Dio Ⅱ Poređenje hemijskih profila i antioksidativnih aktivnosti različitih dijelova uzgojenog Cistanche Deserticola pomoću ultra učinkovite tečne hromatografije-kvadrupolne vremenske masene spektrometrije i 1,1-difenil{5}}bakrilnog aseta

Za više informacija:emily.li@wecistanche.com

Kliknite ovdje da biste dobili više informacija o Cistancheu

Detaljni podaci masenog spektra i predloženi obrasci fragmentacije dati su na slici 7. Strukture šest gore identificiranih PhG-a podijeljene su u tri ostatka: I-kafeinska kiselina (CA), II-aglikon i III-šećer (Glc i Rha) . U MS/MS spektrima, defekti mase koji odgovaraju neutralnom cijepanju kafeoil grupe i Glc i Rha ostataka dominiraju putevima fragmentacije PhGs i stvaraju dijagnostičke fragmente jona (Slika 8). Dodatni MS/MS karakteristični joni fragmenta na m/z 179, 161 i 135 dalje sugeriraju da u njihovim strukturama postoji supstituent kafeoila. Koristeći ove karakteristike fragmentacije, mogli bismo sa sigurnošću predložiti puteve fragmentacije kako slijedi.Acteoside(Slika 7c) proizveo je fragment pri m/z 461 gubitkom CA ostatka, a zatim proizveo jon na m/z 315 daljnjim gubitkom Rha. CA dio je pronađen na m/z 179, a njeni fragmenti joni pronađeni na m/z 161 i m/z 135 nastali su gubitkom H2O i CO2, respektivno. Izoakteozid (slika 7d) je proizveo iste jone kao i akteozid na m/z 461, 315, 179, 161 i 135. 20 -Acetilakteozid (slika 7e) je proizveo fragment pri m/z 623 gubitkom acetila i zatim su generisali ione na m/z 461, 315, 179, 161 i 135, što je bilo identično obrascu fragmentacije akteozida. U međuvremenu, 20 -acetilakteozid je također proizveo fragment na m/z 503 gubljenjem svog CA dijela i nakon toga izgubio svoju Ac grupu da bi proizveo jon na m/z 461. Tubulozid B (slika 6f) pokazao je sličan uzorak fragmentacije kao 20 -acetilakteozid. Ehinakozid (slika 7a) je proizveo fragment ion na m/z 623 gubitkom svog CA dijela, a zatim uzastopni gubici Rha i Glc dijelova dali su fragmentne jone na m/z 477 i 315. Fragment ion na m/z 461 nastao je gubitkom CA i Glc dijelova iz jona prekursora. Nađeni su i karakteristični CA joni na m/z 179, 161 i 135. Cistanozid A (slika 7b) je proizveo fragment jona na m/z 637 gubitkom svog CA dijela, a zatim je stvorio ione na m/z 491 i 475 daljnjim gubitkom Rha i Glc dijelova, respektivno. Stoga bi upotreba UPLC-PDA-QTOF/MS u kombinaciji mogla dati veliki doprinos preciznom razjašnjavanju hemijskih struktura jedinjenja.

2.7. Korelacija između antioksidansa i A8 ntioksidativnih svojstava.

Analiza korelacije između ukupnog sadržaja antioksidansa i ukupnih antioksidativnih aktivnosti opisana je u mnogim studijama [33–38]. Koliko je nama poznato, nedostaju studije o upoređivanju antioksidativnih svojstava i sadržaja PhG uzgojenihC. deserticoladijelova koristeći tako sažet metod karakterizacije. Preliminarni rezultati šest sadržaja PhG opisanih u odjeljku "Kvantitativna analiza" sažeti su u Tabeli 4, a antioksidativna aktivnost (IC50) određena korištenjem DPPH testa kako je opisano u odjeljku "Antioksidacijski kapacitet" navedena je u Tabeli 5. Prvo, ukupan sadržaj antioksidansa i aktivnosti svakog dijela prikazani su na slici 9. Jasno je da postoje upadljive razlike između različitih dijelova. Naime, dobijeni rezultati su ukazivali na antioksidativnu aktivnost kultiviranihC. deserticolastabljike je bio uporediv sa onim od stabljika dostupnih na tržištu. Ovi rezultati sugeriraju da antioksidativna aktivnost ekstrakta stabljike može biti povezana s njegovim sadržajem PhG. Stoga se fitokemikalije u ekstraktu stabljike uzgajajuC. deserticolapredlaže se da igraju važnu ulogu u njegovoj aktivnosti uklanjanja radikala DPPH. Sveukupno, naši rezultati su pokazali snažnu korelaciju između ukupnog sadržaja PhG i antioksidativne aktivnosti: r {{0}}}.92, ** p <>

