Dio Ⅰ: Moguća važnost receptora rastvorljivog luteinizirajućeg hormona tokom razvoja i odrasle dobi kod dječaka i muškaraca
Apr 06, 2023
Simple Summary
Reproduktivni hormoni luteinizirajući hormon (LH) i humani korionski gonadotropin (hCG), oba agonista receptora luteinizirajućeg hormona (LHCGR), neophodni su za mušku reprodukciju tokom razvoja i odrasle dobi. lHCGR se eksprimira i stimulira proizvodnju testosterona Leydigovim stanicama testisa. U ovoj studiji smo pokazali da je rastvorljivi LHCGR prisutan u krvi, urinu i sjemenu zdravih dječaka i muškaraca, kao i kod pacijenata sa aberacijama polnih hromozoma. Pokazujemo kako cirkulirajući nivoi sLHCGR koreliraju s pubertetskim razvojem, funkcijom testisa i kvalitetom sperme, i demonstriramo da se LHCGR oslobađa iz fetalnog ljudskog ne-gonadalnog tkiva. HCG se oslobađa u serum preko testisa i drugih organa, što ukazuje na moguću ekstragonadnu ulogu LH ili hCG kod dječaka i muškaraca.
Abstract
Luteinizirajući hormon (LH) i humani korionski gonadotropin (hCG) su agonisti receptora luteinizirajućeg hormona (LHCGR), koji reguliše mušku reproduktivnu funkciju. lHCGR se može otpustiti u tjelesne tekućine. Željeli smo utvrditi da li je rastvorljivi LHCGR marker funkcije gonada. Poprečne, longitudinalne i interventne studije provedene su na 195 zdravih dječaka i muškaraca i 396 muškaraca s neplodnošću, nedostatkom ili Klinefelterovim sindromom (KS) kako bi se povezao LHCGR mjeren u serumu, sjemenu, urinu i arterijama jetre/bubrega s funkcijom gonada. . lHCGR je mjeren in vitro i in vivo modelima ljudskog tkiva testisa i ćelijskih linija, modelima miša ksenotransplantata, a rezultati humanog Western blota pokazali su da su fragmenti LHCGR otkriveni u serumu i tkivima gonada slične veličine koristeći tri različita antitijela. Čak i nakon humanih ksenotransplantata, LHCGR-ELISA nije pokazala unakrsnu reaktivnost među vrstama ili nespecifične reakcije u mišjem serumu. Nasuprot tome, sLHCGR je otpušten u medij kulture nakon kulture bubrega i nadbubrežne žlijezde ljudskog fetusa. Serum sLHCGR je bio značajno niži kod zdravih dječaka u pubertetu (p=0.0001). Kod zdravih muškaraca, sLHCGR u serumu je bio u negativnoj korelaciji sa omjerom inhibina B/FSH (-0.004,p=0.027). Kod neplodnih muškaraca, sperma sLHCGR je imala negativnu korelaciju sa serumskim FSH (0,006, p=0,009), koncentracijom sperme (-3,5, p=0,003) i ukupnim brojem spermatozoida (-3.2, p=0.007). Injekcija hCG je smanjila sLHCGR u serumu i urinu zdravih muškaraca (p <0,01). Zaključno, sLHCGR se oslobađa u tjelesne tekućine i povezan je s pubertetskim razvojem i funkcijom gonada. Cirkulirajući sLHCGR kod mužjaka orhideja sugerira da sLHCGR u serumu može nastati u ne-gonadalnim tkivima i može funkcionirati u ne-gonadalnim tkivima. (Klinička ispitivanja: NTC01411527, NCT01304927, NCT03418896).
