Metabolomsko profiliranje zasnovano na NMR za uklanjanje radikala i svojstva protiv starenja, 1. dio

Molimo kontaktirajteoscar.xiao@wecistanche.comza više informacija

sažetak:Bilje koje se obično prepoznaje kao ljekovito dobro je poznato po svom terapeutskom djelovanju i tradicionalno se koristi za liječenje brojnih bolesti, uključujući starenje. Ova studija imala je za cilj procijeniti varijacije metabolita između šest odabranih biljaka, odnosno Curcuma longa, Oenanthe japonica, Vitex Mundo, Pluchea indica, Cosmos caudatus i Persicaria minus koristeći protonsku nuklearnu magnetnu rezonancu ('H-NMR) u kombinaciji s multivarijantnom analizom podataka (MVDA) . Aktivnost uklanjanja slobodnih radikala ekstrakta mjerena je pomoću 2,2-difenil-1-pikrilhidrazila(DPPH) i 2,2-azinobisa(3-etil-benzotiazolina{{8 }}sulfonska kiselina) (ABTS) i analiza kapaciteta apsorpcije radikala kisika (ORAC). Svojstvo protiv starenja karakterizirano je djelovanjem protiv elastaze i inhibicije kolagenaze. Rezultati su otkrili da P. minus pokazuje najveću aktivnost uklanjanja radikala i svojstva protiv starenja. Biploča parcijalnih najmanjih kvadrata (PLS) ukazuje na prisustvo moćnih metabolita u P. minusima kao što su kvercetin, kvercetin{13}}O-ramnozid (kvercitrin), derivati ​​miricetina, katehin, izorhamnetin, astragalin i apigenin.metoda ekstrakcije flavonoida pdfMože se zaključiti da se P. minus može smatrati potencijalnim izvorom sastojka protiv starenja, ali i dobrim iskorenjivanjem slobodnih radikala. Stoga bi se P. minus mogao koristiti u budućem razvoju u istraživanjima protiv starenja i preparatima medicinskih sastojaka.

Ključne riječi:radikalno čišćenje; inhibitor elastaze; inhibitor kolagenaze; metabolomika; multivarijantna analiza podataka; protonski NMR; složeno profilisanje

Molimo kliknite ovdje da saznate više

1. Uvod

Starenje je karakterizirano progresivnim opadanjem fizioloških funkcija različitih organa, praćenim disfunkcijama i konačno smrću [1]. Može se kategorizirati prema fiziološkim, metaboličkim i imunološkim poremećajima koji su povezani s ekstremnim oksidativnim stresom. Kontinuirana proizvodnja reaktivnih vrsta kiseonika (ROS), iako je neophodna za biološke funkcije, smrtonosna je kada je prisutna u prevelikim količinama. Ovi radikali se obično eliminišu kroz antioksidativni odbrambeni sistem. Međutim, u fazi starenja, antioksidativni odbrambeni sistem postaje nefunkcionalan, što dovodi do oštećenja ćelija i posljedično čini ćelije ranjivim na razne degenerativne bolesti.

