Studije trećeg dijela su pokazale da autofagija igra važnu ulogu u regulaciji ćelijskog taloženja LD

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

SAŽETAK

Novi dokazi ukazuju na to da neočekivano taloženje lipidnih kapljica (LD) i peroksidacija mogu ubrzati stres organela i igraju ključnu ulogu u patogenezi neurodegenerativnih bolesti (NDD). U našoj prethodnoj studiji, potvrdili smo da je kempferol (Ka), prirodni mali molekul flavonoida, pokazao neuroprotektivne efekte na miševe sa Parkinsonovom bolešću (PD) izazvanom LPS-om. Osim toga, prethodne studije su pokazale da autofagija igra važnu ulogu u regulaciji ćelijskog taloženja LD. U trenutnoj studiji, pokazali smo da je Ka štitio od TH plus neuronskog gubitka i deficita u ponašanju kod MPTP/p-indukovanih PD miševa, praćeno smanjenim lipidnim oksidativnim stresom u supstanci nigra pars compacta (SNpc). U kultivisanim neuronskim ćelijama, Ka je pokazao relativno siguran raspon koncentracije i značajno potisnuo akumulaciju LD i ćelijsku apoptozu izazvanu MPP plus . Dalja studija je pokazala da je zaštitni učinak Ka ovisio o autofagiji, posebno lipofagiji. Kritično, Ka je promovirao autofagiju da posreduje u degradaciji LD u lizosomima, što je zatim ublažilo taloženje lipida i peroksidaciju i rezultirajuće oštećenje mitohondrija, posljedično smanjenje neuronske smrti. Štaviše, AAV-shAtg5- posredovano Atg5 nokdaun je ukinuo neuroprotektivne efekte Ka protiv oksidacije lipida kod PD miševa.Cistanche za poboljšanje pamćenjaOvaj rad pokazuje da Ka sprječava dopaminergičku neuronsku degeneraciju u PD putem inhibicije oštećenja mitohondrija posredovanih peroksidacijom lipida promicanjem autofagije usana i pruža potencijalnu novu terapijsku strategiju za PD i srodne NDD.

Molimo kliknite ovdje da saznate više

Uvod

Parkinsonova bolest (PD) je uobičajena neurodegenerativna bolest (NDD) koja se patološki karakteriše progresivnim gubitkom dopaminergičkih (DA) neurona u supstancia nigra pars compacta (SNpc)[1]. Iako tačna etiologija i prirodni tok ove bolesti tek treba biti u potpunosti razjašnjen, brojni procesi i disfunkcije na nivou sistema, uključujući mitohondrijalne funkcije, homeostazu dopamina, neuroinflamaciju i autofagiju, uključeni su u patogenezu PD [1, 2]. Nedavni izvještaji su otkrili da lipotoksičnost povezana s lipidnim kapljicama (LD) može sudjelovati u patologiji PD [3,4]. LD su visoko dinamične organele koje izlaze iz membrane endoplazmatskog retikuluma (ER) i normalno služe kao intracelularna mjesta za skladištenje neutralnih lipida [5 Nedavno se pokazalo da LD imaju mnogo širu ulogu od skladištenja masnih kiselina (FA) i da učestvuju u mnogim bolestima. (cistanche para que serve) Na primjer, mijeloične ćelije, uključujući makrofage, leukocite i eozinofile, formiraju LD kao odgovor na upalu i stres,cistanche na kineskomi LD su mjesta proizvodnje i skladištenja inflamatornih citokina i dalje su uključeni u prezentaciju antigena i klirens patogena [6]. Važno je da se kod ateroskleroze pokazalo da su pjenaste ćelije bogate LD štetne u svim stadijumima bolesti [7].

