3. Rezultati

3.1. KRG je inhibirao TYR aktivnost i potisnuo sadržaj melanina u sistemu bez ćelija

Enzim TYR učestvuje u koraku melanogeneze koji ograničava brzinu [20,21]. Stoga, da bismo provjerili da li je KRG bio u stanju da potisne proizvodnju ovog enzima, izveli smo TYR test gljiva bez ćelija. Kao što je prikazano na slici 1A, KRG je snažno inhibirao proizvodnju TYR-a. B16/F10 ćelije su tretirane sa KRG i stimulisane sa a-MSH da induciraju lučenje melanina, i pronađeno je da je KRG efikasno potisnuo, kao što je prikazano na slici 1B. Kao pozitivna kontrola u oba eksperimenta korišćena je Kojična kiselina, poznato sredstvo za izbeljivanje.

Prema relevantnim studijama, cistanche je uobičajena biljka koja je poznata kao "čudotvorna biljka koja produžava život". Njegova glavna komponenta je cistanozid, koji ima različite učinke kao što su antioksidans, protuupalni i promocija imunološke funkcije. Mehanizam između cistanche i izbjeljivanja kože leži u antioksidativnom dejstvu cistanche glikozida. Melanin u ljudskoj koži nastaje oksidacijom tirozina koju katalizira tirozinaza, a reakcija oksidacije zahtijeva sudjelovanje kisika, pa radikali bez kisika u tijelu postaju važan faktor koji utječe na proizvodnju melanina. Cistanche sadrži cistanozid, koji je antioksidans i može smanjiti stvaranje slobodnih radikala u tijelu, čime inhibira proizvodnju melanina.

Kliknite na Prednosti tableta Cistanche

Za više informacija:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

3.2. Efekti KRG na ekspresiju mRNA i proteina MITF i TRP

Navedeni rezultati su ukazali na efekte KRG na sadržaj TYR i melanina. Međutim, da bismo razjasnili mehanizam inhibicije melanina od strane KRG-a, procijenili smo transkripciju i translaciju gena povezanih s melanogenezom: TRP-1 i TRP-2, TYR i transkripcijski faktor povezan s mikroftalmijom (MITF ). Kao što je prikazano na slikama 2A i B, KRG je snažno inhibirao sve četiri komponente puta melanogeneze. Stoga je KRG potvrđen kao efikasan agens za izbjeljivanje u in vitro studiji.

3.3. Utjecaj oralne suplementacije KRG na tjelesnu težinu i unos hrane

Izloženost umjetnom UVB-u izaziva stres kod životinja, što može rezultirati gubitkom apetita; stoga smo procijenili unos ishranom i dijetnu efikasnost HRM-2 miševa izloženih UVB-u tokom 5 sedmica, tretiranih kremom za sunčanje i oralno primijenjenim KRG. Kao što je prikazano na slici 3A, nije bilo značajne promjene u tjelesnoj težini u normalnim, kontrolnim UVB ili tretiranim grupama. Takođe je utvrđeno da je unos hrane značajno povećan u grupama sa pozitivnom kontrolom i KRG-om, kao što je prikazano na slici 3B. Ovi rezultati pokazuju da iako je UVB izazvan stres kod miševa, KRG tretman je efikasno spriječio gubitak apetita i težine kod miševa.

3.4. Analiza ekspresije gena povezanih s borama kod HRM-2 miševa ozračenih UVB zrakama

Da bi se izmjerio učinak KRG-a na stvaranje bora na koži, HRM-2 miševi su zračeni UVB-om da izazovu bore. Nakon 5 sedmica ozračivanja, izolovana su tkiva kože i analizirana je ekspresija gena povezanih sa borama (tj. IL-1b, MMP-2 i MMP- 9). Kao što je prikazano na slikama 4A i B, ekspresija proteina MMP-2, utvrđena ELISA-om, i ekspresija mRNA, utvrđena PCR-om u realnom vremenu, bile su značajno niže u pozitivnoj kontrolnoj grupi i KRG tretmanu grupe od onih u kontrolnoj UVB-ozračenoj grupi. Nivoi MMP-9 i IL-1b su takođe značajno smanjeni u grupama koje su tretirane KRG u poređenju sa kontrolnom grupom ozračenom UVB-om, kao što je prikazano PCR u realnom vremenu (sl. 4C i D).