Širom svijeta danas postoji raznovrsnost začinskog bilja koje narod dugo tradicionalno koristi za starenje, bilo da se uključi u kuhana jela ili jede sirovo kao salatu. Među uobičajenim biljem koje se u Maleziji koristi u ove svrhe su listovi Curcuma longa, Oenanthe japonica, Vitex negundo, Pluchea indica, Cosmos caudatus i Persicaria minus. Osim u ove svrhe, vjeruje se da ove biljke imaju i medicinske vrijednosti koje indirektno doprinose zdravstvenim prednostima svojih potrošača. Na primjer, listovi C. longa se široko koriste zbog svoje prijatne arome, posebno u azijskim kulinarskim preparatima, iako njihova upotreba u medicinskim pripremama još nije dobro dokumentirana.O. javanica se obično koristi u tradicionalnoj medicini za liječenje žutice, hipertenzije, polidipsije, snižavanja krvnog pritiska, ublažavanja aritmije i antianafilakse [2-4]. Također je objavljeno da ova biljka ima zaštitna svojstva protiv oštećenja jetre izazvanog oksidativnim stresom, peroksidacije lipida u jetri kod pacova tretiranih bromobenzenom, intoksikacije alkoholom i aktivnosti virusa hepatitisa B [5-8]. V. negundo se tradicionalno koristi kao narodna medicina za liječenje glavobolje, groznice, prehlade i kašlja, očnih bolesti, zubobolje, upala, leukoderme, kožnih čireva, kataralne groznice, reumatoidnog artritisa, gonoreje, bronhitisa, vermifuga, antibakterijskog lijeka i antihistaminska svojstva [9,10]. Prijavljeno je da ova biljka ima antihiperglikemijski potencijal i hepatoprotektivne efekte te se koristi kao hormonska nadomjesna terapija u kliničkoj praksi[11-13]. Tradicionalno je poznato da P. indica posjeduje antioksidativno, antimikrobno, protuupalno, hipoglikemijsko i diuretičko djelovanje; i za liječenje reumatoidnog artritisa [14-19]. Popularna lokalna biljka, C. caudatus, koristi se za poboljšanje cirkulacije, pospješuje stvaranje zdravih kostiju, smanjuje tjelesnu toplinu, potiče svjež dah, liječi infekcije povezane s patogenim mikroorganizmima, snižava visoki krvni tlak, a korisna je i u čišćenju krv [20-24]. Također je poznato da ova biljka ima antioksidativna, antidijabetička, antihipertenzivna, antibakterijska, l i antigljivična svojstva [22,25-27]. Poznato je da biljka, P. minus, posjeduje antimikrobnu aktivnost, citotoksičnu aktivnost protiv HeLa (ljudski karcinom grlića materice), snažan antioksidans i djelovanje protiv raka [28-33]. Ova biljka se također koristi u biljnoj medicini za liječenje probavnih smetnji, jer se njeno eterično ulje koristilo za uklanjanje peruti, a koristi se i u aromaterapiji i u industriji parfema [34,35]. Međutim, primjena ovih biljaka kao sredstva protiv starenja je još uvijek ograničena i postoji nedostatak informacija u ovoj oblasti.

