DIO Ⅱ: Uloga ljudskog primarnog bubrežnog fibroblasta u TGF- 1-uređajima koji oponašaju fibrozu
Mar 26, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
DIO Ⅱ: Uloga humanog primarnog bubrežnog fibroblasta u TGF- 1-uređajima koji oponašaju fibrozu
Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee i dr.
Abstract
Bubrežna fibrozaje progresivna kronična bolest bubrega koja u konačnici dovodi do završnog stadijuma zatajenja bubrega. Uprkos nekoliko pristupa borbifibroza bubrega, eksperimentalni model za procjenu trenutno dostupnih lijekova nije idealan. Razvili smo modele koji oponašaju b koristeći trodimenzionalne (3D) uređaje za ko-kulturu dizajnirane sa tri odvojena sloja intersticijuma tubula, odnosno epitelnim, fibroblastičnim i endotelnim slojevima. Uveli smo ljudske proksimalne tubularne epitelne ćelije (HK-2), endotelne ćelije ljudske pupčane vene i bubrežne fibroblaste dobijene od pacijenata, te procijenili efektetranformirajući faktor rasta- (TGF-)iTGF-inhibitorni tretman na ovobubrežnifibrozamodel. Izrazfibrozamarker alfa-aktina glatkih mišićaTGF- 1tretman je povećan u monoslojno kultivisanim HK-2 ćelijama u 3D modelu bolesti. U vaskularnom odjeljkububrežnifibrozamodelima, gustoća žila je povećana i smanjena uTGF--liječena grupa iTGF-- grupa za tretman inhibitora, respektivno. Multiplex ELISA koristeći supernatante uTGF--stimulativni 3D modeli su pokazali da nivoi proinflamatornih citokina i faktora rasta uključujući interleukin-1 beta, faktor nekroze tumora-alfa, osnovni faktor rasta fibroblasta iTGF- 1, TGF- 2, iTGF- 3su povećane, što je oponašalo fibrozno mikrookruženje ljudskih bubrega. Ova studija može omogućiti izgradnju čovjekabubrežnifibroza- oponašanje modela uređaja izvan eksperimenata tradicionalne kulture.
Ključne riječi: renalni fibroblast; fibroza; TGF- 1
cistanche tubolosa zdravstvene prednosti: liječenje kroničnih bolesti bubrega
KLIKNITE OVDJE ZA DIO Ⅰ
3. Diskusija
TGF- 1igra važnu ulogu u akumulaciji matriksa u bubrežnoj fibrogenezi i inhibira proliferaciju u većini stanica, uključujući glomerularne epitelne i endotelne stanice, kao i tubularne epitelne stanice 【1】. Međutim, TGF-ß1 inducira proliferaciju u ljudskim bubrežnim fibroblastima putem indukcije osnovnog faktora rasta fibroblasta (FGF-2) [8].
U ovoj studiji ustanovili smo afibroza- imitirajući uređaj koji koristi tri bitne ćelijske komponente, uključujući ljudske primarne bubrežne fibroblaste, bubrežne tubularne epitelne ćelije i ljudske endotelne ćelije i procijenio ga kaobubrežnifibrozamodel zasnovan naTGF- 1stimulacija. Za generiranjebubrežnifibroza-na-čipu, uspostavili smo novi sistem 3D-kulture dizajniran sa tri odvojena dela tkiva, sa ciljem da se prevaziđu prepreke povezane sa modeliranjem bubrežne bolesti. Naša studija je to pokazalaTGF- 1inducirani ćelijski odgovori, uključujući tubularni epitelno-mezenhimalni prijelaz (EMT) epitelnih stanica, mikrovaskularne promjene endotelnih stanica i promjene citokina u bubrežnim fibroblastima. Ovo je prva studija koja je uvela afibroza- uređaj za oponašanje koji sadrži primarne fibroblaste izvedene iz ljudskih bubrega i stimulirane fibroblaste izolovane od pacijenata saTGF- 1, poznati induktor fibroznih odgovora koji se općenito koristi kao standard za oponašanjefibrozau ćelijskim kulturama [9]. Ovi rezultati ukazuju na toTGF- 1-tretirane epitelne ćelije se pretvaraju u fenotip nalik na mezenhimske ćelije. KadaTGF- 1se primjenjuje na fibroblaste, različiti citokini se mijenjaju kako bi odražavali indukciju fibroznih procesa. Očigledno je da ububrežnifibrozaU modelu, fibroblasti su glavna sila koja stoji iza razvoja uspostavljenog sistema kulture kroz TGF stimulaciju.
