Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Kliknite ovdje za informacije o dijelu II (Uvod, materijali i metode) ovog članka.

Proteomičko profiliranje proksimalnog tubularnog i glomerulusa normalnog ljudskog bubrega skoro jedne ćelije

Tara K. Sigdel¹, Paul D. Piehowski², Sudeshna Roy¹, Juliane Liberto¹, Joshua R. Hansen², Adam C. Swensen², Rui Zhao³, Ying Zhu³, Priyanka Rashmi¹, Andrew Schroeder¹, Izabella Damm¹, Svastika Sur¹, Jinghui Luo4, Yingbao Yang4, Wei-Jun Qian²* i Minnie M. Sarwal¹* za Konzorcij projekta precizne medicine bubrega (KPMP).

¹Odsjek za transplantaciju više organa, Odsjek za hirurgiju, Univerzitet Kalifornije, San Francisco, San Francisco, CA, Sjedinjene Američke Države

²Pacific Northwest National Laboratory, Odsjek za biološke nauke, Richland, WA, Sjedinjene Američke Države

³Laboratorija za molekularne nauke o okolišu, Pacific Northwest National Laboratory, Richland, WA, Sjedinjene Američke Države

⁴Odsjek za patologiju, Univerzitet Michigan, Ann Arbor, MI, Sjedinjene Američke Države

Ključne riječi:glomerula, spektrometrija mase, analiza jedne ćelije, proteomika,bubreg

Molekularne procjene na nivou jedne ćelije mogu ubrzati biološka istraživanja pružanjem detaljnih procjena ćelijske organizacije i heterogenosti tkiva u bolesti i zdravlju. Ljudskobubregima složena višećelijska stanja s različitom funkcionalnošću, od kojih se većina sada može u potpunosti iskoristiti s nedavnim tehnološkim napretkom u proteomici tkiva na nivou gotovo jedne ćelije. Razgovaramo o temeljnim koracima u prvoj primjeni ove proteomske metode zasnovane na masovnoj spektrometriji (MS) za analizu podsekcija normalnog čovjekabubreg, u sklopu Projekta precizne medicine bubrega (KPMP). Koristeći ~30-40 laserski snimljenih mikro-diseciranih ćelija bubrega, identifikovali smo više od 2500 ljudskih proteina, sa specifičnostima zaproksimalni tubularni(PT; n=25 proteina) i glomerularnih (Glom; n=67 proteina) regionabubregi njihove jedinstvene metaboličke funkcije. Ova pilot studija pruža mapu puta za primjenu našeg proteomskog tijeka gotovo jedne ćelije za analizu drugih mikro-kompartmana bubrega, u većem obimu, kako bi se razotkrile poremećaji subćelijske funkcije bubrega u normalnom bubregu, kao i različite etiologije akutnih i hroničnihbolest bubrega.

cistanche može poboljšati funkciju bubrega

Uvod

Nedavni napredak u molekularnom profiliranju, posebno transkripcionoj analizi na nivou jedne ćelije, može otkriti rijetke populacije stanica unutar heterogenih kliničkih tkiva, što doprinosi našem razumijevanju biologije bubrega i njegovih molekularnih procesa (1-7). Postoji nezadovoljena potreba za razvojem metoda koje mogu pružiti sveobuhvatne biološke informacije na nivoima RNK i DNK i također omogućiti analizu jednoćelijskog proteomskog tkiva.

Proteomske tehnologije, za razliku od genomike, mogu pružiti funkcionalne informacije o ćelijskim stanjima i regulatornim mrežama (2). Tehnološki izazov za proteomiku zasnovanu na masovnoj spektroskopiji (MS) je ograničenje početnog materijala. Za razliku od transkriptomike, proteomika ne dozvoljava molekularno pojačanje. Ova činjenica je rezultirala značajnim naporima da se poboljša analitička osjetljivost proteomike zasnovane na MS-u, uključujući minijaturizaciju tehnologije i veću efikasnost na izvoru jonizacije elektrosprejom (8, 9), tako da je analitička osjetljivost sada dovoljna za otkrivanje proteina kod jednog sisara ćelije. Uprkos visokoj analitičkoj osjetljivosti, proteomske primjene na male količine uzoraka dovele su do dodatnih izazova, kao što su nespecifična adsorpcija proteina i peptida na površine reakcionih epruveta, neefikasna kinetika probave, potreba za čišćenjem i izazovi s dostavom. Naša grupa je nedavno izvijestila o metodi skoro jednoćelijske proteomike (nscProteomics) u HeLa ćelijama, koja pruža visoko inovativnu i osjetljivu tehnologiju za mjerenje proteoma uzoraka s podnanogramskim količinama proteina iz malog broja ćelija (10). Ova metoda zahtijeva visoko prilagođenu opremu za obradu uzoraka i teško je prenijeti u druge istraživačke laboratorije u trenutnom stanju razvoja. Processing humanbubregtkiva kroz ovaj cevovod zahtevala su veliku pažnju na razvoj protokola kako bi se optimizovalo očuvanje tkiva i hvatanje ćelija.

