Izoastilbin inhibira neuronsku apoptozu i oksidativni stres u Arat modelu ishemijsko-reperfuzijske ozljede u mozgu: uključenost SIRT1/3/6

Za više informacija e-mailtina.xiang@wecistanche.com

Abstract

Pozadina.Pokazalo se da ima izoastilbin (IAB).antioksidativnoi anti-apoptotičke funkcije. Nedavna studija je pokazala da IAB može smanjitioksidativnostres kod Alchajmerove bolesti. Međutim, ostaje nepoznato da li je antioksidativna funkcija IAB zaštitna i kod drugih moždanih bolesti.
Ciljevi.Istražiti uloge i osnovne mehanizme IAB-a u reperfuziji okluzije srednje cerebralne arterije (MCAO/R) kod pacova.
Materijali i metode.Mužjaci Wistar pacova su nasumično podijeljeni u 5 grupa: lažna grupa, MCAO/R grupa i 3 MCAO/R grupe kojima je davan IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg ili 80 mg/kg) jednom dnevno tokom 3 dana. Veličina infarkta, modificirana neurološka ocjena ozbiljnosti (mNSS),oksidativnostresmarkeri i markeri neuronske apoptoze korišteni su za ispitivanje funkcije IAB.
Rezultati.U poređenju sa MCAO/R grupom, davanje IAB je smanjilo veličinu infarkta i mNSS rezultate kod MCAO/R pacova. Izoastilbin je takođe smanjio nivo malondialdehida (MDA) i pojačao aktivnost katalaze (CAT), superoksid dismutaze (SOD) i glutation peroksidaze (GSH-PX). Tretman izoastilbinom je oslabio MCAO/R-inducirani neuronapoptozau poređenju sa MCAO/R grupom, kao što pokazuju rezultati X-dUTP nick-end (TUNEL) i western blot testova posredovanih terminalnom deoksinukleotid transferazom. Izoastilbin je takođe preokrenuo MCAO/R-indukovanu smanjenje ekspresije proteina SIRT1/3/6.
Zaključci.Ova zapažanja sugeriraju da IAB štiti odoksidativnostres i neuronska apoptoza kod pacova nakon ozljede cerebralne ishemije-reperfuzije (I/R) kroz regulaciju SIRT1/3/6, što ukazuje da bi IAB mogao biti obećavajući terapeutski agens za cerebralnu I/R ozljedu.
Ključne riječi:apoptoza, oksidativni stres, izoastilbin, fokalna cerebralna ishemija-reperfuzijska povreda

Pozadina

Ishemijski i hemoragijski moždani udar su među vodećim uzrocima invaliditeta i smrti u cijelom svijetu.1,2Ishemijski moždani udar uzrokovan je opstrukcijama u krvnim žilama, čime se ciljni organi izlažu riziku od smrti ćelije.3Iako je najefikasniji tretman za cerebralnu ishemiju brzo obnoviti opskrbu krvlju, trombolitička terapija može povećati veličinu infarkta i pogoršati ishemijsko-reperfuzijsku (I/R) ozljedu u mozgu.1,4 Stoga postoji hitna potreba za razvojem novih lijekova za liječenje cerebralne I/R ozljede.

Ishemijsko-reperfuzijska ozljeda u mozgu uključuje složenu patofiziologiju, uključujući pojavuoksidativnostres, apoptoza i smanjenje adenozin trifosfata (ATP), a sve to može dovesti do povrede neurona.5 Reaktivne vrste kiseonika (ROS) se proizvode tokom ishemije, što dovodi do neuronskeapoptozai neurološka disfunkcija.6 Konkretno, NADPH oksidaze stvaraju ROS tokom I/R ozljede, što uzrokujeoksidativnostres. Ovaj stres je obilježen povećanom peroksidacijom lipida, smanjenom aktivnošću katalaze (CAT) i superoksid dismutaze (SOD), te smanjenim nivoom glutationa (GSH).7–11 Visoki nivoi ROS ioksidativnostresće, zauzvrat, pokrenuti ćelijsku smrt kroz mitohondrijski apoptotski put nakon cerebralne I/R ozljede.12 Prijelazne pore mitohondrijalne permeabilnosti mogu se otvoriti kao posljedica suvišne akumulacije ROS, što rezultira nižim mitohondrijskim transmembranskim potencijalom i povećanom proizvodnjom aktivatora kaspaze kao što je kao citokrom c, koji na kraju pokreće kaskadu kaspaze i dovodi do smrti ćelije.12 Geng et al. sugerirali su da je apoptoza neuronskih stanica barem djelomično posredovana putem mitohondrijske apoptoze kod cerebralne I/R ozljede.13 Posljedično, inhibicija ili preokret oksidativnog stresa i neuronske apoptoze obećavaju nove metode za ublažavanje cerebralne I/R ozljede.