Davis i saradnici su izvijestili da je 3D kultura endotelnih stanica dovoljna da stanice napadnu i formiraju lumen i mrežu cijevi, prateći intaktni organizam in vivo [10,11]. Nekoliko grupa je izvijestilo da modeli 3D kulture pokazuju više razine nefrotoksičnosti od modela 2D ćelijske kulture [12]. Nadalje, ekspresija gena povezanih s nefrotoksičnošću i upalom bila je značajno veća u modelu bubrežne 3D ćelijske kulture nego u tipičnoj 2D kulturi[13].
U ovoj studiji, mediji kulture ljudibubrežnifibroza-on-a-chip je imao značajno viši nivo citokina u poređenju sa onim u 2Dculture. Naša grupa je pokazala da fibroblasti izvedeni od pacijenata mogu rekreirati nativno bubrežno tkivo, uključujući slojeve endotela i epitelnih ćelija, kroz naše predloženefibroza-na-čipu model. Shodno tome, ovi nalazi ukazuju da jebubrežnifibroza-on-a-chip model precizno simulira mikrofizičko okruženje ljudskog bubrega. Osim toga, budući da su fibroblasti uzgojeni u čipu izvedeni od pacijenata, drugi klinički relevantni modeli pacijenata mogu se lako i jasno dobiti na siguran način. Dakle, ljudskobubrežnifibroza-on-a-chip model sistem može omogućiti razvoj personalizirane medicine sa osjetljivim mjerenjima epitelnih i endotelnih funkcija. U našim eksperimentima,fibrozai angiogeneza su smanjene uTGF-grupe tretirane inhibitorima. TGF-inhibitori su prirodni antagonisti TGF-a, što je dokazano korištenjem različitih modela bubrežne bolesti. Čini se da je moguće provesti eksperimente kako bi se potvrdila efikasnost liječenja na modelima bolesti korištenjem terapeutskih agenasa kao što je ovaj inhibitor TGF-a. Stoga je ovaj čip pružio sredstva za razvoj poboljšanog modela renalne fibroze za mjerenje morfologije i funkcije stanica i mogao bi biti koristan u provođenju procjena nefrotoksičnosti za farmaceutske proizvode.
TGF-je dominantni profibrotički faktor u različitim bolestima bubrega [14] i igra ulogu u angiogenezi [15]. Angiogeni efekti TGF-a su veoma složeni i mogu imati ili proangiogenu ili antiangiogenu aktivnost u zavisnosti od okruženja i različitih regulatornih faktora [16]. Angiogeni faktori rasta kao što su VEGF i FGF-2indukuju angiogenezu in vivo izgleda da igraju centralnu ulogu u modulaciji angiogeneze in vivo [17-20]. Neki dokazi ukazuju da ova dva faktora mogu djelovati sinergistički kako bi promovirali morfogenetske događaje endotelnih stanica [21,22]. Dali smo dokaze da su ekspresija VEGF mRNA i izlučivanje proteina FGF-2 značajno povećane od strane TGF- 1 u 3D čipovima u poređenju sa 2D kulturom.
Ograničenje našegfibrozamodeli mogu biti da su nastali u relativno kratkom vremenskom periodu, 24 h. TGF-beta ima profibrotička i antiinflamatorna svojstva u ranim fazamafibrozaprocesu, a ne u hroničnom procesu. konvencionalno,TGF-primarno se koristi u citokinima induciranimfibrozamodeli. Međutim, pošto samo jedan citokin ne može biti predstavljen in vivo,fibrozaindukcijski modeli koji koriste nekoliko dodatnih supstanci kandidata kao što suTGF-i BMP7 su predloženi. Međutim, dva ili tri citokina još uvijek nisu dovoljna za reprodukciju in vivo. Koristili smoTGF-kao polazna tačka; međutim, pokušali smo da implementiramo in vivo mikrookruženje na čip indukujući raznovrsniju citokinsku oluju. Fibroblast, glavna ćelijska komponentafibroza, uvedena je i sekundarna stimulacija raznovrsnijih citokina (IL-1 , TNF- , b-FGF,TGF- 1, TGF-2, iTGF-3) je induciran u fibroblastima stimuliranim saTGF-. Dakle, okruženje sličnofibrozau ljudskom tijelu se reprodukovala.
