Vakcina zasnovana na MRNA za COVID-19: Nova je, ali nije nepoznata!

sažetak:

mRNA vakcine koriste prednosti mehanizma koji naše ćelije koriste za proizvodnju proteina. Naše ćelije proizvode proteine ​​na osnovu znanja sadržanog u našoj DNK; svaki gen kodira jedinstveni protein. Genetske informacije su neophodne, ali ćelije ih ne mogu koristiti sve dok ih mRNA molekuli ne pretvore u uputstva za proizvodnju specifičnih proteina. Vakcinacije mRNA pružaju gotove upute za mRNA za konstruiranje specifičnog proteina. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) i mRNA-1273 (Moderna) su novo odobrene vakcine COVID-19 zasnovane na mRNA koje su pokazale odličnu zaštitu i efikasnost. Ukupno postoji još pet kandidata za vakcinu zasnovanu na mRNA za COVID-19 u različitim fazama kliničkog razvoja. Ovaj pregled je posebno fokusiran na vakcine zasnovane na mRNA za COVID-19, pokrivajući njihov razvoj, mehanizam i kliničke aspekte.

cistanche koristi za muškarce - jača imuni sistem

Ključne riječi:

COVID-19 vakcina; mRNA vakcine; razvoj vakcine; vektorske vakcine

1. Uvod

Pandemija bolesti korona virusa{{0} (COVID-19) uzrokovana teškim akutnim respiratornim sindromom coronavirus-2 (SARS-CoV-2) proširila se svijetom. Do sada, globalno, bilo je 662 miliona potvrđenih slučajeva COVID-19, uključujući 6,6 miliona smrtnih slučajeva prijavljenih Svjetskoj zdravstvenoj organizaciji (WHO) [1]. Virus pogađa više od 200 zemalja širom svijeta, a većina slučajeva je prijavljena u Brazilu, Rusiji i Sjedinjenim Državama [2]. Prvi izvještaj o izbijanju COVID-19 bio je iz grada Wuhana, provincija Hubei u Kini, 30. decembra 2019. godine. Grupe slučajeva upale pluća zabilježene su u Wuhanu. Kasnije, 7. januara 2020. godine, otkriveno je da je uzročnik novog korona virusa (2019-nCoV). SZO je na kraju bolest nazvala COVID-19 [3,4]. Procijenjena stopa smrtnosti se kreće od 0,5-1,5%. SARS-CoV-2 pripada porodiciCoronaviridaei redNidovirales. SARS-CoV-2 pripada Betacorona virusu koji ima blisku genomsku vezu sa dva virusa, SARS-CoV i koronavirusom bliskoistočnog respiratornog sindroma (MERS CoV). U poređenju sa SARS-om i MERS-om, SARS-CoV-2 je veoma zarazan. COVID-19 je ozbiljna bolest globalnog značaja. Bolest se ne može liječiti specifičnim antivirusnim lijekom, ključ za sprječavanje širenja bolesti je prekid lanca prijenosa [5]. Da bi se smanjila prevalencija i stope mortaliteta, koristi se masovna imunizacija protiv pandemije [6,7]. Otkako je sekvenca genoma SARS-CoV{10}} objavljena 11. januara 2020. godine, proučavano je više od 150 nadležnih projekata imunizacije. Glavni cilj vakcinacije je da izazove imuni odgovor koji pruža dugoročnu zaštitu od težine bolesti [8]. Kako su ocijenili Paddy Ssentongo i kolege [9], efikasnost vakcine (VE) protiv svih SARS-CoV-2 infekcija pala je sa 83% u prvom mjesecu nakon završetka prve serije imunizacije na 22% nakon 5 mjeseci ili više . Slično, VE protiv simptomatskog COVID-19 se smanjio sa 94% u prvom mjesecu na 64% tokom četvrtog mjeseca nakon imunizacije. Sve u svemu, VE protiv teškog COVID-19 je bio jak u svim uzrastima, sa nivoom od 90% (95% CI, 87–92%) pet mjeseci ili više nakon potpunog vakcinisanja.

Koronavirus ima šiljasti (S) protein na svojoj površini; ovaj S protein će stupiti u interakciju sa domenom za vezivanje receptora receptora za enzim koji konvertuje angiotenzin (ACE) [10,11]. Većina kandidata za vakcinu cilja na ovaj S protein virusa [12]. Pfizer BioNTech COVID-19 vakcina-BNT162b2 je prva imunizacija koju je odobrila Uprava za hranu i lijekove (FDA). Zasnovan je na RNK (mRNA) koju je napravio Pfizer koji je dobio odobrenje za hitnu upotrebu za 12-15 godina ili više za prevenciju bolesti COVID-19. Američka uprava za hranu i lijekove (USFDA) odobrila je Pfizer vakcinu 23. avgusta 2021. [13]. Razne studije su objavile da imunizacija ima efikasnost od 89,1% u prevenciji infekcije SARS-CoV{18}}; osim toga, vakcine su također smanjile hospitalizaciju, smrtne slučajeve povezane s COVID{19}}i prevenciju prijema na intenzivnu negu. Kontrolirano širenje SARS-CoV-2 može se postići ranije kada je veliki dio populacije imuniziran (npr. 70-80%). Imunizacija značajno smanjuje incidencu COVID-19. Vakcina pruža snažan i efikasan imunološki odgovor za iskorjenjivanje SARS-CoV-2 infekcije iz ljudskog tijela. Ljudi koji su bili zaraženi imali su snažan odgovor T-ćelija na virus, što može pomoći u njihovoj sposobnosti da se oporave od infekcije [14,15]. Neutralizacija je ostala u snažnoj korelaciji sa zaštitom od simptomatske infekcije SARS-CoV-2 varijantama koje izazivaju zabrinutost [16]. Dakle, vakcinacija je strategija za kontrolu pandemije.

cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem

COVID-19 vakcine se razvijaju na različitim platformama. Živi atenuirani virus, inaktivirane vakcine, virusni vektori koji se ne repliciraju, RNK i DNK su primjeri toga. Različite vrste vakcina sa primjerima su navedene na slici 1. Strategija razvoja vakcine je korištenje ubijenog SARS-CoV-2 virusa, koji nije u stanju da se replicira, ali može ostati netaknut u tijelu. Imuni sistem će pokrenuti svoj odgovor na virus stvaranjem antitijela protiv njega. COVAXIN® (BBV152) proizvođača Bharat Biotech, Hyderabad, Indija, i CoronaVac također poznat kao sinovac® koji je razvio Sinovac Biotech, Peking, Kina, koristio je pristup inaktiviranim virusom za razvoj cjepiva [17]. Virusni vektor koji se ne replicira je takođe tehnika koju su usvojile kompanije za proizvodnju vakcina. Adenovirus (Ads) je široko korišten virusni vektor koji ima dvolančani genom koji djeluje kao uzročnik obične prehlade. CanSino Biologics Tianjin, Kina je razvio Ad5-nCoV (Convidecia®) koji kodira punu dužinu S-proteina SARS-CoV-2 virusa. Virusni vektor ne posjeduje svojstva replikacije i stoga ne uzrokuje stvarnu bolest. Nakon što uđe u tijelo, virusna DNK se prikazuje na ćelijama koje predstavljaju antigen i na nju se stvara imuni odgovor. Oxford/Astrazeneca je koristio adenovirus iz čimpanze (ChAdOx1) koji posjeduje potencijal da minimizira interakciju s preovlađujućim antitijelima protiv adenovirusa. Vakcina je nazvana AZD122 (Vaxzevria™). Istraživački institut Gamaleya, Moskva, Rusija razvio je vakcinu Sputnik V™ koja je takođe virusni vektor koji ima rekombinantni ljudski Ad26 serotip. Janssen vakcinu su proizveli Johnson and Johnson, New Jersey, SAD koristeći isti pristup [18].

mRNA se takođe smatra novim pristupom formulisanju vakcine. mRNA vakcine su nove za javnost, ali ih naučnici već dugo istražuju. Ove mRNA vakcine se sintetiziraju iz DNK šablona koji kodira šiljasti protein i spakuje se u nosač baziran na lipoproteinu kako bi se ubrzao ulazak mRNA u tijelo i spriječila degradacija [19]. Kada se vakcina daje intramuskularnim putem, ona se ubrizgava u dublja tkiva i molekuli mRNA će ući u ćeliju, olakšavajući proces translacije [20]. Po ulasku u tijelo, mRNA će biti prepoznata kao antigen i aktivirat će se humoralni imuni odgovor koji će stimulirati B stanice da se razviju u memorijske B stanice. Na taj način na sekundarnu izloženost antigenu; memorijske B ćelije će neutralisati i blokirati antigene [21]. FDA je odobrila vakcine zasnovane na mRNA, od kojih je jedna Pfizer-BioNTech's, New York, NY, SAD BNT162b2 (Comirnaty®), a druga je Moderna™, Cambridge, MA, SAD mRNA-1273 također poznata kao Spikevax. FDA je odobrila mRNA-1273 za odobrenje za hitnu upotrebu (EUA) za upotrebu kod osoba starijih od 18 godina. Trenutni pregled će pružiti detaljne informacije o vakcinologiji i činjenicama o COVID-19, razvoju vakcine zasnovane na mRNA, kako mRNA vakcine rade, formulaciji i sastojcima koji se koriste, sigurnosti i efikasnosti, te regulatornim izazovima za vakcine.

Slika 1. Različite vrste vakcina za infekciju COVID-19. (Kreirano sa BioRender.com pristupljeno 31. decembra 2022.)