Da bismo istražili mehanizam putem kojeg IAB ublažava oštećenja izazvana I/R, fokusirali smo se na SIRT signalnu kaskadu. Nedavne studije su pokazale zaštitnu ulogu SIRT1/3/6 u raznim bolestima, uključujući neuralnu degeneraciju u mozgu, upalu krvnih sudova i nakupljanje masti u tijelu. Zaista, otkrili smo da IAB tretman povećava nivo ekspresije SIRT tokom I/R ozljede, što ukazuje na to da IAB može zaštititi od stanicaapoptozaregulacijom SIRT ekspresije. Uzeti zajedno, naši rezultati sugeriraju da je IAB potencijalno koristan tretman za kliničku cerebralnu I/R ozljedu.

Ciljevi

Naš opći cilj bio je ispitati efekte i osnovne mehanizme IAB kod I/R ozljede korištenjem MCAO/R životinjskog modela.

materijali i metode

Životinje

Mužjaci Wistar pacova nabavljeni su od Shanghai Laboratory Animal Company (Šangaj, Kina). Pacovi starosti 60-90 dana sa normalnom tjelesnom težinom (200-250 g) hranjeni su ad libitum hranom i vodom i održavani su u stalnom okruženju (25 ±2 stepena, 40 ±10 posto relativne vlažnosti i 12 h svjetlo/mrak ciklus) . Sa životinjama se postupalo u skladu sa smjernicama za njegu i korištenje laboratorijskih životinja Jiamusi College, Heilongjiang Univerzitet tradicionalne kineske medicine, Kina. Institucionalni komitet za brigu o životinjama i upotrebu Jiamusi koledža, Univerziteta kineske medicine Heilongjiang odobrio je postupke na životinjama (odobrenje br. 20190815).

Uspostavljanje MCAO/R ozljede i IAB tretman

Toksičnost IAB je određena kako je prethodno opisano.15 Izoastilbin (Chengdu Purechem-Standard Co., Ltd., Chengdu, Kina) je razrijeđen do konačne koncentracije od 20 mg/kg, 40 mg/kg i 80 mg/kg u fosfatu -puferirani rastvor (PBS). Životinje su randomizirane u 5 grupa: 1. lažne; 2. MCAO/R; 3. MCAO/R praćeno 20 mg/kg IAB; 4. MCAO/R praćeno 40 mg/kg IAB; i 5. MCAO/R nakon čega slijedi 80 mg/kg IAB.

Pacovi su anestezirani upotrebom intraperitonealne (ip.) injekcije 50 mg/kg natrijum pentobarbitala (Sinopharm Chemical Reagent, Peking, Kina). Da bismo uveli MCAO/R, izložili smo karotidne arterije, odnosno eksternu karotidnu arteriju (ECA), desnu zajedničku karotidnu arteriju (CCA) i unutrašnju karotidnu arteriju (ICA). ECA i CCA su proksimalno ligirane. ICA je ligirana pomoću monofilamentnog šava od 0,285 mm, umetnutog u lumen ICA na oko 18 mm kroz ECA panj da bi se opstruirala srednja cerebralna arterija (MCA). LaserDopler (USCN KIT INC., Wuhan, Kina) je korišten da se potvrdi da je protok krvi smanjen na manje od 20 posto normalnog nivoa. Lažna grupa je podvrgnuta istoj operaciji; međutim, arterije nisu bile vezane. Nakon 2 h okluzije, podvezane arterije su reperfuzirane i pacovima je zatim davan IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg ili 80 mg/kg) ili PBS dnevno tokom 3 uzastopna dana. Na kraju, 72 h nakon MCAO/R, procijenjen je neurološki kapacitet pacova.

Procjena volumena infarkta mozga štakora

Nakon IAB tretmana, mozgovi su brzo izmjereni kako bi se izmjerila njihova mokra težina. Nakon toga, mozgovi su dehidrirani na 100 stepeni tokom 24 sata da bi se procenila njihova suva težina. Koncentracija vode u mozgu izračunata je kao: ((mokra težina ‒ suha težina)/mokra težina) × 100 posto.

Modificirani rezultat neurološke ozbiljnosti (mNSS)

Senzorne, motoričke, ravnotežne i refleksne neurološke funkcije procijenjene su 72 h nakon operacije MCAO pomoću mNSS.17 Ozbiljnost neuroloških deficita rangirana je na skali od 0 do 10, s višim rezultatom koji ukazuje na teže oštećenje nervni sistem.