ekstrakt cistanche deserticola: liječenje bolesti bubrega
4. Materijali i metode
4.1. Ćelijske kulture
Kidney fibroblasts(KFs)were isolated from biopsies of the normal tissue portion of renal cell carcinoma patients with an estimated glomerular filtration rate (eGFR)>60 mL/minuti/1,73 m2 nakon što su pacijenti dali pristanak na drugu biopsiju u svrhu istraživanja. KF su kultivisane u medijumu za rast fibroblasta (FGM-2, Lonza, Švajcarska), a pasusi 3 do 4 su korišćeni za eksperimente. Bubrežni fibroblasti su strugani iz kulture 1-2 sedmica dok ćelije nisu formirale monosloj. Da bi se eliminisale epitelne ćelije koje kontaminiraju kulturu, fibroblasti su odabrani pomoću magnetnih zrna protiv fibroblasta (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, Kalifornija, SAD) nakon prvog pasaža. Ćelije su odvojene pomoću 0.05 posto tripsin-etilendiamintetraoctene kiseline (EDTA) (Welgene, Gyeongsan, Koreja), inkubirane sa zrncima anti-fibroblasta, i razdvojene pomoću magnetne kolone, a protok- kroz je prikupljeno. Pročišćeni primarni fibroblasti su okarakterizirani fluorescentno aktiviranom analizom sortiranja ćelija (FACS) korištenjem PE-konjugiranih anti-fibroblastnih antitijela. Za nježno usitnjavanje bubrežnog tkiva korišten je disocijator za nježno magnetno aktivirano sortiranje ćelija (MACS). Octo MACSTM magnetni separator sa MACS LS kolonama (sa klipovima) primenjenim za prečišćavanje ćelija obeleženih mikrozrncima kupljen je od Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, Kalifornija, SAD). Nježne MACS C epruvete (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, Kalifornija, SAD) korištene su za mljevenje bubrega za odvajanje ćelija. MACS Smart Strainers (70 um) su nabavljeni od Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, Kalifornija, SAD). Pufer za kolonu je korišten za pranje kolona i resuspendiranje ćelijskih peleta. Pufer je pripremljen kao rastvor koji sadrži 0,5 posto goveđeg serumskog albumina (BSA) sa 2 mM EDTA u fiziološkom rastvoru puferisanom fosfatom (PBS) (pH7,4) i kupljen od Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, Kalifornija, SAD). Ljudske endotelne ćelije pupčane vene koje eksprimiraju zeleni fluorescentni protein (GFP-HUVECs, Lonza, Švicarska) uzgajane su u medijumu za rast endotela (EGM-2, Lonza, Švicarska), a korištene su ćelije u pasusima 3 do 4. Ljudska proksimalna tubularna ćelijska linija (ljudski bubreg-2(HK-2) ćelije su dobijene iz American Type Culture Collection (ATCC). Ćelijska linija je uzgajana u Dulbecco-ovom modificiranom Eagleovom mediju s visokim sadržajem glukoze (DMEM)) dopunjen sa 10 posto fetalnog goveđeg seruma (FBS), penicilina (100 U/mL) i streptomicina (100 ug/mL). Reagensi su kupljeni od Gibco (Rockville, MD, SAD). Sve ćelije su odvojene upotrebom 0,05 posto tripsina- EDTA i održavan u vlažnom inkubatoru na 37 stepeni i 5 procenata CO2. KF su ponovo suspendovani u FGM-2 u koncentraciji ćelija od 4×10 stepeni ćelija/mL Tubularne epitelne ćelije ljudskog bubrega (HK{{49 }}) su ponovo suspendovani u koncentraciji od 2×10 stepeni ćelija/mL u DMEM sa visokim sadržajem glukoze. GFP-HUVEC su resuspendovani u koncentraciji od 2×10 stepeni ćelija/mL u EGM-2.
4.2.Reagensi
Matrica se sastojala od fibrinskih gelova, uključujući komercijalno dostupan fibrinogen iz goveđe plazme, aprotinin iz goveđeg pluća i trombin iz goveđe plazme. Navedena tri materijala nabavljena su od Sigme (St. Louis, MO, SAD). Fibrinogen je rastvoren u 1×PBS u vodenom kupatilu (37 stepeni) tokom 30 min u koncentraciji od 10 mg/mL. Trombin i aprotinin su rastvoreni u dejonizovanoj vodi u koncentraciji od 50 jedinica/mL i 4 TIU/mL. Tri rastvora su sterilisana filtriranjem kroz filter od 0,22 μm. Rekombinantni ljudskiTGF- 1je nabavljen od PeproTech EC Ltd. (London, UK). Specifični inhibitor TGF-beta receptor kinaze, SB431542, kupljen je od Tocris Cookson, Inc. (Ellisville, MO, SAD).
