Email:joanna.jia@wecistanche.com

Antidepresivi i aktivnosti za poboljšanje kognitivnih sposobnosti tradicionalne kineske biljke Cistanche

Dongfang Wang,1 Haizhen Wang,2 i Li Gu2

1Ključna državna laboratorija za biokontrolu, Institut za vodene ekonomske životinje i ključna laboratorija za vodene ekonomske životinje provincije Guangdong, Škola prirodnih nauka, Univerzitet Sun Yat-sen, Guangdžou 510275, Kina

2 Centar za istraživanje prehrambenog i zdravstvenog inženjerstva državnog ministarstva obrazovanja, Univerzitet Sun Yat-sen, Guangzhou 510275, Kina

Prepisku treba uputiti Li Guu; Primljeno 20. februara 2017.; Revidirano 11. maja 2017.; Prihvaćeno 28. maja 2017.; Objavljeno 28. juna 2017. Akademski urednik: Ki-Wan Oh Autorsko pravo © 2017 Dongfang Wang et al. Ovo je članak otvorenog pristupa koji se distribuira pod licencom Creative Commons Attribution License, koja dozvoljava neograničenu upotrebu, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je originalno djelo pravilno citirano. Više od deset posto ljudi pati od barem jedne epizode depresije i povezanih mentalnih poremećaja u životu, a depresija i povezani mentalni poremećaji jedan su od najvećih svjetskih javnozdravstvenih problema. Teorija višestrukih sistema smatra da je disregulacija višestrukih sistema u osnovi patogeneze depresije i povezanih mentalnih poremećaja, te su hitno potrebne nove terapije zasnovane na teoriji disregulacije višestrukih sistema. U ovoj studiji je antidepresivno dejstvo odvarka od biljkeCistanchedeserticolaYCMa i Cistanchetubulosaje pregledan. biljkaCistanchedekocija je značajno smanjila period nepokretnosti u testu suspenzije repa miša. Miševi tretirani dekocijom bilja pokazali su poboljšanu sposobnost prostornog učenja i pamćenja u Morrisovom testu vodenog lavirinta. Grupe tretirane dekocijom bilja pokazale su smanjenu aktivnost monoamin oksidaze (MAO); koncentracija dopamina (DA) u mozgu je povećana, što ukazuje na biljkuCistanchedekocija je poboljšala razdražljivost živaca; koncentracija kortikosterona u serumu (CORT) je smanjena, što pokazuje da su miševi imali koristi od smanjenog nivoa stresa. Otuda antidepresivna efikasnost i mehanizam tradicionalnogKineskibiljkaCistanchesu istražene u ovoj studiji. biljkaCistanchepokazao potencijal da se razvije kao komplementarna i alternativna terapija za depresiju.

Prevencija Alchajmerove bolesti sa cistancheom

1. Uvod

Depresija i srodni poremećaji raspoloženja, s procjenom od 12 do 17 posto populacije koja doživi barem jednu epizodu u životu, među vodećim su uzrocima mentalnih poteškoća i smatraju se jednim od najvećih svjetskih problema javnog zdravlja.[1].Od posebne važnosti, značajan dio pacijenata s depresijom pati od gubitka pamćenja, problema s koncentracijom, smanjene energije ili umora, gubitka interesa ili zadovoljstva u hobijima i aktivnostima, poteškoća sa spavanjem, ranog jutarnjeg buđenja ili prekomjernog spavanja. Iako su neuralni supstrati za abnormalnost depresije i srodnih sindroma nejasni, općenito je prihvaćeno da oštećenje neuroplastičnosti i stanične otpornosti dovodi do patofiziologije depresije i uspješno liječenje može ovisiti o intervenciji razine neurotransmitera.[2]. Pristup liječenju depresije u osnovi je baziran na klasičnom monoaminskom sistemu

hipoteza, koja tvrdi da disregulacija monoamina, posebno serotonina (5-HT) i norepinefrina (NE) doprinosi patogenezi depresije, a intervencija neurotransmiterskog sistema agonistima dopamina i dopamin-noradrenergičkim modulatorima ublažila bi simptome velike depresije poremećaj [3]. Iako se široko propisuje, ljekovita efikasnost antidepresiva je upitna, a nuspojava se ne može zanemariti jer značajan dio pacijenata ne reaguje na manipulaciju monoaminskim sistemom [4]. Nedavno, nove teorije o patogenezi depresije ukazuju na to da više sistema, uključujući upalne puteve, put oksidativnog stresa, osovinu hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda (HPA), metabolički i bioenergetski sistem, neurotrofne puteve, glutamatni sistem, opioidni sistem i holinergičkog sistema, usko su povezani sa pojavom depresije [3]. Dokazi pokazuju da je višestruka ciljana intervencija proizvela bolju efikasnost od jedne pojedinačne ciljne intervencije [5]. Hitno su potrebne nove terapije zasnovane na teoriji višestruke sistemske disregulacije.