Mjerenje superoksid dismutaze (SOD), malondialdehida (MDA), katalaze (CAT) i glutation peroksidaze (GSH-PX)

Nakon IAB tretmana određen je sadržaj proteina iz moždanog tkiva. Koncentracija proteina kortikalnih homogenata određena je korištenjem BCA kompleta (Beyotime, Šangaj, Kina). SOD, MDA, CAT i GSH-PX su detektovani korišćenjem odgovarajućih kompleta (kataloški br. A003-1, A001-3, A007 i A005; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina). Ukratko, sakupljen je supernatant kortikalnog homogenata. Za SOD, uzorci su inkubirani sa WST-8/radnim rastvorom enzima na 37 stepeni tokom 30 minuta. Apsorpcija je mjerena na talasnoj dužini od 450 nm. Jedna jedinica enzimske aktivnosti SOD (U) je definirana kao količina uzorka potrebna za postizanje stope inhibicije od 50 posto WST{10}} formazan boje. Za MDA, uzorci su pomešani sa radnim rastvorom i zatim zagrevani na 100 stepeni 15 min. Apsorpcija supernatanta je mjerena na talasnoj dužini od 532 nm. Za CAT, uzorci su pomiješani sa CAT detekcionim puferom i rastvorom vodonik peroksida i zatim inkubirani na 25 stepeni 5 minuta. Apsorpcija je detektovana na talasnoj dužini od 520 nm. Za GSH-PX, uzorci su mešani sa GSH na 37 stepeni tokom 5 minuta. Apsorpcija supernatanta je mjerena na talasnoj dužini od 412 nm. Jedna jedinica (U) enzimske aktivnosti definirana je kao količina GSH-PX u 1 mg proteina koja je katalizirala potrošnju 1 μmol/L GSH uz oduzimanje efekta neenzimske reakcije.

Terminalno bojenje deoksinukleotidil transferaze dUTP nick end labeling (TUNEL)

Tkiva mozga ipsilateralne hemisfere su izolovana, fiksirana u 4 posto paraformaldehida i ugrađena u parafin. Tkiva su zatim izrezana na 5- μm kriške i antigen je izložen nakon 10 minuta mikrotalasnog grijanja u citratnom puferu. Neuronska apoptoza je procijenjena korištenjem TUNEL testa (In Situ Cell Death Detection Kit; Roche, Penzberg, Njemačka), prema uputama proizvođača. Ukratko, kriške mozga su stavljene u ledeno hladan 4-postotni paraformaldehid na 30 minuta, a zatim su inkubirane u mraku sa TUNEL reakcijskom smjesom na 37 stupnjeva 1 h. Nakon toga, jezgra su obojena 6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI; Sigma-Aldrich). Uzorci su snimljeni i indeks apoptoze je izračunat kao broj TUNEL-pozitivnih ćelija podijeljen sa ukupnim brojem ćelija.

Western blot

Tkiva mozga pacova su lizirana pomoću pufera radio-imunoprecipitacije (RIPA) (Beyotime, Dalian, Kina). Proteini su podvrgnuti elektroforezi na 12-15% natrijum dodecil sulfat-poliakrilamidnom gelu (SDS-PAGE), a zatim prebačeni na membrane od poliviniliden fluorida (PVDF) (Millipore, Billerica, SAD). Membrane su blokirane korištenjem 5 posto bezmasnog mlijeka i inkubirane su s primarnim antitijelima na 4 stepena preko noći. Sekundarna antitijela konjugirana s peroksidazom hrena (HRP) su potom inkubirana na sobnoj temperaturi 2 h. Specifični signali obeleženih proteina detektovani su pomoću hemiluminiscencionog sistema. -aktin je korišten za normalizaciju nivoa ekspresije proteina Bcl-2, Baxa i Sirtuina (SIRT1/3/6). Slike su analizirane pomoću softvera ImageJ.

Statističke analize

Podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD) iz 3 nezavisna eksperimenta. Potvrđeno je da podaci iz svake grupe prate normalnu distribuciju koristeći Shapiro-Wilkov test. Razlike između grupa analizirane su jednosmjernom analizom varijanse (ANOVA), nakon čega je uslijedio Tukeyjev post hoc test korištenjem Prism v. 8 softvera (GraphPad Software, San Diego, SAD). Vrijednost p< 0.05 indicated="" statistical="" significance.="" a post="" hoc="" power="" analysis="" was="" performed="" using="" g*power="" 3.1.9.7="" software="" (heinrich="" heine="" university,="" düsseldorf,="">