Cistanche može poboljšati imunitet

Međutim, LD nisu opširno proučavani u centralnom nervnom sistemu (CNS), sa nekoliko radova koji izveštavaju o histološkom prisustvu LD u ljudskom moždanom tkivu [8,9]. Uprkos tome, LD mogu imati važne funkcije u mozgu, jer su nedavne studije potvrdile da agregirani LD u gliji ubrzavaju neurodegeneraciju u modelu Drosophila [10]. Nedavno je objavljeno da su kod miševa, uljno crvene O-pozitivne ćelije opterećene lipidima, uključujući neurone, astrocite glijalnog fibrilarnog kiselog proteina (GFAP)t i ionizirani adapterski molekul koji vezuje kalcij-1 (IBA{{7} })t mikroglije, prisutne su u mnogim regijama mozga i pokazalo se da učestvuju u procesima povezanim sa godinama [11]. Naš prethodni rad je također pokazao povećanu akumulaciju LD u mozgu u modelu PD miša [12]. Uzeti zajedno, ove studije sugeriraju da LD mogu biti uključeni u patogenezu PD, kao i druge NDD.

Normalno, intracelularni LD se razgrađuju u lizosomima i isporučuju FA u mitohondrije za njihovu potrošnju kao alternativni izvor energije tokom perioda iscrpljivanja nutrijenata [13]. Međutim, neuroni imaju nizak kapacitet za potrošnju mitohondrijske FA za proizvodnju energije [14]. Ova karakteristika čini neurone posebno osjetljivim na akumulaciju i peroksidaciju LD. Nadalje, akumulacija LD povećava brzinu oksidacije FA i nameće uporni pritisak na mitohondrijski lanac transporta elektrona, što povećava proizvodnju reaktivnih vrsta kisika (ROS) kompleksima I i III transportnog lanca elektrona [15] kako bi se pojačao oksidativni stres. Preopterećenje lipidima također dovodi do proizvodnje ROS od strane ekstramitohondrijalnih izvora kao što su nikotinamid adenin dinukleotid fosfat (NADPH) oksidaze i drugi oksidativni enzimi. U kombinaciji sa smanjenom ekspresijom antioksidativnih enzima i niskim kapacitetom za potrošnju FA u neuronima, akumulacija LD posreduje u oksidativnom stresu i može dalje dovesti do oštećenja mitohondrija, lizozomske disfunkcije, defektne autofagije i aktivacije upalnih odgovora [16,17]. Osim ako se akumulirani LD ne mogu inhibirati ili ukloniti, visoko aktivni neuroni prolaze kroz patofiziologiju, što dovodi do neurodegeneracije [17]. (cistanche penis) Dokazi ukazuju da katabolički proces posredovan lizozomima koji se naziva autofagija igra ključnu ulogu u održavanju ćelijske homeostaze LD u više tkiva [17,18]. detaljno,cistanche rast penisaLD se mogu selektivno izdvojiti u autofagozome i dostaviti u lizozome radi razgradnje lizosomskim kiselim lipazama, proces koji je posebno poznat kao lipofagija [19]. Stoga, ciljanje na LD i njihov put autofagnog uklanjanja može predstavljati novi pristup upravljanju neurodegeneracijom.

Proučavanje prirodnih proizvoda i dijetetskih agenasa kao izvora potencijalnih NDD tretmana i strategija zadobilo je ogroman interes posljednjih godina [20]. Kaempferol (Ka) je prirodna polifenolna mala molekula koja se može naći u velikom broju kineskih ljekovitih biljaka i prehrambenih izvora [21]. Prijavljeno je da Ka ima antibakterijske, anti-aging i imunomodulatorne efekte, kao i antioksidativne i neuroprotektivne aktivnosti [20,22,23]. Ranije je prijavljeno da Ka inhibira upalu u BV2 mikroglijalnim ćelijama in vitro [24] i povećava otpornost DA neurona na neuroinflamaciju in vivo [25]. Međutim, efekat Kaon LD na PD još nije istražen.

S obzirom na važnost LD i intimnu vezu između LD, mitohondrija i autofagije [16], koji su svi uključeni u PD, pretpostavljamo da Ka inhibira LD peroksidaciju i sprječava neurodegeneraciju DA u PD. U ovoj studiji, pokazali smo da Ka značajno štiti od neurodegeneracije u mišjem PD modelu inhibirajući akumulaciju LD. (cistanche prah) Dalja studija je otkrila da je Ka pokrenuo autofagiju i smanjio nakupljanje oksidiranih LD-a kako bi ublažio mitohondrijalnu disfunkciju i proizvodnju mitohondrijalnog ROS-a (mtROS), čime je spriječio neuronsku apoptotičku smrt.cistanche propiedadesNalazi dobiveni u ovoj studiji mogu pomoći u direktnim kliničkim odlukama u vezi s upotrebom prirodnog molekula Ka u NDD kao što je PD.