Osim toga, određeni uzorci s većim ukupnim sadržajem antioksidansa nisu pokazali visoke antioksidativne aktivnosti, kao što su os i cvast. U međuvremenu, vjenčić, koji je imao najveću aktivnost od šest dijelova, imao je manji ukupni sadržaj antioksidansa od osovine i cvasti. Slika 4, kao što je opisano u odeljku "Kvantitativna analiza", prikazuje relativne količine jedinjenja PhG da bi se dalo preliminarno razumevanje njihovih pojedinačnih doprinosa. U ovoj studiji je također provedena regresiona analiza parcijalnih najmanjih kvadrata (PLS) [39–41] kako bi se uporedila korelacija između obilja svakog antioksidansa i antioksidativne aktivnosti in vitro. PLS model je konstruiran korištenjem sadržaja svakog antioksidansa (kao matrice deskriptora X) u hromatogramima otiska prsta na 330 nm i antioksidativnih aktivnosti (kao matrice odgovora Y) svih dijelova. Dijagrami koeficijenata i vrijednosti varijabilne važnosti u projekciji (VIP) dobiveni korištenjem SIMCA-P plus softvera (verzija 13.0, Umetrics, Umea, Švedska) prikazani su na slici 10. Značajno je da je inverzna vrijednost IC50 (1/IC50) odabrana kao Y varijabla za uspostavljanje modela jer niže vrijednosti IC50 predstavljaju jaču antioksidativnu aktivnost. Prema dobijenom dijagramu koeficijenta regresije na slici 10A, modeli linearne regresije pokazuju da su svi antioksidansi osim akteozida bili u pozitivnoj korelaciji sa 1/IC50. Dobijeni kalibracioni model PLS-a izražava se regresijskom jednačinom: Y=0.50X1 plus 0,57X2 − 0,11X3 plus 0,32X4 plus 0,58X5 plus 0,24X6. VIP vrijednosti odražavaju važnost varijabli u modelu. što je veći VIP, to je relevantniji za klasifikaciju uzorka. Kao što su naši rezultati pokazali, 20 -acetilakteozid je bio važan doprinos antioksidativnoj aktivnosti (Slika 10B). Ovaj nalaz je u skladu sa studijom Yang et al [20].

3 Materijali i Metode

3.1 Postrojenje Materijali.KultivisanoC. deserticolaje velikodušno osigurala baza za sadnju Bencao Congrong u okrugu Yongning, provincija Ningxia, a autentičnost je potvrdio prof. Jun Chen sa Instituta za razvoj ljekovitog bilja Kineske akademije medicinskih nauka, Peking, Kina. Šest različitih dijelova se uzgajaC. deserticola uključuju sukulentnu stabljiku (R1), os cvasti (R2), cvast (R3), cvijet (bez sjemena) (R4), stabljiku cvasti (R5) i vjenčić (R6). Detaljne informacije o uzorku prikazane su na slici 11. Svaki dio je odvojeno osušen u sušilici, usitnjen u prah, propušten kroz 40-mrežasto sito, a zatim stavljen u hermetičke posude i pohranjen u eksikatoru. Uzorci vaučera ovih uzoraka deponovani su na Institutu za razvoj ljekovitog bilja Kineske akademije medicinskih nauka, Peking, Kina.

3.2. Hemikalije i reagensi. Izoakteozid (Lot 130809), akteozid (Lot 130421) i ehinakozid (Lot 121027) kupljeni su od Chengdu Pure-Chem Standard Co. Ltd. (Peking, Kina), Cistanozid A, 20 -Acetilakteozid B i izolovani tubulozid i prečišćena od kultivisanaC. deserticolau našoj laboratoriji, sa više od 98 posto čistoće (HPLC) i njihova struktura je takođe potvrđena na osnovu HR-MS, 1H-NMR i 13C-NMR i u poređenju sa prethodnom literaturom. Njihove strukture su prikazane u tabeli 7. DPPH, L-askorbinska kiselina i Trolox su kupljeni od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). Rastvarači, acetonitril i metanol bili su HPLC kvaliteta iz Merck-a (Darmstadt, Njemačka), a mravlja kiselina čistoće od 96 posto bila je HPLC kvaliteta (Tedia, Fairfield, OH, SAD). Dejonizovana voda (18 MΩ) pripremljena je destilovanom vodom preko Milli-Q sistema (Millipore, Milford, MA, SAD). Ostali reagensi i hemikalije su bile analitičke čistoće.