Ključne riječi
LH receptor; pubertet; razvoj; neplodnost;Cistanche koristi; ekstra-gonadni efekti; gonadotropini; fetalni bubreg; fetalna nadbubrežna žlijezda; TCAM2; NTera2
Kliknite ovdje za kupovinuHerbal Cistanche Extract
Uvod
Luteinizirajući hormon (LH) i humani korionski gonadotropin (hCG) su oba agonisti receptora luteinizirajućeg hormona (LHCGR), koji je neophodan za mušku reprodukciju tokom razvoja i odrasle dobi [1]. HCG je receptor povezan sa G proteinom za koji se zna da je eksprimiran u Leydigu, granularnom luteinu i membranskim ćelijama i moćan je regulator proizvodnje polnih steroida [1]. hCG je snažan i uporan agonist, ali je samo fiziološki važan tokom fetalnog razvoja [2]. Osim kod nekih karcinoma zametnih stanica i karcinoma gušterače, hCG se ne proizvodi u odrasloj dobi, iako je ranija studija otkrila nisko pulsirajuće lučenje hCG-a hipofize kod odraslih muškaraca i žena. hCG se koristi za liječenje žena za izazivanje ovulacije tokom liječenja plodnosti, za muškarce za stimulaciju sinteze testosterona i potencijalne spermatogeneze kod hipogonadnih muškaraca ili kao dijagnostički test za proizvodnju endogenog testosterona [4]. Ablacija mišjeg LH receptora (LHCGR) dovodi do dramatičnog smanjenja kvaliteta testosterona i sperme [5], a nekoliko istraživačkih grupa je identifikovalo mutacije i SNP u LHCGR, pokazujući njegovu važnost za ljudsku reproduktivnu funkciju [6-8].
LHCGR gen se nalazi na hromozomu 2 i sastoji se od 11 egzona, od kojih egzoni 1-10 kodiraju ekstracelularne strukturne domene, a egzon 11 kodira 7 transmembranskih i intracelularnih strukturnih domena [9]. Postoji nekoliko izoformi LHCGR, od kojih se za jednu smatra da se luči jer nema transmembransko sidro [10]. Druga mogućnost je da oslobađanje LHCGR u tjelesne tekućine ovisi o enzimskom cijepanju proteina na ćelijskoj membrani, kao što su ADAM, MMP i drugi poznati transmembranski proteini koji se cijepaju. Zaista, pokazalo se da hCG specifično reguliše MMP-2 i MMP-9 [11,12], a nekoliko studija je pokazalo post-transkripcijsku regulaciju LHCGR [13,14]. Rastvorljivi LHCGR (LHC) je mjeren u ženskom serumu i folikularnoj tekućini pomoću ELISA platforme [15,16]. Specifičnost antitijela korištenih u ELISA testu potvrđena je ekspresijom različitih LHCGR fragmenata u CHO ćelijama za lokalizaciju epitopa i otkrivanje ekspresije u ljudskoj posteljici [15-17]. sLHCGR je detektovan u serumu pomoću LC-MS/MS [18]. koncentracije sLHCGR u serumu kod žena bile su povezane s liječenjem plodnosti, preeklampsijom, prijevremenim porodom i trudnoćom kod djece sa stopom implantacije Downovog sindroma [15,16], ali do sada nisu potvrđene od strane drugih istraživačkih grupa. Koliko znamo, sLHCGR nikada nije opisan u tjelesnim tekućinama zdravih muškaraca, dječaka adolescenata u razvoju ili muškaraca sa aberacijama polnih hromozoma. sLHCGR može funkcionisati u muškoj cirkulaciji kao marker funkcije gonada kroz transport visokog afiniteta vezivanja ili promenu aktivnosti LH ili hCG.
Materijali i metode
1. Kohorte
Mladići iz opšte populacije
U Danskoj, svi zdravi mladići stariji od 18 godina moraju proći fizički pregled kako bi se utvrdilo da li su sposobni za vojnu službu. Od 1996. godine, oko 300 regruta, koji predstavljaju opštu populaciju, svake godine je pregledano na kvalitet sjemena. Svi su dali uzorke sperme, popunili upitnik, obavili ultrazvučni pregled testisa i vađeni uzorci krvi. Uzorci seruma i sjemena iz biobanke, kao i ultrazvučne procjene i informacije o BMI i starosti od 148 muškaraca ispitanih 2013. i 2014. godine, uključeni su u trenutnu studiju (odobrenje Etičkog odbora: H-KF-289428).
