Monoterpenski sastojci iz Cistanche Tubulosa—hemijske strukture kankanozida A—E i kankanola—

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA i Masayuki YOSHIKAWA

Abstract

Izolovana su četiri nova iridoidna glikozida, kankanozidi A (1), B (2), C (3) i D (4), klorovani iridoid, kankanol (5) i aciklički monoterpenski glikozid, kankanozid E (6). iz metanolnog ekstrakta osušenih stabljika Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) zajedno sa 16 poznatih jedinjenja. Strukture ovih novih jedinjenja (1-6) određene su na osnovu hemijskih i fizičko-hemijskih dokaza.

Ključne riječi:Cistanche tubulosa; kankanoside; kankanol; iridoid; monoterpen; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)je višegodišnja parazitska biljka koja raste na korijenu vrste Salvadora ili Calotropis, a rasprostranjena je u Sjevernoj Africi, Arabiji i azijskim zemljama.1) Stabljike ove biljke (Kanka-nikujuyou na japanskom) tradicionalno se koriste za liječenje impotencije, steriliteta , lumbago i telesna slabost.2) Prethodno je nekoliko iridoida, monoterpenoida, feniletanoida i lignana izolovano iz kineske i pakistanske C. tubulosa. 1,3–7) U toku naših serijskih studija o bioaktivnim sastojcima kineskih prirodnih lijekova,8–18) četiri nova iridoidna glikozida, kankanozida A (1), B (2), C (3) i D (4 ), hlorisani iridoid, kankanol (5) i aciklički monoterpenski glikozid, kankanozid E (6), izolovani su iz metanolnog ekstrakta ovog biljnog leka zajedno sa 16 poznatih jedinjenja uključujući 12 monoterpena (7-18). Ovaj rad se bavi izolacijom i razjašnjavanjem strukture novih monoterpenskih konstituenata (1—6).

Cistanche tubulosa

Metanolni ekstrakt iz osušenih stabljikaCistanche tubulosa(26,8 posto od ovog biljnog lijeka) je podvrgnuto normalnoj fazi i reverzno-faznoj kolonskoj hromatografiji na silika gelu i ponovljenoj HPLC da bi se dobili kankanozidi A (1, 0.0{{10 }}54 posto ), B(2, 0.030 posto ), C (3, 0.00 27 posto ), i D (4, {{40}.{{48}015 posto), kankanol (5, 0.0{ {66}}34 posto ), i kankanozid E (6, 0.027 posto ) zajedno sa musaenozidnom kiselinom19) (7, 0.020 posto) , genipozidna kiselina19) (8, 0,030 posto), 8-epiloganska kiselina7) (9, 0,033 posto), glurozid19) (10, 0,14 posto), antirid20) (11, 0,0079 posto), ajugol19, (01) posto ), barciozid19) (13, 0,21 posto), 6-deoksikatalpol19) (14, 0,11 posto), argiol21) (15, 0,0030 posto), cistanin22,23) (16, 0,0040 posto), cis tahlor22 17, 0,0035 posto ), (2E,6Z)-8-bD-glukopiranosiloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienska kiselina24) (18, 0,0028 posto ), D manitol25) (4,19 str ercent ), uridin25) (0,0069 posto), (3R)-3-hidroksi-2- pirolidinon26,27) (0,0020 posto), i (3R)-3-hidroksi-1-metil{ {97}}pirolidinon27) (0,0059 posto).