Biljni proizvodi su navodno konzumirali više od polovine američke populacije[6];Interes i potražnja za biljem ili biljnim proizvodima kao dopunskim načinom liječenja depresije rastu u cijelom svijetu. Utvrđeno je da više ljekovitih biljaka pokazuje blagotvorno djelovanje na ublažavanje depresije. Bilje za koje se navodi da ima učinak suzbijanja depresije i poboljšanja kognitivnih funkcija uključuje morsku krkavinu [7], Ginkgo biloba[8], Piper nigrum[9], Hypericum perforatum [10], Griffonia simplicifolia[11]. Kombinovana primena ferulinske kiseline i piperina pokazala je sinergistički efekat sličan antidepresivu kod miševa manipulisanjem monoaminergičkim sistemom[7]. Albiflorin je karakteriziran visokim selektivnim afinitetom prema neurotransmiterskim receptorima i transporterima i značajno povećanim ekstracelularnim koncentracijama 5-HT i NE u hipotalamusu štakora koji se slobodno kreću[12]. Ljekovita biljka Melissa officinalis L. ublažila je depresivno ponašanje miševa djelovanjem na nivo serotonergičkog neurotransmitera[13].Ove biljke ili dekocije, razvijene kao alternativni lijekovi za depresiju, pomažu u ublažavanju simptoma depresije i predstavljaju novi izvor za razvoj antidepresivnih lijekova. biljkaCistanchevrste, rasprostranjene u sušnim zemljama i pustinjama sjevernog dijela Kine, tradicionalno su kinesko ljekovito bilje i široko se koristi za liječenje raznih bolesti više od 1,000 godine u Kini. Višestruka efikasnost biljkeCistanchedekocija u rasponu između afrodizijaka [14], koji podstiče imunitet[15], antioksidativno [16] i hepatoprotektivno [17] svojstva. Dekocije C. deserticola indukuju steroidogene enzime testisa [18], potiču erektilni odgovor penisa i skraćuju period latencije erektilne reakcije kod kastriranih pacova [19]. biljkaCistancheprijavljeno je da inhibira aktivnosti dopaminergičkih neurona regulacijom gena inhibitorne apoptoze i neurotrofnih faktora [20]. C.tubulosadekocije su popravile kognitivnu disfunkciju uzrokovanu A� 1-42 blokiranjem taloženja amiloida i oživjele holinergičku i hipokampalnu dopaminergičku neuronsku funkciju [21]. Neuroprotektivno svojstvo biljnog Cistanchea implicira terapeutski potencijal kod kognitivnih bolesti. Depresija je uobičajen mješoviti oblik emocionalnih reakcija sa zaboravom i kognitivnim padom kao uobičajenim simptomima [22]. Biljka Cistanche se obično koristila kao tradicionalna kineska medicina za liječenje zaborava; štaviše, nedavni izvještaj pokazuje da je rana primjena kukuruznog brašna dopunjenog C.tubulosaje koristan za promicanje dugovječnosti i učenje povezano s mirisom i poboljšanje pamćenja u modelu Drosophila koji nisu kralježnjaci [23]. Ove činjenice ukazuju na poboljšanje kognitivnih sposobnosti biljkeCistanche; ovdje, u ovom istraživanju, po prvi put smo okarakterisali antidepresivno svojstvo i njegov odnos sa aktivnostima poboljšanja kognitivnih sposobnosti u modelu sisara regulacijom monoaminskog sistema i HPA ose. Rasvjetljavanje svojstva antidepresiva i preliminarnog mehanizma biljkeCistanchemogao proširiti spektar primjene biljke Cistanche, koja bi se mogla razviti kao alternativni lijek za depresiju.

2. Materijali i metode

1.1. Biljni materijal i priprema decokcija. C. deserticola YCMa je ​​dobijena iz Nei Mongolske autonomne regije, Kina; C.tubulosaje dobijen iz autonomne regije Xinjiang Uygur, Kina. Prije dekocije, biljka (C. deserticola YCMa ili C. tubulosa) je pregledana kako bi se otkrio sadržaj ehinakozida i verbaskozida pomoću HPLC (tečna hromatografija visokih performansi) (Milford, MA, Waters, SAD) i prihvatljivog proizvoda (prema Farmakopeji Narodne Republike Kine) korišteno je za eksperimente na životinjama. Dekocija je dobijena na osnovu metode isparavanja vode koju je razvio Centar za istraživanje prehrambenog i zdravstvenog inženjerstva pri Državnom ministarstvu obrazovanja, Univerziteta Sun Yat-sen. Osušeni Cistanche deserticola YCMa od 125 g razbijen je i prosijan sitom 120-, a zatim je prah otopljen u 3 L ultra čiste vode, zagrijan