Zdravi dečaci pre i posle puberteta
Copenhagen Adolescence Study je kombinovana poprečna i longitudinalna studija zdrave danske dece [20]. Iz nasumično odabranih javnih škola, 6203 djece je pozvano da učestvuje. Ukupan broj učesnika bio je 2020 djece. Longitudinalno praćenje 209 djece (101 dječak) rađeno je svakih 6 mjeseci i uključivalo je fizički pregled, Tannerovu procjenu puberteta i uzorke krvi i urina. Trideset i šest dječaka sa longitudinalnim praćenjem uključeno je u ovu studiju za procjenu sLHCGR tokom puberteta (kliničko ispitivanje: NTC01411527).
Neplodni muškarci bez ozbiljnih komorbiditeta
Copenhagen-Bone-Gonad Study je kohortna studija na 307 neplodnih muškaraca bez teških komorbiditeta koji su pohađali našu mušku kliniku od 2011. do 2015. godine, uključujući ukupno 1427 muškaraca [21,22]. Svi muškarci su upućeni u našu kliniku zbog lošeg kvaliteta sperme i želje za roditeljstvom. Svi su podvrgnuti fizičkom pregledu, uključujući ultrazvuk testisa, uzeti su im uzorci krvi i dati uzorke sperme. Specijalista je dobio njihovu detaljnu anamnezu. Istraživači su pratili muškarce 150 dana i uzimali su vitamin D ili placebo kao što je prethodno opisano. Svi podaci dati u ovoj studiji su iz početne posjete prije intervencije i sve uključene varijable su bile unaprijed definirane (kliničko ispitivanje: NCT01304927).
Standardized Cistanche
Muškarci i dječaci s Klinefelterovim sindromom i pacijenti s anorhijom
Identifikovali smo 64 dječaka i muškaraca s Klinefelterovim sindromom (KS), 47 nakon puberteta i 16 prije puberteta, definiranih prema Tannerovom stadiju, iz naše muške klinike. Imali smo tačne hromozomske aberacije, istoriju bolesti, status puberteta i informacije o serumu dostupne svima. 7 dječaka je podvrgnuto longitudinalnom praćenju sa redovnim kliničkim pregledima i vađenjem krvi prije i tokom puberteta.
Također smo uključili 8 muškaraca s normalnim brojem hromozoma kojima su odstranjeni bilateralni testisi zbog prethodnih stanja: karcinoma zametnih stanica testisa (n=4), difuznog karcinoma prostate (n=1), bilateralnog kriptorhizma i pedijatrijske orhiektomije ( n=1), bilateralna neoplazija germinativnih ćelija in situ (n=1) i uznapredovali rak testisa nakon uklanjanja preostalih testisa zbog traume (n=1).
Odrasle osobe koje prolaze kroz mjerenje protoka Splanchnicus
Uključili smo tri muškarca i tri žene u postmenopauzi s normalnom funkcijom jetre koji su primljeni zbog sumnje na mezenteričnu ishemiju i upućeni na mjerenje visceralnog krvotoka, ali nisu pokazali mezenteričnu ishemiju. Uzorci krvi su uzeti istovremeno iz jetre, bubrega, femoralne vene i odgovarajuće arterije (odobrenje Etičkog odbora: H.18048245)
Interventna studija: Zdravi muškarci izloženi humanom horionskom gonadotropinu
Jedanaest zdravih muškaraca je regrutovano da učestvuju u kliničkoj intervenciji putem objave danskog Rigshospitaleta. Dobrovoljci su tretirani sa 5000 IU humanog korionskog gonadotropina, a njihova maksimalna proizvodnja endogenog testosterona je izmjerena poređenjem osnovnih uzoraka krvi i urina sa uzorcima praćenja prikupljenim 8, 24 i 72 sata nakon injekcije hCG (kliničko ispitivanje: NCT03418896).