U ovoj studiji, fokusirali smo se na pružanje mape puta za uspješno mjerenje proteomskog ispitivanja različitih pod-kompartmanabubreg, na nivou gotovo jedne ćelije, sa sljedećim rezultatima: (i) Procjena optimalnog prikupljanja i skladištenja bubrežnog tkiva za nscProteomics; (ii) Identifikacija odgovarajućeg referentnog standarda za nscProteomiku; (iii) Optimizacija debljine bubrežnog tkiva za mikrodisekciju laserskog hvatanja (LCM); (iv) Optimizacija LCM parametara; (v) Opis metode nscProteomics koristeći potpuno automatizovanu mikro POTS metodu zasnovanu na LC-MS (μPOTS; obrada u jednom loncu za uzorke u tragovima) (11); (vi) Analitika podataka za nscProteomics.

Za postizanje navedenih zadataka obradili smo 11 jedinstvenih ljudibubregbiopsije i razvijeni protokoli i metodologije za prikupljanje, obradu i ispitivanje proteomske ekspresije ljudibubreguzorci od μPOTS. U kombinaciji sa visoko osjetljivim LC-MS, pokazujemo potpuno automatiziranu μPOTS metodu koja omogućava reproducibilnost i pruža kvantitativna proteomska mjerenja ~3,000 proteina od 10 do 100 mikro-diseciranih (LCM) ćelija bubrega, a nivo pokrivenosti koji je ranije postignut samo za hiljade ćelija (12–17). Ova studija će pomoći u molekularnoj karakterizaciji ćelijske heterogenosti i patologije tkiva u biopsijama bubrega pacijenata s različitim uzrocima akutne i kronične bolesti bubrega. Ova jedinstvena tehnologija ima potencijal da otkrije proteomsku heterogenost i jedinstvene proteinske markere u različitimbubregpodtipovi i podstrukture bolesti koje će korelirati s patogenezom bolesti, prognozom i stratifikacijom rizika. Studija je sažeta na slici 1.

Slika 1. Radni tok proteomike skoro jedne ćelije (nscProteomics) optimizovan je za obradu ljudskihbubregmaramice. Tok rada uključuje identifikaciju optimalnogbubregprikupljanje i skladištenje tkiva, kontrola kvaliteta za mikrodisekciju laserskog hvatanja, uspostavljanje nscProteomics metode za ćelije bubrega.

Eksperimentalne procedure

Dizajn studija

Šematski prikaz proteomskih studija sprovedenih na 11 jedinstvenih ljudskih normalnihbubrezije prikazano na slici 2A. Izvedeno je ukupno 28 testova masene spektrometrije (MS) za bulk i lasersko hvatanje mikro-disekovane (LCM) nscProteomike na uparenim glomerularnim (Glom) i proksimalnim zavijenim tubularnim (PT) sekcijama. Tkiva iz prva dvabubrezisu sačuvani kao FFPE i u mediju optimalne temperature rezanja (OCT). Problemi bubrežnog tkiva iz još 9 bubrega obrađeni su samo u OCT (Slika 2A).