Struktura kankanozida A (1) Kankanozid A (1) je dobijen kao amorfni prah i pokazao je negativnu optičku rotaciju ([a]D 25 107,4 stepena u MeOH). IR spektar 1 pokazao je apsorpcionu traku na 1647 cm 1 koja se može pripisati olefinskoj funkciji pored jakih apsorpcionih traka na 3410 i 1076 cm 1 što ukazuje na glikozidni dio. U pozitivnom i negativnom ionskom bombardovanju brzim atomom (FAB)-MS od 1, kvazimolekularni pikovi jona uočeni su na m/z 369 (M Na) i 345 (MH), a FAB-MS analiza visoke rezolucije otkrila je molekularni formula 1 da bude C16H26O8. Kisela hidroliza 1 sa 1,0 M hlorovodoničnom kiselinom (HCl) oslobađa D-glukozu, koja je identifikovana HPLC analizom pomoću optičkog detektora rotacije.8,10—12,15—18) 1 H- (CD3OD, tabela 1) i 13C-NMR (Tabela 2) spektri 1, koji su dodijeljeni različitim NMR eksperimentima,28) pokazali su signale koji se mogu pripisati dva metila [d 1,31 (s, 10-H3), 1,51 (br s, {{47} }H3)], dva metilena [d 1,49, 2,02 (oba m, 6a- i 6b-H), 1,64, 1,67 (oba m, 7b- i 7a-H)], dva metina [d 2,21 (dd, J 2,7 , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)], i a,b-nezasićena acetal grupa [d 5,33 (d, J 2,7 Hz, 1-H ), 5,95 (br s, 3-H)] zajedno sa b-glukopiranozilnom ostatkom [d 4,62 (d, J 7,9 Hz, 1 -H)]. Kao što je prikazano na slici 1, eksperiment korelacione spektroskopije 1 H–1H (1 H–1 H COSY) na 1 je pokazao prisustvo parcijalnih struktura napisanih podebljanim linijama. U eksperimentu heteronuklearnih korelacija višestrukih veza (HMBC) na 1, uočene su korelacije dugog dometa između sljedećih protona i ugljika (3-H, 1 -H i 1-C; 11- H3 i 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 i 4- C ; 11-H3 i 5-C; 10-H3 i 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3, i 8-C; 10-H3 i 9-C; 7-H2 i 10-C) kao što je prikazano na slici 1. Enzimska hidroliza 1 sa b-glukozidazom dala je aglikon, kankagenin a (1a) kao što je prikazano na slici 3. Poređenje 13C NMR spektra za 1 sa onima za 1a otkrilo je pomak glikozilacije oko 1- položaja u 1 [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: dC 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Stoga je povezanost bD-glukopiranozilnog dijela u 1 također razjašnjena da se nalazi na 1- poziciji 1a. Zatim, relativnu stereostrukturu 1 karakterizira eksperiment nuklearne Overhauserove spektroskopije poboljšanja (NOESY), koji je pokazao NOE korelacije između sljedećih protonskih parova (1-H i 10-H3; 3-H i 11-H3; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7b-H; 7a-H i 10-H3; 7b-H i {{ 190}}H) kao što je prikazano na slici 2. Konačno, apsolutna konfiguracija 1-položaja u 1 određena je primjenom 13C NMR pravila pomaka glikozilacije 1,1-disaharida,29) koje je pronađeno primijeniti na hemiacetalna jedinjenja.30,31) Potvrđeno je da se stereostruktura 1-položaja u 1 održava u 1a poređenjem 1H-NMR analize uključujući NOESY eksperiment. Utvrđeno je da su vrijednosti pomaka glikozilacije [Dd 1,2 ppm (1 -C) i 0,9 ppm (1- C), u piridinu-d5] karakteristične za kombinaciju R, Rhemiacetal, što je odgovaralo apsolutnoj stereostrukturi od 1 kao što je prikazano na slici 3. Prema tome, apsolutna konfiguracija na {{217}poziciji 1 je određena kao S konfiguracija, a apsolutna stereostruktura 1 je razjašnjena kao što je prikazano.

Strukture Kankanozida B (2) i C (3) Kankanozida B (2) su takođe izolovane kao amorfni prah sa negativnom optičkom rotacijom ([a]D 26 118,7 stepeni u MeOH). IR spektar 2 pokazao je apsorpcione trake na 3410, 1647 i 1{{5{{80}}}}85 cm 1 koje se mogu pripisati hidroksilnim, olefinskim i eterskim funkcijama. Molekularna formula C15H24O10 od 2 određena je kvazimolekularnim pikovima jona u FAB-MS pozitivnim jonima i FAB-MS visoke rezolucije. Kisela hidroliza 2 sa 1,0 M HCl oslobodila je D-glukozu, koja je identifikovana HPLC analizom pomoću optičkog detektora rotacije.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, tabela 1) i 13C-NMR ( Tabela 2) spektri28) od 2 pokazuju signale koji se mogu pripisati dva metilena [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-5), , 3,99 (oba d, J 11,9 Hz, 10-H2)], četiri metina [d 2,21 (dd, J 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J 6,4 Hz, 1-H)], i par cisolefifina [d 4,95 (dd, J 4,0 , 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J 1,8, 6,1 Hz, 3-H)], zajedno sa b-glukopiranozilnom ostatkom [d 4,72 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Signali protona i ugljika u 1 H- i 13C-NMR podacima 2 bili su slični onima za 6-deoksikatalpol (14), osim za signale zbog 7- i 8- pozicije. Kao što je prikazano na slici 1, eksperiment 1 H–1 H COZY na 2 pokazao je prisustvo parcijalnih struktura napisanih podebljanim linijama i, u HMBC eksperimentu, uočene su korelacije dugog dometa između sljedećih protonskih i ugljičnih parova ({{ 122}}H, 1 -H i 1-C; 1-H i 3-C; 10-H2 i 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 i 8-C; 7-H, 10-H2 i 9-C 7-H i 10-C). Relativnu stereostrukturu 2 karakterizira NOESY eksperiment, koji je pokazao NOE korelacije između sljedećih protonskih parova (1-H i 10-H2; 3- H i 4-H; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7-H; 7-H i 9-H) kao što je prikazano na slici 2. Konačno, alkalni tretman 14 sa 5 posto vodenog rastvora kalijum hidroksida (KOH) dao je 2 i 19, 32) tako da je stereostruktura 2 razjašnjena.

