 stepenu i omogućen im je slobodan pristup ishrani i čistoj vodi za piće. Eksperiment je odobrio Etički komitet zdravstvenih istraživanja (HREC) Univerziteta Obafemi Awolowo, a studija je opisana u skladu sa smjernicama ARRIVE (životinje u istraživanju: izvještavanje o eksperimentu in vivo) [37].

Cistanche protiv umora

Histopatološke studije

Tkiva su mikrotomom izrezana na {{0}} μm debele dijelove, fiksirana na stakalce i obojena PAS-om. Slajdovi su posmatrani pod svjetlosnim mikroskopom (Olympus CH; Olympus, Tokio, Japan) i fotomikrografije su snimljene Leica DM 750 kamerom na ×400 mag notifications. Odsjek bubrežnog tkiva je procijenio certificirani patolog koji je bio slijep na eksperimentalni protokol. Oštećenje glomerula je ocijenjeno između stupnjeva 0 i 4 procjenom mezangijalne proliferacije, debljine bazalne membrane i fibrinoidnih promjena. Oštećenje tubula je ocijenjeno između stupnjeva 0 i 4 procjenom vakuolne degeneracije, deskvamacije, tubularne degeneracije, proksimalne tubularne nekroze i formiranja gipsa. Tubulointersticijski inflamatorni infiltrati su ocijenjeni između stupnjeva 0 i 2 procjenom raznolikosti inflamatornih ćelija u mediju i prisustva infiltrata unutar epitela tubula (Tabela 1) [44]. Ukupno oštećenje bubrega od 0-2 predstavlja nikakvu/blagu nefrotoksičnost, 3-6 umjerenu nefrotoksičnost, a 7-10 tešku nefrotoksičnost [44].

Rezultati

Analiza gasnom hromatografijom-masenom spektrometrijom, sadržajem fenola i kapacitetom uklanjanja DPPH ekstrakta listova Ocimum gratissimum GC–MS analiza otkrila je neka bioaktivna jedinjenja ekstrakta listova Ocimum gratissimum (Tablica 2). Polifenolni sadržaj ekstrakta je prepoznat metodom Folin–Ciocâlteu (Tablica 2). Ukupni sadržaj fenola (TPC) (80.36±0.50mg GAE/100g) dobijen u ekstraktu Ocimum G. otkrio je da je ekstrakt Ocimum gratissimum bogat fenolnim sadržajem. Kapacitet ekstrakta za uklanjanje DPPH također je procijenjen izračunavanjem vrijednosti IC50, koja se odnosi na količinu ekstrakta koja je sposobna počistiti 50 posto slobodnih radikala sadržanih u reakcionoj smjesi. Vrijednost IC50 (22,12±0,43mg/ml) ekstrakta je bila visoka i to je značilo visokuantioksidansaktivnost listova Ocimum gratissimum. Tako se funkcija visokog sadržaja fenola u biljci pokazala u njenoj sposobnosti da ukloni aktivnost slobodnih radikala (Tablica 2).

Utjecaj PREOG-a i ciklofosfamida na klirens kreatinina

Značajno smanjenje renalnog klirensa kreatinina uočeno je u grupi koja je primala samo CP u poređenju sa kontrolnom (p<0.05). however,="" the="" preog-treated="" groups="" revealed="" a="" significant="" increase="" in="" the="" creatinine="" clearance="" when="" compared="" with="" cp="" alone="" treated="" group=""><0.05)>