2. Miševi, ljudsko tkivo i ćelijske linije
Dva soja ćelija karcinoma ljudskih testisa NTera-2 i TCam{1}}, koji predstavljaju embrionalni karcinom i seminom, korištena su i uzgajana kao što je prethodno opisano [23].
Serumi su sakupljeni od golih miševa bez tumora (WT) i TCam-2 golih miševa s ksenograftom tretiranih vektorom, LH ili hCG, respektivno (Inspektorat za eksperimente na životinjama, Kopenhagen, Danska, broj licence: 2012-15-2934-00051) .
Ljudska fetalna tkiva u prvom tromjesečju prikupljena su iz doniranih ženskih tkiva nakon planiranih pobačaja. Fetalni bubreg i tkivo fetusa nadbubrežne žlijezde kultivirani su u modelima suspenzije kapi kao što je prethodno opisano, a podloga je sakupljena za analizu [24,25] (odobrenje Etičkog odbora: H-1-2012-007).
Uzorci testisa odraslih su dobijeni od muškaraca sa ovariektomijom sa rakom testisa (odobrenje Etičkog odbora: H{{0}}). Peritumoralno tkivo koje sadrži nemaligna područja pohranjeno je na - 80◦ C ili fiksirano preko noći na 4° C u formalinu ili modificiranom Stieve-ovom fiksatoru (200 mL 37 posto formaldehida, 40 mL sirćetne kiseline u 1 L 0,05 M fosfata pufer, pH 7,4).
3. Biohemijske analize
Detekcija ukupnog sLHCGR u serumu, spermi, urinu i različitim medijima za kulturu je izvršena u procesu validacije korištenjem ELISA kompleta iz New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL) korištenjem antitijela LHR029 protiv ljudskog LHCGR i mjerenjem svih ovih više puta. ELISA test je imao granicu detekcije od 0,01 pmol/mL i maksimalan nivo od 15,55 Šest muškaraca iz opšte populacije sa nivoima sLHCGR iznad gornje granice detekcije su razrijeđeni i ponovo izmjereni, pokazujući nivoe do 30 pmol/mL. performanse ELISA platforme su detaljno opisane ranije [15-17].
Cistanche suplementi
Također smo postavili dvije različite interne ELISA analize, koje su postavili naši laboratorijski tehničari, a sve daljnje reagense je obezbijedio Origin Biomarkers Ltd, UK, u skladu sa njihovom predloženom postavkom [26]. Prvo, cirkulirajući sLHCGR vezan za hCG je otkriven korištenjem sendvič ELISA kompleta s antitijelima 5A10C9 (ProMab) i am0{{20}}904pun ( OriGene) usmjeren protiv LHCGR i hCG, respektivno. Drugo, na sličan način smo koristili internu ELISA-u za određivanje ukupnih arterijskih i venskih uzoraka jetre, bubrega i donjih ekstremiteta od šest odraslih osoba sLHCGR, gdje smo koristili isto antitijelo LHR029 (NBCL Holland) protiv sLHCGR. Testirana su dva različita protokola. Sva mjerenja sLHCGR opisana u ovom radu obavljena su korištenjem NBCL ELISA, osim za hCG-sLHCGR kompleks i arterijske/venske uzorke iz organa opisanih iznad. Kod zdravih dječaka, testosteron je analiziran korištenjem DPC-coated-a count RIA kompleta (Diagnostic Products, Los Angeles, CA) s granicom detekcije (LOD) od 0,23 nmol/L i CV od 8,6 posto korištenjem vremenski razlučive imunofluorescencije (Delfia; Wallac, Turku, Finska), granica detekcije bila je 0,20 nmol/l sa CV od 6,4 posto. Kod odraslih, testosteron i globulin koji vezuje polne hormone (SHBG) su analizirani hemiluminiscentnim imunotestom (Access, Beckman Coulter, SAD) sa LOD od 0,35 nmol/L i 0,33 nmol/L, respektivno. Nivoi FSH i LH u serumu i urinu mjereni su primjenom vremenski razlučive imunofluorescencije (Delfia; Wallac, Turku, Finska) sa granicama detekcije od 0,06 i 0,05 IU/L, respektivno, i CV i lt; oboje po 5 posto. Inhibin B analiza je izvedena upotrebom specifičnog bilateralnog enzimskog imunoeseja (inhibin B genII, Beckman Coulter, SAD) CV <11 procenata. Za AMH smo koristili Beckman Coulter enzimski imunotest (Immunotech, Beckman Coulter, Marseilles, Francuska) i CV <8 posto. Konačno, IGF1 i IGF-BP3 su određeni pomoću hemiluminiscentnog testa IDS-iSYS imunodijagnostičkog sistema sa CV od 10 procenata i 9 procenata, respektivno. Slobodni estradiol je izračunat korištenjem Mazerove konstante, a slobodni testosteron (FT) je izračunat korištenjem Vermeulenove formule [27,28].