Kankanozid C (3) je izolovan kao amorfni prah sa negativnom optičkom rotacijom ([a]D 26 34.0 stepen u MeOH). U negativnom jonskom FAB-MS od 3, uočen je par izotopskih kvazimolekularnih pikova jona na m/z 399 i 401 (MH). Molekularna formula 3 je određena kao C15H25ClO10 FAB-MS mjerenjem visoke rezolucije. Kisela hidroliza 3 sa 1,0 M HCl oslobodila je D-glukozu, koja je identifikovana HPLC analizom pomoću optičkog detektora rotacije.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, tabela 1) i 13C-NMR ( Tabela 2) spektri28) od 3 pokazuju signale koji se mogu pripisati tri metilena [d 1,70 (br dd, J oko 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J oko 6, 13 Hz, 4b-H) , 1,68 (br d, J oko 13 Hz, 6a H), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (oba d, J 11,3 Hz, 10-H2)], pet metina [d 2,47 (dd, J 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m, 5- H), 3,94 (br s, 7-H), 5,10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J 2,5 Hz, 1-H)], i b-glukopiranozil dio [d 4,60 (d, J 8,0 Hz, 1 -H)]. Signali protona i ugljika u 1 H- i 13C-NMR spektrima 3 su se mogli preklapati sa onima od 2, osim signala zbog 3- i 4- položaja. Položaji bD-glukopiranozila i funkcije hlora u 3 su razjašnjeni iz H–H COZY i HMBC eksperimenata kao što je prikazano na slici 1. Shodno tome, planarna struktura 3 je konstruisana kako je prikazano. Relativna stereostruktura 3 određena je eksperimentom NOESY, u kojem su uočene NOE korelacije između sljedećih protonskih parova (1-H i 3-H, 10-H2; 3- H i 4a-H; 4b-H i 5- H; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7-H; {{121} }H i 9-H) kao što je prikazano na slici 2.

Strukture kankanozida D (4) i kankanola (5) Kankanozid D (4) je izolovan kao amorfni prah sa negativnom optičkom rotacijom ([a]D 25 30.6 stepen u MeOH). IR spektar 4 pokazao je apsorpcionu traku na 1655 cm 1 koja se može pripisati olefinskoj funkciji i jake apsorpcione trake na 3410 i 1078 cm 1 što ukazuje na njegovu glikozidnu strukturu. U pozitivno-jonskom FAB-MS od 4, kvazimolekularni pik jona je uočen na m/z 341 (M Na). Molekularna formula C15H26O7 od 4 određena je FAB-MS mjerenjem visoke rezolucije. Kisela hidroliza 4 sa 1,0 M HCl oslobađa D-glukozu,8,10—12,15—18) dok je (R)-rotundnost (4a) 33,34) dobijena enzimskom hidrolizom 4 sa b-glukozidazom. 1H-NMR (Tabela 3, CD3OD) i 13C-NMR (Tabela 4) spektri28) od 4 su pokazali signale koji se mogu pripisati metilu [d 1,69 (s, 10-H3)], tri metilena [d 1,41, 2,06 (oba m, 4-H2), 1,51, 2,01 (oba m, 6a- i 6b-H), 2,23 (br dd, J oko 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (br dd , J oko 8, 15 Hz, 7b-H)], metin [d 2,90 (m, 5-H)], i dva metilena koja imaju funkciju kiseonika {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4 , 13,2 Hz), 3,97 (DDD, J 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (oba d, J 12,2 Hz, 1-H2)} zajedno sa b- glukopiranozilni dio [d 4,25 (d, J 7,7 Hz, 1 -H)]. Položaj bD-glukopiranozilnog dijela u 4 je razjašnjen HMBC eksperimentom kao 3-pozicija (slika 1). Na osnovu ovih dokaza, utvrđeno je da je apsolutna stereostruktura 4 kao što je prikazano.