2. Vakcinologija i činjenice o COVID-u-19

U decembru 2019. u Kini je prijavljena grupa osoba koje su iz neutvrđenog razloga bolovale od plućnih oboljenja. Kineski centar za kontrolu i prevenciju bolesti (CDC) je potom istražio nesigurnost u slučajevima vezanim za upalu pluća i njihovo porijeklo prikupljanjem uzoraka iz tijela pacijenta koji su otkriveni lančanom reakcijom polimeraze u realnom vremenu [22]. Kasnije je poznat uzrok plućnog poremećaja i utvrđeno je da ga uzrokuje koronavirus, koji je dalje nazvan SARS-CoV-2 (teški akutni respiratorni sindrom) ili COVID-19. Od tada se to pretvorilo u globalnu pandemiju. Spada u grupu -korona virusa. Strukturno, to je omotana, nesegmentirana, koja pripada podrodu Sarbecovirus i podfamiliji Orthocoronavirinae. Genomski materijal prisutan u njegovoj strukturi je jednolančana RNA sekvenca pozitivnog smisla [23]. Nalaze se prvenstveno kod ptica i sisara domaćina. Genomska struktura koronavirusa prikazana je na slici 2, koja predstavlja da virusna struktura posjeduje šiljaste proteine, koji imaju podjedinice, S1 i S2, na vanjskoj membrani. RNK virusni genom je inkapsuliran unutar membrane zajedno sa nukleokapsidom. Dakle, možemo reći da postoje četiri strukturna proteina, tj. šiljasti protein (S), protein nukleokapsida (N), membranski protein (M) i protein omotača (E) [24]. Osim toga, prisutni su i nestrukturni proteini (Nsp), kojih je ukupno šesnaest. Proteini šiljaka su istaknuta mjesta vezivanja receptora, gdje proteini mogu stupiti u interakciju s receptorima prisutnim u tijelu [25]. S1 podjedinica uključuje domen za vezivanje receptora (RBD), pri čemu se enzim II koji konvertuje angiotenzin vezuje za šiljasti protein. Takođe se sastoji od N-terminalnog domena (NDT). S2 podjedinica posjeduje fuzione proteine ​​(FP) i transmembranske proteine ​​(TM) [26]. Po ulasku virusa u ćelije domaćina, on dovodi do fuzije i uklanjanja omotača virusne membrane, nakon čega slijedi transkripcija i translacija mRNA, koja je neophodna za formiranje virusnog sklopa, koji potom egzodusira iz domaćina putem egzocitoze kako bi inficirao druge ćelije. Ulazak virusnih čestica u druge ćelije tijela dovodi do stimulacije imunološkog odgovora i stvaranja antitijela [27].

Slika 2. Genomska struktura koronavirusa. (Kreirano sa BioRender.com pristupljeno 31. decembra 2022.).

Globalno, imunizacija se široko koristi i efikasna je u smanjenju stope smrtnosti. Na osnovu zdrave nauke i znanja, procena bezbednosti i efikasnosti vakcina i evaluacija njihovog prihvatanja može se poboljšati [28]. Vakcine su evoluirale od tradicionalnih vakcina kao što su žive atenuirane ili ubijene vakcine do podjediničnih vakcina i na kraju, homolognih ili heterolognih strategija primarnog pojačanja imunizacije [29]. Različite strategije vakcinacije prikazane su na slici 3. U antici, žive atenuirane vakcine su se pokazale kao spasitelj protiv različitih patogenih virusa i smatrale su se sigurnima protiv miliona populacija, ali su često zanemarene. Mnoge vakcine, uključujući vakcine protiv malih boginja, zaušnjaka, rubeole i cjepiva protiv vodenih boginja, su žive atenuirane vakcine [25,30]. Oslabljeni oblici virusa mogu se postići njegovim izlaganjem nepovoljnim uslovima ili genetskim modifikacijama. Ova vrsta vakcine, posebno oralna poliomijelitis vakcina (OPV) može se davati neinvazivnim putevima. Nasuprot tome, ubijene vakcine, koje su inaktivirane verzije virusa, imaju ograničenu primjenu u smislu imunološkog odgovora, ali trenutno korištena indijska vakcina, COVAXIN®, koju proizvodi Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, Indija koristi inaktiviranu verziju virus u njegovoj formulaciji vakcine [31]. Inaktivirani virus je dovoljno sposoban da zadrži svoj epitomski konformitet koji pomaže u modulaciji humoralnog imunološkog odgovora [32].

Slika 3. Interakcija vakcina sa ćelijama domaćina i virusnom česticom. (Kreirano sa BioRender.com pristupljeno 31. decembra 2022.)

Najnovije tehnologije kao što su vakcine zasnovane na mRNA ili vakcine bazirane na vektorima maksimalno ih koriste za sigurnost i efikasnost COVID-19 vakcina [33]. Vakcine bazirane na vektorima poznate su i kao heterologna prime-boost vakcinacija, koja pomaže u izazivanju i ćelijskog i humoralnog imunološkog odgovora, dok žive podjedinične vakcine izazivaju samo humoralni odgovor [34–39]. Prema studiji, 5-10 puta povećanje imunog odgovora posredovanog T ćelijama u slučaju heterologne vektorske vakcine u poređenju sa istom formulacijom, pripremljenom pomoću homolognog pristupa [40]. Stoga su vakcine bazirane na vektorima, odnosno bazirane na DNK i RNK, poželjnije u odnosu na bazirane na podjedinicama, često se smatraju robusnijim u poređenju sa RNK vakcinama i efikasnim jer kodiraju šiljasti protein strukture virusa. U slučaju virusa Chikungunya, strategija koimunizacije korištenjem DNK i virusu sličnih čestica je stvorila bolji imunološki odgovor u studijama na životinjama [41]. Ponekad DNK vakcine zahtevaju specijalizovane sisteme za isporuku kao što su elektroforeza, nizovi mikroiglica i sistemi bazirani na nosaču kao što su liposomi da bi se poboljšala permeabilnost. Mikrosfere na bazi polilaktičke-ko-glikolne kiseline formulirane su za isporuku HIV-1 DNK vakcine intramuskularnim putem [42]. Međutim, vakcine zasnovane na DNK stvaraju slab imunološki odgovor i često zahtijevaju još jednu dozu. Ovo se može prevazići upotrebom vakcina zasnovanih na mRNA [25,43].

cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem

3. Razvoj vakcine zasnovan na mRNA

Ranije su se za formulaciju vakcine koristili različiti oblici RNK, uključujući in vitro transkribovanu mRNA, siRNA (male interferentne RNK), aptamere zasnovane na RNK, ribosprekidače, antisens molekule, a kasnije i mRNA. Svijest o ribonukleinskoj kiselini, tj. mRNA, potiče od njenog osnovnog, nadalje, ekonomičnog stvaranja, njenog prolaznog kretanja i sporog razgradnje u ciljnim stanicama, a njene sigurnosne prednosti su u suprotnosti s DNK terapijom jer ne koordinira ljudski genom, inhibirajući inserciju. mutageneze, i brzo je dostupan za interpretaciju u protein u ćelijskoj citoplazmi [44]. Početkom 1990-ih, istraživači su uveliko radili kako bi uspjeli u razvoju vakcina zasnovanih na mRNA. Izvedeni su različiti eksperimenti in vitro i rezultati su pokazali naknadnu proizvodnju željenih proteina; stoga je zaključeno da budući da je mRNA dovoljno sposobna da proizvodi proteine, onda to može biti vjerojatan terapijski režim za liječenje bolesti [45]. Prema Martinonu i saradnicima, mRNA vakcina na bazi nukleoproteina za liječenje gripe sintetizirana je in vitro transkripcijom i ugrađena u liposomske vezikule. Rezultati su pokazali indukciju citotoksičnih T-ćelija i antitijela, in vivo [46]. Od tada je došlo do progresivnog razvoja u korištenju mRNA kao terapijskog alata zbog njegove značajne djelotvornosti, lakog proširenja i isplativosti, što je primarni zahtjev za liječenje visoko zaraznih bolesti i terapiju raka. Nedavne istraživačke studije otkrile su da terapije zasnovane na mRNA značajno štite miševe od simptoma Chikungunya i održavaju poželjne nivoe antitijela nakon dvije doze [47]. Vakcine zasnovane na RNK ciljaju imunološke ćelije tijela mijenjajući njihove funkcije, ciljajući ribozome za translaciju, stvarajući tako imuni odgovor [19].

Imunizacije zasnovane na mRNA sadrže jednolančanu mRNA, koja kodira željeni antigen. Mogu se prenijeti kao gola mRNA ili inkapsulirati u odgovarajuće sisteme nosača kako bi se olakšala isporuka u ćelije. Jednom kada mRNA uđe u ćeliju, ona se prirodnim mehanizmima ćelije prevodi u strukture zasnovane na proteinima. Dalje je podvrgnut post-translacijskim modifikacijama kako bi se dobio protein od interesa i generira imuni odgovor kako je određeno signalnim peptidima [44,48]. Vakcine zasnovane na mRNA suočavaju se s najmanje dvije prepreke: nuklearnom degradacijom kada se ubrizgavaju u životinje i urođenom imunogenošću sličnom onoj antigena [49]. Da bi se prevazišao ovaj problem, pseudouridin (Ψ) je dobro poznata modifikacija RNK. Ψ zamijeniti uridin in vitro transkribiranom (IVT) mRNA, koja je vrlo rasprostranjen i prirodni nukleotid u svim stanicama s RNK. Vakcinacija protiv COVID-19, koju proizvode i Moderna i Pfizer-BioNTech, sastoji se od novog modificiranog Ψ koji ima djelotvornost do 90% protiv simptoma [50]. Pri čemu je vakcini koju je razvio CureVac NV nedostajala Ψ-modifikovana mRNA i klinička ispitivanja su potvrdila efikasnost od samo 48% [51].