3.5. Efekti KRG-a na melanogenezu kod oštećenja kože zračenom UVB zračenjem

Da bi se potvrdila efikasnost izbjeljivanja KRG-a, ispitana je razlika u stvaranju melanina u sedmicama 1, 3 i 5 UVB zračenja podjelom dorzalne kože HRM-2 miševa na lijevu (netretiranu) i desnu (UVB) i sekcije tretirane uzorkom). Kao što je prikazano na slici 5A, tokom prve nedelje izlaganja miševa UVB-u uz tretman kreme za sunčanje i KRG, nije bilo značajnog smanjenja proizvodnje melanina pri obe doze KRG. U nedelji 3, došlo je do manjeg smanjenja proizvodnje melanina u grupi koja je tretirana kremom za sunčanje pozitivne kontrole i grupama KRG u poređenju sa grupom ozračenom kontrolnom UVB, kao što je prikazano na slici 5B. U sedmici 5, kao što je jasno prikazano na slici 5C, grupa koja je primala kremu za sunčanje pozitivne kontrole i obje grupe koje su tretirane KRG pokazale su značajno smanjenje proizvodnje melanina. Ovi rezultati su pokazali da je KRG efikasan agens za izbjeljivanje kože.

3.6. Analiza efekata KRG na formiranje bora kod HRM-2 miševa

Da bi se utvrdili efekti KRG-a na formiranje i dubinu bora, HRM-2 miševi su zračeni UVB-om da bi izazvali foto-starenje, a dubina bora kože je izmjerena pomoću 3D analizatora, kako je opisano u Materijalima i metodi odjeljak (2.11), u sedmicama 3, 4 i 5. Kao što je prikazano na slikama 6A i B, grupa koja je liječena kremom za sunčanje pozitivne kontrole i obje grupe koje su tretirane KRG pokazale su značajno smanjenje formiranja i dubine bora.

3.7. Utjecaj KRG-a na smanjenje debljine epiderme i povećanje kolagena

UV zračenje može povećati debljinu epiderme, uzrokujući da koža postane deblja i gruba. Štaviše, kontinuirano izlaganje UVB-u može degradirati MMP i uzrokovati gubitak kolagena, koji je neophodan za dobro zdravlje kože [22]. Kao što je prikazano na slici 7A, debljina epiderme izazvana UVB-om je bila snažno smanjena u grupi koja je tretirana kremom za sunčanje pozitivne kontrole i u obe grupe tretirane KRG. Štaviše, na slici 7B, prikazano je da je debljina epiderme, kako je vizualizovana bojenjem hematoksilinom i eozinom, smanjena u grupi koja je tretirana kremom za sunčanje pozitivne kontrole i u obe grupe tretirane KRG. Massonovo bojenje trihoma, izvedeno da se vizualiziraju komponente matriksa u koži HRM-2 miševa, otkrilo je smanjen intenzitet bojenja u kontrolnoj UVB-ozračenoj grupi kao rezultat degradacije kolagenih vlakana; obrnuto, kod miševa tretiranih kremom za sunčanje i obe doze KRG, intenzitet bojenja je dramatično povećan u poređenju sa UVB kontrolnom grupom (slika 7C). Ovi rezultati jasno su pokazali da je KRG siguran i efikasan tretman sa efektima izbeljivanja kože i anti-ageinga.