Kankanol (5) je dobijen kao amorfni prah sa pozitivnom optičkom rotacijom ([a]D 25 11,1 stepen). Hemijska jonizacija (CI)-MS od 5 pokazala je par pikova jona izotopa na m/z 221 i 223 zbog kvazimolekularnog jona (MH). CI-MS mjerenje visoke rezolucije od 5 otkrilo je da je molekulska formula C9H13ClO4. 1 H-NMR (Tabela 1, CD3OD) i 13C-NMR (Tabela 2) spektri28) od 5 su pokazali prisustvo sljedećih funkcija: tri metilena [d 1.60 (DDD, J 2.5, 5.5, 13.1 Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J oko 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J oko 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3,88 (oba d, J 9,2 Hz, 10-H2)], pet metina [d 2,76 (dd, J 4,3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J oko 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J 4,3 Hz, 1-H) ]. Planarna struktura 5 je potvrđena eksperimentima 1 H–1 H COZY i HMBC. To jest, eksperiment 1 H–1 H COZY na 5 je pokazao prisustvo parcijalnih struktura napisanih podebljanim linijama, a u HMBC eksperimentu su uočene korelacije dugog dometa kao što je prikazano na slici 1. Relativna stereostruktura 5 je bila određen eksperimentom NOESY, u kojem su uočene NOE korelacije između sljedećih protonskih parova (1-H i 9-H; 3-H i 4a-H; 4b-H i {{ 93}} H; 5-H i 6b-H, 9-H; 6b-H i 7-H; 7-H i 9-H) kao što je prikazano na slici 2. Poređenjem 1 H- i 13C-NMR podataka za 5 sa onima za 14a, koji su dobijeni tretmanom 14 sa 5 posto vodene HCl kao što je prikazano na grafikonu 1,35) položaj hlora grupa u 5 je podržana da bude 3-pozicija. Nadalje, acetilacija 5 sa anhidridom octene kiseline (Ac2O) i piridinom dala je 3,7-oksid (5a), dok je 14a dao diacetat (14b) pod istim uslovima acetilacije. Ovaj dokaz nas je također naveo da potvrdimo da je pozicija funkcije hlora 3b-pozicija (Grafikon 3). Shodno tome, utvrđeno je da je stereostruktura 5 kao što je prikazano.

Struktura kankanozida E (6) Kankanozid E (6) je izolovan kao amorfni prah sa negativnom optičkom rotacijom ([a]D 25 20.0 stepen u MeOH). IR spektar 6 pokazao je apsorpcione trake na 3410, 1647, 1085 cm 1 koje se mogu pripisati glikozidnim i karbonilnim funkcijama, dok je njegov UV spektar pokazao apsorpcijski maksimum na 211 nm (log e 4,63), što ukazuje na prisustvo b-nezasićene karboksilne kiseline. Molekularnu formulu C16H28O8 od 6 karakteriše FAB-MS pozitivnih i negativnih jona i MS mjerenje visoke rezolucije. Kisela hidroliza 6 oslobođene D-glukoze,8,10—12,15—18) dok (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil- 2-oktanske kiseline (6a) 36) dobijen je enzimskom hidrolizom 6 sa b-glukozidazom. 1 H-NMR (Tabela 3, CD3OD) i 13C-NMR (Tabela 4) spektri28) od 6 ukazuju na prisustvo (2E,6R)-8-hidroksi-2,6- dio dimetil-2-oktanske kiseline [d 0,95 (d, J 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (oba m, 5-H2), 1,45, 1,70 (oba m, { {70}}H2), 1.65 (m, 6-H), 1.81 (s, 9-H3), 2.22 (2H, m, 4-H2), 3.61, 3.94 (oba m, 8-H2), 6,78 (dd, J 1,2, 7,3 Hz, 3-H)] zajedno sa bD-glukopiranozilnim dijelom [d 4,26 (d, J 7,6 Hz, 1 -H)] . Poređenjem signala ugljika u 13C-NMR spektru od 6 sa onima od 6a, pomak glikozilacije je uočen oko 8-položaja 6. Položaj glukozidne veze je također potvrđen HMBC eksperimentima kao što je prikazano u Slika 1. Prema tome, apsolutna stereostruktura 6 je razjašnjena kao (2E,6R)-8-b-D-glukopiranosiloksi-2,6-dimetil-2-oktanska kiselina.