na 100∘C 2 h, zatim ohlađen na sobnu temperaturu i prosijan; supernatant je recikliran. Talog je zatim rastvoren u 2 L ultra čiste vode i zatim zagrevan 1,5 h i ohlađen kao što je gore pomenuto da bi se supernatant reciklirao; sediment je zatim korišten za recikliranje supernatanta. Sadržaj svih supernatanta je obogaćen rotacionim vakuumskim isparivačima na 60∘C; konačno, koncentracija sirovog lijeka je postavljena na 0,5 g/ml i proizvod je pohranjen na -20∘C.

1.2. Echinacoside and Verbascoside Assay HPLC analizom. HPLC (tečna hromatografija visokih performansi) je korištena za mjerenje kvalitativnog i kvantitativnog eseja ehinakozida i verbaskozida; verbaskozid (čistoća > 93 procenta) i ehinakozid (čistoća > 93 procenta) kupljeni su od Nacionalnog instituta za kontrolu hrane i lijekova (Peking, Kina) i korišteni kao standardna kontrola.

1.3. Briga o životinjama i eksperimentalno ponašanje. Subjekti su bili SPF (bez specifičnih patogena) mužjaci Kunming miševa težine 21-25 grama, koje je nabavio Centar za medicinske eksperimentalne životinje provincije Guangdong. Životinje su bile smještene u plastičnim kavezima (deset po kavezu); Uslovi okoline su postavljeni na sledeći način: vlažnost 40∼70 procenata, sobna temperatura 21 ± 1∘C, i period od 12 h: 12 h svetlo-mrak. Sve eksperimente na životinjama odobrio je Komitet za etiku na životinjama Univerziteta Sun Yat-sen.

1.4. Test ovjesa repa. Test ovjesa repa urađen je prema protokolu koji su opisali Cryan et al. [24] sa skromnim promjenama. Ukratko, 21. dana, miševi su obješeni za rep pomoću metalnih vješala vezanih najlonskim kateterom, sa glavom na visini od 50 mm od poda. Miševi su obješeni na udicu na ljepljive trake 10-20 mm od kraja repa i izolirani akustički i vizualno klapnama. Pokreti tijela miša su zabilježeni, a respiratorni pokreti su zanemareni. Prije dana eksperimenta, miševi su suspendirani na 8 minuta radi adaptacije.

1.5. Test Morrisovog vodenog lavirinta. Test vodenog lavirinta urađen je prema opisu Vorheesa et al. [25–27] pomoću uređaja koji je razvila Kineska akademija medicinskih nauka. Kružni bazen (prečnik 150 cm) napunjen vodom (26

± 1∘C; visina oboda (udaljenost od vodene površine do ivice zida): 10 cm)

Tabela 1: Sadržaj ehinakozida i verbaskozida u prahu i dekociji C. deserticola YCMa i C.tubulosa.

korištena je kružna platforma za spašavanje (promjer: 11 cm; udaljenost

Uzorci

ECH procenat VerBS procenat između središnje tačke platforme i zida bazena: 27 cm) je potopljen 1–1,5 cm ispod površine vode, a područje za testiranje je osvijetljeno indirektnim osvjetljenjem (50 ± 10 luksa) kako bi se izbjegle refleksije. Korištene su četiri početne lokacije, S, S, E i W. Za test prostornog učenja, životinje su svakodnevno trenirane 9-11 dana na fiksnoj startnoj lokaciji. Period latencije bijega se mjeri kako bi se prikazala prostorna memorija i sposobnost učenja miševa. Ako miševi ne mogu pronaći ili se popeti na platformu, miševi bi bili odvedeni do platforme i ostali bi 10 s. Nakon odmora od 60 s, pristupilo se sljedećem treningu. Podaci dobiveni iz posljednjeg testa prostornog učenja korišteni su kao osnovna vrijednost za oblikovanje. Od 23. do 28. dana urađen je navigacijski test i prostorna sonda. Test navigacije po mjestu trajao je 6 dana i rađen je u 13 sati, životinje su stavljene u vodu sa glavom okrenutom prema zidu bazena u smjeru kazaljke na satu i zabilježen je period latencije (unutar 2 min). Nakon što je obavljen test navigacije po mjestu, platforma je uklonjena. Miševi su stavljeni u vodu sa glavom okrenutom prema zidu bazena na nasumičnoj lokaciji, a zabilježeni su trag kretanja i frekvencija kojom su miševi plivali tamo gdje se nalazila platforma u roku od 2 minute. Trag kretanja zabilježen je multifunkcionalnim autonomnim snimačem kretanja miševa (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Kina).