4.3. Uzorak ćelija u uređaju
Prije sjetve ćelija kako bi se olakšalo čvrsto vezivanje, uređaj je tretiran 1 min u plazma mašini (Femto Science Inc., Suwon, Koreja) snage 70 W, 50 Hz. Površinska hidrofilnost izazvana tretmanom plazmom i pomogla je da se olakša oblikovanje gela i punjenje medija. Kako bi se izbjegle promjene u hidrofilnosti, eksperimenti su izvedeni unutar 30 minuta nakon tretmana plazmom. Različiti ćelijski uzorci unutar uređaja mogu se napraviti na vrlo prilagodljiv način. Bilo je važno unaprijed odrediti sastav i koncentraciju različitih tipova ćelija koje treba uzorkovati. Za suspenzije ćelijskog hidrogela, pripremljeno je 37,5 μL suspenzije ćelija i odvojeni alikvot od 12,5 μL rastvora fibrinogena od 10 mg/mL (250 μL rastvora fibrinogena od 10 mg/mL sa 40 μL 4 TIU/mL rastvora fibrinogena za odmah mešanje) prije utovara. Neposredno prije punjenja, 37,5 μL ćelijske suspenzije je pomiješano sa 12,5 μL 10 mg/mL fibrinogena do homogenizacije. 50 uL hidrogela je pomešano sa 1 uL kapljicom trombina (0,5 jedinica/mL). Odmah nakon miješanja, trombin sa suspenzijom fibrina GFP-HUVEC (koncentracija ćelija od 2×10' ćelija/mL) je ubrizgan u vanjski rub vanjskog kanala (Slika 3, Gel A). Čekali smo 3 minute da se umrežavanje fibrinogena završi. Odmah nakon miješanja, trombin sa suspenzijom fibrina KFs (koncentracija ćelija od 4×10 stepeni ćelija/mL) stavljen je na svaku stranu dna rezervoara po jažici (Slika 3, Gel C). Ova fibrinska suspenzija KFs je ostavljena da se umre na sobnoj temperaturi 3 min. Suspenzija ćelija od 10 μL humanih bubrežnih proksimalnih tubularnih epitelnih ćelija (HK-2) je ubrizgana u injekcioni port unutrašnjeg kanala (slika 3, gel B). Za pričvršćivanje HK-2 na zid fibrin gel u kanalu GFP-HUVECs, uređaj je okrenut za 90 stepeni i stavljen u 5% CO, inkubator na 30 minuta na 37 stepeni. HK-2 se smjestio i formirao ćelijski sloj sa strane fibrinskog gela.
Nakon spajanja HK-2, uređaj je napunjen EGM-2. Uređaj je inkubiran 3 dana na 37 stepeni u inkubatoru sa 5% CO. Podloga je promijenjena sa ili bez 5 ng/mLTGF- 1i sa 5 ng/mLTGF- 1i 10 umTGF- 1inhibitora nakon tri dana inkubacije (Slika 3).
šta je cistanche
4.4. Imunocitofluorescencija
Kokultivirana tkiva u uređaju su fiksirana sa 4 procenta (w/v) rastvora paraformaldehida (Biosesang, Seongnam, Korea) u PBS (Welgene, Gyeongsan, Korea) u trajanju od 20 min, nakon čega je uslijedila permeabilizacija sa 20 min uranjanja u 0,15 posto Triton X-100 (Sigma, St. Louis, MO, SAD). Uzorci su zatim tretirani sa 3% BSA (Sigma, USA) tokom 1 h. Ćelije su inkubirane sa antitijelima kupljenim od Abcam-a. Primarna antitijela su bila anti-citokeratin 8 i anti-o-SMA, ostavljena 2 dana na sobnoj temperaturi (RT). Alexa Fluor 647 konjugovani magareći anti-zečji IgG(H plus L) korišćen je kao sekundarno antitelo. Obeležavanje DNK je izvedeno sa 1:250 razblaženjem Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, SAD) tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Slike su prikupljene korišćenjem Zeiss LSM 710 konfokalnog laserskog mikroskopa. Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) mjeren je pomoću ImageJ i analizatora intenziteta fluorescencije.