Rezultati

Izoastilbin štiti neurone od MCAO/R-induciranih ozljeda

Da bi se istražilo jesu li IAB zaštićeni neuroni podvrgnuti cerebralnom I/R, analizirana je koncentracija vode u mozgu i volumen infarkta. Kod kontrolnih životinja nije bilo infarkta i koncentracija vode je bila relativno niska (slika 1B,C; lažna grupa). Nakon MCAO/R operacije, uočili smo značajno povećanje veličine infarkta i koncentracije vode (slika 1B, C). Infarkt i ishemijski edem ukazuju na to da je naš pristup uspješno generirao I/R model kod pacova. Zanimljivo, kada smo odmah nakon ozljede primijenili različite koncentracije IAB-a (20 mg/kg, 40 mg/kg i 80 mg/kg), uočili smo oporavak infarkta i ishemijskog cerebralnog edema ovisno o dozi (slika 1B,C). Ovaj rezultat sugerira da IAB štiti od oštećenja mozga izazvanog ishemijom. Zatim smo pregledali ćelijuapoptozakoristeći mNSS test. Kao što je prikazano na slici 1D, lažno operisani pacovi nisu pokazali očigledne neurološke deficite, dok su MCAO/R pacovi pokazali značajno povećane mNSS rezultate. U skladu sa morfološkim promjenama prikazanim na slikama 1B i 1C, IAB tretman značajno je smanjio mNSS skor MCAO/R pacova (slika 1D). Uzeti zajedno, ovi rezultati pružaju dokaz da IAB ima neuroprotektivnu funkciju u Vivo modelu cerebralne I/R ozljede glodara. S obzirom da je veća koncentracija IAB-a imala bolje zaštitne efekte bez očiglednih nuspojava, koristili smo 80 mg/kg za sljedeće eksperimente.

Izoastilbin ublažava oksidativni stres kod MCAO/R pacova

Procijeniti uticaj IAB-a naoksidativni stres, nivoi GHS-PX, MDA, SOD i CAT su procijenjeni nakon IAB tretmana. Zbog povećanja oksidativnog stresa, pacovi podvrgnuti MCAO/R imali su više razine MDA u poređenju sa lažnim pacovima. Ovaj efekat je oslabljen IAB tretmanom (slika 2A). Nadalje, nivoi CAT, SOD i GHS-PX smanjeni su kod MCAO/R pacova u poređenju sa lažnim pacovima (Slika 2B, D). Tretman IAB je povisio nivoe CAT, SOD i GHS-PX kod MCAO/R pacova (slika 2B, D), što sugerira da je IAB zaštitio od cerebralne I/R ozljede smanjenjem oksidativnog stresa.

Izoastilbin inhibira neuronsku apoptozu kod MCAO/R pacova

Zatim smo koristili TUNEL test za procjenu neuronaapoptozanakon cerebralne I/R ozljede. Kao što je prikazano na slici 3A, postojao je povećan broj TUNEL-pozitivnih ćelija kod MCAO/R pacova, koji je smanjen IAB tretmanom (slika 3A). Da bismo istražili osnovne mehanizme IAB zaštite, ispitali smo ekspresiju proteina apoptoze Bax i Bcl-2 koristeći Western blot. Kod štakora podvrgnutih MCAO/R, ekspresija Baxa (pro-apoptotički marker) je povećana, dok je ekspresija Bcl-2 (anti-apoptotički marker) smanjena, u poređenju sa lažnom grupom (Slika 3B, C ). Međutim, IAB tretman je spriječio promjene izazvane MCAO/R (Slika 3B, C). Ovi rezultati sugeriraju da je IAB inhibirao neuronsku apoptozu kod MCAO/R pacova.

Izoastilbin pojačava SIRT ekspresiju

Zatim smo pokušali ispitati kako IAB štiti neurone odoksidativni stres. Utvrđeno je da je SIRT, NAD plus-ovisna deacetilaza uglavnom lokalizirana u mitohondrijima, povezana s preživljavanjem i apoptozom stanica, metabolizmom ćelije i odgovorom na stres. SIRT može aktivirati mitohondrijalne signale i puteve kako bi promovirao proliferaciju mitohondrija i stvaranje ATP-a. Takođe sudjeluje u upali, na način da smanjenje SIRT-a dovodi do povećanja faktora kronične upale, kao što su NFκB i aktivnost RelA/p65.18–20 Zanimljivo, nekoliko studija je otkrilo da SIRT ispoljava nervni zaštitni efekat i ublažava oksidativne stres u patofiziologiji cerebralne I/R ozljede.21 Ovdje smo istraživali moždanu ekspresiju SIRT1/3/6 kod pacova podvrgnutih MCAO/R. Otkrili smo da je povreda MCAO/R smanjila nivoe proteina SIRT1/3/6, dok je IAB tretman umanjio ove efekte (sl. 4A-D). Ovi podaci sugeriraju da bi IAB mogao biti protektivan kod MCAO/R pacova tako što povećava ekspresiju SIRT1/3/6 u zaštiti od oksidativnog stresa.