Narodno predanje koristi bilje ili ljekovito bilje za liječenje raznih stanja kao što su giht, visoki krvni tlak, dijabetes, dijareja, a također i za odlaganje starenja [36]. Svjetska zdravstvena organizacija je izvijestila da se većina bolesti liječi tradicionalnim biljem ili ljekovitim biljkama i to prakticira 65-80 posto svjetske populacije[37]. Pokazalo se da neke od ovih biljaka imaju vrlo moćnu aktivnost uklanjanja radikala [38]. Prirodna jedinjenja za koja se veruje da doprinose ovim terapeutskim efektima su izvedena iz grupe sekundarnih metabolita, posebno polifenola. Biljke prirodno sintetiziraju polifenole i pružaju ogromnu kategoriju kemijskih spojeva koji posjeduju antioksidativna, antikancerogena, anti-gojaznost, antidijabetička, protuupalna i druga funkcionalna svojstva. Polifenoli također mogu braniti od oksidativnog stresa [39,40]. Ovi sekundarni metaboliti imaju značajne varijacije u svojoj strukturi, što doprinosi ukusu, boji i senzornim osobinama biljaka. Polifenoli stupaju u interakciju sa ćelijama na ćelijskom nivou, uglavnom putem direktnog kontakta sa receptorima ili enzimima koji su povezani sa transdukcijom signala. Modifikacija redoks statusa ćelija može dovesti do ove interakcije i takođe pokrenuti lanac redoks-ovisnih odgovora. Učinci antioksidansa i prooksidansa polifenola su široko definirani, što rezultira različitim efektima na ćelijske fiziološke puteve. Preživljavanje stanica može se poboljšati ako polifenoli djeluju kao antioksidansi. Nasuprot tome, mogu uzrokovati apoptozu i inhibirati evoluciju tumora kada djeluju kao prooksidansi. Međutim, zaštitni efekti polifenola mogu se proširiti i dalje od samo prevladavanja oksidativnog stresa [41]. Akumulirajuće studije su izvijestile da polifenoli kao što su kvercetin, epikatehin galat, epigalokatehin galat i galna kiselina mogu inhibirati aktivnost proteolitičkih enzima i tirozinaze in vitro, djelujući kao kompleksni ili precipitirajući agensi [42-45]. Stoga bi se biljke ili ljekovite biljke koje su pokazale antioksidativna svojstva i inhibitorno djelovanje na enzime starenja mogle primijeniti kao antioksidansi, ali i kao sredstva protiv starenja. S obzirom na to, potrebno je izvršiti profiliranje metabolita i korelacije sa aktivnošću uklanjanja radikala i svojstvima protiv starenja ovih biljaka. Metaboličke varijacije između organizama mogu se procijeniti putem metabolomike, koja se danas smatra svestranim alatom [46,47].flavonoidivarijacija se može proučavati upotrebom specifičnih analitičkih metoda zajedno sa multivarijantnom analizom podataka. Na primjer, najčešće korišteni analitički instrument za proučavanje metabolomike biljaka je spektroskopija nuklearne magnetne rezonance (NMR) [48] NMR spektroskopija bi mogla ponuditi jednostavnu strukturnu analizu postignutu iz signala i konstanti spajanja metabolita (primarnih i sekundarnih) koji su prisutni u organizmima, uključujući sirove ekstrakte [49]. Štaviše, intenzitet signala metabolita u odnosu na molarnu koncentraciju može pružiti korisne dokaze o kvaliteti i količini identificiranih metabolita [49]. NMR je najbolja opcija za uzimanje otisaka prstiju i diskriminaciju biljaka zbog ove procjene koja odražava broj metabolita koji su identificirani, a ne dodijeljene signale [49]. Velikom količinom podataka dobijenih NMR analizama upravljano je analizom glavnih komponenti (PCA) i parcijalnim najmanjim kvadratima (PLS), koje su komponente multivarijantne analize podataka. Ovi korisni alati se također koriste za otkrivanje mogućih markera u uzorcima[48].

Cistanche može protiv starenja

S obzirom na ograničenu primjenu i nedostatak informacija o ovim odabranim biljkama kao agensima protiv starenja, u ovoj studiji prikazani su listovi šest odabranih biljaka, a to su C.longa, O. javanica, V. negundo, P. indica, C. .caudatus i P.minus, analizirani su pomoću 'H-NMR spektroskopije za profilisanje metabolita i korelaciju sa aktivnošću uklanjanja radikala i svojstvima protiv starenja. Pretpostavljalo se da će ove biljke otkriti značajne biološke aktivnosti (aktivnost uklanjanja radikala i svojstva protiv starenja) i da će se dobiti značajna korelacija između metabolita i svojstava protiv starenja.hesperidin koristiOve biljke su selektovane na osnovu njihove upotrebe generacijama u lokalnoj tradicionalnoj kuhinji i u narodnim vremenima se jele sirove kao salata.

2. Rezultati i diskusija

2.1.Radikalna aktivnost čišćenja biljaka

Slobodni radikali su povezani kao uzročnici brojnih ljudskih bolesti koje uključuju dijabetes melitus, aterosklerozu, upalne lezije, ishemijsku bolest srca, metaboličke poremećaje, različite imunosupresivne bolesti, neuromišićna degenerativna stanja i proces starenja [50-52]Potencijalni mehanizam Vjeruje se da su fenolna jedinjenja kao antioksidativni odbrambeni sistem zbog njihovog direktnog uklanjanja slobodnih radikala koji su uključeni u starenje i druge hronične bolesti [53-55]. U osnovi, mjerena je aktivnost uklanjanja radikala prirodnih spojeva u biljkama kako bi se rangirali i preporučili najbolji biljni materijali za potrošnju [56].