Slika 2. (A) Sažetak uzoraka i testova studije. (B) QC dijagram za ponovljivost procesa pomoću OCT tkiva. Razlike u spektralnom broju proteina za 2 odvojena ciklusa koristeći OCT tkivo su ucrtane u odnosu na prosječan spektralni broj proteina za 1257 proteina. U zapletu, plava linija prikazuje srednju razliku; crvena i zelena linija prikazuju 2 SD i 3 SD granice. 97,96 posto proteina je unutar izračunate granice reproduktivnosti od 13,52 što ukazuje na visok stepen reproduktivnosti. Također se vidi da je varijabilnost procesa koji uključuje OCT tkivo među ciklusima niža od varijabilnosti procesa koji uključuje FFPE tkivo (izračunata granica reproduktivnosti: 24,43). (C) Poređenje distribucije spektralnog broja 374 uobičajena proteina u OCT i FFPE. Veći broj proteina iz OCT tkiva pokazuje visok spektralni broj, dok se veća prevlast niskog spektralnog broja vidi za proteine ​​iz FFPE tkiva. (D) Poređenje distribucije spektralnog broja 76 jedinstvenih proteina u FFPE i 244 jedinstvena proteina u OCT. Veća prevlast proteina niskog spektra uočena je u OCT tkivu. Ovo može ukazivati ​​da je tehnika OCT tkiva bolja za detekciju proteina sa malom količinom proteina u trenutnom scenariju. Koeficijent korelacije između proteina identifikovanih iz 2 OCT zamrznutih tkiva bio je 0.96 (P <>

Uzimanje uzoraka bubrežnog tkiva

Čovjektkiva bubregaprikupljeno je iz ukupno 11 deidentificiranih parcijalnih nefrektomija, dobijenih sa Kalifornijskog univerziteta u San Francisku (UCSF) i Univerziteta u Michiganu (UM), s odobrenim IRB-om, kao dio pilot studije izvodljivosti tehnologije u NIH Kidney Precision Medicine Projekat (KPMP). Samo zdravo područjebubregkako je odredio obučeni patolog, korišteno je u tu svrhu. Uzorci su anonimizirani uz jedino upozorenje da su tkiva sakupljena od odraslih. Da bi se procijenio optimalni protokol za prikupljanje uzoraka za tehnologiju, u početku je ~100 mg tkiva iz 2 bubrega podijeljeno jednako i pripremljeno kao formalinom fiksirani parafinski delovi (FFPE) tkiva ili je zamrznuto u Tissue-Plus™ OCT spoj (Fisher Scientific). Jedan uzastopni presek debljine 5 μm i tri 10 μm debljine su izrezani iz svakog OCT bloka sa kriomikrotomom i montirani na 1,0 polietilen tereftalat (PET) membranske pločice (Zeiss) za glomerularne iproksimalni tubuldisekcija. Presjek debljine 5 μm obojen je H&E za vizualizaciju glavnih histoloških struktura. Preostali delovi debljine 10 μm ostavljeni su neobojeni. Svi predmeti su čuvani na -80 stepeni do disekcije.

Cistanche za poboljšanje disfunkcije bubrega

Procjena uticaja transporta i obrade tkiva na proteomski izlaz

Za procjenu utjecaja kašnjenja na proteomsku analizu OCT zamrznutog tkiva,bubregtissue samples were collected at one center, shipped to a second site >Putuje 4 h, a obrađuje se u drugom centru i obrnuto. Bulk proteomika je obavljena na dva 2 jedinstvenabubrezi(bubreg #3, #4), nabavljen na Univerzitetu u Mičigenu, i poslat na 2 različite lokacije (Sveučilište Ohio State i UCSF) za analizu MS, koristeći isti protokol i MS parametre na obje lokacije. Rezultati MS ispitivanja su zatim upoređeni između 2 lokacije.