Diskusija

Koncentracija ROS raste do maksimuma, što potencijalno može izazvati apoptozu ili ćelijsku nekrozu.25–28 Postoji nekoliko dobro utvrđenih markera oksidativnog stresa. Na primjer, MDA, citotoksično jedinjenje proizvedeno peroksidacijom lipida,29 povećava se u kardiomiocitima štakora nakon I/R oštećenja.30 Antioksidativni enzimi SOD, CAT i GHS-PX igraju važnu ulogu u uklanjanju superoksida i sprječavanju oksidativnog oštećenja.31, 32 Štaviše, promjene u aktivnosti ovih enzima također su povezane s oksidativnim stresom. Smanjivanje oksidativnog stresa je potencijalni način zaštite tkiva od I/R ozljeda.

Nedavna studija je pokazala da neuroprotektivni učinak IAB-a može biti posljedica modulacije oksidativnog stresa. Konkretno, studija je otkrila da IAB inhibira stvaranje ROS-a i inducira SOD i GSH-PX da poboljšaju oksidativna oštećenja kod mišjeg AD modela.15 Međutim, da li i kako IAB štiti od I/R ozljede u mozgu, još nije poznato. U ovoj studiji, pokazali smo da IAB uspješno ublažava cerebralnu I/R ozljedu smanjenjem volumena infarkta i neuroloških deficita nakon MCAO/R ozljede. Da bismo testirali da li su efekti IAB-a posljedica slabljenja ROS vrsta, izmjerili smo nekoliko markera oksidativnog stresa. Utvrđeno je da tretman izoastilbinom nakon MCAO/R smanjuje nivoe MDA, ali povećava aktivnost CAT, SOD i GSH-PX. Ovi rezultati sugeriraju da je osnovni mehanizam neuroprotekcije posredovane IAB-om od I/R ozljede kroz smanjenje oksidativnog stresa.

Zaista, cerebralni I/R može inducirati apoptozu neurona.33,34 Aktivacija pro-apoptotičkih proteina (Bax i Bak) i paralelna inaktivacija anti-apoptotičkih proteina (kao što je Bcl-2) dogodila se tokom cerebralnog I/R povreda. I Bcl-2 i Bax se nalaze u vanjskom dijelu mitohondrijalne membrane i učestvuju u modulaciji ćelijske apoptoze.35–37 Prethodne studije su pokazale da prekomjerna ekspresija Bcl-2 blokira smrt neurona in vitro i in vivo.38Erfani et al. otkrili su da je omjer Bax/Bcl{10}} povećan tokom cerebralne I/R ozljede, što je doprinijelo apoptozi neurona.39 Štaviše, povećana regulacija Baxa i smanjenje regulacije Bcl{12}} pronađeni su u mozgovima miševa koji su bili podvrgnuti MCAO/R. 40 Pored toga, otkriveno je da IAB modulira nivoe ekspresije proteina i Bcl-2 i Baxa kako bi poboljšao redoks sistem kod miševa sa AD, što ukazuje na anti-apoptotičku ulogu IAB-a u ovom stanju.15 U sadašnjem studije, pokazali smo da primjena IAB-a smanjuje I/R-indukovanu neuronsku apoptozu in vivo smanjenjem Bax i povećanjem Bcl-2. Ovi nalazi impliciraju da neuroprotektivna sposobnost IAB-a ovisi o njegovoj anti-apoptotičkoj aktivnosti kod pacova. Međutim, I/R takođe može dovesti do nekroze, koja nije posredovana oksidativnim stresom.25–28 Od velikog je interesa ispitati da li IAB takođe može da funkcioniše tako što inhibira nekrozu da bi ublažio I/R povredu.

Da bismo ispitali mehanizam putem kojeg IAB ublažava oksidativni stres, fokusirali smo se na SIRT proteine. Prethodni izvještaj je otkrio da prekomjerna ekspresija SIRT3 inhibira fisiju mitohondrija radi zaštite od cerebralne I/R ozljede. Štaviše, SIRT6 može zaštititi mozak od I/R oštećenja kroz supresiju oksidativnog stresa.2 Ovdje smo otkrili da SIRT1/3/ 6 je značajno smanjena kod MCAO/R pacova, dok je primjena IAB povećala ekspresiju SIRTl/3/6. Koliko nam je poznato, ova studija je prva koja pokazuje da IAB može povećati ekspresiju SIRT1/3/6 proteina kako bi ublažio oksidativni stres i neuronsku apoptozu izazvanu cerebralnom I/R ozljedom.