2. Materijali i metode

2.1. Eksperimentalne životinje

C57BL/6J miševi (mužjaci, 4-mjeseci) su dobijeni od Nanjing Medical University Animal Core (Nanjing).cistanche tubulosa beneficiosMiševi su održavani i uzgajani u Centru za resurse za životinje Medicinskog fakulteta Medicinskog univerziteta u Nanjingu i u objektu za životinje u bolnici Nanjing Drum Tower. Miševi imaju slobodan pristup hrani i vodi u prostoriji sa temperaturom okoline od 22 stepena ±2 stepena i ciklusom svetlosti/mraka od 12:12 h. Sve procedure na životinjama provedene su u strogom skladu sa smjernicama Vodiča Nacionalnog instituta za zdravlje za njegu i korištenje laboratorijskih životinja.

2.2.Reagensi

MPTP(M0896),3-MA(M9281),penicillin-streptomycin (V900929), sodium pentobarbital, and probenecid were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Kaempferol (HPLC>95%) for in vivo treatment was purchased from Nanjing Jingzhu Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, China), kaempferol (HPLC>99.0 posto ,96,353) za in vitro eksperimente je dobijeno od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). BODIPY 493/503 (D3922), BODIPY 581/591 C11 (D3861) i DHE (D11347) su kupljeni od Thermo Fisher Scientifica. Za eksperimente na životinjama, Ka je otopljen u otopini od 10 posto DMSO u 16 posto SBE- -CD u sterilnoj fiziološkoj otopini. Za eksperimente na ćelijama, Ka je pripremljen u DMSO (Sigma-Aldrich) i PBS (konačna koncentracija DMSO je 0,01 posto), pH 7,4.

2.3. Indukcija i tretman mišjeg modela PD izazvanog metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridinom (MPTP)

Da bi se procijenili efekti Ka u PD modelu MPTP/p-toksičnosti, miševi (mužjaci, u dobi od 4-5 mjeseci) nasumično su podijeljeni u grupu tretiranu fiziološkim rastvorom, grupu tretiranu MPTP, grupu tretiranu MPTP plus Ka , i samo Ka tretirana grupa. U grupi tretiranoj MPTP-om, miševi su primili kroničnu primjenu MPTP-a po protokolu sličnom onom prethodno opisanom [26]: MPTP je otopljen u fiziološkoj otopini i ubrizgan supkutano u dozi od 25 mg/kg, a zatim 250 mg/kg probenecida (otopljenog u dimetil sulfoksidu) intraperitonealna (ip) injekcija u intervalima od 1 h svakih 3,5 dana u periodu od 5 sedmica. (korijen cistanche) Kontrolni miševi su primili fiziološku otopinu i injekciju probenecida. U grupi tretiranoj MPTP plus Ka, miševi su primali Ka (50 mg/kg, jedna injekcija dnevno tokom eksperimenata, Jingzhu Biotechnology, Nanjing, Kina) intraperitonealno (ip) dnevno 3 dana prije tretmana s MPTP i preko 5 MPTP nedelje injekcija. Sedmicu nakon posljednje injekcije MPTP-a, miševi su podvrgnuti testiranju ponašanja zaslijepljeni grupama. Nakon toga, svi miševi su anestezirani sa 40 mg/kg natrijum pentobarbitala i žrtvovani za detekciju moždanih proteina i imunohistohemiju ili qPCR analizu.

2.4. In vivo stereotaksična hirurgija i eksperimentalni tretmani

Stereotaksična operacija pod anestezijom natrijum pentobarbitalom (40 mg/kg, ip) izvedena je kako je opisano [25]. Atg5 miša i kontrolna shRNA su transficirani vektorima pakovanja (AAV-U6-CMV-she-NA-EGFP) da bi se stvorio AAV. Za mikroinjekciju, anestezirani miševi se stavljaju u stereotaksički aparat. Ubrizgan im je 1 μL AV staklenom elektrodom usmjerenom na DG (AP:-0.3mm; ML: ±0.13mm; DV:-0.45 mm） brzinom od 0,25 μL/min Zatim je igla zadržana još 2-min 2 sedmice nakon mikroinjekcije virusa, miševi su podvrgnuti MPTP-indukovanom PD modelu provodljivosti i (ili) tretmanu Ka.