echinacoside in cistanche

1.6. Detekcija MAO aktivnosti. Aktivnost MAO mjerena je pomoću kompleta za detekciju MAO (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina), a detekcija je urađena prema protokolu proizvođača. Dobijen je homogenat iz moždanog tkiva; 500 µl je pomešano sa 300 µl Agensa 1 i 300 µl Agensa 2, inkubirano 3 h na 37∘C, a zatim sukcesivno dodavano sa 300 µl, Agensa 3, 3 ml Agensa 4, i vorteks za 2 min. Reakciona smjesa je centrifugirana na 3,{16}} o/min tokom 10 min, a optička gustina supernatanta je određena ultraljubičastim i spektrofotometrom vidljivog spektra (Lambda 25, PerkinElmer, SAD) korištenjem ekscitacionog svjetla od 242 nm.

1.7. Enzimski imunosorbentni test neurotransmitera i ACTH i CORT. Enzimski-vezani imunosorbentni test (ELISA) komplet za detekciju dopamina (DA), norepinefrina (NE) i 5-hidroksitriptamina (5-HT) kupljen je od BLUE GENE, Šangaj. Kompleti za ELISA detekciju kupljeni su od Qiyun Biotech, Guangzhou.

Postupci su sljedeći: eksperiment je izveden na sobnoj temperaturi. Premažite jažice PVC mikrotitarske ploče antitijelom za hvatanje u koncentraciji 1-10 µg/mL u karbonatnom/bikarbonatnom puferu (pH 9,6). Zatvorite ploču i inkubirajte preko noći na 4∘C; isprati ploču sa PBS/tween 3 puta, a nespecifična mesta vezivanja su blokirana Block Solution-om; zatim operite ploču sa PBS/tween 3 puta. Standardi i uzorci se razblaže u rastvoru za blokiranje i 100 µl se doda u bunar ploče, a ploča se zatvori i inkubira na 37∘C 1 h. Dodajte 100 µl razrijeđenog antitijela za detekciju i inkubirajte ploču na

C. deserticola prah 1.27 ± 0.009 0.52 ± 0.003

C. tubulosaprah 19.81 ± 0.66 2.45 ± 0.12

Dekocija C. deserticola {{0}}.90 ± 0.001 0.20 ± 0,001 C.tubulosadekocija 5,90 ± 0.12 0.54 ± 0,05 Echinacoside, ECH; feniletanoidni glikozidi, PeGs; verbaskozid, VerBS.

37∘C 1 h; operite ploču sa PBS/Tween 3 puta. Dodajte 50 µl rastvora za razvijanje boje i držite ploču dalje od svetlosti i inkubirajte je na sobnoj temperaturi 15 minuta; 50 µl pufera za zaustavljanje se dodaje da se reakcija zaustavi. Izmjerite optičku gustoću (OD) za svaku jažicu pomoću čitača mikroploča postavljenog na 405 nm za 30 min.

1.8. Statistička analiza. Svi podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM (standardna greška srednje vrijednosti), značajna razlika je analizirana pomoću t-testa ili jednosmjerne ANOVA praćene Duncanovim testovima višestrukog opsega korištenjem SPSS 16.0, a razlike između grupe sa � < 0.05="" smatrane="" su="" statistički="">

2. Rezultati

2.1. Određivanje sadržaja glavnih bioaktivnih sastojaka u C. deserticola YCMa i C.tubulosaUzorci. Feniletanoidni glikozidi kao što su ehinakozid i verbaskozid općenito se smatraju glavnim bioaktivnim sastojcima; stoga sadržaj ehinakozida i verbaskozida u C. deserticola YCMa i C.tubulosauzorci su određeni HPLC. HPLC hromatogrami su prikazani na slici1, a rezultati pokazuju da je ukupan sadržaj feniletanoidnih glikozida iz C. deserticola YCMa bio približno dvostruko veći od C. tubulosa. Težina ehinakozida, odnosno verbaskozida, čini 1,27 ± 0.009 posto i {{10}}, 52 ± 0,003 posto praha pripremljenog od C. deserticola YCMa i 19,81 ± 0,66 posto i 2,45 ± 0,12 posto praha pripremljenog od C.tubulosa. Težine ehinakozida i verbaskozida, respektivno, čine {{0}}.90 ± 0.{{10}}01 posto i 0,20 ± 0,001 posto odvarka C. deserticola YCMa i 5,90 ± 0,12 posto i 0,54 ± 0,05 posto praha pripremljenog od C.tubulosa(Tabela1).