Ograničenja

Postoji mnogo različitih zaštitnih puteva protiv oksidativnog stresa. Ovdje smo pokazali da je signalni mehanizam IAB zaštite preko SIRT 1/3/6. Međutim, treba dalje razjasniti druge mehanizme protiv oksidativnog stresa ili cerebralne I/R ozljede. Tokom I/R ozljede, uključene su i apoptoza i nekroza; međutim, fokusirali smo se samo na apoptozu. Stoga će biti neophodna dalja istraživanja o ulozi IAB-a u nekrozi kako bi se u potpunosti objasnila zaštitna funkcija IAB-a tokom I/R ozljede.

Zaključci

Ovdje smo pokazali da IAB može ublažiti oksidativni stres i apoptozu neurona kod pacova podvrgnutih cerebralnom I/R. Štaviše, antioksidativni stres i anti-apoptotičke funkcije IAB-a mogu nastati kroz regulaciju ekspresije SIRT1/3/6. Uzeti zajedno, naši podaci sugeriraju da je IAB kandidat za liječenje cerebralne I/R ozljede.

ORCID iDs Lifeng An  https://orcid.org/0000-0002-4835-1817 Dandan Zhu  https://orcid.org/0000-0001-9119-9956 Xin Zhang  https://orcid.org/0000-0002-9496-1691 Jingwen Huang  https://orcid.org/0000-0001-6449-5362 Guangbao Lu https://orcid.org/0000-0002-2465-8996

Lifeng An1,B,D, Dandan Zhu2,B, Xin Zhang2,C, Jingwen Huang1,C, Guangbao Lu1,A,F

1 Jiamusi College, Univerzitet kineske medicine Heilongjiang, Kina

2 Postdiplomski fakultet, Univerzitet kineske medicine Heilongjiang, Jiamusi, Kina

A – koncept i dizajn istraživanja; B – prikupljanje i/ili prikupljanje podataka; C – analiza i interpretacija podataka;