3.3. Priprema rastvora

3.3.1. Standardni rastvori. Mešani standardni osnovni rastvor koji sadržiechinacoside(501 µg/mL), cistanozid A (64 µg/mL), akteozid (239 µg/mL), izoakteozid (22,6 µg/mL), 20 -acetilakteozid (278 µg/mL) i tubulozid Bµg (46. /mL) je pripremljen u metanolu. Osnovni rastvori su razblaženi metanolom da bi se dobio niz odgovarajućih koncentracija koje su korišćene kao radni rastvori za razvoj kalibracione krive i čuvane na 4 ◦C pre upotrebe.

3.3.2. Sample Solutions. Precizno izmeren prah (40 mesh, 1 g) od šest različitih delova kultivisanogC. deserticolaje dodan sa 50 mL metanola, respektivno. Nakon potapanja 30 minuta na sobnoj temperaturi, smjese su izvagane i zatim ekstrahirane u ultrazvučnom vodenom kupatilu (40 kHz, 250 W, Kunshan, Kina) na sobnoj temperaturi 40 minuta. Nakon hlađenja, dodato je još metanola da se nadoknadi izgubljena težina. Svi rastvori su filtrirani kroz 0,22 µm membranske filtere pre ubrizgavanja. Alikvot (3 µL) rastvora supernatanta je ubrizgan u UPLC radi analize. Svaki ekstrakt je ubrizgan u tri primjerka.

3.3.3. DPPH Solutions. Osnovni rastvor DPPH radikala (5 × 10−3 mol/L) pripremljen je otapanjem tačno izvaganog uzorka DPPH u metanolu neposredno pre eksperimenata i zaštićen od svetlosti. Zatim je osnovni rastvor sveže razblažen metanolom da bi se dobio standardni rastvor (1 × 10-4 mol/L).

3.4. UPLC-PDA stanje analize. UPLC analiza je provedena na Waters Acquity UPLC sistemu (Waters, Milford, MA, SAD) koji se sastoji od grijača kolone, upravitelja uzorka, binarnog upravitelja rastvarača i detektora niza fotodioda. Kromatografsko odvajanje je izvedeno na Acquity UPLC BEH C18 koloni (1,7 µm, 2,1 mm × 1{{10}}0 mm; Vode) fiksiranjem grijača kolone na 30 ◦C. Mobilna faza se sastojala od acetonitrila (A) i vode koja sadrži 0,2 posto mravlje kiseline (B) pri brzini protoka od 0,4 mL/min. Program gradijentnog eluiranja korišten je kako slijedi: 5 posto A na 0–2 min, 5–15 posto A na 2–4 ​​min, 15 posto A na 4–6 min, 15–20 posto A na 6–10 min, 20 –35 posto A na 10–15 min, 35 posto A na 15–18 min i 35–5 posto A na 18–18,1 min. Kompozicija je zatim držana na 5 posto A dodatnih 10 minuta radi ponovnog ekvilibriranja. Talasna dužina detekcije je postavljena na 330 nm.

3.5. UPLC-ESI-Q/TOF-MS analiza. Stanje Uslovi UPLC-a bili su isti kao oni opisani u Odjeljku 3.4. MS analiza je izvedena na Waters Xevo G2-XS QTOF masenom spektrometru (Waters MS Technologies, Manchester, UK) opremljenom elektrosprej interfejsom (ESI) u načinu rada negativnih jona sa punim skeniranim MS spektrom preko m/ z raspon od 50–1200. U izvoru, kapilarni napon je bio 2000 V, temperatura izvora je bila 120 ◦C, temperatura desolvatacije je bila 450 ◦C, konusni napon je bio 40 V, konusni gas je bio 30 L/h i brzina protoka desolvatacionog gasa je bila 600 L/h. MS/MS eksperimenti su provedeni korištenjem MSE, a energija sudara je bila 20–40 V. Svi MS podaci su prikupljeni korištenjem Lock Spray sistema kako bi se osigurala tačnost mase i ponovljivost. [M − H]− jon leucin-enkefalina na m/z 554,2615 korišćen je kao blokada mase u negativnom ESI modu. Podaci su prikupljeni, analizirani i obrađeni pomoću softvera Waters Mass Lynx 4.1 (Waters MS Technologies, Manchester, UK).