Atg5 shRNA je dobijena od Hanbio Biotechnology (Shanghai, China) Co., Ltd. Za Atg5 tišinu, prajmeri su prikazani u dodatnoj tabeli 1.

2.5. Analiza ponašanja

Tjedan dana nakon završne injekcije MPTP-a ili fiziološkog rastvora, rotator test i test na stubu su izvedeni kao što je opisano ranije [27]. Za rotacijski test, miševi su aklimatizirani na rotarod u dva pokusa (6 min sa ubrzanom brzinom od 12-20 o/min) dnevno 2 uzastopna dana prije početka eksperimenta. Zatim su miševi testirani na 20 o/min u trajanju od 300 s druga 3 uzastopna dana. Latencija pada zabilježena je korištenjem Rotarod sistema za analizu (Jiliang, Šangaj, Kina). Za testiranje stuba, miševi su postavljeni glavom gore na vrh vertikalnog drvenog stupa (grube površine, visine 50 cm, prečnika 1 cm). Svi miševi su navikli na aparat 2 dana prije testiranja, a zatim testirani tri puta trećeg dana. Zabilježeno je ukupno vrijeme (T-ukupno, dok miš nije došao do poda sa svoje četiri šape) i vrijeme okretanja (T-okretanje, da se miš potpuno okrene glavom prema dolje). Eksperiment je zaslijepljen za grupe miševa za svaki test ponašanja i test je izveden tri puta.

2.6. Sakupljanje uzoraka mozga

Nakon završnih testova ponašanja, miševi su anestezirani natrijum pentobarbitalom (40 mg/kg, ip). Za qPCR, Western blotting i tečnu hromatografiju visokih performansi (HPLC), cijeli mozgovi su brzo izvađeni iz životinja, a zatim su tkiva srednjeg mozga i strijatum brzo secirana, prethodno zamrznuta tekućim dušikom. Svi uzorci su pohranjeni na -80 stepeni do analize.

Za imunohistohemijsku analizu, miševi su perfuzirani transkardijalno sa 4 posto paraformaldehida (PFA). Mozgovi su ekstrahovani, naknadno fiksirani, dehidrirani, ugrađeni u OCT (Tissue-Tek), a serijski dijelovi mozga su kriosecirani (30 μm po komadu) kroz svaki cijeli sloj i srednji mozak pomoću mikrotoma za zamrzavanje (Leica CM1950, Njemačka Nussloch, ). Svi dijelovi su sakupljeni u šest odvojenih serija, a kriške mozga su pohranjene u 50 posto glicerina i zamrznute na -20 stepenu do analize.

Za TEM, miševi su perfuzirani sa 2,5 posto glutaraldehida i 2 posto paraformaldehida kao što je opisano 【12】. Mala porcija （<1 mm³）="" of="" the="" mesencephalon="" was="" carefully="" sectioned="" and="" incubated="" in="" the="" same="" fixative="" for="" 2="" h="" at="" 4="" ℃.="" specimens="" were="" postfixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide,="" stained="" in="" aqueous="" uranyl="" acetate,="" and="" then="" dehydrated="" and="" embedded="" in="" epoxy="" resin.="" ultrathin="" sections="" were="" stained="" using="" lead="" citrate="" and="" examined="" with="" a="" transmission="" electron="" microscope(jem-1010,="" tokyo,="">