Tokom procesa translacije, prvenstveno postoje dvije različite kategorije mRNA vakcina, a to su neamplifikujuća mRNA (NMR) i samoamplifikujuća mRNA (SMR). Mehanizam rada mRNA koja se ne pojačava i mRNA koja se samo-amplifikuje objašnjen je na Slici 4. Strukturno, kao što je prikazano na Slici 5, obe strukture poseduju CAP, 50 i 30 neprevedenih regiona (UTR), okvir otvaranja (ORF), i konjski rep [52,53].

Slika 4. Kategorije mRNA. (Kreirano sa BioRender.com pristupljeno 31. decembra 2022.)

Uz to, SMR posjeduje replikazu kao segment koji pomaže u amplifikaciji mRNA unutar ćelije. Nadalje, segmenti se prevode ribosomima kako bi proizveli proteine ​​od interesa. Sekretirani proteini dovode do stvaranja imunološkog odgovora [54]. SMR-ovi su relativno veći od NMR-a i anjonskih molekula. Nedavne studije samoreplicirajuće RNK pokazale su bolju in vitro ekspresiju subgenoma nestrukturnih proteina replikona venecuelanskog konjskog encefalitisa (VEE) kada su uočene različite mutacije. Slično kliničko ispitivanje provedeno je kako bi se ciljao glikoprotein Rabies koristeći VEE-Sindbis virus samo-amplifikujuću RNK formuliranu u nano-emulzije trenutno je u tijeku [55]. Glavni kritični atributi kvaliteta (CQA) koji definiraju efikasnost mRNA terapija su sažeti u Tabeli 1 [54].

Slika 5. Optimizacija mRNA sekvence. (Prilagođeno iz [56] s pravima i dozvolama).

Tabela 1. CQA za mRNA vakcine.

Proizvodnja mRNA je proces u dva koraka, koji uključuje proizvodnju i pročišćavanje. U sistemima za proizvodnju mRNA nisu prisutne nikakve nečistoće jer ne sadrži nikakve životinjske ili ćelijske sirovine, proizvodnja je relativno sigurnija [65]. Proizvodnja mRNA sekvence može biti enzimski proces u jednom koraku ili enzimski proces u dva koraka. Analog za zatvaranje se koristi u slučaju proizvodnog procesa u jednom koraku, koji se općenito koristi u laboratorijskoj skali. Proces se zatim postiže prečišćavanjem, koje uključuje odvajanje pomoću hromatografskih tehnika kao što je prikazano na slici 6. Enzimska reakcija u dva koraka za proizvodnju mRNA obuhvata in vitro transkripciju DNK šablona kako bi se formirala sekvenca RNA polimeraze [66]. Tako formirana mRNA šablona može biti zatvorena korištenjem enzima za zatvaranje vakcinije i donora metila. Proizvodnja mRNK je relativno visoka i na industrijskom nivou, teško je postići reproduktivnost [67].

Slika 6. Proces proizvodnje mRNA sekvence. (Kreirano sa BioRender.com pristupljeno 1. januara 2023.)

4. Kako funkcionišu mRNA vakcine?

mRNA je nestabilna negativno nabijena molekula koja je inkapsulirana u lipidnim nanočesticama. Kroz endocitozu, ove lipidne nanočestice ulaze u ćelije. Jednom kada uđu u citoplazmu, ovi endosomi se odmah usmjeravaju u lizozome radi razgradnje. Studije otkrivaju da lipidi koji se mogu jonizirati igraju važnu ulogu u bijegu endosoma i oslobađanju mRNA. Glavna grupa lipida se protonira unutar kiselog okruženja endosoma, a ovo kationsko stanje se naknadno vezuje za anjonsku glavu fosfolipida u endosomalnoj membrani. Hidrofobni rep kationskog lipida i fosfolipida se zatim proteže, narušavajući dvoslojnu fosfolipidnu strukturu i omogućavajući mRNA da pobjegne u citoplazmatski odjeljak. Ribosomi transformišu mRNA u proteine ​​kada se ona oslobodi. Ovaj protein može aktivirati imuni odgovor na dva načina: (1) Proteasom razgrađuje ove proteine ​​u peptide, koji se zatim predstavljaju kao antigen na površini ćelije pomoću MHC (glavni kompleks histokompatibilnosti) molekula klase I, koji se vezuju za TCR (T ćelijski receptor) da aktivira CD8+ T ćelije, koje ubijaju inficirane ćelije; sam protein može aktivirati imunološki odgovor na dva načina. (2) Ekstracelularno izlučeni proteini su zahvaćeni APC (ćelije koje predstavljaju antigen) i razgrađuju se u peptide koji su predstavljeni na površini ćelije od strane MHC klase II i prepoznati od strane CD4+ T ćelija, koje luče citokine da bi proizvele ćelijski odgovor i koaktiviraju B ćelije kako bi proizvele humoralni imuni odgovor, kao što je prikazano na slici 7. Nadalje, mRNA vakcine su isporučivale dvolančanu i jednolančanu RNK koja se veže za TLR (Toll-like receptor) u endosomu, što je rezultiralo stimulacija brojnih IFN-1 (interferon tipa I) stimuliranih gena, čime se aktiviraju antivirusni urođeni imuni odgovori.

Slika 7. Mehanizam putem kojeg mRNA vakcina izaziva imunitet na domaćina. (Kreirano sa BioRender.com pristupljeno 1. januara 2023.)

5. Aspekti formulacije vakcina zasnovanih na mRNA

Jednom kada se transkribovana mRNA ubrizgava, ona će eksprimirati proteine ​​unutar tijela. Uočen je imunološki odgovor zbog ekspresiranog proteina iz mRNA. Ovaj proces je pretežno osnova razvoja mRNA vakcine [68].

5.1. DNK šablon

Identifikacija antigena iz ciljnog patogena je najvažniji korak. Za razvoj imunizacije mRNA potrebno je dodavanje kodiranog antigena u DNK šablonu, što će pomoći u translaciji mRNA in vitro. Specifični antigen će biti proizveden in vivo transkripcijom transkribovane mRNA, koja će stići samo do citoplazme; ovo će pomoći u izazivanju imunološkog odgovora. Plazmidna DNK (pDNA) sadrži promotorsku sekvencu sa jakim afinitetom za DNK zavisnu RNK polimerazu, kao što je T7, SP6 ili T3, kao i odgovarajuću sekvencu za mRNA konstrukt. Enzim će proći duž šablona, ​​produžujući RNA transkript sve dok ne dođe do kraja šablona [69].

5.2. Capping Enzyme

Za efikasno prevođenje mRNK sa DNK šablona, ​​veoma je važno zatvaranje na 50 kraju mRNA. Nadalje, 50 cappping u zreloj mRNA je potrebno za zaštitu mRNA od degradacije, ekspresije gena i regrutacije ribosoma. 5 0 -50 -trifosfatni most povezuje 50 kapica eukariotske mRNA sa 7-metilgvanozinom (m7G) (m7GpppN). Nova tehnika ko-transkripcije koja je koristila komplet čiste kapice za precizno dodavanje prirodne strukture od 50 cap1 na početno mjesto tokom IVT reakcija učinila je stvaranje 50 capped mRNA pomoću T7 polimeraze uobičajenom metodom zatvaranja s dobrom translacijom i minimalnom reaktogenošću. U vakcinama COVID-19 BNT162b1 mRNA, 5 0 kapice su dodane metodom čistog poklopca [70]. Kapa analogno transkribovana mRNA ima poli 1 rep i 30 (poli-A) rep je prisutan na 30 krajeva eukariotske mRNA. Ovaj poli A rep obavlja funkcije transporta, translacije i stabilnosti mRNA. 30 poly A rep i 50 cap će stvoriti stabilnu strukturu zatvorene petlje sa eIF4F kompleksom za početak procesa prevođenja. Zbog svojih 120 nukleotida (nt) u repu od 30 poli(A), BioNTech mRNA vakcina ima superiornu stabilnost i efikasnost translacije [71].

5.3. Nukleotidni trifosfatni supstrati (NTP)

Kada se DNK plazmidi integrišu sa T7 polimerazom i nukleotid trifosfatima, mRNA se efikasnije prevodi i proizvodi više prinosa. Nakon primjene vakcine, postoji zabrinutost zbog imunogenosti. Nakon aktivacije nizvodne signalizacije, tijelo će prepoznati virusne RNK i odgovoriti na njih. Ovo prepoznavanje jednolančane i dvolančane RNK vrši endosomalni receptori kao što su Toll-like receptori (TLR3), TLR7 i TLR8. Dvolančanu i 50 -trifosfatom modificiranu RNK prepoznaje gen-I koji inducira retinoičnu kiselinu citosolnog receptora (RIG-1) i protein 5 povezan s diferencijacijom melanoma (MDA-5). Alergijske reakcije i anafilaktički šok zabilježeni su kada je imunološki sistem organizma bio aktiviran na nekontrolisan način. Ova prekomjerna stimulacija imunološkog sistema na molekularnom nivou će ograničiti translaciju proteina, ekspresiju antigena i efikasnost vakcine. Ovo ograničenje se može prevazići modifikacijama nukleobaze. N1-metil pseudouridin, modificirana nukleobaza, povećat će proizvodnju proteina i smanjiti aktivaciju TLR3. Modificirani nukleotidi putem RIG-1 ne samo da utiču na interakciju protein-RNA, već i smanjuju sposobnost mRNA da šire imunološke signale. Efikasnost translacije mRNA u protein je poboljšana zbog N1-metilpseudouridina. Brzo pokretanje translacije će koordinirano povećati poluživot mRNA [50].

cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem

Kliknite ovdje za pregled proizvoda Cistanche Enhance Immunity

【Zatražite više】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. Komponente lipidnih nanočestica za isporuku mRNA