U ovoj studiji, potencijal aktivnosti uklanjanja radikala šest biljaka protiv 2,2-difenil-1-pikrilhidrazila (DPPH),2,2-azinobis(3-etil-benzotiazolin{ {7}}sulfonska kiselina)(ABTS) i kapacitet apsorpcije radikala kiseonika (ORAC)(peroksil) radikali su ispitani i prikazani su na slici 1. Rezultati studije su otkrili da se aktivnost uklanjanja radikala proučavanih biljaka kretala od 36,12 do 411,61 ug/mL za IC5o DPPH testa, 70,27 do 854,98 mg Trolox ekvivalentnog antioksidativnog kapaciteta (TEAC)/g uzorka za ABTS test i 1972,31 do 6639,01 mM za Trolox/g uzorak za Trolox/g. Nalazi aktivnosti uklanjanja radikala DPPH pokazali su da su listovi P. minus pokazali značajno (p<0.05) higher="" radical="" scavenging="" effect="" followed="" by="" c.caudatus,="" pindica,="" v.="" negundo,="" o.e="" javanica,="" and="" c.longa="" leaves="" (figure="" 1a).="" the="" leaves="" of="" p.="" minus="" extracted="" with="" 60%="" ethanol="" showed="" exceptionally="" high="" radical="" scavenging="" activity="" that="" was="" close="" to="" that="" of="" trolox.="" this="" finding="" is="" in="" agreement="" with="" huda-faujan="" et="" al.[57]who="" stated="" that="" p.="" minus="" extract="" showed="" greater="" antioxidant="" activity="" when="" compared="" to="" other="" common="" herbs="" such="" as="" c.="" caudatus,o.javanica,="" centella="" asiatica,="" and="" murraya="" koenigiii="" leaves,="" and="" the="" antioxidant="" activity="" were="" comparable="" to="" that="" of="" synthetic="" antioxidant="" butylhydroxytoluene="" (bht),="" other="" studies="" have="" also="" proved="" that="" p.minus="" leaves="" demonstrated="" high="" antioxidant="" activity="">

In this study, ABTS radical cation decolorization assay showed quite similar results obtained in the DPPH radical scavenging activity (Figure 1B).P.minus leaves showed the highest Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC), followed by C.caudatus, P.indica, V. negundo, C.longa, and O. javanica. However, the antioxidant value for C. longa leaves was not significantly different (p>0.05) od V. negundo i O.javanica. Ovaj nalaz je očekivan budući da aktivnosti uklanjanja radikala ABTS i DPPH dijele sličan mehanizam reakcije u analizi antioksidansa u kojoj se jedan ili više elektrona prenosi da bi smanjili ciljna jedinjenja. U ABTS testu, rezultati su upoređeni korišćenjem Trolox ekvivalenta. Prema TEAC-u, ekstrakt lišća P.minus bio je snažno sredstvo za uklanjanje radikala i moglo bi se dalje proučavati u pogledu drugih funkcionalnih svojstava.

Slika 1 takođe pokazuje aktivnost čišćenja biljnih ekstrakata na peroksil radikale u smislu ORAC vrednosti (mM Trolox/g uzorka). Među testiranim ekstraktima biljaka, aktivnost uklanjanja V. negundo i C.caudatus protiv peroksil radikala generisanih AAPH bila je značajno (p<0.05) higher,="" followed="" by="" p.="" minus="" and="" p.="" indica,="" and="" the="" lowest="" radical="" scavenging="" potential="" was="" exhibited="" by="" o.="" javanica="" and="" c.="" longa="" (figure="" 1c).="" this="" finding="" was="" slightly="" different="" when="" compared="" with="" the="" other="" two="" radical="" scavenging="" assays(dpph="" and="" abts),="" which="" revealed="" that="" p.minus="" had="" the="" highest="" free="" radical="" scavenging="" effect.="" in="" vitro,="" antioxidant="" potential="" can="" be="" determined="" according="" to="" two="" categories="" of="" classes,="" which="" are="" hydrogen="" atom="" transfer(hat)based="" assays="" and="" electron="" atom="" transfer="" (et)based="" assays.="" assays="" based="" on="" et="" include="" dpph="" and="" abts="" radical="" scavenging="" capacity="" assays,="" the="" total="" phenolic="" assay="" by="" folin-ciocalteu="" reagent,="" superoxide="" dismutase(sod)="" assay,="" and="" the="" ferric="" ion="" reducing="" antioxidant="" power(frap)="" assay="" an="" example="" of="" hat-based="" assays="" is="" the="" orac="" assay="" which="" scavenges="" peroxyl="" radicals="" [60].="">izgubljeno carstvo cistancheStoga se može nagađati da je mehanizam djelovanja u efektu uklanjanja radikala P.minus bio snažno ovisan o testovima baziranim na ET, koji uglavnom hvataju reaktivne vrste kisika osim peroksil radikala. Ipak, svi testovi sugerišu da P.minus i C.caudatus imaju visoku antioksidativnu aktivnost, uporedivu sa pozitivnom kontrolom, kvercetinom. Stoga treba istražiti primjenu ovih biljaka kao sredstava protiv starenja.