3.8. Utjecaj kreme crvenog ginsenga na ljudsku kožu

Elastičnost kože (koja se naziva i elastičnost) mjerena je kao što je prikazano u Tabeli 1. Prosječno povećanje elastičnosti od 0.03386 uočeno je u eksperimentalnoj grupi koja je primila kremu koja sadrži 3 posto crvene ginseng. Kontrolna grupa, koja je primala kremu bez ginsenga, pokazala je prosječno povećanje otpornosti od 0,0255.

Sadržaj ulja u eksperimentalnoj grupi povećan je na 67,8 posto u odnosu na kontrolnu grupu, u kojoj je sadržaj ulja iznosio 45,6 posto, kao što je prikazano u tabeli 2. Detaljnije, rezultati su pokazali da je sadržaj ulja povećan za 50 posto u svim eksperimentalne grupe: 46,6 posto u hemisferi, 25,4 posto u lijevom obrazu i 32,6 posto ukupno.

Sadržaj vlage je smanjen iu kontrolnoj i u eksperimentalnoj grupi, kao što je prikazano u tabeli 3. Smatralo se da se to može pripisati promjeni vremenskih uslova između oktobra i novembra u Republici Koreji.

Promjena boje kože u eksperimentalnoj grupi bila je prosječno smanjenje od 8,24; obrnuto, kontrolna grupa je pokazala povećanje od 2,12 (Tabela 4). Detaljnije, tonus kože čela je povećan i u kontrolnoj i u eksperimentalnoj grupi. U eksperimentalnoj grupi smanjio se tonus kože i na desnom i lijevom obrazu; nasuprot tome, u kontrolnoj grupi, njihov ton kože se povećao i na čelu i na desnom obrazu, što je ukazivalo da je koža potamnila. Stoga zaključujemo da je krema od ginsenga smanjila sklonost kože gubitku boje; drugim riječima, pojačao je efekat posvjetljivanja.

Prosječna eritema kože smanjena je za 33,8 u eksperimentalnoj i 3,6 u kontrolnoj grupi (tabela 5). Ovi rezultati snažno ukazuju na pozitivne efekte ekstrakta crvenog ginsenga u poboljšanju ukupnog stanja kože bez izazivanja bilo kakvih nuspojava.

4. Diskusija

Melanociti su specijalizirane stanice koje proizvode melanin koje se nalaze u bazalnom sloju epiderme. Ove ćelije su uključene u proizvodnju i transport melanina do susjednih keratinocita i posljedično stvaranje ravnomjernog sloja pigmentacije kože. Melanin je esencijalni pigment koji ima dvije funkcije. Prva i najvažnija funkcija je pigmentiranje kože, a druga funkcija je zaštita kože od štetnog UV zračenja smanjenjem broja reaktivnih vrsta kisika [23,24]. Kada je koža izložena UV zračenju, aktivira se a-MSH hormon koji uzrokuje proizvodnju melanina iz melanocita [25]. Ključni regulatori cijelog ovog procesa proizvodnje melanina su MITF, transkripcijski faktor za regulaciju TYR, i proteini povezani s tirozinom (TRP-1 i TRP-2) [4,26e28]. Ove komponente su uključene u proizvodnju melanina i pigmentaciju kože.

Starenje kože može se široko klasificirati u dva tipa [29]. Intrinzično (ili endogeno) starenje je neizbježan fenomen starenja koji se javlja sa starenjem ljudi. Kliničke karakteristike ovog tipa starenja su relativno blage i uključuju fine bore, suhu kožu i smanjenu elastičnost [30]. Fotostarenje (egzogeno starenje) odnosi se na fenomen starenja koji se uočava na koži koja je dugo izložena sunčevoj svjetlosti. Element odgovoran za oštećenje je UVB na sunčevoj svjetlosti. Ova vrsta fotostarenja može se spriječiti primjenom komercijalno dostupnih krema za sunčanje prije izlaska na sunce i minimiziranjem vremena izlaganja suncu. Kliničke karakteristike egzogenog starenja su štetne, kao što je vrlo gruba, suha koža sa smanjenom elastičnošću i stvaranje dubokih bora sa jakim opuštenošću kože. Fotoostarjela koža je također vrlo sklona pigmentacijskim bolestima, kao što je solarni lentigo [31,32].