4.5. Multipleksna analiza citokina
MSD V-Plex Citokine and Angiogenesis Panel 1 Human kit (Rockville, MD, USA) korišten je za mjerenje koncentracija interleukina-1 beta (IL-1ß) i osnovnog faktora rasta fibroblasta (b-FGF) u pojedinačnim uzorcima, prema uputama proizvođača. Svi uzorci su procijenjeni na ukupne nivoe proteina IL-1 i b-FGF. Količina (u pg/mL) je kvantificirana iz standardne krive svakog mjerenja.
4.6. Multiplex Bead Immunoassay
Koncentracije citokina su analizirane korišćenjem multipleksnog sistema za imunotestiranje (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, Kalifornija, SAD), zasnovanog na tehnologiji multipleksiranja (xMAP; Luminex, Austin, TX, USA), prema uputstva proizvođača. Podaci su prikupljeni korištenjem Luminex kompatibilne radne stanice i njenog softvera za upravljanje (Bio-Plex radna stanica i verzija 6.0 softvera; Bio-Rad, Tokio, Japan), prema uputama proizvođača. Ljudski TGF- 1, TGF- 2 i TGF- 3 koji se odnose nafibrozaprocesa analizirani su istovremeno u razrijeđenim uzorcima. IzoformeTGF-otkriveni su pomoću Bio-Plex 200 sistema i komercijalno dostupnih Bio-Plex ProTM HumanTGF-testovi (Bio-Rad Laboratories, Inc); na osnovu informacija koje je dao proizvođač. Komplet za multipleksno ispitivanje može kvantitativno izmjeriti više citokina iz supernatanta sa donjom granicom detekcije od 1 pg/mL po citokinu. Svaki uzorak je rađen kao jedno mjerenje za ograničenu količinu sakupljenog supernatanta.
4.7. PCR u realnom vremenu
Ekstrakcija RNK je izvedena pomoću TRIzol reagensa (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Master Mix i Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit su korišćeni za reverznu transkripciju ukupne RNK. qPCR je izveden korišćenjem Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix-a (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Specifične prajmere je pripremio Bioneer (Daejeon, Koreja) i korišćeni u ovom eksperimentu na sledeći način. Sekvence prajmera su sažete u tabeli 1.
Deset mikrolitara PowerUp SYBR Green Master Mixa, 4 μL cDNA i 2 pmol svakog prajmera korišćeno je za PCR u realnom vremenu u konačnoj zapremini od 20 μL. Reakcija je izvedena na 95 stepeni tokom 1s i 60 stepeni tokom 20 s tokom 45 ciklusa nakon denaturacije na 95 stepeni tokom 20 s. PCR je obavljen u duplikatu ili tri primjerka za svaki uzorak. Nivoi cDNK su određeni korišćenjem standardne krive pragova ciklusa. Svi podaci za svaku cDNK bili su unutar odgovarajuće standardne krive. Dobijeni podaci su normalizovani na -aktinsku cDNK.
4.8. Statistička analiza
Kvantitativni podaci su predstavljeni kao srednji ±SD ili SE od najmanje tri nezavisna eksperimenta. Statističke analize su obavljene korišćenjem dvostranog Studentovog t-testa. Smatrali smo značajnu razliku samo na nivou pouzdanosti od 95 posto ili više (str<>
5. Zaključci
Ukratko, protokoli u ovoj studiji omogućili su izgradnju čovjekabubrežnifibroza-imitirajući uređaje kao model i pokazao različite efekte koji nisu mogući u eksperimentima 2D kulture. Vjerujemo da će strategija evaluacije predložena u ovoj studiji dovesti do boljeg razumijevanja detaljafibrozamehanizmi uključeni u patološke promjene tokombubrežna bolest. Razvijeni 3D bubrežna fibroza-na-čipu mogao bi se koristiti kao potencijalni in vitro model, koji će nas približiti stvaranju poboljšanog modela bubrega na-čipu.