korist ekstrakta cistanche

Eksperimentalno

Za dobijanje fizičkih podataka korišteni su sljedeći instrumenti: specifične rotacije, Horiba SEPA{0}} digitalni polarimetar (l 5 cm); UV spektri, Shimadzu UV-1600 spektrometar; IR spektri, Shimadzu FTIR-8100 spektrometar; EI-MS, CI-MS i maseni spektrometar visoke rezolucije CI-MS, JEOL JMS-GCMATE; FAB-MS i MS visoke rezolucije, JEOL JMS-SX 102A maseni spektrometar; 1 H-NMR spektar, JEOL EX-270 (270 MHz) i JNM-LA500 (500 MHz) spektrometri; 13C-NMR spektri, JEOL EX-270 (68 MHz) i JNM-LA500 (125 MHz) spektrometri sa tetrametilsilanom kao internim standardom; i HPLC detektor, Shimadzu RID-6A indeks loma i SPD- 10Avp UV-VIS detektori. HPLC kolone, YMC-Pack ODS-A (250 4,6 mm id) i (250 20 mm id) kolone su korištene u analitičke i preparativne svrhe.

Za hromatografiju su korišteni sljedeći eksperimentalni uslovi: kolonska kromatografija na silika gelu obične faze, Silika gel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 15{{10}}—35 0 mreža); kromatografija na koloni silika gela reverzne faze, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 100—200 mesh); TLC, prethodno obložene TLC ploče sa silika gelom 60F254 (Merck, 0,25 mm) (obična faza) i silika gelom RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (reverzna faza); HPTLC reverzne faze, prethodno obložene TLC ploče sa silika gelom RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); a detekcija je postignuta prskanjem sa 1 posto Ce(SO4)2–10 posto vodenog H2SO4 nakon čega je uslijedilo zagrijavanje.

Biljni materijal

Osušene stabljike Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT kupljene su u Urumqiju, provincija Xinjiang, Kina u januaru 2005. godine preko Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Japan, a botaničku identifikaciju obavio je profesor Jia Xiaoguang sa Instituta za tradicionalni kineski Xinjiang i Etnološki lijekovi. Uzorak vaučera (2005.01. Xinjiang-01) ove biljke nalazi se u dosijeu u našoj laboratoriji.