2.2. Aktivnost inhibicije elastaze

Elastaza je enzim iz klase proteaza (peptidaza) koji razgrađuje elastin. Elastin se nalazi u vezivnom tkivu i protein je odgovoran za elastičnost kože i pluća, a katalizira ga enzim elastaza [61-63]. Prethodne studije su dokazale da se propadanje elastina intracelularnom elastazom povećava kako starimo ili zbog ponovljenog izlaganja UV zračenju, što kasnije dovodi do starenja kože [62-64].

Ova studija je osmišljena kako bi se utvrdilo djelovanje odabranih biljnih ekstrakata kao agenasa protiv starenja. Slika 2A prikazuje inhibiciju enzima elastaze ekstraktima biljaka. Enzimi elastaze inkubirani s ekstraktima biljaka značajno (p < 0.05)="" inhibiraju="" enzim="" za="" više="" od="" 40="" posto.="" rezultati="" studije="" su="" otkrili="" da="" se="" aktivnost="" inhibitora="" elastaze="" testiranih="" biljaka="" kretala="" od="" 43,47="" do="" 57,91="" posto="" inhibicije.="" pri="" koncentraciji="" od="" 100="" ug/ml="" za="" svaki="" ekstrakt="" biljke,="" p.minus="" je="" pokazao="" značajno=""><0.05) higher="" elastase="" inhibition="" at="" 57.61="" ±="" 0.95%,="" even="" higher="" than="" that="" of="" quercetin="" at="" the="" same="" concentration="" with="" inhibition="" at="" 52.94±1.18%.="" c.caudatus="" also="" showed="" comparable="" anti-elastase="" activity="" (51.34±0.21%)to="" quercetin,="" followed="" by="" p.="" indica,="" v.negundo,="" c.="" longa="" and="" o.javanica.="" similar="" findings="" were="" also="" observed="" by="" other="" studies="" on="" persicaria="" species="" (synonyms="" polygonum="" spp)[43,65,66].="" kim="" et="" al.="" [44]="" also="" reported="" that="" the="" persicaria="" spp="" demonstrated="" the="" highest="" elastase="" inhibition="" among="" 60="" plants="" studied="" with="" inhibition="" against="" elastase="" activity="" being="" more="" than="" 50%.="" the="" inhibition="" of="" the="" elastase="" enzyme="" activity="" of="" p.="" minus="" obtained="" in="" this="" study="" is="" in="" agreement="" with="" previous="">

Ekstrakti biljaka su široko istraživani u pogledu inhibicije enzima starenja i često se otkriva da imaju anti-elastazno djelovanje, na primjer, aktivnost anti-elastaze određena je iz polifenola izolovanih iz listova dragulja (Diospyros kaki) [67] i ruzmarina (Rosmarinus officinalis) ekstrakti [68]. Fenolna jedinjenja kao što su katehin, epikatehin, resveratrol i procijanidin B2 u komini grožđa, kao i biljni fenoli [69,70], i flavonoidi kao što su kvercetin, kempferol i miricetin kao pojedinačna jedinjenja[71], takođe imaju snažno djelovanje protiv elastaze.mikronizirana pročišćena frakcija flavonoida 1000 mg koristiSlično istraživanje na 23 biljne ekstrakte otkrilo je da bijeli čaj ima najveću antielastaznu aktivnost, koji je sadržavao vrlo visok sadržaj fenola [72]. Stoga su fenolna jedinjenja, posebno flavonoidi koji bi mogli biti prisutni u P. minus, mogli doprinijeti njegovoj visokoj antielastaznoj aktivnosti.