2.2. Dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa ublažila je nivo stresa i depresije. Test suspenzije repa (TST) je brza i klasična metoda za procjenu antidepresivnog djelovanja lijekova kod miševa [24]; u ovom istraživanju, nepokretan status, uzrokovan kratkotrajnim i neizbježnim stresom vješanja za rep, korišten je kao osobina koja odražava nivo depresije kod miševa. Provjerili smo da li dekocija C. deserticola YCMa i C.tubulosamože preokrenuti nepokretnost i promovirati pojavu ponašanja vezanog za bijeg. U poređenju sa kontrolnim grupama, period nepokretnosti stresne grupe je povećan za 27,4 posto; u poređenju sa stresom

Slika 1: HPLC hromatografski profil feniletanoidnih glikozida iz praha C. deserticola YCMa i C. tubulosa. Vrhovi 1 i 2 predstavljaju ehinakozid i verbaskozid, respektivno.

Slika 2: Učinak dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa na period nepokretnosti miševa sa suspenzijom repa u 5 min. Nakon adaptacije, eksperimentalnim grupama je davan odvarak biljke Cistanche putem sonde 21 dan, a zatim suspendiran za rep, a kretanje je praćeno 5 minuta nakon suspenzije; svaka grupa se sastojala od 10 miševa. L, M i H, respektivno, predstavljaju nisku, srednju i visoku; CD i CT, respektivno, predstavljaju

Dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa. Svi podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

grupe,

grupe, grupe tretirane srednjom, visokom koncentracijom odvarka biljke C. deserticola YCMa, pokazale su statistički značajno smanjenje perioda nepokretnosti svaka za 44,1 posto i 56,1 posto; grupe tretirane srednjom, visokom koncentracijom

Dekocija biljke C. tubulosa pokazala je statistički značajno smanjenje perioda nepokretnosti za 41,9 posto i 47,7 posto (Slika2). Ovi rezultati ukazuju da dekocija C. deserticola YCMa i C.tubulosamogao smanjiti nivo stresa i depresije kod miševa, a dekocija C. deserticola YCMa pokazala je nešto veću efikasnost od C. deserticola YCMa.tubulosadecoction.

1.1. Dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa poboljšala je prostorno učenje i pamćenje miševa. Ljudi (i adolescenti i odrasli) koji pate od depresije su skloni

do smetnji u učenju [28]; dekocija C. deserticola YCMa i C.tubulosadokazano ublažava stres i depresiju; zatim smo odabrali da procijenimo može li izvarak C. deserticola YCMa i C. tubulosa utjecati na prostorno učenje i pamćenje koristeći Morrisov model vodenog lavirinta, koji se široko primjenjuje u procjeni prostornog učenja i funkcije pamćenja povezanih područja mozga[29]. Tragovi kretanja su klasifikovani u četiri tokom latencije pretraživanja; pravolinijska putanja je pokazala da su miševi precizno odredili položaj platforme za spašavanje, putanja tendencije je pokazala da su miševi pokazali u osnovi ispravnu orijentaciju, a putanja oštrih je pokazala da su miševi ili bili u ranom periodu obuke ili su patili od demencije, pokušavajući da locirati ciljno mjesto na osnovu instinkta; nasumična putanja pretraživanja pokazala je da miševi imaju nisku sposobnost pozicioniranja i da su besciljno pretraživali ciljno mjesto. Podaci su prikupljeni prema kriterijima.

Učinak dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa na sposobnost učenja prostora i pamćenja kod miševa pod stresom prikazan je na slici.3. Nakon testa ovjesa repa, miševi su pokazali značajno produžen period latencije. U poređenju sa stresnim grupama, miševi tretirani umjerenom, visokom dozom C. deserticola YCMa i niskom, visokom dozom dekocije C. tubulosa pokazali su skraćeni period latencije; učestalost kada su miševi plivali skrivenom platformom je značajno povećana u grupama tretiranim umjerenom, visokom dozom C. deserticola YCMa dekocije. Ovi rezultati ukazuju na to da su miševi pod stresom imali koristi od primjene dekocije biljke Cistanche i pokazali su poboljšanje prostornog učenja i pamćenja.

1.2. Odvar od C. deserticola YCMa i C.tubulosaNaniže regulisana aktivnost monoamin oksidaze. MAO katalizira oksidativnu deaminaciju amina kao što su tiramin, kateholamin i 5-hidroksitriptamin (5-HT) u mozgu i perifernim tkivima; inhibicija MAO aktivnosti rezultira djelotvornošću antidepresiva [30]. Pokušali smo objasniti antidepresivni učinak C. deserticola YCMa i C.tubulosa; tada je određena MAO aktivnost u mozgu. Nakon testa ovjesa repa, aktivnost MAO je značajno povećana; MAO aktivnost u grupama liječenim suspenzijom repa, a zatim slijedi umjerena, visoka doza