Štaviše, kada je koža previše izložena sunčevoj svjetlosti koja sadrži UVB, povećava se količina ekstracelularnih MMP, uzrokujući degradaciju matriksnih proteina, čiji je kolagen glavna komponenta [33]. Kolagen je globalno prihvaćen kao neophodan element za elastičnost kože, a poznato je da njegova degradacija uzrokuje rano stvaranje bora i smanjuje elastičnost kože. Nakon izlaganja UVB-u, povećanje MMP-a razgrađuje kolagen i druge supstratne proteine ​​[34]. Dakle, radi se o vrsti rane koju nanosi sunčevo zračenje na koži, a naše tijelo ulaže napore da zacijeli rane kroz sintezu novog kolagena. Međutim, kako proces zacjeljivanja rana nije uvijek savršen, kontinuirano izlaganje kože UVB zrakama rezultirat će kliničkim simptomima starenja, uključujući bore.

Iako melanociti oslobađaju veliki broj rastvorljivih komponenti, prostaglandin E2, prostaglandin F2a, adrenokortikotropni hormon i NO se smatraju regulatorima melanogeneze [35-38]. Međutim, efekti citokina na proces melanogeneze su prilično komplikovani. Na primjer, među IL familijom, IL-1a/1b i faktori stimulacije kolonija granulocita-makrofaga uključeni su u stimulaciju melanogeneze; međutim, IL-6, transformirajući faktor rasta beta 1 (TGF-b1) i faktor nekroze tkiva a (TNF-a) potiskuju proizvodnju melanina. Naši rezultati su pokazali da je IL-1b povećan u kontrolnoj UVB-ozračenoj grupi, ali da je značajno smanjen KRG tretmanom. U zaključku, KRG i KRG krema su pokazale snažna antimelanogena svojstva i izbjeljivanje kože i mogu se razviti u komercijalno dostupan kozmetički agens.

Sukobi interesa

Priznanja

Dodatak A. Dodatni podaci

Reference

[1] Brenner M, Hearing VJ. Zaštitna uloga melanina od UV oštećenja u ljudskoj koži. Photochem Photobiol 2008;84:539e49.

[2] Kim DS, Jeong YM, Park IK, Hahn HG, Lee HK, Kwon SB, Jeong JH, Yang SJ, Sohn UD, Park KC. Novi 2-imino-1,3-derivat tiazolina, KHG22394, inhibira sintezu melanina u ćelijama melanoma B16 miša. Biol Pharm Bull 2007;30:180e3.

[3] Kim DS, Kim SY, Park SH, Choi YG, Kwon SB, Kim MK, Na JI, Youn SW, Park KC. Inhibicijski efekti 4-n-butil resorcinola na aktivnost tirozinaze i sintezu melanina. Biol Pharm Bull 2005; 28:2216e9.

[4] Kim HR, Kim H, Jung BJ, You GE, Jang S, Chung DK. Lipoteihoična kiselina izolirana iz Lactobacillus plantarum inhibira melanogenezu u B16F10 ćelijama melanoma miša. Mol Cells 2015;38:163e70.

[5] Goldstein B. Ginseng: njegova istorija, rasprostranjenost i narodna tradicija. Am J Chin Med (Gard City NY) 1975;3:223e34.

[6] Chevallier A. Enciklopedija ljekovitog bilja. St Leonards. Novi Južni Vels: Dorling Kindersley pty limited; 1996.

[7] Kim BM, Kim DH, Park JH, Na HK, Surh YJ. Ginsenoside Rg3 indukuje apoptozu ćelija raka dojke kod ljudi (MDA-MB-231). J Cancer Prev 2013;18:177e85.