Analiza sjemena
Zdravi mladići i neplodni odrasli učesnici dali su uzorke sperme i dobili informacije koje su sami prijavili o trajanju apstinencije od ejakulacije. Analizu sperme obavili su obučeni tehničari kao što je prethodno opisano [19]. Količina sjemena procijenjena je vaganjem. Za procjenu održivosti spermatozoida, 10 μL dobro pomiješanih kopija sjemena stavljeno je na stakalce i pregledano pod mikroskopom × 400x na zagrijanom dijelu od 37◦ C. Spermiji su klasifikovani kao napredno održivo (SZO klasa a plus B), neprogresivno održivo (klasa C) ili neaktivno (klasa D). Korišten je prosjek dvije procjene održivosti. Za procjenu koncentracije sperme, uzorci su razrijeđeni u destilovanoj vodenoj otopini od 0,6 mol/L NaHCO3 i 0,4 posto (v/v) formaldehida, a zatim procijenjeni pomoću Bürker-Türk hemocitometra i korišten je prosjek procjena. Brojane su samo spermatozoidi sa repovima. Konačno, pripremljeni su brisevi i obojeni Papa bojom, a morfologija sperme je procijenjena striktno prema kriterijima [29].
Western blotting
Ljudsko tkivo testisa je homogenizovano u puferu za lizu, razblaženo u SDS puferu za punjenje, a zatim zagrevano na 95◦ C 5 min. Uzorci su stavljeni na 4-20 posto gotovih poliakrilamidnih gelova (BioRad, cat# 456-8096) i stavljeni na 100 V 1 h da bi se odvojili proteini. Da bi se otkrio sLHCGR u serumu, albumin i IgG su uklonjeni pomoću Pierce kompleta za uklanjanje albumina/IgG (Thermo Scientific, Waltham, MA, SAD, kat. br. 89875) prije stavljanja uzoraka na gel. nakon gel elektroforeze, proteini su prebačeni na poliviniliden difluoridne membrane pomoću vlažnog upijača (BioRad). Membrane su zatvorene u tris-puferisanom fiziološkom rastvoru i 5% obranog suvog mleka tokom 1 sata, zatim inkubirane preko noći na 4◦ C sa primarnim antitelima i 1 sat na sobnoj temperaturi sa sekundarnim antitelima. Membrane su isprane pojačanom hemiluminiscencijom (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate, Cat# 34095) i fotodetektorom sa chemiDoc MP sistemom za snimanje (BioRad, Cat# 17001402). Za detekciju LHCGR u tkivu i serumu korišćena su tri različita antitela: Aviva System Biology (OASG04237); NBCL Holland, isto antitijelo kao u serumskom ELISA kompletu (LHR029) i Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, SAD, SC- 26341). -2 mikroglobulin je korišten kao kontrola punjenja.