U poređenju sa svim drugim vakcinama, mRNA vakcine se razvijaju relativno brzo i efikasnije su. Međutim, najveći izazov u proizvodnji mRNA vakcina je njihova slaba stabilnost. Stabilnost i kapacitet vakcine za liječenje infekcije COVID-19 su smanjeni jer se cjepivo nakon porođaja brzo razgrađuje ribonukleazama, stvarajući razbijene komponente koje se eliminiraju putem bubrega. Kako bi se riješio ovaj izazov, mRNA se može formulirati s lipidnim nanočesticama (LNP). mRNA-LNP vakcina će zaštititi mRNA od prerane degradacije i olakšati citoplazmatsku isporuku ćelijama koje predstavljaju antigen [72]. Lipidi su savršeni agensi za isporuku mRNA na citosolno mjesto, jer je njihova fuzija kompatibilna sa membranama lipidnih stanica; što dovodi do ciljanog i efikasnog oslobađanja mRNA. LNP su čestice nano veličine prečnika manjeg od jednog mikrona koje sadrže dva ili više lipida u različitim proporcijama. LNP se razlikuju od liposoma zbog prisustva lipidnih komponenti u jezgru kao diskontinuirane mješavine. LNP-ovi koji su podvrgnuti formulaciji imaju višelamelarnu vezikularnu strukturu, homogenu ljusku jezgre i nanostrukturirano jezgro [73]. Postoji prisustvo vode unutar jezgra LNP-a, što izlaže mRNA interakciji sa vodenim medijumom. Kao što je prikazano na slici 8, mRNA se nalazi unutar LNP-a, što ga štiti od vanjskog okruženja. Najčešći sastav, koji čini mRNA LNP sisteme su kationski/jonizujući lipid, fosfolipid ("pomoćni lipid"), holesterol i poli-etilen-glikol (PEG). Fizičko-hemijske karakteristike unutar LNP sistema za isporuku, kao što su efikasnost inkapsulacije, spoljašnji površinski naboj, veličina čestica i oblik mogu se lako modifikovati podešavanjem sastava lipida. Omjeri komponenti se prilagođavaju ovisno o željenom ciljnom tkivu [74].

Slika 8. Struktura lipidnih nanočestica korištenih za efikasnu isporuku mRNA. (Kreirano uz BioRender. com pristupljeno 1. januara 2023.)

5.4.1. Kationski lipidi

Sa aminskom grupom koja daje neto pozitivan naboj, hidrofobnim lancem i veznom grupom koja omogućava vezivanje hidrofilnog dijela na hidrofobni lanac, kationski lipidi pokazuju amfifilno svojstvo. Imaju trajno pozitivno naelektrisanje na svojoj polarnoj glavi, što pomaže u interakciji sa negativno nabijenim nukleinskim kiselinama, povećavajući efikasnost hvatanja. Endosomski izlazak iz LNP sistema i ćelijski unos je takođe povećan zbog neto pozitivnog naboja. Za primjenu mRNA istraženi su kationski lipidi, jonizabilni lipidi i drugi tipovi lipida. U poređenju sa nejonizujućim kationskim lipidima, jonizujući lipidi, koji su pozitivno nabijeni pri niskom pH, a pri fiziološkom pH ostaju neutralni, relativno su manje toksični zbog varijacija pH. Unutar ćelijske membrane nabijeni su pozitivno, au krvotoku posjeduju nenabijena svojstva. BNT162b2 vakcina sadrži kationski lipid ALC-0315 dok mRNA-1273 sadrži SM-102; pri niskom pH, oba lipida se protoniraju što će lako formirati kompleks sa mRNA. Struja mRNA u vodi se kombinuje sa mešavinom lipida u etanolu pomoću mikrofluidnog uređaja. Da bi se uhvatila negativno nabijena mRNA, komponente ova dva toka se brzo kombinuju i stvaraju nanočestice [75]. Za BNT162b2 vakcinu molarni omjeri kationskog lipida: PEG-lipida: holesterola: DSPC su (46,3:1,6:42,7:9,4) a za mRNA{18}} su (50:1,5:38,5:10). Nanočestice imaju prečnik od 80-100 nm i oko 100 mRNA molekula postoji za jednu lipidnu nanočesticu [73].

5.4.2. Polietilen glikol (PEG) Lipidi

Za stabilnost koloida i sprečavanje vezivanja proteina za nanočestice polietilen glikol se koriste lipidi. Daju dužu sistemsku cirkulaciju minimizirajući klirens nanočestica. LNP-ovi mogu uzrokovati fizičku agregaciju u otopini, što može povećati veličinu čestica LNP-a, a PEG lipidi mogu prevazići moguće čak i prerano oslobađanje inkapsulirane mRNA, problem. Štaviše, stabilnost skladištenja LNP-ova će takođe biti poboljšana [76].

5.4.3. Holesterol

Za transfekciju ćelija i stabilizaciju LNP holesterol ima vitalnu ulogu. Niža prelazna temperatura se postiže kada se sadržaj holesterola poveća u LNP, što će pomoći u oslobađanju mRNA iz LNP-a i njenoj translokaciji kroz endosomalnu membranu [77]. U studiji koju su sproveli Zhang i saradnici, modifikovani liposomi su formulisani korišćenjem kationskog peptida DP7 modifikovanog holesterolom zajedno sa Dioleoil-3- trimetilamonijum propanom (DOTAP) kao nosačem za isporuku mRNA. Liposomi su pripremljeni tehnikom hidratacije filma, a zatim procijenjeni na njihovu efikasnost transfekcije. In vitro, transfekcione studije su otkrile povećanje efikasnosti transfekcije sa povećanjem koncentracije DP7 peptida. Pored toga, in vivo, antitumorske studije su pokazale da kompleks ima bolju efikasnost protiv tumora [78].

5.4.4. Ostali pomoćni sastojci

mRNA vakcine se sastoje od stabilizatora npr. Trometamin, koji puferom održava pH 7-8, soli: pomaže u ravnoteži kiselosti u vašem tijelu, šećer koji pomaže molekulama da održe svoj oblik tijekom smrzavanja djelujući kao krioprotektant i održava dugoročnu stabilnost formulacije lipidnih nanočestica-mRNA [73]. Sažetak ključnih sastojaka koji se koriste u vakcinama zasnovanim na mRNA dat je u tabelama 2 i 3.

Tabela 2. Ključni sastojci koji se koriste u vakcinama zasnovanim na mRNA.

Tabela 3. Sastojci formulacije Pfizer i Moderna mRNA vakcina.

5.5. Drugi sistem isporuke za mRNA

5.5.1. Polimerne nanočestice

Polimerne nanočestice mogu se sintetizirati iz sintetičkih ili prirodnih polimera kao što su PLGA [poli (mliječna-ko-glikolna kiselina)], hitozan, PLA (polimliječna kiselina), polikaprolakton, želatin i poli-alkil-cijanoakrilati. Ove polimerne nanočestice mogu inkapsulirati hidrofobna i hidrofilna jedinjenja i proteine, dugi rok trajanja; i može modificirati isporuku terapijskih spojeva. RNK se može inkapsulirati u samosastavljene katjonske polimere sa hidrofobnom modifikacijom [80,81].

5.5.2. Kationske nano-emulzije

Kationske nano-emulzije su se dokazale kao efikasno sredstvo za isporuku nukleinskih kiselina. Kationski lipidi prisutni u nano-emulzijama važni su za komplekse sa nukleinskom kiselinom putem elektrostatičkih interakcija i poboljšavaju efikasnost transfekcije nukleinske kiseline i njenu stabilnost. Studije otkrivaju da sistem za isporuku mRNA kationskih nano-emulzija pojačava imuni odgovor regrutirajući imune ćelije i podstičući ćelijske odgovore na antitijela i T-primate u relativno niskim dozama [80,82].

5.5.3. Silic Nanoparticles

Nanočestice mezoporoznog silicijum dioksida sastoje se od amorfne matrice silicijum dioksida sa dobro raspoređenom poroznošću u mezoporoznom opsegu. Ove nanočestice imaju velike površine sa velikim volumenom pora i njihova površina se može lako modificirati određenim pozitivno nabijenim dijelovima kako bi se efikasno transportovala negativno nabijena RNK. Štaviše, ciljana isporuka RNK može biti moguća vezivanjem specifičnih liganada na površini [81]. Prema studiji koju su proveli Adam i saradnici, formulisana je nazalna vakcina na bazi modifikovanih poroznih silicijumskih mikročestica (mPSM) za COVID-19. Formulacija je dovela do povećanja broja pomoćnih T ćelija (Th1) i imunoloških odgovora, a mPSM je uzrokovao unos antigena nazalnim putem. Utvrđeno je da je virusno opterećenje značajno smanjeno [83].

5.5.4. Nanomaterijali ugljenika i zlata

Ugljične nanocijevi, nanočestice zlata, nanografen oksid i kvantne tačke su sintetizirane nanostrukture koje također imaju potencijal da isporuče RNK na ciljano mjesto i štite ga od degradacije [81].

6. Izazovi skladištenja vakcine

Zahtjevi za stabilnost i skladištenje su glavna briga za mRNA vakcine. Stabilnost zavisi od faktora kao što su ekscipijenti, pH i temperatura. Vakcina COVID-19 iz BioNTech/Pfizer-a treba da se čuva na -80 ◦C i ima rok trajanja do 6 meseci, dok vakcinu COVID-19 iz Moderne treba čuvati na -20 ◦C i ima isti rok trajanja. BioNTech/Pfizer vakcina zahteva pakovanje suvim ledom tokom transporta. Distribucija obje vakcine u siromašnim zemljama svijeta je izazovna, jer se mRNA vakcine moraju čuvati na ultra niskim temperaturama. Ovi zahtjevi su skupi i u regijama svijeta sa ograničenim resursima, aranžmani su teški. Jedan od problema je razvoj termostabilne mRNA vakcine koja je klinički efikasna i koja se može čuvati duže vreme bez velikih troškova skladištenja. Prema preporukama EMA za skladištenje, mRNA vakcine koje proizvode Moderna i BioNTech su stabilne kada su zamrznute do 6 mjeseci na -25 ◦C, do 30 dana na temperaturi u frižideru (4 ◦C) i do 6 sati na sobnoj temperaturi [ 84].