2.3. Inhibicijska aktivnost kolgenaze

Enzim kolagenaza je metaloproteinaza koja razbija peptidne veze u kolagenu. Osim kolagena, ovaj enzim je u stanju da cijepa i druge molekule koji se nalaze u stanicama, kao što su elastin, fibronektin, želatin, agrekan i laminin [73]. Rezultati studije su pokazali da se inhibitorna aktivnost na kolagenazu testiranih biljaka kretala u rasponu od 56,49±1,29 do 71.00±1,08 posto. Uporedivi trend je uočen i za antikolagenazno djelovanje proučavanih biljaka, gdje je P.minus ponovo značajno (p<0.05) higher="" collagenase="" inhibitory="" activity="" with="" 71.00±="" 1.08%(figure="" 2b).="" interestingly,="" the="" inhibitory="" effect="" of="" p.minus="" was="" higher="" than="" that="" of="" quercetin="" at="" the="" same="" concentration="" (65.95±0.56%).="" c.caudatus="" and="" p.="" indica="" on="" the="" other="" hand,="" showed="" comparable="" anti-collagenase="" activity="" to="" quercetin="" at="" 66.05±0.74%="" and="" 66.29±1.68,="" respectively.="" the="" inhibition="" of="" the="" collagenase="" enzyme="" decreased="" in="" the="" order="" of="" p.="" minus="">P.indica >C.caudatus >C.longa> O.javanica>V. Segundo. However, the anti-collagenase activity was found to be not significantly different (p>0.05)između P. indica i C.caudatus, C.longa i O.javanica. Studija o aktivnosti protiv kolagenaze objavila je da katehini zelenog čaja kao što je epigalokatehin galat (EGCG) mogu biti moćni inhibitor kolagenaze. Slično, u ovoj studiji, EGCG je pokazao posebno dobru aktivnost protiv kolagenaze pri 12,5 ug/mL. Prema Kim et al. [74], ekstrakt čaja, koji sadrži katehine koji su prepoznati kao kelatori metala, može se vezati za Zn2ion unutar enzima kolagenaze i stoga spriječiti njegovo spajanje sa supstratom. Ovaj mehanizam je zbog kolagenaze koja je enzim metaloproteinaze koji sadrži cink.

Kolagen koji je najzastupljeniji protein u ekstracelularnom matriksu i glavna komponenta kože odgovoran je za snagu i elastičnost kože, te za održavanje njene fleksibilnosti [75]. Stoga, spojevi koji pokazuju aktivnost protiv kolagenaze mogu općenito imati vrijedne efekte na očuvanje zdrave kože inhibiranjem degradacije dermalnog matriksa odlaganjem procesa razgradnje kolagena, a potom i procesa bora. U ovoj studiji, inhibicijski efekat ekstrakta P. minus na aktivnost kolagenaze mogao se desiti putem nekoliko mehanizama. Budući da je P. minus biljka i da je za većinu biljaka poznato da su bogate polifenolima, hidroksilne grupe (OH) polifenola su mogle biti povezane sa kičmom ili drugim funkcionalnim bočnim grupama kolagenaze. Osim toga, hidrofobna interakcija između benzenskog prstena polifenola i kolagenaze mogla je možda promijeniti konformaciju enzima, što je rezultiralo nefunkcionalnošću enzima [76]. Treći mehanizam može uključivati ​​aktivno mjesto jona cinka na kolagenazi kao što je gore navedeno. Bigg et al. [77] su izvijestili da aktivno mjesto enzima kolagenaze sadrži strukturni ion cinka koji vitalno funkcionira u pomaganju interakcije s inhibitorom. Pored polifenola, flavonoidi, koji su podgrupa polifenola, također mogu helirati metal cink svojom 3-hidroksi flavonskom strukturom [78].