[8] Kim EK, Lee JH, Cho SH, Shen GN, Jin LG, Myung CS, Oh HJ, Kim DH, Yun JD, Roh SS. Priprema crnog Panax ginsenga novim metodama i njegovo antitumorsko djelovanje. The Korea Journal of Herbology 2008;23:85e92.

[9] Saba E, Jeong DH, Roh SS, Kim SH, Kim SD, Kim HK, Rhee MH. Ekstrakti Chong-Myung-Tang-a obogaćeni crnim ginsengom poboljšavaju ponašanje u prostornom učenju kod pacova i izazivaju protuupalne efekte in vitro. J Ginseng Res 2017;41:151e 8.

[10] Saba E, Kim SH, Kim SD, Park SJ, Kwak DM, Oh JH, Park CK, Rhee MH. Ublažavanje dijabetičkih komplikacija pomoću ekstrakta crvenog ginsenga obogaćenog ginsenozidom Rg3- kod LDLe/miševa hranjenih zapadnom dijetom. J Ginseng Res 2017;42:352e5.

[11] Saba E, Son Y, Jeon BR, Kim SE, Lee IK, Yun BS, Rhee MH. Acetil eburikoična kiselina iz laetiporus sulfurous var. minijature suzbija upalu u ćelijama mišjih makrofaga RAW 264.7. Mycobiology 2015;43:131e6.

[12] Dai D, Zhang CF, Williams S, Yuan CS, Wang CZ. Ginseng na rak: potencijalna uloga u moduliranju angiogeneze posredovane upalom. Am J Chin Med 2017;45:13e22.

[13] Saba E, Jeon BR, Jeong DH, Lee K, Goo YK, Kim SH, Sung CK, Roh SS, Kim SD, Kim HK, et al. Ekstrakt crnog ginsenga ublažava hiperholesterolemiju kod pacova. J Ginseng Res 2016;40:160e8.

[14] Christensen LP. Hemija, biosinteza, analiza i potencijalni zdravstveni učinci ginsenozida. Adv Food Nutr Res 2009;55:1e99.

[15] Song M, Mun JH, Ko HC, Kim BS, Kim MB. Korejski crveni ginseng u prahu u liječenju melazme: nekontrolirana opservacijska studija. J Ginseng Res 2011;35:170e5.

[16] Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. Kojić kiselina, kozmetičko sredstvo za izbjeljivanje kože, sporo se vezuje inhibitor aktivnosti kateholaze tirozinaze. J Pharm Pharmacol 1994;46:982e5.

[17] Bisett DL, Hannon DP, Orr TV. Životinjski model kože stare od sunca: histološke, fizičke i vidljive promjene na koži miša bez dlake zračenoj UV zračenjem. Photochem Photobiol 1987;46:367e78.

[18] Cardiff RD, Miller CH, Munn RJ. Ručno bojenje sekcija mišjeg tkiva hematoksilinom i eozinom. Cold Spring Harb Protoc 2014;2014:655e8.

[19] Chang JY, Kessler HP. Masson trihromna boja pomaže u razlikovanju miofibroma od lezija glatkih mišića u predelu glave i vrata. J Formos Med Assoc 2008;107:767e73.

[20] Ohguchi K, Tanaka T, Iliya I, Ito T, Iinuma M, Matsumoto K, Akao Y, Nozawa Y. Gnetol kao moćni inhibitor tirozinaze iz roda Gnetum. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:663e5.

[21] Yokota T, Nishio H, Kubota Y, Mizoguchi M. Inhibicijski efekat glabridina iz ekstrakta sladića na melanogenezu i inflamaciju. Pigment Cell Res 1998;11:355e61.

[22] Jablonska-Trypuc A, Matejczyk M, Rosochacki S. Matrične metaloproteinaze (MMP), glavni enzimi ekstracelularnog matriksa (ECM) u degradaciji kolagena, kao meta za lijekove protiv raka. J Enzyme Inhib Med Chem 2016; 31: 177e83.