Slika 3: Učinak C. deserticola YCMa i C.tubulosadekocije o sposobnosti učenja prostora i pamćenja kod miševa pod stresom. Nakon adaptacije, eksperimentalnim grupama je 21 dan davan odvarak biljke Cistanche putem sonde, a zatim je testiran sa

R. Morris vodeni labirint za određivanje prostornog učenja i pamćenja. L, M i H, respektivno, predstavljaju nisku, srednju i visoku; CD i CT, respektivno, predstavljaju C. deserticola YCMa i C.tubulosadecoction. "#" i "∗" predstavljaju P< 0.05="" and="" p="" <="">

Slika 4: Učinak dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa na aktivnost monoaminooksidaze u mozgu (MAO) kod miševa pod stresom. Nakon adaptacije, eksperimentalnim grupama je davan odvarak biljke Cistanche putem sonde tokom 21 dan, a zatim suspendiran za rep na 5 minuta, svaka grupa je bila sastavljena od 10 miševa, a miševi su žrtvovani radi sakupljanja moždanog tkiva. i koristi se za mjerenje MAO aktivnosti. L, M i H, respektivno, predstavljaju nisku, srednju i visoku; CD i CT, respektivno, predstavljaju dekokciju C. deserticola YCMa i C. tubulosa. P= 10; svi podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM; P < 0,05="" smatrano="" je="" značajno="" različitim="" i="" označeno="" je="" sa="">

decokcija iz C. deserticola YCMa pokazala je značajan pad za približno 13,9 posto ~12,3 posto; MAO aktivnost u grupama koje su tretirane suspenzijom repa, a zatim visokodoziranom dekocijom od C. tubulosa pokazala je značajan pad za oko 13,2 posto (Slika4).Podaci su pokazali da dekocija iz C. deserticola YCMa i C. tubulosa može inhibirati aktivnost MAO i može doprinijeti antidepresivu

efekat i dekocija C. deserticola YCMa pokazala je jaču efikasnost od C. tubulosa.

1.1. Primjena dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa rezultirala je povećanjem centralne koncentracije dopamina i smanjenjem koncentracije kortikosterona u serumu. Nivo DA i NE u

Slika 5: Učinak dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa na nivoe neurotransmitera u mozgu kod miševa pod stresom. Nakon adaptacije, eksperimentalnim grupama je davan odvarak biljke Cistanche putem sonde 21 dan, a zatim suspendiran za rep na 5 minuta, svaka grupa se sastojala od 10 miševa, a miševi su žrtvovani da bi se sakupilo moždano tkivo i korišteni za neurotransmiter mozga. merenje nivoa. L, M i H, respektivno, predstavljaju nisku, srednju i visoku; CD i CT, respektivno, predstavljaju dekokciju C. deserticola YCMa i C. tubulosa. P= 10; svi podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM; P< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

centralno

mjeren je centralni nervni sistem da bi se odredila ekscitabilnost nerva. Nakon 4 nedelje testa suspenzije repa, u poređenju sa grupama koje su bile pod stresom, nivo DA u grupama tretiranim umerenom dozom C. deserticola YCMa se značajno povećao za svaku za 43,5 procenata; nivo DA u grupama liječenim umjerenom dozom C. tubulosa je također značajno povećan (Slika5(a)). Nivo NE je blago povećan u grupama koje su tretirane odvarom oba bilja u poređenju sa grupama koje su bile pod stresom i nije pronađena statistička razlika (Slika5(b)).Ovi rezultati bi mogli objasniti molekularni mehanizam antidepresivnog djelovanja biljke Cistanche.

Adrenokortikotropni hormon (ACTH), polipeptidni hormon koji proizvodi i luči prednja hipofiza, stimuliše lučenje glukokortikosteroida djelovanjem na koru nadbubrežne žlijezde, zona fasciculata [31]; kortikosteron, steroidni hormon koji proizvodi korteks nadbubrežnih žlijezda, uključen je u regulaciju fizioloških procesa kao što su podizanje energije, reakcija imuniteta i reakcije na stres [32], pa smo odabrali da proučimo učinak odvarka bilja na HPA os. Izmjerena je i koncentracija ACTH i kortikosterona u serumu. Nakon 4 tjedna testa suspenzije repa, koncentracija ACTH i kortikosterona u stresnoj grupi je značajno povećana (Slika6).Nisu primijećene značajne promjene u grupama koje su tretirane dekocijom biljke Cistanche u poređenju sa grupom koja je bila pod stresom (Slika6(a)).U poređenju sa stresnom grupom, koncentracija kortikosterona u serumu u grupama liječenim umjerenom, visokom dozom dekocije C. deserticola YCMa bila je značajno smanjena; koncentracija kortikosterona u grupama liječenim visokim dozama C. tubulosa je smanjena, ali ne do značajne statističke razlike

(Slika5(b)).Podaci su pokazali da je izvarak od oba

C. deserticola YCMa i C. tubulosa mogle bi smanjiti koncentraciju kortikosterona u serumu i mogle bi biti uključene u regulaciju HPA ose, a dekocija C. deserticola YCMa pokazala je jaču efikasnost od C. tubulosa.