Imunohistohemija
Imunohistohemija je izvedena kao što je prethodno opisano [25]. Ukratko, rezovi su fiksirani modificiranim Stiff fiksativom, devoskani i rehidrirani. Ekstrakcija antigena je izvedena u autoklavu koji je sadržavao citratni pufer za ekstrakciju (10 mM, pH 6.0). Endogena peroksidaza je blokirana sa 3 procenta (v/v) H2O2 u metanolu tokom 30 minuta. Između svakog koraka, sekcije su isprane u TBS. Sekcije su inkubirane sa 0,5 posto BSA konjskog seruma 30 minuta, nakon čega je uslijedila inkubacija preko noći sa dva različita primarna antitijela 1 sat na sobnoj temperaturi (LHR029 za WB/ELISA, Santa Cruz Biotechnology SC- 25828). Sekcije su inkubirane sa sekundarnim antitelima 30 minuta. Slike su vizualizirane aminoetil karbazolom (AEC, Invitrogen, Life Technologies/Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Negativne kontrole su bile bez primarnih antitijela. Nijedna negativna kontrola nije obojena. Protivbojenje je izvršeno Mayerovim hematoksilinom, a montaža Aquatexom. Sekcije su procenjene na mikroskopu Nikon Microphot-FXA (Nikon Corporation, Melville, NY, SAD). Konačna analiza je izvršena pomoću softvera NDPview verzije 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, Iwata City, Japan.
Ekstrakt cistanche blagotvorno djeluje na bubrege
REFERENCE
1. Dufau, ML Receptor luteinizirajućeg hormona. Annu. Rev. Physiol. 1998, 60, 461–496.
2. Rao, CV Diferencijalna svojstva vezivanja humanog horionskog gonadotropina i humanog luteinizirajućeg hormona za plazma membrane žutih tijela goveda. Acta Endocrinol. 1979, 90, 696–710.
3. Odell, WD; Griffin, J. Pulsativno lučenje humanog korionskog gonadotropina u normalnih odraslih osoba. N. Engl. J. Med. 1987, 317, 1688–1691.
4. Bang, AK; Nordkap, L.; Almstrup, K.; Priskorn, L.; Petersen, JH; Rajpert-De Meyts, E.; Andersson, A.-M.; Juul, A.; Jørgensen, N. Dynamic GnRH i hCG testiranje: Uspostavljanje novih dijagnostičkih referentnih nivoa. EUR. J. Endocrinol. 2017, 176, 379–391.
5. Zhang, FP; Poutanen, M.; Wilbertz, J.; Huhtaniemi, I. Normalni prenatalni, ali zaustavljeni postnatalni seksualni razvoj kod miševa nokautiranja receptora luteinizirajućeg hormona (LuRKO). Mol. Endocrinol. 2001, 15, 172–183.
6. Bruysters, M.; Christin-Maitre, S.; Verhoef-Post, M.; Sultan, C.; Auger, J.; Faugeron, I.; Larue, L.; Lumbroso, S.; Themmen, APN; Bouchard, P. Nova mutacija spajanja LH receptora odgovorna je za muški hipogonadizam sa subnormalnom proizvodnjom sperme u propositusu i neplodnost sa redovnim ciklusima kod pogođene sestre. Hum. Reprod. 2008, 23, 1917–1923.
7. Latronico, AC; Arnhold, IJP Inaktivirajuće mutacije receptora ljudskog luteinizirajućeg hormona kod oba spola. Semin. Reprod. Med. 2012, 30, 382–386.
8. Simoni, M.; Tüttelmann, F.; Michel, C.; Böckenfeld, Y.; Nieschlag, E.; Gromoll, J. Polimorfizmi gena luteinizirajućeg hormona/horionskog gonadotropina receptora: Povezanost s nespuštenim testisima i muškom neplodnošću. Pharmacogenet. Genom. 2008, 18, 193–200.
9. Ascoli, M.; Fanelli, F.; Segaloff, DL The lutropin/choriogonadotropin receptor, a 2002 perspective. Endocr. Rev. 2002, 23, 141–174.
10. Tena-Sempere, M.; Zhang, FP; Huhtaniemi, I. Perzistentna ekspresija skraćenog oblika ribonukleinske kiseline prenosioca luteinizirajućeg hormona u testisima pacova nakon selektivne destrukcije Leydigovih ćelija etilen metan sulfonatom. Endocrinology 1994, 135, 1018–1024.