Diskusija

U trenutnoj studiji postoje indikacije o povišenim nivoima u parametrima oksidativnog stresa kao što su lipidna peroksidacija, vodikov peroksid (H2O2) i dušikov oksid (NO), što sugerira da lipidi membrane i proteini bubrega pacova tretiranih s Samo CP su oštećeni. Takođe, smanjene su aktivnosti antioksidativnih enzima kao što su superoksid dismutaza i katalaza i nivo neenzimskog antioksidansa, redukovanog glutationa u grupi lečenoj samo CP. Smanjenje antioksidansa u bubrežnim stanicama pacova liječenih samo CP bio je pokazatelj neravnoteže redoks-homeostaze. Ranije je dokazano da CP inducira oksidativno oštećenje, upalu i nekrozu ili apoptozu stanica nakon aktivacije i promocije reaktivnih vrsta kisika (ROS) preko svog metabolita, akroleina [7, 11, 14], koji kasnije pokreću deaktivaciju i smanjenjeantioksidativna odbranakapacitete zahvaćenih organizama [10, 11, 45]. U ovoj studiji, prekomjerna proizvodnja ROS nadmašuje endogenuantioksidativni kapacitet, izaziva oksidativni stres, a zatim oštećuje bubrežne ćelije pacova tretiranih CP, što je refektirano povećanim nivoima markera oksidativnog stresa i smanjenim nivoimaantioksidativni parametri. Također, histološki pregled ovih pacova pokazao je oštećenje glomerula i tubularnu nekrozu bubrežnih stanica. Nadalje, redoks neravnoteža izaziva hiperprodukciju proinflamatornih citokina [3, 14]. Uočen je prekomjerna proizvodnja ROS-a koja je pokrenula peroksidaciju lipida i mobilizaciju proinflamatornih citokina i istovremeno izazvala upalno oštećenje bubrežnih stanica. Procjena IL-6 u ovoj studiji bila je značajno povišena kod pacova liječenih CP, što ukazuje na napad oksidativnog stresa i upalu bubrežnih ćelija. Utvrđeno je da povišenje IL-6 pokreće i/ili stimulira jetru da započne odgovor akutne faze što rezultira povećanjem proizvodnje cirkulirajućeg C-reaktivnog proteina (CRP) i drugih bioaktivnih medijatora [46]. CRP je bio značajno povećan kod pacova tretiranih CP, a povišeni nivo ovog biomarkera bio je pokazatelj ranog odbrambenog sistema od infekcija, informacija i oštećenja tkiva [47, 48]. Povišenje nivoa CRP-a u ovoj studiji dodatno je potvrdilo upalu kod pacova tretiranih samo CP. Uočeno je da CP izaziva smanjenje endogenih antioksidansa bubrega, kao što je prekomjerna upotreba GSH od strane bubrega zbog akumulacije proizvoda metabolita ciklofosfamida u bubrežnim tubularnim stanicama [9]. Kao rezultat ovog procesa, bubreg pacova tretiranih samo CP-om mogao je podstaći imunološki odgovor na svoje ćelije, što je kasnije rezultiralo upalom, što pokazuje povećanje CRP-a u plazmi. U skladu s tim, CP ima potencijal da izazove upalu i vjerovatno imunološko oštećenje u bubrezima pacova tretiranih CP.

Zaključak

Zaključno, rezultati ovih nalaza pokazali su da ekstrakt Ocimum gratissimum bogat polifenolima sprječava štetne nuspojave CP na bubrežnu funkciju kroz smanjenje oksidativnog stresa, sprječava prekomjernu proizvodnju proinflamatornih citokina i infltraciju leukocita, te poboljšava enzimsko djelovanje antioksidansa. aktivnost bubrežnog tkiva. Štaviše, potvrđeno je da je CP inducirao smanjenje lučenja aldosterona i olakšao prekomjerni gubitak natrijuma i vode kroz urin kod pacova. Međutim, ekstrakt Ocimum G. poboljšana bubrežna funkcija povećala je proizvodnju aldosterona i spriječila pretjerani gubitak natrijuma i vode kod pacova tretiranih CP. Prisustvo polifenola i antioksidansa u listovima Ocimum gratissimuma čine ga savršenim kandidatom za liječenje i/ili prevenciju nefrotoksičnog efekta ciklofosfamida.

Reference

1. Chabner BA, Ryand DP, Pax-Ares L, Garcis-Carbonero, Calaresi P. Anti-neoplastični agensi. U: Harnam JG, Libmirde LE, urednici. Goodman i Gilman su farmakološka osnova terapije. 10th ed. New York: McGraw Hill; 2001. str. 1389–459.