1. Diskusija

U ovoj studiji definirane su antidepresivne aktivnosti i poboljšanje pamćenja i učenja biljke Cistanche, što bi moglo baciti novo svjetlo na funkciju biljke Cistanche i dati naznake za proširenje terapijske primjene. Prethodne studije pokazuju da je biljka Cistanche multifunkcionalni kineski lijek s biološkim djelovanjem protiv starenja, antioksidansa, estrogena, antiosteoporotičnog, afrodizijačkog i protuupalnog djelovanja [33]. Herb Cistanche je prepoznat kao lijek za nedostatak bubrega, neplodnost i kronični zatvor (Kineski farmakopejski komitet, 2010.). Dekocija biljke Cistanche sastoji se od hlapljivih ulja, neisparljivih feniletanoidnih glikozida (PeG), iridoida, lignana, alditola, oligosaharida i polisaharida. Ehinakozid i verbaskozid se općenito smatraju glavnim bioaktivnim sastojcima [34]. Postoje četiri glavne vrste Cistanche uključujući C. deserticola YCMa, C. tubulosa, Cistanche Sinensis G. Beck i Cistanche salsa var. albiflorashi et al. [35]; odabrali smo C. deserticola YCMa i C. tubulosa kao naš model za određivanje sadržaja PeGs, a C. deserticola YCMa je ​​imala veći sadržaj PeGs (Slika1), što može objasniti veću efikasnost C. deserticola YCMa. Rezultati pokazuju da sadržaj glavnih bioaktivnih sastojaka određuje efikasnost biljke Cistanche.

Slika 6: Učinak dekocija C. deserticola YCMa i C. tubulosa na koncentraciju hormona u serumu kod visećih miševa pod stresom. Nakon adaptacije, eksperimentalnim grupama je davan odvarak biljke Cistanche putem sonde 21 dan, a zatim suspendiran za rep na 5 min, svaka grupa je bila sastavljena od 10 miševa, a krv je sakupljena i korištena za određivanje nivoa serumskog adrenokortikotrofnog hormona (ACTH) i kortikosterona (CORT). L, M i H, respektivno, predstavljaju nisku, srednju i visoku; CD i CT, respektivno, predstavljaju dekokciju C. deserticola YCMa i C. tubulosa. P=10; svi podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SEM; P < 0,05="" smatrano="" je="" značajno="" različitim="" i="" označeno="" je="" sa="">

Prethodne studije pokazuju da su biljni proizvodi Cistanche korisni za liječenje neurodegenerativnih poremećaja povećanjem faktora rasta živaca (NGF) u hipokampusu miševa [36,37], ali nije prijavljeno nikakvo istraživanje o antidepresivnim i kognitivnim aktivnostima učenja biljke Cistanche na modelima sisara. U ovoj studiji, dekocija biljke Cistanche pokazala se efikasnom za ublažavanje nivoa stresa i značajno povećanje ponašanja preživljavanja u testu ovjesa repa (Slika2) i poboljšati prostorno učenje i kapacitet memorije u modelu vodenog lavirinta (Slika3). Lin et al. dokazao da je biljka Cistanche poboljšala olfaktorno pamćenje u modelu voćne mušice [23]; fokusirali smo naše istraživanje na učinak antidepresiva i usvojili drugačiji životinjski model; rezultat je pokazao da je biljka Cistanche poboljšala varijantnu vrstu kognitivne funkcije, odnosno sposobnost prostornog učenja kod miševa. Prema teoriji monoamina, iskustvo stresa i depresija su usko povezani sa nivoom monoaminskih neurotransmitera u mozgu, kao što su DA, NE, 5-HT i epinefrin [38]. I otkrili smo da dekocija biljke Cistanche može potkopati aktivnost MAO (Slika4) i povećati centralnu koncentraciju DA (Slika5(a)). Iznenađujuće, centralna koncentracija 5-HT je smanjena tretmanom odvarom od biljke Cistanche (podaci nisu prikazani), jer su prethodna istraživanja pokazala da je smanjena centralna 5-HT aktivnost povezana s depresijom [39]. Disregulacija osovine hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda često je povezana s depresijom [40], intervencija sa sistemom glukokortikoidnih receptora (GR) uspješno je preokrenula depresivni fenotip kod miševa[41], a otkrili smo da je biljka Cistanche značajno ublažila serum