7. Sigurnost i efikasnost mRNA vakcina

7.1. Sigurnost vakcina zasnovanih na mRNA

Za mRNA vakcine je izvršena procjena ishoda vezanih za sigurnost. Otvorena ispitivanja mRNA-1273 u fazi eskalacije doze sprovedena su na učesnicima starosti između 18 i 70 godina ili više [85]. Studija je provedena u dvije grupe u kojima su učesnici od 18 do 55 godina primili dozu vakcine od 250 µg, a stariji ispitanici su dobili 25 µg ili 100 µg doze. Nakon vakcinacije uočeni su traženi lokalni i sistemski neželjeni događaji, neželjeni neželjeni događaji, ozbiljni neželjeni događaji i razvoj novih hroničnih zdravstvenih stanja. Rezultati su pokazali da nema razvoja ozbiljnih nuspojava. Najtipičnije prijavljene neželjene reakcije bile su glavobolje, umor, mijalgija, zimica i bol na mjestu injekcije. Pokazalo se da su nivoi neutralizirajućih antitijela u korelaciji sa odbranom od raznih virusa kod ljudi i sa odbranom od SARS-CoV-2 kod životinja. Vakcina mRNA{15}} kod starijih osoba proizvela je visoke nivoe vezujućih i neutralizirajućih antitijela, a trendovi zavisni od vremena i doze bili su slični odgovorima kod mlađih odraslih osoba. Odgovori nakon druge vakcinacije bili su uporedivi s onima uočenim kod pacijenata koji su se oporavili od COVID-19 i koji su donirali rekonvalescentni serum, uključujući neke koji su bili u kritičnom stanju. Stariji pacijenti koji su primali dozu od 100 µg pokazali su veći odgovor antitijela i T-ćelija u poređenju sa onima koji su primili 25 µg, a odgovor je bio identičan reakciji kod učesnika u dobi od 18 do 55 godina koji su primili dozu od 100 µg. Pacijenti stariji od 56 godina moraju primiti drugu dozu vakcine da bi postigli neutralizirajuća antitijela. Nakon primanja doze, titar antitijela se brzo povećava. Ključni sigurnosni rezultati Moderna i Pfizer vakcina uočeni tokom različitih kliničkih ispitivanja navedeni su u Tabeli 4.

Tabela 4. Studije sigurnosti i efikasnosti mRNA vakcina u kliničkim ispitivanjima

Tabela 4. Nast.

Nakon druge doze vakcine, događaji lokalne i sistemske reaktogenosti su se povećali u učestalosti i prvenstveno su bili umjerene težine. Incidencija eritema je utvrđena kod tri učesnika i trajala je 5 do 7 dana. Zatraženi sistemski neželjeni događaji kao što su groznica i umor javili su se izrazito u starijoj podgrupi. Svi ovi nalazi upućuju na to da su neželjeni događaji traženi ili neželjeni bili blagi do umjereno teški. Stoga je mRNA-1273 dodatno testirana za faze 2/3 ispitivanja kako bi se procijenila sigurnost i efikasnost u većim populacijama [95]. Faza 3 kliničkog ispitivanja je bila randomizirana, stratificirana, zaslijepljena posmatračima i placebom kontrolirana studija, koja je uključivala 30.420 dobrovoljaca u dobi od 18 godina ili starijih, nasumično raspoređenih da prime vakcinu (0,5 mL sa 100 µg doza) ili placebo. Lokalne reakcije tokom 7 dana nakon imunizacije, sistemske nuspojave, neočekivane nuspojave nakon 28 dana primjene doze i svi značajni neželjeni događaji su praćeni radi procjene sigurnosti. Zatraženi neželjeni efekti su bili dominantni u mRNA- 1273 u poređenju sa placebo grupom (84,2%, naspram 19,8%). Neki od najzapaženijih događaja bili su bol na mjestu injekcije nakon vakcinacije, eritem, osjetljivost i induracija. Ovi događaji su nestali u roku od 4-5 dana nakon vakcinacije. Nakon druge doze, mRNA-1273 grupa je tražila sistemske događaje koji su postali ozbiljniji. Prisustvo reakcija preosetljivosti bilo je kod 1,5% i 1,1% učesnika u grupi vakcinisanih i placebo grupa. Osim ovih pritužbi, nakon primjene vakcine nije bilo zabrinutosti za sigurnost [106].

Treća doza vakcine bila je potrebna zbog slabljenja zaštite nakon dvije injekcije mRNA SARS CoV-2 i uvođenja varijacija. Nakon davanja treće doze mRNA vakcine ljudima koji su prethodno primili primarnu seriju mRNA-1273 u fazi 1 studije, procijenjena je njihova rana sigurnost i imunogenost. Studija poprečnog presjeka obavljena u Napulju (Italija) procijenila je spremnost za uzimanje vakcine za pojačavanje COVID-19 vakcine. U ovoj grupi, prihvatanje dodatne doze bilo je skoro 86%. Nadalje, starije osobe boljeg zdravlja nakon glavne serije vakcina, oni koji žive sa prijateljima ili članovima porodice koji su bili pozitivni na COVID-19, i oni koji su dobili informacije o bolestima od zvaničnih javnih institucija bili su voljni da dobiju dopunu doza [107].

Bivalentna vakcinacija je sadržavala 25 mcg svake mRNA-1273 i mRNA-1273.351, dok su formulacije dopunske vakcine sadržavale 100 mcg mRNA-1273 i 50 mcg mRNA-1273 .351, koji kodira beta varijantu spike proteina. Treća doza mRNA vakcine pokazala je adekvatnu reaktogenost i sigurnost. U poređenju sa vršnim odgovorima nakon druge doze, vakcinacijom izazvana povećanja titara vezanih i neutralizirajućih antitijela na D614G, Beta i Delta varijante bila su slična ili veća. Uočeno je da su neutralizirajuća i vezujuća antitijela konstantno smanjena. Međutim, otkrivanje antitijela je bilo 10-11 mjeseci (prije treće doze) kod učesnika bez obzira na dob i početnu primarnu seriju doze (npr. 25, 50, 100 i 250 µg). Bol na mjestu injekcije, umor, mijalgija i drhtavica bili su najčešće prijavljeni neželjeni efekti nakon treće doze mRNA vakcine, a učestalost ovih događaja bila je uporediva među tri režima dopunske vakcine (monovalentni prototip, monovalentna varijanta i bivalentne grupe ). Uz upotrebu monovalentnih ili bivalentnih Beta varijanti vakcina, nije uočena nikakva specifična prednost ili nedostatak u ćelijskim odgovorima na epitope unutar peptida mutiranih beta. Svi ovi nalazi podržavaju trenutnu sugestiju da se monovalentni prototip mRNA-1273 pojačava koristi za pružanje opsežne imunološke unakrsne zaštite između varijanti [95]. Prema anketi, primjena heterolognog BNT162b2 (BNT) kod učesnika koji su primali ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT) pokazala je neinferiornu imunogenost u odnosu na homolognu primjenu BNT (i primarna i dopunska su bile BNT vakcine, BNT/BNT), sa podnošljivom reaktogenošću i veći odgovori T ćelija. U poređenju sa homolognom ChA dOX1 vakcinacijom (ChAd/ChAd), heterologna ChAd/BNT vakcinacija je izazvala jaču imunogenost (ChAd/BNT vs. ChAd/ChAd, odnos titra antitela: 9,2) [108].

Ispitivanje faze 1 za BNT162b2 sprovedeno je na 76 učesnika; oni su randomizirani da primaju doze vakcine od 10 µg, 30 µg i 100 µg, a drugoj grupi je dat placebo. 58,3% ispitanika koji su primali 10 µg i 100% od 30 µg i 100 µg iskusilo je traženi lokalni reakcijski bol na mjestu injekcije nakon prve doze. Ozbiljnost svih lokalnih reakcija bila je blaga do umjerena. Umor i glavobolja kod BNT162b2 bili su uobičajeni sistemski događaji. Osim toga, primijećeni su i drhtavica, bolovi u mišićima i zglobovima. Kod povećanja doze, sistemski događaji su više prijavljeni nakon druge doze. Ukupno 50,0 posto učesnika koji su primili 10 ili 30 g BNT162b1, 58,3 posto osoba koje su primile 100 g BNT162b1 i 11,1 posto primatelja placeba prijavilo je neželjene događaje. Nisu prijavljeni ozbiljni neželjeni događaji [109].

U kliničkom ispitivanju vakcine Pfizer/BioNTech (BNT162b2) koja je bila multinacionalna, placebo kontrolisana, nasumična studija efikasnosti, randomizirana i ključna, nasumično je raspoređeno 43.548 učesnika u dobi od 16 godina ili više. Ukupno 21.720 dobrovoljaca je dobilo 30 µg po dozi BNT162b2 i 21.728 sa placebom. Da bi se odredio sigurnosni profil BNT162b2, procijenjene su karakteristike kao što je bol na mjestu injekcije, koji je kratkotrajan, blag do umjeren u slučaju ozbiljnosti, umor i glavobolja. Svim učesnicima su date dvije injekcije BNT162b2 ili placeba, prema randomizaciji u razmaku od 21 dan, u deltoidni mišić [98]. Lokalne reakcije kod onih koji su primili BNT162b2 vakcinu prijavljene su više u poređenju sa placebo grupom. Blaga do umjerena bol na mjestu injekcije bila je najčešća pritužba registrovana među primaocima BNT162b2 unutar jedne sedmice. Jaka bol je prijavljena kod manje od 1% populacije. Bol je uočen manje kod starijih učesnika u odnosu na mlađe. Crvenilo ili otok je manje uočen. Nakon primjene druge doze, lokalne reakcije su manje prijavljene [110].