3.6. Offline DPPH Radical Scavenging Assay. Ukupna antioksidativna aktivnost biljnih ekstrakata procijenjena je korištenjem offline DPPH testa uklanjanja radikala. Rastvori uzoraka (2 mL) različitih koncentracija su pomešani sa 2 mL 1 × 10-4 mol/L rastvora DPPH (u metanolu). Svi uzorci su promućkani i ostavljeni da stoje u mraku na sobnoj temperaturi 60 min. Smanjenje slobodnih radikala DPPH izmjereno je očitavanjem apsorbancije na 517 nm naspram slijepog uzorka (metanol bez uzorka) na ELISA čitaču (TECAN, Growing, Austrija). Kao kontrola ovog eksperimenta korišćen je samo metanol (2 mL). Trolox i L-askorbinska kiselina korišteni su kao pozitivne kontrole. Aktivnost uklanjanja radikala (postotak inhibicije) testiranih uzoraka, koja je izražena kao postotak uklanjanja DPPH, izračunata je korištenjem sljedeće formule: postotak inhibicije=[(A kontrola − A uzorak)/Akontrola] × 100. Ukupna antioksidativna aktivnost izračunata je crtanjem procenta inhibicije u odnosu na koncentraciju uzorka i predstavljena je kao koncentracija uzorka potrebna za uklanjanje 50 posto DPPH radikala (IC50). Svi testovi su izvedeni u tri primjerka, a IC50 vrijednosti su prikazane kao srednja vrijednost ± SD.

3.7. UPLC-PDA u kombinaciji sa pre-kolumnim DPPH testom. U ovoj studiji, nakon što su pomešani 2 mL rastvora DPPH (3 × 10-3 mol/L) i 1 mL rastvora uzoraka (12 mg/mL) različitih delova kultivisane C. deserticola, UPLC-PDA je korišćen za dalje pregledati profile antioksidansa i identificirati komponente antioksidansa otkrivanjem promjena u karakterističnim pikovima otopina uzoraka prije i nakon reakcije uklanjanja slobodnih radikala DPPH. Za svaki različiti dio biljke, alikvoti od 10 µL otopine uzorka prije i nakon DPPH analize su odvojeno ubrizgani u UPLC sistem pod istim uslovima kao što su oni opisani u Odjeljku 3.4. Nakon što su rastvori uzoraka pomešani sa rastvorom DPPH, detektovane su promene u karakterističnim pikovima rastvora uzoraka na 330 nm.

3.8. Analiza podataka. Analitički podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD) trostrukih nezavisnih mjerenja. Urađena je bivarijantna korelaciona analiza radi proučavanja odnosa između ukupnog sadržaja PhG i antioksidativne aktivnosti određivanjem Pearsonovog koeficijenta korelacije (r) pomoću IBM SPPS Statistics (verzija 19; International Business Machines Corp., New York, NY, USA). Vrijednosti IC50 su također izračunate probit analizama koristeći SPPS Statistics 19. Brzina uklanjanja slobodnih radikala DPPH i ukupan sadržaj PhG su ucrtani korištenjem OriginPro 8.5.1 (Origin Lab Corp., Northampton, MA, SAD). Regresije parcijalnih najmanjih kvadrata (PLS) određene su korištenjem SIMCA-P plus softvera (Verzija 13.0, Umetrics, Umea, Švedska).