[23] Englaro W, Bertolotto C, Brunet A, Pagès G, Ortonne JP, Ballotti R. Inhibicija puta protein kinaze aktiviranog mitogenom pokreće diferencijaciju stanica B16 melanoma. Journal of Biological Chemistry 1998;273:9966e70.

[24] Tam I, Stepien K. Melanociti-imunokompetentne pigmentirane ćelije. Postepy Dermatologii I Alergologii 2007;24:188.

[25] Lee HJ, Lee WJ, Chang SE, Lee GY. Hesperidin, popularni antioksidans, inhibira melanogenezu putem erk1/2- posredovane MITF degradacije. Int J Mol Sci 2015; 16: 18384e95.

[26] Hu YH, Liu X, Jia YL, Guo YJ, Wang Q, Chen QX. Inhibitorna kinetika hlorcimetnih kiselina na tirozinazu gljiva. J Biosci Bioeng 2014;117:142e6.

[27] Masamoto Y, Ando H, Murata Y, Shiraishi Y, Tada M, Takahata K. Inhibicijska aktivnost eskuletina na tirozinazu gljiva izolovanog iz sjemena Euphorbia lathyris L. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:631e4.

[28] Wu M, Hemesath TJ, Takemoto CM, Horstmann MA, Wells AG, Price ER, Fisher DZ, Fisher DE. c-Kit pokreće dvostruke fosforilacije, koje spajaju aktivaciju i degradaciju esencijalnog melanocitnog faktora Mi. Genes Dev 2000;14:301e12.

[29] Tobin DJ. Uvod u starenje kože. Journal of Tissue Viability 2017;26:37e 46.

[30] Helfrich YR, Sachs DL, Voorhees JJ. Pregled starenja kože i fotostarenja. Dermatol Nurs 2008;20:177e83. kviz 184.

[31] Fisher GJ, Kang S, Varani J, Bata-Csorgo Z, Wan Y, Datta S, Voorhees JJ. Mehanizmi fotostarenja i hronološkog starenja kože. Archives of Dermatology 2002;138:1462e70.

[32] El-Domyati M, Attia S, Saleh F, Brown D, Birk D, Gasparro F, Ahmad H, Uitto J. Intrinzično starenje naspram fotostarenja: komparativna histopatološka, ​​imunohistohemijska i ultrastrukturna studija kože. Eksperimentalna dermatologija 2002;11:398e405.

[33] Brennan M, Bhatti H, Nerusu KC, Bhagavathula N, Kang S, Fisher GJ, Varani J, Voorhees JJ. Matriks metaloproteinaza-1 je glavni kolagenolitički enzim odgovoran za oštećenje kolagena u UV zračenoj ljudskoj koži. Photochemistry and Photobiology 2003;78:43e8.

[34] Quan T, Qin Z, Xia W, Shao Y, Voorhees JJ, Fisher GJ. Metaloproteinaze koje razgrađuju matriks u fotostarenju. J Investig Dermatol Symp Proc 2009;14:20e4.

[35] Gillbro JM, Olsson MJ. Melanogeneza i mehanizmi izazivanja munje kože – postojeći i novi pristupi. Int J Cosmet Sci 2011;33:210e21.

[36] Roméro-Graillet C, Aberdam E, Clément M, Ortonne JP, Ballotti R. Dušikov oksid proizveden od ultraljubičastog zračenja keratinocita stimuliše melanogenezu. Journal of Clinical Investigation 1997;99:635.

[37] Wakabayashi Y, Nakajima H, Imokawa G. Poništavajući učinak N-vezanih modifikatora ugljikohidrata na faktor matičnih stanica i endotelin{2}}stimuliranu pigmentaciju epiderme u humanim epidermalnim ekvivalentima. Časopis za dermatološke nauke 2013;69:215e28.

[38] Mizoguchi M. Razvoj melanocita: s porukom ohrabrenja mladim znanstvenicama. Pigment Cell Res 2004;17:533e44.

Za više informacija: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501