Ekstrakcija i precipitacija proteina

Ovo je provedeno i na OCT i na FFPE metodama pripreme tkiva za odabir optimalne metode za proteomiku tkiva. OCT tkivo je isječeno na rezove debljine 10 μm pomoću kriomikrotoma. Da bi se odabrala minimalna količina tkiva potrebna za ekstrakciju proteina za MS, tri uvojka (odsječak koji se stavlja u Eppendorfovu epruvetu umjesto da se raširi na stakalcu) i 5 uvojaka smrznutog tkiva su izrezani, odmrznuti i prebačeni u epruvete za mikrocentrifugu. koji sadrži zrno od nerđajućeg čelika (Qiagen) od 5 mm, izloženo puferu za lizu ćelija sisara (uključujući rastvor benzonaze® nukleaze i inhibitora proteaze; Qiagen), i homogenizovano u TissueLyser LT (Qiagen) na 50 r/s tokom 3 min. Koncentracija proteina je kvantifikovana (Bradfordov test; Thermo Scientific) i čuvana na -20 stepeni do upotrebe. Tkivo pohranjeno za<2 months="" in="" ffpe="" was="" sectioned="" into="" ten="" 10="" μm="" thick="" sections="" using="" a="" microtome.="" three="" and="" five="" curls="" of="" tissue="" were="" cut,="" deparaffinized="" in="" xylene,="" centrifuged,="" and="" incubated="" in="" extraction="" buffer="" exb1="" (qiagen)="" supplemented="" with="" β-mercaptoethanol.="" samples="" were="" incubated="" on="" ice,="" followed="" by="" incubation="" at="" 80°c="" for="" 2="" h.="" protein="" was="" quantified="" (bradford="" assay;="" thermoscientific)="" and="" stored="" at="" −20°c="" until="" further="" use.="" protein="" was="" precipitated="" by="" the="" addition="" of="" cold="" acetone,="" followed="" by="" centrifugation="" to="" pellet="" and="" dry="" the="" precipitated="" protein.="" the="" pellet="" was="" re-suspended="" in="" 6="" m="" urea/100="" mm="" tris-hcl="" ph="" 7.8,="" and="" protein="" concentration="" was="" quantified="" (bradford="" assay;="" thermoscientific)="" and="" stored="" at="" −20°c="" until="" trypsin="">

Probava tripsina

Otprilike 150 ug ukupnog proteina (~15 posto dostupnog ulaza) bilo je izloženo redukcijskim agensima (200 mM DTT i 100 mM Tris-HCl) i alkilirajućim reagensima (200 mM jodoacetamida i 100 mM Tris-HCl) a zatim razrijeđen vodom bez RNK-aze/DNK-aze da se smanji koncentracija uree na 0,6 M. Četiri ug svinjskog tripsina (Sigma) je dodano i uzorak je digestiran na 37 stepeni. Koncentracija proteina je kvantificirana (Bradfordov test; ThermoScientific) i 10 ug proteina je korišteno za MS.

MS za masovnu proteomiku za procjenu optimalne metode obrade bubrežnog tkiva

Smjesa triptičnih peptida je zakiseljena mravljom kiselinom, očišćena C18 Monospin kolonama i analizirana na Orbitrap Q Exactive HF-X (Thermo Scientific). MS/MS je izveden korištenjem Higher-Energy C-Trap Dissociation (HCD). Maseni spektri su analizirani korišćenjem Byonic v2.14.27 (Protein Metrics) dozvoljavajući tolerancije mase od 12 ppm. Dozvoljene su promjenjive posttranslacijske modifikacije, uključujući oksidaciju, metilaciju, karbamilaciju i fosforilaciju. Proteini su bili ograničeni na one koji su postigli bolji rezultat od stope lažnog otkrivanja od 1 posto (FDR). Napravljena su poređenja količine proteina i MS podataka kako bi se odabrala optimalna metoda zabubregprikupljanje tkiva između FFPE i OCT.

Mikrodisekcija laserskog snimanja

Neobojeni preseci debljine 5, 10 i 20 μM montirani na PET stakalca postavljeni su na binu Zeiss PALM MicroBeam laserskog mikrodisekcionog sistema (Zeiss) radi testiranja optimalne debljine rezanja. Glomerularna iproksimalni tubulregije su odabrane korištenjem alata za ruke, a disekcije su izvedene na 10X objektivu. Uhvaćeni su preseci površine od ~4.580 μm2 i debljine 10 uM, što je činilo ~40 glomerularnih ćelija na osnovu prethodno objavljene formule za procenu glomerularnih ćelija kod zdrave odrasle osobe.bubreg(18). Zaproksimalni tubularnićelija, uhvatili smo ~2.900 μm2proksimalni tubularnićelija, što je činilo ~36 ćelija. Isečeni delovi su katapultirani u 200 μL neprozirne lepljive kapice (Zeiss) (LPC Energy, 66; LPC Focus, 79) i čuvani na -80 stepeni.