4. Zaključak

Različiti delovi kultivisane C. deserticola, široko korišćenog biljnog leka, ispitivani su zbog njihovih kvaliteta. Prvo, karakteristični otisci prstiju šest različitih dijelova uzgojaCistanchedeserticolauzorci su generisani i evaluirani korišćenjem SES-a i simultane analize sadržaja šest markerskih jedinjenja. Drugo, kvantifikacija šest glavnih jedinjenja korišćenjem UPLC-a pokazala je karakteristike distribucije ovih jedinjenja u različitim delovima. Međutim, rezultati nisu mogli biti direktno povezani s djelovanjem biljne medicine. Stoga je bila neophodna bolja metoda za istovremeno određivanje kvaliteta i aktivnosti uzgojenih uzoraka C. deserticola. Prvo, koristili smo offline DPPH esej uklanjanja radikala kako bismo procijenili antioksidativne aktivnosti uzgojenihCistanchedeserticolaekstrakti i našli najveću aktivnost u ekstraktu stabljike. Nadalje, UPLC-PDA zajedno sa DPPH testom prije kolone primijenjen je za skrining i procjenu antioksidanata u uzgojenimCistanchedeserticolaekstrakti stabljike. Ova metoda ne samo da je pružila više hemijskih informacija, već je dala i neke informacije o antioksidansima koje bi se mogle koristiti za identifikaciju i procjenu biljnih lijekova. Drugo, aktivne komponente u ekstraktima stabljike su odvojene i identifikovane korišćenjem UPLC-PAD-QTOF/MS da bi se potvrdio broj i položaj supstituentskih grupa i da bi se poboljšala tačnost strukturne analize. Konačno, odnos između hemijskih komponenti i in vitro antioksidativne aktivnosti je uspostavljen i potvrđen korištenjem PLS modela.

U zaključku, po prvi put smo uporedili profile hemijskog sastava i antioksidativne aktivnosti različitih delova uzgojenih uzoraka C. deserticola. Ovi nalazi su bili od posebnog interesa jer raspodjela PhG jedinjenja, sadržaj PhG i njihov doprinos antioksidansu različitih dijelova uzgojenih uzoraka C. deserticola nisu prijavljeni do ove studije. Nadalje, PLS analiza je prvo uspostavljena kako bi se dalo preliminarno razumijevanje šest pojedinačnih doprinosa PhG antioksidativnoj aktivnosti. Ovaj pristup može nam dati neke nove uvide u sveobuhvatnu procjenu kvaliteta uzgojene C. deserticola. Konačno, ovaj rad predstavlja prvi izvještaj o snažnoj korelaciji između aktivnosti uklanjanja radikala DPPH i ukupnog sadržaja PhG u različitim dijelovima uzgojene C. deserticola (r=0.92). Među ovim različitim dijelovima, utvrđeno je da su stabljike bogate PhGs i da imaju snažno antioksidativno djelovanje. Konkretno, odbačeni nadzemni dijelovi uzgojene C. deserticola također su sadržavali neke bioaktivne spojeve i mogli bi se koristiti kao alternativni dodatak ishrani. Nadamo se da će rezultati pružiti korisne informacije za buduću upotrebu uzgojene C. deserticola. Koliko nam je poznato, ovo je prvi izvještaj o brzoj identifikaciji i kvantificiranju prirodnih antioksidanata u različitim dijelovima uzgojenogCistanchedeserticolakoristeći UPLC-PAD-QTOF/MS, offline DPPH metodu i UPLC-PAD-pre-columnDPPH metodu. Prema našim rezultatima, metoda koja je ovdje razvijena mogla bi pružiti moćan i smislen alat za sveobuhvatnu kontrolu kvaliteta složenih biljnih lijekova. U našoj zemlji, pod vodstvom inicijative "Jedan pojas, jedan put", ova tradicionalna kultura sa zdravstvenim prednostima mogla bi se koristiti za dizajniranje novih proizvoda sa primjenom širom svijeta.

Priznanja

Autori zahvaljuju na finansijskoj podršci Inovacionog fonda za medicinske nauke Kineske akademije medicinskih nauka (CAMS) (CIFMS) (br. 2016-I2M-1-012) i Nacionalne fondacije za prirodne nauke Kine (br. 31570344).

Prilozi autora

Yue Shi i Xiaoming Wang su učestvovali u dizajnu istraživanja. Xiaoming Wang, Jinfang Wang, Huanyu Guan, Rong Xu, Xiaomei Luo, Meifeng Su, Xiaoyan Chang, Wenting Tan i Jun Chen bili su odgovorni za izvođenje eksperimenata. Yue Shi, Xiaoming Wang i Jinfang Wang izvršili su analizu podataka. Yue Shi i Xiaoming Wang doprinijeli su pisanju i uređivanju rukopisa. Sukob interesa: Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

Reference

Wang, T.; Zhang, X.; Xie, W. Cistanche deserticola YC Ma, "Desert Ginseng": Pregled. Am. J. Chin. Med. 2012, 40, 1123–1141. [CrossRef] [PubMed]