2.6. Imunohistohemijska analiza

Rezovi mozga su isprani u PBS-u, a zatim 3% H2O2 tokom 10 min, a zatim inkubirani sa 0.3% Triton X-100 u PBS-u sa dodatkom 5% BSA tokom 1 h. Nakon toga, stakalca su inkubirana sa primarnim antitelima na 4 stepena preko noći u PBS-u koji sadrži 5 procenata BSA na 4 stepena preko noći, zatim isprana i inkubirana u sekundarnim antitelima 1 h na sobnoj temperaturi, nakon čega je usledila inkubacija sa diaminobenzidinom (DAB) ili montaža u DAPI (Life Technologies, Cat P36931) kao imunofluorescentno bojenje u trajanju od 5 min. Za Nissl bojenje, stakalca su spojena u rastvoru krezil violet (CV) (0,1 g krezil violeta, 99 ml H20 i 1 procentna sirćetna kiselina 1 ml) tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim dehidrirani alkoholom i ksilenom. Slike su posmatrane i fotografije su snimljene pod mikroskopom Olympus BX52 (Olympus America Inc., Melville, NY, Sjedinjene Države). Ukupan broj TH-pozitivnih i Nissl-pozitivnih neurona u SNpc-u dobijen je serološki metodom optičkog frakcioniranja sa MicroBrightField Stereo-Investigator softverom (MicroBrightField, Williston, VT, USA).

2.7. Analiza tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC).

Miševi strijatalni uzorci su homogenizirani sa {{0}}.1 M perhlornom kiselinom (1 mg tkiva u 100μL perhlorne kiseline) i 0,1 mM EDTA, tretiranim ultrazvukom i centrifugirano na 20,{7}} o/min tokom 30 min, kako je objavljeno [27]. Zatim su sakupljene supernatantne tekućine za mjerenje. Mobilna faza je miješani rastvor koji se sastoji od 90 mM monobaznog natrijum fosfata, 1,7 mM 1- oktan sulfonske kiseline, 50 mM citrata, 50 uM EDTA, 10 posto acetonitrila sa brzinom protoka od 0,2 ml/min. Paralelno, za kvantitativni proračun standardne krive, pripremljeni su osnovni standardni rastvori za dopamin i dihidroksi-fenil octenu kiselinu (DOPAC) (Sigma-Aldrich, USA) u 0,1 M HClO4. Ubrizgano je 10 ul pripremljenog supernatanta ili standardne otopine u mobilnu fazu i testiran elektrohemijskim detektorom ESA Coulochem III (Coulochem III, Thermo Fisher Scientific).Uzorci su izmjereni i pikovi su kvantificirani Koncentracije monoamina su kvantificirane poređenjem sa standardom korištenjem ClarityChrom softvera (Knauer, Njemačka) a zatim sadržaj u sloju je konvertovan prema omjeru razrjeđenja.Standardna kriva DA i DOPAC prikazana je na dodatnoj slici 1a i b.

2.8. Ćelijske kulture i tretmani

Kulture mezencefalnih primarnih neurona provedene su kako je prethodno opisano [12]. Ukratko, mezencefalna tkiva miševa C57BL/6 embrionalnog dana 14/15 (E14/15) su pažljivo uklonjena, mehanički razdvojena kako bi se uklonile membrane i velike krvne žile, a zatim secirao. Zatim su digestirani sa tripsinom-EDTA (Amresco, Solon, OH, SAD) i zatim filtrirani kroz 100-um filter da bi se dobila jednoćelijska suspenzija. Nakon toga, ćelije su postavljene na poli-L-lizinom prethodno obložene ploče 12-/24-jažice na 2,5 ×10 stepen ćelija/ml koje sadrže Neurobasal medij (Cat 21103049, GibcoTM , Thermo Fisher Scientific, Rockford, SAD) sa dodatkom B27 (2 posto v:v, Cat 1750404, GibcoTM) i penicilina/streptomicina (0,5 posto v:v). Kulture su držane u vlažnoj komori (37 stepeni, 5 posto CO2 inkubator). Podloga za kulturu se mijenja svaka 3 dana, a ćelije se mogu koristiti na 7-10 dana.

Ćelijske linije: SH-SY5Y ćelijske linije su uzgajane u 10 posto FBS-a i 1 posto penicilina/streptomicina u vlažnom inkubatoru na 37 stepeni i 5 posto CO2. U eksperimentima, SH-SY5Y ćelije su tretirane MPP plus (200 μM) ili različitim dozama Ka (0,3,30,60,100,300,600uM) tokom 24h.Ka(3,10,30,60μM,3h)primed-SH- SY5Y ćelije su stimulirane sa MPPt (400 μM) tokom 24 h. Ka (30 μM, 3 h) sa (ili bez) 3-MA (3 mM, 1 h) ili -tokoferolom (50 μM, 1 hdrich, 7gma78) ）primed-SH-SH5Y ćelije su stimulisane sa MPPT (200 μM) tokom 24 h.