Proteomika skoro jedne ćelije (nscProteomika)

Za solubilizaciju proteina sakupljenih u kapicama za hvatanje sa LCM, 10 μL kapljica 0,1 posto DDM 50 mM Tris pH 8 je dodana direktno u kapicu. Uzorci su inkubirani 30 minuta na 37 stepeni u Eppendorf ThermoTop termomikseru da bi se smanjilo isparavanje, nakon čega je uslijedilo centrifugiranje na 2,000 × g 1 min kako bi se lizat prenio u bočicu. Proteini su redukovani sa 5 mM ditiotreitola i inkubirani na 37 stepeni 30 min. Alkilacija je izvedena na 10 mM jodoacetamida uz 45 min inkubacije u mraku na 25 stepeni. Zatim je dodan alikvot od 10 ng Ls-C nakon čega je uslijedila inkubacija od 3 sata na 25 stepeni. Zatim je dodan alikvot od 10 ng tripsina, nakon čega je uslijedila digestija preko noći na 25 stepeni. Digestivni peptidi su pomešani sa alikvotom od 15 μL vode od 18 MΩ.

LC-MS platforma za ultra-male uzorke

Uzorci peptida (25 μL) su odvojeni pomoću kolone od 60 cm, sa unutrašnjim prečnikom od 50 μm i integrisanim emiterom (New Objective). Kolone su pakirane interno sa Waters BEH medijumom prečnika 1,7 μm. 100-min gradijent je proizveden korištenjem Dionex Ultimate 3000 RSLC nano pumpe (Thermo Scientific). Ovaj sistem je povezan sa QExactive Plus masenim spektrometrom (Thermo Scientific). Maseni spektri su prikupljeni od 300 do 1.800 m/z, koristeći top 12 metoda akvizicije ovisno o podacima. MS1 spektri su prikupljeni sa masenom rezolucijom od 35K, a MS2 sa 17,5K. Maksimalni IT od 100 ms korišten je za povećanje identifikacije od jona niske zastupljenosti.

Ekstrakcija proteomskih podataka

Svi neobrađeni fajlovi su obrađeni korišćenjem MaxQuant-a (verzija 1.5.3.30) za detekciju karakteristika, pretraživanje baze podataka i kvantifikaciju proteina/peptida (19) prema prethodno opisanim podešavanjima (10). Tandem maseni spektri su pretraženi u UniProtKB/Swiss-Prot bazi podataka ljudi (preuzeto 29. decembra 2018. i koja sadrži 20.417 pregledanih unosa). Podaci MS proteomike za nscProteomics deponovani su u Konzorcijum ProteomeXchange preko PRIDE (20) partnerskog spremišta sa identifikatorom skupa podataka PXD015058 i 10.6019/PXD015058.

Analiza podataka

MS podaci su dobijeni iz testova izvedenih na PNNL (nscProteomics) i Univerzitetu Stanford (bulk proteomics). Za masovnu proteomiku. Za odabir optimalnog korištene su sljedeće statističke metodebubregmetoda prikupljanja tkiva, bilo zamrznuto u OCT ili obrađeno kao FFPE, kako je procijenjeno kvantitativnom proteomikom mase tkiva, (i) izračunat je prinos proteina/mg ekvivalentnog ulaznog tkiva; (ii) Reproducibilnost MS testirana je na MS izlazu iz FFPE i OCT sekcija iz svakog od 2 bubrega, koje je pripremila ista osoba koristeći isti protokol, analizirana na istom MS instrumentu korištenjem postavljenog protokola, u razmaku od nekoliko dana (21). Granica reproducibilnosti (22) je korištena da se obezbijedi približna granica mjernih razlika između uzastopnih ciklusa jednog procesa, kao i procjena preciznosti za poređenje između procesa. Izračunat je koeficijent korelacije, koji je dao stepen slaganja između uzastopnih serija (koristeći isto tkivo); (iii) Obilje proteina i distribucija veličine peptidnih fragmenata izračunati su kako bi se procijenile varijacije koje potiču od degradacije proteina, umrežavanja zbog formalina, itd. Ostali aspekti QC-a, uključuju (iv) procjenu pomaka procesa u ponavljanjima i vremenu korištenjem zajedničkog skupabubregreferenca i (v) izračunavanje pristrasnosti. Stroga kvantitativna analiza i identifikacija jedinstvenih proteina koristila je podatke samo sa proteinima sa spektralnim brojem većim ili jednakim 5 (23). Fisherov egzaktni test je korišten za procjenu obogaćivanja uobičajenih i jedinstvenih proteina mapiranih između dva normalna ljudska bubrega (#1 i #2). Na osnovu gornje analize (vidi rezultate), OCT zamrznuto tkivo je odabrano kao metoda prikupljanja za sve naredne analize.