Mlađi učesnici koji su primili vakcinu susreli su se sa više sistemskih događaja nego stariji primaoci. Umor i glavobolja (59% i 52%) bili su najčešće prijavljeni događaji, a vrlo manje vakcinisane osobe (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. Efikasnost mRNA vakcina

Za procjenu efikasnosti mRNA-1273, primarni cilj vakcine bio je efikasnost u sprječavanju simptomatske COVID-19 infekcije nakon 14 dana od druge doze vakcine. Kao sekundarna krajnja tačka korištena je prevencija teške COVID-19 infekcije s upornim simptomima. Rezultati nakon vakcinacije pokazuju da je bilo 11 slučajeva COVID-19 u vakcinisanoj grupi i 185 slučajeva u placebo grupi, što ukazuje na efikasnost mRNA-1273 vakcine od 94,1% za liječenje simptomatskog COVID-19 . Za sekundarne krajnje tačke efikasnosti izvršena je procjena prevencije teškog COVID-19. Rezultati su pokazali 100% efikasnost vakcine jer je 30 učesnika sa virusnom infekcijom bilo u placebo grupi. Studija sprovedena u Kataru pokazala je efikasnost vakcine (VE) mRNA-1273 95.7% protiv teške, kritične ili fatalne infekcije COVID-19. Nakon više od ili jednako 14 dana prve doze, efikasnost je bila 88,1% u odnosu na B.1.1.7 (alfa) varijantu i 100% nakon druge doze. 61,3% i 96,4% VE prijavljeno je nakon prve i druge doze imunizacije protiv B.1.351 (beta) soja. Stoga je vakcina prilično uspješna i protiv soja, bilo simptomatskog ili asimptomatskog, i protiv bilo koje COVID{31}} hospitalizacije i smrti, čak i nakon jedne doze [112].

Efikasnost BNT162b2 vakcine (VE) protiv potvrđenog COVID-19 koji je počeo najmanje 7 dana nakon druge doze kod osoba koje nisu imale virološki ili serološki dokaz infekcije SARS-CoV-2 bila je prva primarna krajnja tačka. Druga primarna krajnja tačka mjerila je efikasnost kod učesnika sa i bez dokaza o prethodnoj infekciji i prevenciji teške COVID-19 infekcije. U istraživanju sa ukupno 36.523 osobe, 8 slučajeva COVID-19 s početkom 7 dana nakon druge doze dogodilo se u grupi koja je vakcinisana, u poređenju sa 162 slučaja u grupi koja je primala placebo. Ovo pokazuje 95% efikasnosti vakcine. Međutim, uočeni VE protiv virusne bolesti bio je 52% između prve i druge doze, a bio je 91% u prvih 7 dana nakon doze 2, postižući potpunu efikasnost protiv bolesti s početkom najmanje 7 dana nakon doze 2. Samo 1 od 10 teških slučajeva COVID-19 koji su zabilježeni nakon prve doze dogodio se u grupi koja je primila vakcinu. Ovo zapažanje je u skladu sa odličnom ukupnom efikasnošću protiv svih pacijenata sa COVID-19. Dva slučaja infekcije zabilježena su kod pacijenata koji su primili cjepivo među pacijentima s hipertenzijom i 44 slučaja u placebo grupi. Ovaj slučaj pokazuje 94,6% efikasnosti vakcine kod pacijenata sa hipertenzijom. Tako BNT162b2 vakcina ispunjava i primarne i sekundarne krajnje tačke efikasnosti kod vakcinisanih učesnika [113]. Osim SARS-CoV-2 infekcije, sa jednom dozom vakcine BNT162b2, predviđena efikasnost vakcinacije protiv simptomatske bolesti sa delta varijantom (B.1.617.2) iznosila je oko 36%. Nakon dvije doze, VE je bio oko 88 posto [114].

cistanche biljka koja povećava imuni sistem

8. Regulatorni izazovi

Regulatorna nauka je osnova na kojoj se donose regulatorne odluke. Njegov primarni cilj je razvoj novih metoda, alata i standarda za procjenu sigurnosti, efikasnosti, kvaliteta i performansi reguliranih proizvoda u svim fazama njihovog životnog ciklusa [115]. mRNA cjepiva se suočavaju s istim vrstama regulatornih prepreka kao i svaka druga vrsta cjepiva, uključujući potrebu za pokazivanjem dokaza o sigurnosti i djelotvornosti u pretkliničkim studijama, kliničkim ispitivanjima i postmarketinškom nadzoru, kao i održavanje visokog standarda za sirovine koje se koriste u proizvodnji i konzistentnost proizvodnje. Testiranje vakcine se u velikoj meri oslanja na pouzdanost i reproduktivnost enzima, nukleotida i linearnih DNK šablona [116]. Sirove komponente, kao što su lipidi, treba strogo regulisati i dokazati njihovu čistoću. Trenutne dobre proizvodne prakse (cGMP) treba slijediti prilikom kreiranja linearnog DNK šablona. Da bi se osiguralo da je ljekovita supstanca najvišeg kvaliteta, bitno je paziti na postotak zatvorene i poliadenilirane mRNA, broj kratkih transkripata i prisustvo dvolančane RNK. Poliadenilacija i zatvaranje 50 kraja mRNK osiguravaju stabilnost i efikasnu translaciju [21]. Efikasnost translacije je usko povezana sa poli (A) repom [114]. Kvantifikacija količine mRNA inkapsulirane u čestici i određivanje distribucije čestica je kritično za proizvod lijeka jer omogućava proizvođaču da osigura uniformnost proizvodnje. Praćenje se obično vrši na brojnim karakteristikama, uključujući one koje se odnose na stabilnost, identitet i sterilnost. Jedno od pitanja za proizvođače vakcina, regulatore i korisnike je termička stabilnost mRNA vakcina [115]. Konvencionalne vakcinacije se podvrgavaju testiranju na stres, uključujući produženo izlaganje povišenim temperaturama, kako bi se utvrdila njihova stabilnost u različitim okolnostima skladištenja. Ovo se mora provesti i za mRNA vakcine, gdje je potrebno procijeniti ne samo stabilnost molekula mRNA već i očuvanje strukture same čestice vakcine. Protokoli za ispitivanje integriteta pojedinačnih komponenti mRNA u višekomponentnim mRNA vakcinama još uvijek trebaju razvoj. Identifikacija vakcine nukleinske kiseline određena je njenom sekvencom. Općenito, sekvenca prvog DNK plazmida korištenog kao šablona je dovoljna za vakcinaciju mRNA. To je zato što se DNK trenutno prevodi u RNK. Nije poznato da sekvencioniranje mRNA, bilo direktno ili pretvaranjem u cDNK, a zatim sekvenciranje te DNK, daje dodatne informacije. Iako su stope greške RNA polimeraza znatno veće od onih kod DNK polimeraza, navedene stope greške od 1 greške na svakih 104–105 nukleotida bilo bi teško otkriti u RNK zbog nasumične prirode grešaka. Na osnovu trenutnih istraživanja koja sugeriraju da mRNA vakcine pružaju zaštitni imunitet na životinjskim modelima, čini se da ova stopa grešaka ne mijenja formiranje imunogenog antigena. Kvantifikacija lipida može se provesti pomoću LC-MS/MS [116]. Ako se protein prebrzo prevede, možda se neće pravilno sklopiti u funkcionalni antigen, što može imati neželjenu posljedicu smanjenja efikasnosti vakcine.

9. Diskusija

2021. mRNA vakcine su privukle pažnju zbog svoje kritične pozicije u reakciji farmaceutske industrije na COVID-19. Za razliku od tradicionalnih virusnih vakcina, koje koriste oslabljene kopije virusa koji se ne repliciraju za prikaz antigena i izazivanje imunološkog odgovora, strategija mRNA koristi optimizirane jednolančane mRNA molekule koje mogu osigurati biološku indukciju. Kada dobijete vakcinu, ćelije će je primiti, 'pročitati' sekvencu mRNA i proizvesti šik protein. Pošto vašem telu nedostaju proteini koji podsećaju na taj šiljak, vaš imunološki sistem to tumači kao štetne i pokreće napad na njega. Osim toga, ako se kasnije zarazite koronavirusom, imunološki sistem pamti spike protein i čak ga prepoznaje. Izvanredan tempo kojim su prve dvije vakcine protiv COVID-19 razvijene i javno dostupne u SAD-u podržava ideju da su mRNA vakcine iz Pfizera i Moderne dobile odobrenje FDA za hitne slučajeve u decembru 2020-manje od godinu dana nakon što su kineski naučnici objavili genski sastav koronavirusa. Najveća prednost tehnologija vakcina zasnovanih na mRNA je njihov potencijal da se brzo modifikuju za različite bolesti jer se obrada ciljnog antigena 'prebacuje' ćelijama domaćinima, što znači da se samo genetski kod antigena koristi za dizajniranje vakcine. kandidat. Vrijeme između kineske vlade koja je razmijenila njihovu genetsku strukturu SARS-CoV-2 i Moderne koja je transportovala svog kandidata za vakcinu u Nacionalni institut za zdravlje (NIH) u Sjedinjenim Državama za prvu fazu studija bilo je samo 44 dana. Vakcine mRNA vakcine nisu istorijski dobile odobrenje za upotrebu u čovječanstvu zbog uočenog nedostatka kliničkih ispitivanja za ovu metodu, kao i tehničkih izazova vezanih za stabilnost i distribuciju proizvoda. S takvim porastom mRNA vakcina na tržištu, mogući su precizniji savjeti koji će pomoći u razvoju i procjeni novih mRNA vakcina. Kontrola je još jedna oblast u kojoj je nauka o mRNA vakcinama u povojima. Trenutno ne postoje službene smjernice američke Uprave za hranu i lijekove ili Europske agencije za lijekove za mRNA vakcine, iako su lijekovi dovoljno sigurni za velika klinička ispitivanja.