11. Fluhr, H.; Bischof-Islami, D.; Krenzer, S.; Licht, P.; Bischof, P.; Zygmunt, M. Ljudski korionski gonadotropin stimulira matriks metaloproteinaze-2 i -9 u citotrofoblastnim stanicama i smanjuje tkivni inhibitor metaloproteinaza-1, -2 i -3 u decidualiziranim stromalne ćelije endometrijuma. Fertil. Steril. 2008, 90, 1390–1395.
12. Licht, P.; Fluhr, H.; Neuwinger, J.; Wallwiener, D.; Wildt, L. Da li je ljudski korionski gonadotropin direktno uključen u regulaciju ljudske implantacije? Mol. Cell. Endocrinol. 2007, 269, 85–92.
13. Li, Y.-X.; Guo, X.; Gulappa, T.; Menon, B.; Menon, KMJ SREBP igra regulatornu ulogu u ekspresiji mRNA LH/hCG receptora u ljudskim ćelijama granuloze-luteina. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2019.
14. Menon, KMJ; Menon, B.; Wang, L.; Gulappa, T.; Harada, M. Molekularna regulacija ekspresije gonadotropin receptora: Odnos prema metabolizmu sterola. Mol. Cell. Endocrinol. 2010, 329, 26–32.
15. Chambers, AE; Griffin, C.; Naif, SA; Mills, I.; Mills, WE; Syngelaki, A.; Nicolaides, KH; Banerjee, S. Kvantitativne ELISA analize za LHCGR rastvorljiv u serumu i hCG-LHCGR kompleks: Potencijalna dijagnostika u skriningu trudnoće u prvom trimestru za mrtvorođenost, Downov sindrom, prijevremeni porođaj i preeklampsiju. Reprod. Biol. Endocrinol. 2012, 10, 113.
16. Chambers, AE; Nayini, KP; Mills, WE; Lockwood, GM; Banerjee, S. Cirkulirajući LH/hCG receptor (LHCGR) može identificirati pacijente prije tretmana IVF koji imaju rizik od OHSS-a i loše implantacije. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 161.
17. Chambers, AE; Stanley, PF; Randeva, H.; Banerjee, S. Mikrovezikulom posredovano oslobađanje rastvorljivog LH/hCG receptora (LHCGR) iz transficiranih ćelija i eksplantata placente. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 64.
18. Gao, HJ; Chen, YJ; Zuo, D.; Xiao, MM; Li, Y.; Guo, H.; Zhang, N.; Chen, RB Kvantitativna proteomska analiza za visoku propusnost skrininga diferencijalnih glikoproteina u serumu hepatocelularnog karcinoma. Cancer Biol. Med. 2015, 12, 246–254.
19. Priskorn, L.; Nordkap, L.; Bang, AK; Krause, M.; Holmboe, SA; Egeberg Palme, DL; Winge, SB; Mørup, N.; Carlsen, E.; Joensen, UN; et al. Prosječan broj spermatozoida ostaje nepromijenjen uprkos smanjenju pušenja kod majki: Rezultati velike studije poprečnog presjeka s godišnjim istraživanjima tokom 21 godine. Hum. Reprod. 2018, 33, 998–1008.
20. Sørensen, K.; Aksglaede, L.; Petersen, JH; Juul, A. Nedavne promjene u vremenu puberteta kod zdravih danskih dječaka: Asocijacije s indeksom tjelesne mase. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2010, 95, 263–270.
21. Blomberg Jensen, M.; Lawaetz, JG; Petersen, JH; Juul, A.; Jørgensen, N. Efekti suplementacije vitaminom D na kvalitet sjemena, reproduktivne hormone i stopu živog rađanja: Randomizirano kliničko ispitivanje. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2018, 103, 870–881.
22. Blomberg Jensen, M.; Gerner Lawaetz, J.; Andersson, A.-M.; Petersen, JH; Nordkap, L.; Bang, AK; Ekbom, P.; Joensen, UN; Prætorius, L.; Lundstrøm, P.; et al. Nedostatak vitamina D i nizak nivo jonizovanog kalcija povezani su sa kvalitetom sperme i nivoom seksualnih steroida kod neplodnih muškaraca. Hum. Reprod. 2016, 31, 1875–1885.