Studija Sina i Kima [79] otkrila je da su flavonoli veoma efikasni kao inhibitori kolagenaze. Prema autorima, kvercetin i kempferol su imali veći inhibicijski učinak na aktivnost kolagenaze u odnosu na flavone, izoflavone i flavanone, pri čemu je potonji bio najneefikasniji. Stoga se vjeruje da grupa jedinjenja flavonola kao što su kvercetin, kempferol, miricetin i galanin koji mogu biti prisutni u P.minus-u obezbjeđuju visoku anti-kolagenaznu aktivnost ove biljke. S druge strane, prirodni inhibitori elastaze i kolagenaze iz biljke potrebni su kao novi izvor sredstava protiv starenja, kako bi se izbjeglo starenje ili naboranost kože. Stoga, ovaj nalaz sugerira da postoji mogućnost da iste komponente u ekstraktu P. minus mogu imati inhibitorni učinak na enzime elastaze i kolagenaze.

2.4.1H-NMR spektri bilja i identifikacija metabolita

Reprezentativni H-NMR spektri proučavanog bilja prikazani su na slici 3A. Vizuelno poređenje LH-NMR spektra šest biljaka pokazalo je neke razlike, posebno za različite klase metabolita. Postojala je primjetna razlika između H-NMR spektra biljaka na alifatskim (6 0.5-3.00), ugljikohidratima (63.00-5.50) i posebno, aromatično područje (65.50-9.00). U aromatičnoj regiji, NMR spektri P. minus pokazali su značajne razlike i pokazali još jače signale u poređenju sa drugim biljkama (Slika 3B). Ovo sugerira da se listovi P.minus mogu sastojati od veće koncentracije aromatičnih metabolita u odnosu na druge biljke.

Dalja analiza 'H-NMR spektra otkrila je da je ukupno 29 glavnih metabolita prepoznato iz ekstrakata lista, kao što je prikazano u Tabeli 1. Identifikacija primarnih metabolita obavljena je pomoću softvera (Chenomx baza podataka), a sekundarni metaboliti su identificirani iz online baze podataka (Human Metabolome Database [HMDB]; http://www.hmdb.ca/) i također poređenjem sa podacima iz književnost. Metaboliti su bili devet primarnih metabolita (n=9), fenolne kiseline (n=5). flavonoidi (n=14) i askorbinska kiselina (n =1). Primarni metaboliti koji su identifikovani uključivali su aminokiseline (alanin i valin), masne kiseline i D-limonen kod kojih su otkriveni njihovi hemijski pomaci u alifatski region (6 0.50-3.00). Primarni metaboliti koji se sastoje od ugljikohidrata (-glukoza, -glukoza, fruktoza, saharoza), holin i askorbinska kiselina otkriveni su u području hemijskog pomaka od δ3.00-5.50. Sekundarni metaboliti aromatične regije (65.50-9.00) identificirani su kao kvercetin, kvercetin-3-O-ramnozid [47,80], kvercetin-3-O-glukozid [80], kvercetin-3-O-glukuronid [81], kvercetin-3-O-arabinofuranozid [47 80], rutin, derivati ​​miricetina, katehin, epikatehin, izorhamnetin, astragalin, apigenin, hlorogen kiselina, galna kiselina, kumarinska kiselina, fumarna kiselina, mravlja kiselina, 3-metilksantin i serotonin, Razne studije su pokazale prisustvo fenolnih jedinjenja i sekundarnih metabolita, posebno flavonoida u listovima P. minus [{{33} }], kao što je takođe pronađeno u ovoj studiji.

Ovaj članak je preuzet iz Molecules 2019, 24, 3208; doi:10.3390/molecules24173208 www.mdpi.com/journal/molecules