Ekstrakcija i izolacija

Osušene stabljike C. tubulosa (5.0 kg) su u prahu i ekstrahirane tri puta metanolom pod refluksom po 3 h. Isparavanjem rastvarača pod sniženim pritiskom dobijen je metanolni ekstrakt (1340 g, 26,8 posto iz ovog biljnog lijeka). Metanolni ekstrakt (160 g) podvrgnut je hromatografiji na koloni sa silika gelom normalne faze [3,2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10 : 3 : 1→7 : 3 : 1, niži sloj→6 : 4 : 1)MeOH] da bi se dobilo šest frakcija [Fr. 1 (5.04 g), Fr. 2 (9,84 g), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13,28 g), Fr. 5 (113.6{{104}} g), i Fr. 6 (7,61 g)]. Frakcija 1 (5.00 g) je odvojena hromatografijom na koloni silika gela reverzne faze [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH] da se dobije pet frakcija [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg), i Fr. 1-5 (3200 mg)]. o. {{60}} (830 mg) je dalje odvojeno pomoću HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] da se dobije kankanol (5, 20 mg, 0,0034 posto), argiol (15, 18 mg, 0,0030 posto), cistanin (16, 24 mg, 0,0040 posto), i Fr. 1-1-2 (62 mg), koji je dalje odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (2 : 98, v/v)] da se dobije (3R)-3-hidroksi-2-pirolidinon (0,0020 posto ) i (3R)-3-hidroksi-1-metil-2-pirolidinon (0,0059 posto). o. 1-2 (590 mg) je prečišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (35 : 65, v/v) i CH3CN– H2O (20 : 80, v/v)] da se dobije cistanhlorin (17, 21 mg, 0,0035) procenata). Frakcija 2 (9,72 g) je podvrgnuta hromatografiji na koloni silika gela reverzne faze [290 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70→40 : 60→60 : 40, v/v)→MeOH] da bi se omogućilo sedam frakcija [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg), i Fr. 2-7 (336 mg)]. o. 2-1 (466 mg) je odvojeno pomoću HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)] da bi se dobio uridin (0,0069 procenata). o. 2-2 (535 mg) je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] da bi se dobio antirid (11, 15 mg, 0,0079 posto) i 6-deoksikatalpol (14, 214 mg, 0,11 posto). o. 2-3 (535 mg) je odvojeno pomoću HPLC [MeOH–H2O (20 : 80, v/v)] da bi se dobio glurozid (10, 110 mg, 0,14 posto) i barciozid (13, 164 mg, 0,21 posto) . o. 2-4 (375 mg) je odvojeno pomoću HPLC [MeOH–H2O (30 : 70, v/v)] da bi se dobili kankanozidi A (1, 32 mg, 0,0054 posto) i D (4, 9 mg, 0,0015 posto) ). o. 2-6 (460 mg) je dalje odvojeno pomoću HPLC [MeOH–H2O (45 : 55, v/v)] da bi se dobio kankanozid E (6, 161 mg, 0,027 posto) i (2E,6Z){{192 }}bD-glukopiranosiloksi-2,6-dimetil-2,6-oktadienska kiselina (18, 17 mg, 0,0028 posto). Frakcija 3 (7,60 g) je podvrgnuta kolonskoj hromatografiji na silika gelu reverzne faze [230 g, MeOH–H2O (20 : 80→40 : 60→50 : 50→ 60 : 40, v/v)→MeOH] da se dobije pet frakcija [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg), i Fr. 3-5 (336 mg)]. o. 3-1 (480 mg) je pročišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] da bi se dobio kankanozid B (2, 19 mg, 0,018 posto), geniposidna kiselina (8, 32 mg, 0,030) posto), i ajugol (12,12 mg, 0,011 posto). Frakcija 4 (13,10 g) je podvrgnuta hromatografiji na koloni sa silika gelom reverzne faze [390 g, MeOH–H2O (10 : 90→20 : 80→30 : 70→40 : 60→50 : 50, v/v)→ MeOH] da se dobije sedam frakcija [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg), i Fr. 4-7 (1064 mg)]. o. 4-2 (430 mg) je dalje odvojeno pomoću HPLC [MeOH–H2O (5 : 95, v/v)] da bi se dobilo 2 (70 mg, 0,012 posto) i kankanozid C (3, 16 mg, 0,0027 posto) . o. 4-6 (1058 mg) je također odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (15 : 85, v/v)] da se dobije musaenozidna kiselina (7, 116 mg, 0,020 posto) i 8-epiloganska kiselina (9, 193 mg, 0,033 posto). Frakcija 5 (15,15 g) je podvrgnuta hromatografiji na koloni silika gela reverzne faze [455 g, MeOH–H2O (0 : 100→10 : 90→ 20 : 80→40 : 60→50 : 50, v/v)→MeOH ] dati sedam razlomaka [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg), i Fr. 5-7 (1106 mg)]. o. 5-1 (9311 mg) je kristalizovan iz MeOH da bi se dobio D-manitol (3337 mg, 4,19 procenata).

Poznata jedinjenja (7—18) identifikovana su poređenjem njihovih fizičkih podataka ([a]D, IR, 1H-NMR, 13C-NMR, MS) sa prijavljenim vrednostima1,7,19—24,26,27) ili one komercijalnih uzoraka.25) Kankanozid A (1): amorfni prah, [a]D 25 107,4 stepena (c 1,50, MeOH). FAB-MS sa pozitivnim jonima visoke rezolucije: izračunato za C16H26O8Na (M Na) 369,1525; Pronađeno 369.1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD i piridin-d5) d: dat u tabeli 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD i piridin-d5) d C: dat u tabeli 2. FAB-MS pozitivnih jona: m /z 369 (M Na) . FAB-MS negativnih jona: m/z 345 (MH).