23. Lorenzen, M.; Nielsen, JE; Andreassen, CH; Juul, A.; Toft, BG; Rajpert-De Meyts, E.; Daugaard, G.; Blomberg Jensen, M. Receptor luteinizirajućeg hormona je izražen u tumorima zametnih ćelija testisa: moguće implikacije za rast i prognozu tumora. Rakovi 2020, 12, 1358.
24. Eldrup, E.; Theilade, S.; Lorenzen, M.; Andreassen, CH; Poulsen, KH; Nielsen, JE; Hansen, D.; El Fassi, D.; Berg, JO; Bagi, P.; et al. Hiperkalcemija nakon injekcija kozmetičkog ulja: razotkrivanje etiologije, patogeneze i težine. J. Bone Miner. Res. 2020, 36, 322–333.
25. Jørgensen, A.; Macdonald, J.; Nielsen, JE; Kilcoyne, KR; Perlman, S.; Lundvall, L.; Langhoff Thuesen, L.; Juul Hare, K.; Frederiksen, H.; Andersson, A.-M.; et al. Nodalna signalizacija reguliše razvoj zametnih ćelija i uspostavljanje sjemenih žica u testisu ljudskog fetusa. Cell Rep. 2018, 25, 1924–1937.e4.
26. Chambers, AE; Fairbairn, C.; Gaudoin, M.; Mills, W.; Woo, I.; Pandian, R.; Stanczyk, FZ; Chung, K.; Banerjee, S. Rastvorljivi LH-HCG receptor i estradiol kao prediktori trudnoće i živorođenja u IVF-u. Reprod. Biomed. Online 2019, 38, 159–168.
27. Vermeulen, A.; Verdonck, L.; Kaufman, JM Kritička procjena jednostavnih metoda za procjenu slobodnog testosterona u serumu. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999, 84, 3666–3672.
28. Mazer, NA Nova metoda proračunske tablice za izračunavanje slobodnih serumskih koncentracija testosterona, dihidrotestosterona, estradiola, estrona i kortizola: sa ilustrativnim primjerima iz muške i ženske populacije. Steroidi 2009, 74, 512–519.
29. Menkveld, R.; Stander, FS; Kotze, TJ; Kruger, TF; van Zyl, JA Procjena morfoloških karakteristika ljudskih spermatozoida prema strožim kriterijima. Hum. Reprod. 1990, 5, 586–592.
Li Juel Mortensen1, Mette Lorenzen1, Anne Jørgensen2, Jakob Albrethsen2, Niels Jørgensen2,Søren Møller3,4, Anna-Maria Andersson2, Anders Juul2,4i Martin Blomberg Jensen1,5
1. Grupa za skeletnu, mineralnu i gonadalnu endokrinologiju, Univerzitetski odjel za rast i reprodukciju, Rigshospitalet, 2100 Kopenhagen, Danska; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)
2. Odeljenje za rast i reprodukciju i Međunarodni centar za istraživanje i istraživačku obuku u endokrinom poremećaju muške reprodukcije i zdravlja dece (EDMaRC), Rigshospitalet, Univerzitet u Kopenhagenu, Blegdamsvej 9, 2100 Kopenhagen, Danska; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (NJ); Ana-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)
3. Centar za funkcionalno i dijagnostičko snimanje i istraživanje, Odsjek za kliničku fiziologiju i nuklearnu medicinu 260, bolnica Hvidovre, 2650 Kopenhagen, Danska; Soeren.Moeller@regionh.dk
4. Katedra za kliničku medicinu, Fakultet zdravstvenih nauka, Univerzitet u Kopenhagenu, 2200 Kopenhagen, Danska
5. Odsjek za istraživanje kostiju i minerala, Harvard School of Dental Medicine/Harvard Medical School, Boston, MA 02115, SAD