10. Završne napomene i budući izgledi

Prije 2020. mRNA nije bila dobro poznat naučni termin u svijetu vakcina. Više od godinu dana otkako je počela katastrofalna globalna pandemija COVID-19, klinički programi zasnovani na mRNA zabilježili su značajan porast podrške, kako od strane šire javnosti, tako i od strane velikih farmaceutskih kompanija. Više od 80 miliona Amerikanaca vakcinisano je protiv SARS CoV-2-virusa koji uzrokuje COVID-19, koristeći mogućnosti mRNA tehnologije koje mijenjaju igru. "Polje vakcina je zauvijek transformirano i zauvijek napredovano zbog COVID-19", kaže Dan Barouch, MD, Ph.D., direktor Centra za virusologiju i istraživanje vakcina na Harvard Medical School. Uglavnom u situaciji s vakcinom COVID-19, mRNA lanac je dizajniran da proizvodi jedinstveni "protein šiljaka" koronavirusa, koji proizvodi imuni odgovor koji bi mogao zaštititi od infekcije stvarnim virusom. Vakcine koje su razvili Moderna i Pfizer/BioNTech bile su jedine vakcine zasnovane na mRNA koje su dobile hitno odobrenje od ključnih regulatora, a dokazi iz stvarnog svijeta iz globalnog lansiranja COVID-19 bili bi kritični za potvrđivanje njihove dugoročne djelotvornosti i sigurnosne značajke protiv koronavirusa i nekih drugih virusnih agenasa. Isporuka mRNA zasnovana na egzozomima također će biti budućnost terapeutika zasnovanih na mRNA [117,118]. Uglavnom s obzirom na to da implikacije tehnologije zasnovane na mRNA postaju očigledne kako ove vakcine prve generacije počinju da se primjenjuju na globalnoj razini, trenutno postoji procvat kliničkih istraživanja mRNA za zarazne bolesti, a industrijski istraživači predviđaju povećanje interesa za mRNA platforme za druga terapeutska polja. , posebno onkologiju, ali čak i neuobičajena autoimuna stanja i neurodnih gena.

Reference

1. WHO. WHO Coronavirus (COVID-19) Kontrolna tabla 2023. Dostupno na mreži: https://covid19.who.int/ (pristupljeno 17. januara 2023.).

2. Pal, R.; Yadav, U. COVID-19 Pandemija u Indiji: sadašnji scenario i strm uspon pred nama. J. Prim. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. Keni, R.; Alexander, A.; Nayak, PG; Mudgal, J.; Nandakumar, K. COVID-19: Pojava, širenje, mogući tretmani i globalno opterećenje. Front. Javno zdravlje 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. Chavda, VP; Ping, F.-F.; Chen, Z.-S. Utjecaj COVID-19 na njegu raka: ažuriranje. Vakcine 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. Harapan, H.; Itoh, N.; Yufika, A.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; Megawati, D.; Hayati, Z.; Wagner, AL; Mudatsir, M. Coronavirus Disease 2019 (COVID-19): Pregled literature. J. Infect. Javno zdravlje 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. Chavda, VP; Chhabria, MT; Apostolopoulos, V. Starija populacija i imunokompromitovani pacijenti: Utjecaj na SARS-CoV-2 varijante i ishodi liječenja. Biologika 2022, 2, 165–170. [CrossRef]

7. Chavda, VP; Redwan, EM SARS-CoV-2: Imunopeptidomika i druge imunološke studije. Vakcine 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. Kyriakidis, NC; López-Cortés, A.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO SARS-CoV-2 Strategije vakcina: Sveobuhvatan pregled kandidata za fazu 3. Npj Vaccines 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; Voleti, N.; Groff, D.; Sun, A.; Ba, DM; Nunez, J.; Roditelj, LJ; Chinchilli, VM; Paules, CI SARS CoV-2 Efikasnost vakcine protiv infekcije, simptomatske i teške bolesti COVID-19: Sistematski pregled i meta-analiza. BMC Infect. Dis. 2022, 22, 439. [CrossRef]

10. Chavda, VP; Vora, LK; Vihol, DR COVAX-19® vakcina: potpuno blokira prenošenje virusa na neimune pojedince. Clin. Complement Med. Pharmacol. 2021, 1, 100004. [CrossRef]

11. Chavda, VP; Vora, LK; Pandya, AK; Patravale, VB Intranazalne vakcine za SARS-CoV-2: od izazova do potencijala u upravljanju COVID-19. Drug Discov. Danas 2021, 26, 2619–2636. [CrossRef]

12. Kaur, SP; Gupta, V. Vakcina protiv COVID-19: Sveobuhvatni izvještaj o stanju. Virus Res. 2020, 288, 198114. [CrossRef]

13. Vasireddy, D.; Atluri, P.; Malayala, SV; Vanaparthy, R.; Mohan, G. Pregled vakcina protiv COVID-19 odobrenih u Sjedinjenim Američkim Državama za upotrebu u hitnim slučajevima. J. Clin. Med. Res. 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; Shao, W.; Chen, X.; Zhang, B.; Wang, G.; Zhang, W. Real-World Effectiveness of COVID-19 Vaccines: A Literature Review and Meta-Analysis. Int. J. Infect. Dis. 2022, 114, 252–260. [CrossRef]

15. Alagoz, O.; Sethi, AK; Patterson, BW; Čurpek, M.; Alhanaee, G.; Scaria, E.; Safdar, N. Utjecaj vakcinacije na kontrolu tereta COVID-19 u Sjedinjenim Državama: Pristup simulacijskom modeliranju. PLOS ONE 2021, 16, e0254456. [CrossRef]

16. Cromer, D.; Stein, M.; Reynaldi, A.; Schlub, TE; Wheatley, AK; Juno, JA; Kent, SJ; Triccas, JA; Khoury, DS; Davenport, MP Titri neutralizirajućih antitijela kao prediktori zaštite od varijanti SARS-CoV-2 i utjecaj pojačanja: meta-analiza. Lancet Microbe 2022, 3, e52–e61. [CrossRef]

17. Zhao, J.; Zhao, S.; Ou, J.; Zhang, J.; Lan, W.; Guan, W.; Wu, X.; Yan, Y.; Zhao, W.; Wu, J.; et al. COVID-19: Ažuriranja razvoja vakcine protiv koronavirusa. Front. Immunol. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; Beiss, V.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID{1}} Lideri vakcina i njihov dizajn nanotehnologije. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. Jain, S.; Venkataraman, A.; Wechsler, ME; Peppas, NA Messenger Vakcine zasnovane na RNA: prošlost, sadašnjost i budućnost u kontekstu pandemije COVID-19. Adv. Drug Deliv. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. Arashkia, A.; Jalilvand, S.; Mohajel, N.; Afchangi, A.; Azadmanesh, K.; Salehi-Vaziri, M.; Fazlalipour, M.; Pouriayevali, MH; Jalali, T.; Mousavi Nasab, SD; et al. Teški akutni respiratorni sindrom-koronavirus-2 Spike (S) kandidati za vakcinu na bazi proteina: stanje umjetnosti i budući izgledi. Rev. Med. Virol. 2021, 31, e2183. [CrossRef]

21. Park, JW; Lagniton, PNP; Liu, Y.; Xu, RH MRNA vakcine za COVID-19: šta, zašto i kako. Int. J. Biol. Sci. 2021, 17, 1446. [CrossRef]

22. Zhu, N.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, X.; Yang, B.; Song, J.; Zhao, X.; Huang, B.; Shi, W.; Lu, R.; et al. Novi koronavirus kod pacijenata sa upalom pluća u Kini, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. Wang, MY; Zhao, R.; Gao, LJ; Gao, XF; Wang, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: Struktura, biologija i razvoj terapije zasnovan na strukturi. Front. Cell. Zaraziti. Microbiol. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. Chavda, VP; Hossain, MK; Beladija, J.; Apostolopoulos, V. Vakcine nukleinske kiseline za COVID-19: Promjena paradigme u areni razvoja vakcina. Biologics 2021, 1, 337–356. [CrossRef]

25. Chavda, VP; Pandya, R.; Apostolopoulos, V. DNK vakcine za SARS-CoV-2: ka eri vakcinacije treće generacije. Expert Rev. Vaccines 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. Yang, H.; Rao, Z. Strukturna biologija SARS-CoV-2 i implikacije na terapijski razvoj. Nat. Rev. Microbiol. 2021, 19, 685–700. [CrossRef]

27. Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK; Kumar, S.; Nyodu, R.; Maurya, VK; Saxena, SK Imuni odgovor domaćina i imunobiologija ljudske SARS-CoV-2 infekcije. Coronavirus Dis. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [CrossRef]

28. Asturias, EJ; Duclos, P.; MacDonald, NE; Nohynek, H.; Lambert, PH Napredno vakcinološko obrazovanje: Uređenje okoliša, njegov rast i globalni otisak. Vakcina 2020, 38, 4664–4670. [CrossRef]

30. Kardani, K.; Bolhassani, A.; Shahbazi, S. Prime-Boost vakcinalna strategija protiv virusnih infekcija: mehanizmi i prednosti. Vaccine 2016, 34, 413–423. [CrossRef]