2.9. CCK8 test vitalnosti ćelija

Promijenjena vitalnost ćelija Ka tretmana je otkrivena pomoću Cell Counting Kit-8 (CCK-8 Kit, Selleck, Houston, TX, USA). Ukratko, SHSY5Y ćelije su zasijane u 96- ploča sa bunarima i zatim tretirana različitim koncentracijama Ka (3,30,60,100,300,600,600 uM) tokom 24h. Zatim je 10ul CCK{13}} reagensa dodato u svaku jažicu tokom 4 h. Konačno, apsorbancija je detektirana pomoću Multiskan Spectrum (Thermo Fisher Scientific) na 450 nm.

2.10. ATP test

Nivoi ćelijskog ATP-a su detektovani pomoću ATP Bioluminescence Assay Kit (Beyotime Biotechnology Co., Kina) prema uputstvima proizvođača. Nakon tretmana, ćelije su lizirane i centrifugirane na 12,000 o/min 5 min na 4 stepena, a supernatanti su sakupljeni. Radni rastvor (100 μL) je dodan u 20 μL uzorka u 96- pločici sa jažicom, a luminiscencija je odmah izmerena na automatizovanom čitaču mikroploče. Mjerenja iz svih uzoraka su normalizirana na koncentraciju proteina.

2.11.Na plus -K plus -ATPazni test

Za mjerenje Nat-K plus -ATPaze (A070-2-2, Jiancheng, Nanjing, Kina), ćelije su sonikirane i centrifugirane na 600 rpm tokom 10 minuta da se dobije supernatant. Dodane su reakcione otopine detekcije Nat-Kt-ATPaze i inkubirane prema uputama proizvođača. Zatim je detektirana apsorbancija na 660 nm. Mjerenja svih uzoraka su normalizirana na koncentraciju proteina.

2.12. Western blotting analiza

Ćelije ili moždana tkiva su lizirana u RIPA puferu (50 mM Tris (pH 7,4),cistanche คือ150 mM NaCl,1 posto NP-40 (FNN0021,Thermo), 0,5 posto natrijum deoksiholata (D6750, Sigma), 0,1 posto SDS (74255, Sigma) sa dopunom proteaze i inhibitori fosfataze (Roche, Šangaj, Kina). Koncentracije proteina određivane su pomoću Micro BCA kompleta (Beyotime, Šangaj, Kina). Protein 30-ug svakog uzorka je odvojen pomoću SDS-PAGE pomoću poliakrilamidnih TGX gela (Bio-Rad, Hercules, Kalifornija, SAD), a zatim prebačen na membrane od poliviniliden difluorida (PVDF) (Millipore, Bedford, MA). Nakon blokiranja, PVDF membrane su inkubirane sa različitim specifičnim primarnim antitijelima u TBST na 4 stepena preko noći, a zatim su isprane i inkubirane u odgovarajućim sekundarnim antitijelima konjugiranim s peroksidazom hrena (HRP) 1 h na sobnoj temperaturi. Imunoreaktivne trake su vizualizirane i detektirane pomoću poboljšane hemiluminiscencije (ECL) plus reagens za detekciju (Pierce, Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) i analizirane korištenjem ImageQuantTM LAS 4000 sistema za snimanje (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, SAD).

2.13. Kvantitativna (Q)-i reverzna transkripcija (RT)-PCR u realnom vremenu

Ukupna RNK je ekstrahirana iz moždanog tkiva i kultiviranih ćelija pomoću Trizol reagensa (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Reverzna transkripcija je izvršena korišćenjem kompleta reagensa TAKARA PrimeScript RT (TaKaRa, Japan). qPCR u realnom vremenu je sproveden korišćenjem SYBR Green Master Mix-a (Applied Biosystems) u StepOnePlus instrumentu (Applied Bio-systems). Prajmere je kupio i validirao General (Šangaj, Kina). Prajmeri koji se koriste za qPCR prikazani su u Dodatnoj tabeli 2.

Ovaj članak je preuzet iz Redox Biology 41 (2021) 101911