Sljedeći korak fokusa analize podataka bio je identifikacija, kvantifikacija i validacija proteinskih skupova obogaćenih ili specifičnih za ~10-100 ćelija dobijenih iz svake od dvije odabranebubregpod-kompartmenti—Glom i PT regioni, dobijeni iz istihbubreg, na veliko i LCM od OCT zamrznutobubrežnog tkiva(n=9; bubrezi #3–11) i pokreće nscProteomics.

{{0}}pristup polukonzervativnog filtriranja koraka je usvojen za rješavanje problema nedostajućih/nepotpunih podataka, a G-test (24) je korišten za identifikaciju da li podaci nedostaju nasumično (MAR) ili Missing Not At Random (MNAR). Dodatna procjena pouzdanosti podataka urađena je strogim odabirom proteina uočenih u više od ili jednako 50 posto svih uzoraka. T-test je korišten za identifikaciju značajnog obogaćivanja proteina u glomingu ili PT i primijenjena je korekcija višestrukog testiranja (Benjamini-Hochberg FDR) sa pragom značajnosti od 0,1. Za potrebe analize, podaci o relativnom intenzitetu MS (log 2 transformirani) dobiveni iz Glom, PT i masnih frakcija iz jednogbubregsmatralo se da su upareni. Identifikovali smo proteine ​​obogaćene Glomom (sa niskim nivoom u PT/bulk), a jedinstvene za Glom (odsutne u PT), kao i proteine ​​obogaćene PT (sa niskim nivoom u Glom/bulk) i jedinstvene za PT (odsutne u Glomu) . Analiza obogaćivanja rađena je samo na podacima bez nedostajućih vrijednosti u svakoj grupi kako bi se povećalo povjerenje. Korelacija između vrijednosti obilja uobičajenih proteina korištena je za procjenu stepena slaganja između obogaćenih proteina pod-kompartmenta između odvojenih serija istog eksperimenta. Također smo izvršili unakrsnu validaciju značajno obogaćenih proteina u svakom odjeljku raščlanjivanjem ovih poređenja iz jedinstvenih skupova uzoraka između 2 različita ciklusa, Run 1 i Run 2. Biološku validaciju za obogaćene pod-kompartment (Glom i PT) skupove proteina je preduzeo ispitivanje da li se poznati proteini obogaćeni pod-kompartmentima mogu lokalizirati natrag u njihove specifične regije u javnim podacima iz Atlasa ljudskih proteina (https://www.proteinatlas.org/) (25).

Cistanche za simptome zatajenja bubrega

Cross-Omics poređenje/integracija podataka

Da bi se procijenila podudarnost ekspresije proteina na nivou RNK, korišteni su podaci generirani jednoćelijskim RNA sekvenciranjem (scRNA Seq) izvršenim na 10 nativnih nefrektomija, od kojih se 9 preklapalo sabubrezikoristi se u nscProteomics. Za ovo je korišćena 10x Genomics Chromium platforma sa v3 hemijom korišćenjem metode optimizovane u laboratoriji Sarwal kao mesto za ispitivanje tkiva (TIS) KPMP konzorcijuma (rukopis sa detaljima o metodi i rezultatima je u pripremi). Za ovu unakrsnu analizu koristili smo transkriptomske podatke od 45.411bubregćelije razdvojene u devet glavnih tipova ćelija: podociti, mezangijalne ćelije, glomerularni endotel, stroma/intersticij, imune ćelije,proksimalni tubul, debeli uzlazni ekstremitet Henleove petlje, distalni/vezni tubul i sabirni kanal. Analiza jednoćelijskih podataka urađena je korištenjem paketa Seurat R verzija 2.3.4. Detaljnija analiza ovih podataka je u razvoju (26).

Od: 'Near-Single-Cel Proteomics Profiling of theProksimalni tubularniiGlomerulusnormalnog čovjekaBubreg' autora Tara K. Sigdel1, Paul D. Piehowski2, Sudeshna Roy1, Juliane Liberto1, Joshua R. Hansen2, Adam C. Swensen2, Rui Zhao3, Ying Zhu3, Priyanka Rashmi1, Andrew Schroeder1, Izabella Damm1, Yinghustika Sur1, Swastika Sur1, Jing Yang4, Wei-Jun Qian2* i Minnie M. Sarwal1* zaBubregKonzorcij projekta precizne medicine (KPMP).

---ORIGINALNI ISTRAŽIVAČKI članak Front. med., 17. rujna 2020. |