D – pisanje članka; E – kritička revizija članka; F – konačno odobrenje članka

Reference

1. Rossi DJ, Brady JD, Mohr C. Metabolizam astrocita i signalizacija tokom ishemije mozga. Nat Neurosci. 2007;10(11):1377–1386. doi:10.1038/ nn2004
2. Ribeiro PW, Cola PC, Gatto AR, et al. Veza između disfagije, skale Nacionalnog instituta za zdravlje moždanog udara i prediktora pneumonije nakon ishemijskog moždanog udara. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2015; 24(9):2088–2094. doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.009
3. Hu X, De Silva TM, Chen J, Faraci FM. Cerebralna vaskularna bolest i neurovaskularna ozljeda kod ishemijskog moždanog udara. Circ Res. 2017;120(3):449–471. doi:10.1161/cicresaha.116.308427
4. Tabassum R, Vaibhav K, Shrivastava P, et al. Perililni alkohol poboljšava funkcionalne i histološke ishode protiv ishemijsko-reperfuzijske ozljede smanjenjem oksidativnog stresa i potiskivanjem COX-2, NOS-2 i NF-κB kod pacova okluzije srednje cerebralne arterije. Eur J Pharmacol. 2015;747:190–199. doi:10.1016/j.ejphar.2014.09.015
5. Woodruff TM, Thundyil J, Tang SC, Sobey CG, Taylor SM, Arumugam TV. Patofiziologija, liječenje i životinjski i stanični modeli ishemijskog moždanog udara kod ljudi. Mol Neurodegener. 2011;6(1):11. doi:10.1186/1750- 1326-6-11
6. Gonzalez-Rodriguez PJ, Xiong F, Li Y, Zhou J, Zhang L. Fetalna hipoksija povećava ranjivost hipoksično-ishemične povrede mozga kod novorođenih pacova: Uloga glukokortikoidnih receptora. Neurobiol Dis. 2014;65:172–179. doi:10.1016/j.nbd.2014.01.020
7. Rodrigo R, Fernández-Gajardo R, Gutiérrez R, et al. Oksidativni stres i patofiziologija ishemijskog moždanog udara: Nove terapeutske mogućnosti. CNS Neurol Disord Drug Targets.2013;12(5):698–714. doi:10.2174/ 1871527311312050015
8. Zhang C, Ling CL, Pang L, et al. Direktna makromolekularna isporuka lijeka u područje cerebralne ishemije pomoću nanočestica posredovanih neutrofilima. Theranostics. 2017;7(13):3260–3275. doi:10.7150/thno.19979
9. Kahles T, Luedike P, Endres M, et al. NADPH oksidaza igra središnju ulogu u oštećenju krvno-moždane barijere kod eksperimentalnog moždanog udara. Moždani udar. 2007;38(11):3000–3006. doi:10.1161/strokeaha.107.489765
10. Chen H, Song YS, Chan PH. Inhibicija NADPH oksidaze je neuroprotektivna nakon ishemije-reperfuzije. J Cereb Blood Flow Metab. 2009; 29(7):1262–1272. doi:10.1038/jcbfm.2009.47
11. Kapoor M, Sharma N, Sandhir R, Nehru B. Efekat inhibitora NADPH oksidaze apocinina na ishemijsko-reperfuzijsku povredu hipokampusa u mozgu pacova. Biomed Pharmacother. 2018;97:458–472. doi:10.1016/j. biopha.2017.10.123
12. Yu S, Wang C, Cheng Q, et al. Aktivna komponenta polipeptida Achyranthes bidentata osigurava neuroprotekciju kroz inhibiciju mitohondrijalno ovisnog apoptotičkog puta u kultiviranim neuronima i na životinjskim modelima cerebralne ishemije. PLoS One. 2014; 9(10):e109923. doi:10.1371/journal.pone.0109923
13. Geng HX, Li RP, Li YG, et al. 14,15-EET potiskuje neuronsku apoptozu u ishemiji-reperfuziji kroz mitohondrijski put. Neurochem Res.2017;42(10):2841–2849. doi:10.1007/s11064-017-2297-6
14. Du Q, Li L, Jerz G. Prečišćavanje astilbina i izoastilbina u ekstraktu rizoma smilax glabra brzom protivstrujnom hromatografijom. J Chromatogr A. 2005;1077(1):98–101. doi:10.1016/j.chroma. 2005.04.072
15. Yu H, Yuan B, Chu Q, Wang C, Bi H. Zaštitne uloge izoastilbina protiv Alchajmerove bolesti putem Nrf2- posredovane antioksidacije i anti-apoptoze. Int J Mol Med.2019;43(3):1406–1416. doi:10.3892/ijmm. 2019.4058
16. Zhou X, Xu Q, Li JX, Chen T. Strukturna revizija dva flavanonol glikozida iz Smilax glabra. Planta Med. 2009;75(6):654–655. doi:10. 1055/s-0029-1185360
17. Morimoto J, Yasuhara T, Kameda M, et al. Električna stimulacija povećava sposobnost migracije transplantiranih stromalnih stanica koštane srži u modelu ishemijskog moždanog udara glodara. Cell Physiol Biochem. 2018; 46(1):57–68. doi:10.1159/000488409
18. Torrens-Mas M, Pons DG, Sastre-Serra J, Oliver J, Roca P. Utišavanje SIRT3 senzibilizira ćelije raka dojke na citotoksične tretmane kroz povećanje proizvodnje ROS. J Cell Biochem. 2017;118(2):397–406. doi:10.1002/jcb.25653
19. Nassir F, Arndt JJ, Johnson SA, Ibdah JA. Regulacija mitohondrijalnog trifunkcionalnog proteina modulira nealkoholnu masnu bolest jetre kod miševa. J Lipid Res. 2018;59(6):967–973. doi:10.1194/jlr.M080952
20. Torrens-Mas M, Hernández-López R, Oliver J, Roca P, Sastre-Serra J. Sirtuin 3 utišavanje poboljšava efikasnost oksaliplatina kroz acetilaciju MnSOD kod raka debelog crijeva. J Cell Physiol. 2018;233(8):6067–6076. doi:10.1002/jcp.26443