2. Li, Z.; Lin, H.; Gu, L.; Gao, J.; Tzeng, C. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jedan od najboljih farmaceutskih darova tradicionalne kineske medicine. Front. Pharmacol. 2016, 7, 41. [CrossRef] [PubMed]

3. Gu, C.; Yang, X.; Huang, L. Cistanches Herba: Neuropharmacology Review. Front. Pharmacol. 2016, 7, 289. [CrossRef] [PubMed]

4. Xu, X.; Zhang, Z.; Wang, W.; Yao, H.; Ma, X. Therapeutic Effect of Cistanoside A on Bone Metabolism of Ovariectomized Mice. Molecules 2017, 22, 197. [CrossRef] [PubMed]

5. Wang, D.; Wang, H.; Gu, L. Antidepresivi i aktivnosti poboljšanja kognitivnih sposobnosti tradicionalne kineske biljke Cistanche. Evid.-Based Complement. Altern. Med. 2017, 2017, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

6. Xue, Z.; Yang, B. Phenylethanoid Glycosides: Research Advances in Their Phytochemistry, Pharmacological Activity and Pharmacokinetics. Molecules 2016, 21, 991. [CrossRef] [PubMed]

7. Jiang, Y.; Tu, P. Analiza hemijskih sastojaka u vrstama Cistanche. J. Chromatogr. A 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

8. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T. Antioksidativni efekti feniletanoida iz Cistanche deserticola. Biol. Pharm. Bik. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

9. Ma, Z.; Yang, Z.; Li, P.; Li, C. Simultano određivanje osam feniletanoidnih glikozida u različitim vrstama roda Cistanche pomoću tečne hromatografije visokih performansi. J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2008, 31, 2838–2850. [CrossRef]

10. Jiang, Y.; Li, SP; Wang, YT; Chen, XJ; Tu, PF Diferencijacija Herba Cistanches prema otisku prsta sa tečnom hromatografijom visokih performansi – detekcija niza dioda – masena spektrometrija. J. Chromatogr. 2009, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]

11. Lu, D.; Zhang, J.; Yang, Z.; Liu, H.; Li, S.; Wu, B.; Ma, Z. Kvantitativna analiza Cistanches Herba pomoću tečne hromatografije visokih performansi u kombinaciji sa detekcijom niza dioda i masenom spektrometrijom visoke rezolucije u kombinaciji sa kemometrijskim metodama. J. Sep. Sci. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed]

12. Song, Q.; Li, J.; Liu, X.; Zhang, Y.; Guo, L.; Jiang, Y.; Song, Y.; Tu, P. Domaća online hifenacija ekstrakcije tekućine pod pritiskom, hromatografija turbulentnog protoka i tečna hromatografija visokih performansi, Cistanche deserticola kao studija slučaja. J. Chromatogr. 2016, 1438, 189–197. [CrossRef] [PubMed]

13. Han, L.; Boakye-yiadom, M.; Liu, E.; Zhang, Y.; Li, W. Strukturna karakterizacija i identifikacija feniletanoidnih glikozida iz Cistanches deserticola YC Ma pomoću UHPLC/ESI–QTOF–MS/MS. Phytochem. Anal. 2012, 23, 668–676. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, S.; Jiang, X.; Wu, L.; Wang, Z.; Huang, L. Hemijska i genetička diskriminacija Cistanches Herba zasnovana na UPLC-QTOF/MS i DNK barkodiranju. PLOS ONE 2014, 9, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Song, Y.; Song, Q.; Li, J.; Zhang, N.; Zhao, Y.; Liu, X.; Jiang, Y.; Tu, P. Integrirana strategija za kvantitativno razlikovanje kamilice između Cistanche deserticola i C. tubulosa koristeći tečnu hromatografiju visokih performansi-hibridnu masnu spektrometriju s trostrukim kvadrupolno-linearnim ionskim zamkom. J. Chromatogr. 2016, 1429, 238–247. [CrossRef] [PubMed]

16. Niu, Y.; Yin, L.; Luo, S.; Dong, J.; Wang, H.; Hashi, Y.; Chen, S. Identifikacija antioksidansa u Flos Chrysanthemi pomoću HPLC-DAD-ESI/MSN i HPLC u kombinaciji sa sistemom za derivaciju nakon kolone. Phytochem. Anal. 2013, 24, 59–68. [CrossRef] [PubMed]