Kankanozid B (2): amorfni prah, [a]D 26 118,7 stepeni (c 0.10, MeOH). FAB-MS sa pozitivnim jonima visoke rezolucije: izračunato za C15H24O10Na (M Na) 387,1267; Pronađeno 387.1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 2. FAB-MS pozitivnih jona: m/z 387 (M Na). FAB-MS negativnih jona: m/z 363 (MH) .

Kankanozid C (3): amorfni prah, [a]D 26 34.0 stepen (c 1.00, MeOH). FAB-MS visoke rezolucije negativnih jona: izračunato za C15H24ClO10 (MH) 399,1058; Pronađeno 399.1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 2. FAB-MS negativnih jona: m/z 399, 401 (MH).

Kankanozid D (4): amorfni prah, [a]D 25 30.6 stepeni (c 0,50, MeOH). FAB-MS sa pozitivnim jonima visoke rezolucije: izračunato za C15H26O7Na (M Na) 341,1204; Pronađeno 341.1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 4. FAB-MS pozitivnih jona: m/z 341 (M Na). FAB-MS negativnih jona: m/z 317 (MH).

Kankanol (5): amorfni prah, [a]D 25 11,1 stepen (c 1,40, MeOH). CI-MS visoke rezolucije: izračunato za C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Pronađeno 221.0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 2. CI-MS m/z ( posto ): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) i 57 (49).

Kankanozid E (6): amorfni prah, [a]D 25 20.0 stepen (c 2.00, MeOH). FAB-MS sa pozitivnim jonima visoke rezolucije: izračunato za C16H28O8Na (M Na) 371,1682; Pronađeno 371.1690. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4,16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 4. FAB-MS pozitivnih jona: m/z 371 (M Na). FAB-MS negativnih jona: m/z 347 (MH).

korist ekstrakta cistanche

Kisela hidroliza 1—4 i 6 sa 1 M HCl

Rastvor 1-4 ili 6 (svaki 1,5 mg) u 1 M HCl (0, 5 ml) je zagrijavan pod refluksom 3 h. Nakon hlađenja, reakciona smjesa je izlivena u ledenu vodu i neutralizirana Amberlite IRA-400 (OH oblik), a smola je uklonjena filtracijom. Zatim je filtrat ekstrahovan sa EtOAc. Vodeni sloj je podvrgnut HPLC analizi pod sljedećim uslovima: HPLC kolona, ​​Ka senzor LC NH{{10}}, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokio, Japan); detekcija, optička rotacija [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokio, Japan)]; mobilna faza, CH3CN–H2O (75:25, v/v); sporedna brzina 0,8 ml/min; temperatura kolone, sobna temperatura. Identifikacija D-glukoze prisutne u vodenom sloju izvršena je poređenjem njenog vremena zadržavanja i optičke rotacije s onima autentičnog uzorka: tR 12,3 min (pozitivna optička rotacija)

Enzimska hidroliza 1, 4 i 6 sa b-glukozidazom

Rastvor od 1 (7,7 mg) u H2O (1,5 ml) tretiran je b-glukozidazom (5.0 mg, od badema, Oriental Yeast Co., Tokio, Japan) i rastvor je mešan na 37 stepeni za 3 d. Nakon što je u reakcionu smjesu dodat EtOH, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (55:45, v/v)] da bi se dobio kankagenin a (1a, 2,3 mg, 56 posto) . Sličnim postupkom, (R)-rotundiol33,34) (4a, 1,2 mg, 69 posto ) i (2E,6R)-8-hidroksi-2,6-dimetil{{30} }oktanska kiselina36) (6a, 6,8 mg, 62 procenta) dobijene su od 4 (3,5 mg) i 6 (20,4 mg), respektivno.

Kankagenin a (1a): Bijeli prah, [a]D 25 18,4 stepena (c 0.20, MeOH). EI-MS visoke rezolucije: izračunato za C10H16O3 (M ) 184,1099; Pronađeno 184.1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 2. EI MS: m/z ( posto ): 184 (M , 37) , 95 (100).

Alkalni tretman 14 sa 5 posto vodenog KOH

Rastvor od 14 (23.0 mg) u 5% vodenom rastvoru KOH (1.0 ml) je miješan na 80 stepeni 2 h. Reakciona smeša je neutralizovana sa Amberlite HCR-W2 (H oblik). Uklanjanje rastvarača iz filtrata pod sniženim pritiskom dalo je ostatak, koji je prečišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (5:95, v/v)] da bi se dobilo 2 (4,0 mg, 16 procenata) i 1932) (10,5 mg , 43 posto).