21. Hernández-Jiménez M, Hurtado O, Cuartero MI, et al. Regulator tihih informacija 1 štiti mozak od cerebralnog ishemijskog oštećenja. Moždani udar. 2013;44(8):2333–2337. doi:10.1161/strokeaha.113.001715
22. Chen GY, Nuñez G. Sterilna upala: otkrivanje i reagovanje na oštećenje. Nat Rev Immunol. 2010;10(12):826–837. doi:10.1038/nri2873
23. Eltzschig HK, Eckle T. Ishemija i reperfuzija: Od mehanizma do translacije. Nat Med. 2011;17(11):1391–1401. doi:10.1038/nm.2507
24. Dziedžić T. Sistemska upala kao terapijski cilj u akutnom ishemijskom moždanom udaru. Expert Rev Neurother.2015;15(5):523–531. doi:10.1586/ 14737175.2015.1035712
25. Yemisci M, Gursoy-Ozdemir Y, Vural A, Can A, Topalkara K, Dalkara T. Kontrakcija pericita izazvana oksidativno-nitrativnim stresom ometa kapilarni reflow uprkos uspješnom otvaranju okludirane cerebralne arterije. Nat Med. 2009;15(9):1031–1037. doi:10.1038/nm.2022
26. Chen H, Yoshioka H, ​​Kim GS, et al. Oksidativni stres kod ishemijskog oštećenja mozga: Mehanizmi stanične smrti i potencijalni molekularni ciljevi za neuroprotekciju. Antioksid Redox signal. 2011;14(8):1505–1517. doi:10.1089/ars.2010.3576
27. Olmez I, Ozyurt H. Reaktivne vrste kiseonika i ishemijska cerebrovaskularna bolest. Neurochem Int. 2012;60(2):208–212. doi:10.1016/j. neuint.2011.11.009
28. Guo J, Cheng C, Chen CS, et al. Prekomjerna ekspresija fibulina{1}} ublažava ishemijsku/reperfuzijsku ozljedu nakon okluzije srednje cerebralne arterije kod pacova. Mol Neurobiol. 2016;53(5):3154–3167. doi:10.1007/s12035- 015-9222-2
29. Qiang M, Xu Y, Lu Y, et al. Autofluorescencija MDA-modificiranih proteina kao in vitro i in vivo sonda u analizi oksidativnog stresa. Protein Cell. 2014;5(6):484–487. doi:10.1007/s13238-014-0052-1
30. Hou S, Zhao MM, Shen PP, et al. Neuroprotektivni učinak salvijanolne kiseline protiv cerebralne ishemije/reperfuzijske ozljede. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi:10.3390/ijms17071190
31. Adibhatla RM, Hatcher JF. Oksidacija i peroksidacija lipida u zdravlju i bolesti CNS-a: od molekularnih mehanizama do terapijskih mogućnosti. Antioksid Redox signal. 2010;12(1):125–169. doi:10.1089/ ars.2009.2668
32. Staroń A, Mąkosa G, Koter-Michalak M. Oksidativni stres u eritrocitima pacijenata sa reumatoidnim artritisom. Rheumatol Int. 2012; 32(2):331–334. doi:10.1007/s00296-010-1611-2
33. Aşcı S, Demirci S, Aşcı H, Doğuç DK, Onaran İ. Neuroprotektivni efekti pregabalina na cerebralnu ishemiju i reperfuziju. Balkan Med J. 2016;33(2):221–227. doi:10.5152/balkanmedj.2015.15742
34. Tao T, Li CL, Yang WC, et al. Zaštitni efekti propofola protiv cerebralne ishemije/reperfuzijske povrede kod pacova kroz inhibiciju puta faktora koji indukuje apoptozu. Brain Res.2016;1644: 9–14. doi:10.1016/j.brainres.2016.05.006
35. Martinou JC, Youle RJ. Mitohondrije u apoptozi: članovi porodice Bcl-2 i dinamika mitohondrija. Dev Cell. 2011;21(1):92–101. doi:10.1016/j.devcel.2011.06.017
36. Borner C, Andrews DW. Apoptotične pore na mitohondrijima: Da li se probijamo ili smo još uvijek zaglavljeni? Cell Death Differ. 2014;21(2):187–191. doi:10.1038/cdd.2013.169
37. Siddiqui WA, Ahad A, Ahsan H. Misterija porodice BCL2: Bcl-2 proteini i apoptoza. Ažuriranje. Arch Toxicol. 2015;89(3):289–317. doi:10.1007/s00204-014-1448-7
38. Maes ME, Schlamp CL, Nickells RW. BAX do osnova: Kako porodica gena BCL2 kontroliše smrt ganglijskih ćelija retine. Prog Retin Eye Res. 2017;57:1–25. doi:10.1016/j.preteyeres.2017.01.002
39. Erfani S, Khaksari M, Oryan S, Shamsaei N, Aboutaleb N, Nikbakht F. Nampt/PBEF/visfatin ispoljava neuroprotektivne efekte protiv ishemijske/reperfuzijske ozljede putem modulacije omjera Bax/Bcl-2 i prevencije kaspaze{ {2}} aktivacija. J Mol Neurosci. 2015;56(1):237–243. doi:10.1007/s12031-014-0486-1

40. Chen L, Cao J, Cao D, et al. Zaštitni efekat deksmedetomidina

protiv cerebralne ishemije/reperfuzijske povrede pogoršane dijabetičkom hiperglikemijom: In vivo i in vitro studija, Life Sdi, 2019:235:116553.doi; 10.1016/ilfs.2019116553

41. Zhao H, Luo Y, Chen L, et al. Sirt3 inhibira cerebralnu ishemiju-reperfuzijsku ozljedu kroz normalizaciju Wnt/-katenin puta i blokiranje fisije mitohondrija. Cell Stress Chaperones. 2018;23(5):1079–1092. doi:10.1007/s12192-018-0917-y

42. Zhang W, Wei R, Zhang L, Tan Y, Qian C. Sirtuin 6 štiti mozak od cerebralne ishemije/reperfuzijske ozljede putem NRF2 aktivacije. Neuroscience.2017;366:95–104. doi:10.1016/j.neuroscience.2017.09.035