17. Chen, LX; Hu, DJ; Lam, SC; Ge, L.; Wu, D.; Zhao, J.; Long, ZR; Yang, WJ; Fan, B.; Li, SP Poređenje antioksidativnih aktivnosti različitih dijelova snježne krizanteme (Coreopsis tinctoria Nutt.) i identifikacija njihovih prirodnih antioksidanata korištenjem tečne hromatografije visokih performansi u kombinaciji sa detekcijom diodnog niza i masenom spektrometrijom i 2,20 -azinobis({ {4}}etilbenztiazolin-sulfonska kiselina) test na bazi dijamonijumove soli. J. Chromatogr. 2016, 1428, 134–142. [PubMed]

18. Fu, M.; Xu, Y.; Chen, Y.; Wu, J.; Yu, Y.; Zou, B.; An, K.; Xiao, G. Procjena bioaktivnih flavonoida i antioksidativne aktivnosti u Pericarpium Citri Reticulate (Citrus reticulata "Chachi") tokom skladištenja. Food Chem. 2017, 230, 649–656. [CrossRef] [PubMed]

19. Zhang, X.; Xu, M.; Zhang, J.; Wu, L.; Liu, J.; Si, J. Identifikacija i evaluacija antioksidativnih komponenti u cvjetovima pet vrsta Chimonanthus. Ind. Crop. Prod. 2017, 102, 164–172. [CrossRef]

20. Yang, J.; Hu, J.; Rena, K.; Ka, S.; Du, N. Odnosi strukture i aktivnosti feniletanoidnih glikozida u biljkama Cistanche salsa na antioksidativno djelovanje. J. Chin. Med. Mater. 2009, 32, 1067–1069.

21. He, W.; Fang, T.; Tu, P. Napredak istraživanja farmakoloških aktivnosti ehinakozida. Kina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

22. Li, Y.; Chen, J.; Li, Y.; Li, P. Identifikacija i kvantifikacija hvatača slobodnih radikala u cvjetnim pupoljcima vrste Lonicera putem online HPLC-DPPH testa u kombinaciji s elektrosprej jonizacijskom kvadrupolnom vremenskom tandem masenom spektrometrijom. Biomed. Chromatogr. 2012, 26, 449–457. [CrossRef] [PubMed]

23. Yao, H.; Chen, Y.; Brod.; Hu, J.; Li, S.; Huang, L.; Lin, J.; Lin, X. Skrining i kvantitativna analiza antioksidansa u plodovima Livistona Chinensis R. Br upotrebom HPLC-DAD-ESI MS u kombinaciji sa pre-kolumnim DPPH testom. Food Chem. 2012, 135, 2802–2807. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, Y.; Hao, H.; Wang, G.; Tu, P.; Jiang, Y.; Liang, Y.; Dai, L.; Yang, H.; Lai, L.; Zheng, C.; et al. Pristup identifikaciji sekvencijalnih metabolita tipičnog feniletanoidnog glikozida, ehinakozida, baziran na tečnoj hromatografiji-jonski trap-time analize masene spektrometrije leta. Talanta 2009, 80, 572–580. [CrossRef] [PubMed]

25. Qi, M.; Xiong, A.; Li, P.; Yang, Q.; Yang, L.; Wang, Z. Identifikacija akteozida i njegovih glavnih metabolita u urinu pacova tečnom hromatografijom ultra-performanse u kombinaciji sa elektrosprej jonizacionom kvadrupolnom tandemskom masenom spektrometrijom vremena-fleta. J. Chromatogr. B 2013, 940, 77–85. [CrossRef] [PubMed]

26. Li, W.; Sun, X.; Song, H.; Ding, J.; Bai, J.; Chen, Q. HPLC/Q-TOF-MS identifikacija apsorbiranih sastojaka i njihovih metabolita u serumu i urinu pacova nakon oralne primjene ekstrakta Cistanche deserticola. J. Food Sci. 2015, 80, H2079–H2087. [CrossRef] [PubMed]

27. Li, Y.; Zhou, G.; Xing, S.; Xing, S.; Tu, P.; Li, X. Identifikacija metabolita ehinakozida koje proizvode ljudske intestinalne bakterije korištenjem ultraperformansne tečne hromatografije-kvadrupolne masene spektrometrije vremena leta. J. Agric. Hrana. Chem. 2015, 63, 6764–6771. [CrossRef] [PubMed]