Tretman kiselinom 14 sa 5 posto vodene HCl

Rastvor od 14 (250 mg) u 5% vodenoj otopini HCl (20 ml) je miješan na sobnoj temperaturi 3 h. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu i cela reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Ekstrakt EtOAc je sukcesivno ispran zasićenim vodenim NaHC03 i slanim rastvorom, zatim osušen preko bezvodnog MgSO4 praha i filtriran. Uklanjanje rastvarača iz filtrata pod sniženim pritiskom dalo je ostatak, koji je odvojen pomoću HPLC [MeOH–H2O (20: 80, v/v)] da se dobije 14a (4,0 mg, 25 procenata).

14a

Bijeli prah, [a]D 20 21,5 stepeni (c 0,30, MeOH). CI-MS visoke rezolucije: izračunato za C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Pronađeno 221.0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 2. CI-MS: m/z ( posto ): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) i 57 (65).

Acetilacija 5 i 14a

Rastvor 5 (2,5 mg) u piridinu (0,5 ml) tretiran je anhidridom sirćetne kiseline (Ac2O, 0,4 ml) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 h. Reakciona smeša je izlivena u ledenu vodu i cela reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Ekstrakt EtOAc je sukcesivno ispran sa 5% vodenog rastvora HCl, zasićenim vodenim rastvorom NaHC03 i slanim rastvorom, zatim osušen preko bezvodnog MgSO4 praha i filtriran. Uklanjanje rastvarača iz filtrata pod sniženim pritiskom dalo je ostatak, koji je prečišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (35:65, v/v)] da bi se dobio 5a (2,3 mg, 77 procenata). Sličnim postupkom, 14b (2,7 mg, 87 posto) je takođe pripremljen i prečišćen pomoću HPLC [MeOH–H2O (55:45, v/v)] iz 14a (2,1 mg).

5a

Bijeli prah, [a]D 20 1,8 stepeni (c 0,18, MeOH). CI MS visoke rezolucije: izračunato za C11H15O5 (MH) 227,0919; Pronađeno 227.0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 2. CI-MS m/z ( posto ): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) i 57 (34 ).

14b

Bijeli prah, [a]D 20 23,7 stepeni (c 0,06, MeOH). CI-MS visoke rezolucije: izračunato za C13H18ClO6 (MH) 305,0792; Pronađeno 305.0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: dat u tabeli 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: dat u tabeli 2. CI-MS: m/z ( procenat ): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) i 57 (93).

Priznanja

Ovo istraživanje je podržano od strane 21. programa COE, projekta Academic Frontier, i granta za naučna istraživanja Ministarstva obrazovanja, kulture, sporta, nauke i tehnologije Japana. Autori zahvaljuju profesoru Xiaoguang Jia sa Instituta za tradicionalnu kinesku i etnološku medicinu Xinjiang u Urumqiju, Kina, na identifikaciji biljnog materijala.

cistanche benefit

Reference i bilješke

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309—3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, "Culture Techniques of Xinjiang Staple Medical Plants", Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Ed., 2004, str. 84—88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46—48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170—171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728—730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808—810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bul., 38, 1927—1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bul., 50, 208—215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468—1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005—4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638—645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bul., 51, 654—662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847—855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464—1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bul., 52, 1194—1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bul., 53, 1416—1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) u štampi.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bul., 54, 506—513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645—3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617—622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553—1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bul., 32, 1729—1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244—246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Chem. Lett., 12, 343—344 (2001).

25) Ta poznata jedinjenja su identifikovana poređenjem njihovih fizičkih podataka sa komercijalno dobijenim uzorcima.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213—9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587—2594 (2003).

28) 1 H- i 13C-NMR spektri 1-6 i srodnih jedinjenja (19, 1a, 5a, 14a, 14b) dodijeljeni su uz pomoć poboljšanja bez izobličenja pomoću prijenosa polarizacije (DEPT), korelacijske spektroskopije dvostrukog kvantnog filtera ( DQF COSY), eksperimente heteronuklearne višestruke kvantne koherencije (HMQC) i heteronuklearne višestruke veze (HMBC).

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982—984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bul., 42, 1691—1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bul., 47, 1753—1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281—2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biotech. Biochem., 59, 1979—1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229—232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bul., 39, 1171—1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biotech. Biochem., 63, 731—735 (1999).