cistanche phelypaes: liječenje bolesti bubrega
Reference
1. Border, W.; Noble, N. Transformirajući faktor rasta u tkivufibroza.N. engl. J. Med.1994, 331, 1286-1292.
2. Wang, W.; Huang, XR; Li, AG; Liu, F; Li, J.; Truong, LD; Wang, XJ; Lan, HYSignaling mehanizam TGF-betala u prevenciji bubrežne inflamacije: Uloga Smada. Ja sam. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [CrossRef]
3. Liu,Y.Renalfibroza: Novi uvidi u patogenezu i terapiju. Kidney Int.2006,69,213-217. [CrossRef][PubMed]
4. Andes, D.; Craig, WA Farmakokinetika i farmakodinamika životinjskog modela: Kritički pregled. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [CrossRef]
5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip i bubreg. Kidney Res. Clin. Prakt.2015, 34, 165-169.[CrossRef][PubMed]
6. Jang, KJ; Mehr, AP; Hamilton, GA; McPartlin, LA; Chung, S.; Suh, KY; Ingber, DEHuman bubrežni proksimalni tubul na čipu za transport lijekova i procjenu nefrotoksičnosti. Integer. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl
7. Reardon, S. 'Organi-na-čips' su mejnstrim. Nature 2015, 523, 266. [CrossRef]
8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, CV; MuLler, GATGF- 1indukuje proliferaciju u ljudskim bubrežnim fibroblastima putem indukcije osnovnog faktora rasta fibroblasta (FGF-2).Kidney Int. 2001, 59, 579-592.[CrossRef][PubMed]
9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zuccella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M. Anti-fibrotski efekat pirfenidona kod mišićnih fibroblasta kod pacijenata sa Duchenneovom mišićnom distrofijom. Life Sci. 2016, 145, 127-136. [CrossRef]
10. Davis, GE.: Camarillo. C, W. Pinocitni mehanizam ovisan o alfa 2 beta 1 integrinu koji uključuje formiranje intracelularnih vakuola i koalescenciju reguliše formiranje lumena kapilara i cijevi u trodimenzionalnom kolagenskom matriksu. Exp. Cell Res. 1996, 224, 39-51.[CrossRef]
11. Bayless, KJ; Davis, G. Cdc42 i Race GTPaze su potrebne za formiranje lumena kapilara u trodimenzionalnim ekstracelularnim matriksima. J. Cell Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]
12. DesRochers, TM; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, DL Bioinženjering 3D ljudsko bubrežno tkivo, platforma za određivanje nefrotoksičnosti. PLOS ONE 2013, 8, e59219. [CrossRef]
13. Astashkina, AI; Mann, BK; Prestwich, GD; Grainger, DW Poređenje prediktivnih biomarkera nefrotoksičnosti lijekova u primarnoj organoidnoj kulturi bubrega 3-D i besmrtnim ćelijskim linijama. Biomaterials 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]
14. Meng, XM; Nikolić-Paterson, DJ; Lan, HY TGF-beta: Glavni regulatorfibroza. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [CrossRef]
15. Pardali,E.;Goumans, MJ;ten Dijke,P. Signalizacija članova porodice TGF-beta u vaskularnoj morfogenezi i bolesti. Trends Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]
16. Cunha, SL; Pietras, K. ALK1 kao nova meta za antiangiogenu terapiju raka. Krv 2011,117,6999-7006.[CrossRef]
17.Klagsbrun, M.; D'Amore, PA Regulatori angiogeneze. Annu. Rev. Physiol.1991, 53, 217-239. [CrossRef]
18. Folkman, J.; Shing, Y. Angiogenesis. J.Biol. Chem.1992, 267, 10931-10934. [CrossRef]
19. Shweiki, D. Itin, A. Soffer, D. Keshet, E. Faktor rasta vaskularnog endotela izazvan hipoksijom može posredovati u angiogenezi iniciranoj hipoksijom. Nature 1992, 359, 843-848. [CrossRef]
20. Kim, KJ; Li, B.; Winer, J.; Armanini, M; Gillett, N.; Phillips, HS; Ferrera, N. Inhibicija angiogeneze izazvane faktorom rasta vaskularnog endotela potiskuje rast tumora in vivo. Nature 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]
21. Pepper, MS; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Potentni sinergizam između faktora rasta vaskularnog endotela i osnovnog faktora rasta fibroblasta u indukciji angiogeneze in vitro.Biochem. Biophys. Res. Commun.1992,189,824-831.[CrossRefl
22. Goto, F.; Goto, K.; Weindel, K.; Folkman, J. Sinergistički efekti faktora rasta vaskularnog endotela i osnovnog faktora rasta fibroblasta na proliferaciju i formiranje vrpce endotelnih ćelija goveđeg kapilara unutar kolagenih gelova. Lab. Investig.1993,69, 508-551.[PubMed]