2. Chabner BA, et al. Antineoplastični agensi. U: Brunton LL, Lazo JS, Parker KL, urednici. Goodman i Gilman su farmakološka osnova terapije. 11th ed. New York: McGraw Hill; 2006. str. 1322–8. 1694.
3. Ge B, Yang D, Wu X, Zhu J, Wei W, Yang B. Citoprotektivni efekti lipozoma gliciretinske kiseline protiv cistitisa izazvanog ciklofosfamidom kroz inhibiciju upalnog stresa. Int Immunopharmacol. 2018;54:139–44.
4. Sinanoglu O, Yener AN, Ekici S, Midi A, Aksungar FB. Zaštitni efekti spiruline kod nefrotoksičnosti i urotoksičnosti izazvane ciklofosfamidom kod pacova. Basic Transl Sci. 2012.
5. Caglayan C, Temel Y, Kandemir FM, Yildirim S, Kucukler S. Naringin štiti od hepatotoksičnosti i nefrotoksičnosti izazvane ciklofosfamidom kroz modulaciju oksidativnog stresa, upale, apoptoze, autofagije i oštećenja DNK. Environ Sci Pollut Res Int. 2018;25(21):20968–84.
6. Zhang J, Tian Q, Yung S, Chuen S, Zhou S, Duan W, et al. Metabolizam i transport oksazafosforina i kliničke implikacije. Drug Metab Rev. 2005;37:611–703.
7. Famurewa AC, Edeogu CO, Ofor FI, Besong EE, Akunna GG, Maduagwuna EK. Smanjenje redoks neravnoteže i iNOS/NF-ĸB/kaspase-3 signalizacije uz dodatak cinka sprečava urotoksičnost hemoragičnog cistitisa izazvanog ciklofosfamidom kod pacova. Life Sci. 2021;266:118913.
8. Oyagbemi AA, Omobowale TO, Saba AB, Olowu ER, Dada RO, Akinrinde AS. Galna kiselina poboljšava neurotoksičnost izazvanu ciklofosfamidom kod Wistar pacova kroz aktivnost uklanjanja slobodnih radikala i poboljšanje antioksidativnog odbrambenog sistema. J Diet Suppl. 2016;13:402–19.
9. Abraham P, Isaac B. Efekti oralnog glutamina na nefrotoksičnost izazvanu ciklofosfamidom kod pacova. Hum Exp Toxicol. 2010;30(7):616–23.
10. Šerif IO. Neuroprotektivni mehanizamkvercetinprotiv urotoksičnosti izazvane ciklofosfamom: učinak na oksidativni stres i inflamatorne markere. J Cell Biochem. 2018;119(9):7441–8. 11. Omole JG, et al. Zaštitni učinak kolavirona na srčanu toksičnost izazvanu ciklofosfamidom kod pacova. J Evid Based Integr Med. 2018;23:1
11. Efraim KD, Jacks TW, Sodipo OA. Histopatološke studije o toksičnosti ekstrakta lišća Ocimum gratissimum na neke organe kunića. Afr J Biomed Res. 2003;6:21–5.
12. Akinmoladun AC, Ibukun EO, Emmanuel A, Obuotor EM, Farombi EO. Fitokemijski sastojak i antioksidativna aktivnost ekstrakta iz listova Ocimum gratissimum. Sci Res Essays. 2007;2:163–6.
13. Alabi QK, Akomolafe RO, Omole JG, Adefsayo MA, Ogundipe OL, Aturamu A, et al. Ekstrakt listova Ocimum gratissimum bogat polifenolima ublažava kolitis ublažavanjem ozljeda sluznice debelog crijeva i regulacijom proizvodnje proinflamatornih citokina i oksidativnog stresa kod pacova. Biomed Pharmacother. 2018;103:812–22.
14. Ofah VN, Chikwendu UA. Antidijaroični efekti ekstrakta lista Ocimum gratissimum kod eksperimentalnih životinja. J Ethnopharmacol. 1999;68:327–30.