30. Chen, JM Treba li svijet hitno sarađivati ​​na razvoju zanemarenih živih atenuiranih vakcina za COVID-19? J. Med. Virol. 2022, 94, 82–87. [CrossRef]

31. Chavda, VP; Vihol, DR; Solanki, HK; Apostolopoulos, V. Svijet vakcina COVID-19: doprinos Indije. Vakcine 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. Ashraf, MU; Kim, Y.; Kumar, S.; Seo, D.; Ashraf, M.; Bae, YS COVID-19 vakcine (ponovno) i oralno-mukozni vektorski sistem kao potencijalna vakcinalna platforma. Vakcine 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. Lesser, K.; Whittaker, GR Vakcinacija protiv COVID-19: mjerila u javnom zdravlju i prijenosu virusa. Javno zdravlje 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. Da li je strategija doza doza dovoljna za omikronsku varijantu SARS-CoV-2? Vakcine 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Athalye, M.; Parikh, PK; Chhipa, AS; Patel, S.; Apostolopoulos, V. Repliciranje virusnih vektorskih vakcina za COVID-19: Potencijalna avenija u areni za vakcinaciju. Virusi 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. Chavda, VP; Apostolopoulos, V. COVID{1}} Dizajn vakcine i strategija vakcinacije za nove varijante. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

37. Chavda, VP; Vuppu, S.; Mishra, T.; Kamaraj, S.; Patel, AB; Sharma, N.; Chen, Z.-S. Nedavni pregled upravljanja COVID-19: dijagnoza, liječenje i vakcinacija. Pharmacol. Rep. 2022, 74, 1120–1148. [CrossRef]

38. Chavda, VP; Chen, Y.; Dave, J.; Chen, Z.-S.; Chauhan, SC; Yallapu, MM; Uversky, VN; Bezbaruah, R.; Patel, S.; Apostolopoulos, V. COVID-19 i vakcinacija: mitovi protiv nauke. Expert Rev. Vaccines 2022, 21, 1603–1620. [CrossRef]

39. Chavda, VP; Bezbaruah, R.; Deka, K.; Nongrang, L.; Kalita, T. Delta i Omicron varijante SARS-CoV-2: Šta znamo do sada. Vakcine 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. Fioretti, D.; Iurescia, S.; Fazio, VM; Rinaldi, M. DNK vakcine: razvoj novih strategija protiv raka. J. Biomed. Biotechnol. 2010, 2010, 174378. [CrossRef]

41. Zhao, Z.; Deng, Y.; Niu, P.; Song, J.; Wang, W.; Du, Y.; Huang, B.; Wang, W.; Zhang, L.; Zhao, P.; et al. Ko-imunizacija sa CHIKV VLP i DNK vakcinama izaziva obećavajući humoralni odgovor kod miševa. Front. Immunol. 2021, 12, 925. [CrossRef]

42. Kalams, SA; Parker, SD; Elizaga, M.; Metch, B.; Edupuganti, S.; Hural, J.; De Rosa, S.; Carter, DK; Rybczyk, K.; Frank, I. Sigurnost i komparativna imunogenost HIV-1 DNK vakcine u kombinaciji sa plazmidom interleukinom 12 i utjecaj intramuskularne elektroporacije za isporuku. J. Infect. Dis. 2013, 208, 818–829. [CrossRef]

43. Bezbaruah, R.; Chavda, VP; Nongrang, L.; Alom, S.; Deka, K.; Kalita, T.; Ali, F.; Bhattacharjee, B.; Vora, L. Sistemi za isporuku vakcina zasnovani na nanočesticama. Vakcine 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. Karam, M.; Daoud, G. MRNA vakcine: prošlost, sadašnjost, budućnost. Azijski J. Pharm. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. Zapetljana istorija MRNA vakcina. Nature 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; Obst, R.; Rammensee, HG; Jung, G. undefined In vivo primjena RNK dovodi do indukcije specifičnih citotoksičnih T limfocita i antitijela. EUR. J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [CrossRef]

47. Kose, N.; Fox, JM; Sapparapu, G.; Lombardi, R.; Tennekoon, RN; Dharshan De Silva, A.; Elbashir, SM; Theisen, MA; Humphris-Narayanan, E.; Ciaramella, G.; et al. Lipid-inkapsulirana MRNA koja kodira snažno neutralizirajuće ljudsko monoklonsko antitijelo štiti od infekcije Chikungunya. Sci. Immunol. 2019, 4, eaaw6647. [CrossRef]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Türeci, Ö. Terapeutika zasnovana na MRNA-razvijanje nove klase lijekova. Nat. Rev. Drug Discov. 2014, 13, 759–780. [CrossRef]

49. Moss, P. Imuni odgovor T ćelija protiv SARS-CoV-2. Nat. Immunol. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. Nance, KD; Meier, JL Modifikacije u hitnim slučajevima: Uloga N1-metilpseudouridina u vakcinama protiv COVID-19. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [CrossRef]

51. Kremsner, PG; Ahuad Guerrero, RA; Arana-Arri, E.; Aroca Martinez, GJ; Bonten, M.; Chandler, R.; Corral, G.; De Block, EJL; Ecker, L.; Gabor, JJ; et al. Efikasnost i sigurnost CVnCoV SARS-CoV-2 MRNA vakcine kandidata u deset zemalja Evrope i Latinske Amerike (HERALD): randomizirano, zaslijepljeno posmatračem, placebo kontrolisano ispitivanje, faza 2b/3. Lancet Infect. Dis. 2022, 22, 329–340. [CrossRef]

53. Blakney, AK; Ip, S.; Geall, AJ Ažuriranje o razvoju vakcine za samo-amplifikaciju MRNA. Vakcine 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. Nove nade u tehnologiji vakcina: mRNA vakcine. Microbiol. Bul. 2021, 55, 265–284. [CrossRef]

54. Jackson, NAC; Kester, KE; Casimiro, D.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. Obećanje MRNA vakcina: Biotehnološka i industrijska perspektiva. Npj vakcine 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. Bloom, K.; van den Berg, F.; Arbuthnot, P. Samopojačavajuće RNA vakcine za zarazne bolesti. Gene. Ther. 2021, 28, 117–129. [CrossRef]

56. Kon, E.; Elia, U.; Peer, D. Principi za dizajniranje optimalne MRNA lipidne nanočestične vakcine. Curr. Opin. Biotechnol. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. Li, Y.; Teague, B.; Zhang, Y.; Su, Z.; Porter, E.; Dobosh, B.; Wagner, T.; Irvine, DJ; Weiss, R. In vitro evolucija poboljšanih RNA replikona za imunoterapiju. Sci. Rep. 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; Lacroix, C.; Exposito, JY; Verrier, B. Prilagođavanje MRNA vakcine za balansiranje urođenog/prilagodljivog imunološkog odgovora. Trendovi Mol. Med. 2020, 26, 311–323. [CrossRef]

59. Sample, PJ; Wang, B.; Reid, DW; Presnyak, V.; McFadyen, IJ; Morris, DR; Seelig, G. Human 50 UTR Design and Variant Effect Prediction from a Massively Parallel Translation Assay. Nat. Biotechnol. 2019, 37, 803–809. [CrossRef]

60. Kumar, P.; Sweeney, TR; Skabkin, MA; Skabkina, OV; Hellen, CU; Pestova, TV Inhibicija prevođenja od strane članova porodice IFIT-a određena je njihovom sposobnošću da selektivno komuniciraju sa 50 -terminalnim regijama Cap0-, Cap1- i 50 Ppp-MRNA. Nukleinske kiseline Res. 2014, 42, 3228–3245. [CrossRef]

61. Strenkowska, M.; Grzela, R.; Majewski, M.; Wnek, K.; Kowalska, J.; Lukaszewicz, M.; Zuberek, J.; Darzynkiewicz, E.; Kuhn, AN; Sahin, U.; et al. Analogi poklopca modificirani 1,2-Ditiodifosfatnim dijelom štite MRNA od dekapiranja i povećavaju njen translacioni potencijal. Nukleinske kiseline Res. 2016, 44, 9578–9590. [CrossRef]

63. Rydzik, AM; Warminski, M.; Sikorski, PJ; Baranowski, MR; Walczak, S.; Kowalska, J.; Zuberek, J.; Lukaszewicz, M.; Nowak, E.; Claridge, TDW; et al. Analogi kape MRNA zamijenjeni u tetrafosfatnom lancu sa CX2: Identifikacija O-to-CCl2 kao prve modifikacije za premošćivanje koja daje otpornost na uklanjanje kapaka bez narušavanja translacije. Nukleinske kiseline Res. 2017, 45, 8661–8675. [CrossRef] [PubMed]

63. Nicholson, AL; Pasquinelli, AE Tales of Detailed Poly (A) Tails. Trends Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. The Organizing Principles of Eukaryotic Ribosome Recruitment. Annu. Rev. Chem. 2019, 88, 307–335. [CrossRef]

65. Pascolo, S. The Messenger's Great Message for Vaccination. Expert Rev. Vaccines 2014, 14, 153–156. [CrossRef]

67. Rosa, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC MRNA Vakcine Proizvodnja: Izazovi i uska grla. Vakcina 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger RNA: The Jeftin Biopharmaceutical. J. Multidiscip. inž. Sci. Technol. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; Andreadakis, Z.; Kumar, A.; Gómez Roman, R.; Tollefsen, S.; Saville, M.; Mayhew, S. Pejzaž razvoja vakcine COVID{1}}. Nat. Rev. Drug Discov. 2020, 19, 305–306. [CrossRef]

70. Maruggi, G.; Zhang, C.; Li, J.; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA kao transformativna tehnologija za razvoj vakcine za kontrolu infektivnih bolesti. Mol. Ther. 2019, 27, 757–772. [CrossRef]