koncentracija CORT (Slika6(b)).Modulacija monoaminskog sistema i HPA ose doprinose antidepresivnom efektu biljke Cistanche. Ehinakozid je mogao slobodno da prođe krvno-moždanu barijeru i da deluje na centralni nervni sistem [42], što može objasniti zašto je dekokcija biljke Cistanche imala antidepresivnu funkciju. Po prvi put smo okarakterisali svojstvo antidepresiva i njegov odnos sa aktivnostima poboljšanja kognitivnih sposobnosti u modelu miša, a preliminarni mehanizam je istražen. Ipak, mehanizam antidepresivnog svojstva Cistanchea nije razjašnjen na molekularnom nivou, te su potrebna dalja istraživanja kako bi se razjasnio sveobuhvatni antidepresivni mehanizam biljke Cistanche.

S obzirom na to da je dekocija biljke Cistanche mješavina jedinjenja, može postojati više načina da dekokcija biljke Cistanche djeluje antidepresivno i podstiče sposobnost učenja. Oksidativni stres utječe na mnoge stanične funkcije neurona, a prekomjerna proizvodnja reaktivnih vrsta kisika (ROS) uzrokuje oštećenje stanica, apoptozu i smrt [43]. Ehinakozid ekstrahovan iz stabljike C. salsa pokazuje neuroprotektivni efekat smanjenjem proizvodnje ROS i apoptoze posredovane mitohondrijama [44]; akteozid, izuzetno jak antioksidativni spoj, mogao bi biti dijelom odgovoran za neuroprotektivni učinak[45]. Osim tradicionalne metode dekokcije, primjena modernih farmaceutskih metoda kao što su kapsule glikozida s kontroliranim oslobađanjem može pojačati učinak biljnog odvarka, jer se bioaktivni sastojci mogu probaviti i razgraditi u gastrointestinalnom traktu [37].

Prethodne studije pokazuju da su biljni proizvodi Cistanche korisni za liječenje neurodegenerativnih poremećaja povećanjem faktora rasta živaca (NGF) u hipokampusu miševa [36,37], ali nije prijavljeno nikakvo istraživanje o antidepresivnim i kognitivnim aktivnostima učenja biljke Cistanche na modelima sisara. U ovoj studiji, dekocija biljke Cistanche pokazala se efikasnom za ublažavanje nivoa stresa i značajno povećanje ponašanja preživljavanja u testu ovjesa repa (Slika2) i poboljšati prostorno učenje i kapacitet memorije u modelu vodenog lavirinta (Slika3). Lin et al. dokazao da je biljka Cistanche poboljšala olfaktorno pamćenje u modelu voćne mušice [23]; fokusirali smo naše istraživanje na učinak antidepresiva i usvojili drugačiji životinjski model; rezultat je pokazao da je biljka Cistanche poboljšala varijantnu vrstu kognitivne funkcije, odnosno sposobnost prostornog učenja kod miševa. Prema teoriji monoamina, iskustvo stresa i depresija su usko povezani sa nivoom monoaminskih neurotransmitera u mozgu, kao što su DA, NE, 5-HT i epinefrin [38]. I otkrili smo da dekocija biljke Cistanche može potkopati aktivnost MAO (Slika4) i povećati centralnu koncentraciju DA (Slika5(a)). Iznenađujuće, centralna koncentracija 5-HT je smanjena tretmanom odvarom od biljke Cistanche (podaci nisu prikazani), jer su prethodna istraživanja pokazala da je smanjena centralna 5-HT aktivnost povezana s depresijom [39]. Disregulacija osovine hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda često je povezana s depresijom [40], intervencija na sistemu glukokortikoidnih receptora (GR) uspješno je preokrenula depresivni fenotip kod miševa.[41], a otkrili smo da je biljka Cistanche značajno ublažila serum

koncentracija CORT (Slika6(b)).Modulacija monoaminskog sistema i HPA ose doprinose antidepresivnom efektu biljke Cistanche. Ehinakozid je mogao slobodno da prođe krvno-moždanu barijeru i da deluje na centralni nervni sistem [42], što može objasniti zašto je dekokcija biljke Cistanche imala antidepresivnu funkciju. Po prvi put smo okarakterisali svojstvo antidepresiva i njegovu vezu sa aktivnostima poboljšanja kognitivnih sposobnosti u modelu miša, a istražen je preliminarni mehanizam. Ipak, mehanizam antidepresivnog svojstva Cistanchea nije razjašnjen na molekularnom nivou, te su potrebna dalja istraživanja kako bi se razjasnio sveobuhvatni antidepresivni mehanizam biljke Cistanche.

S obzirom na to da je dekocija biljke Cistanche mješavina jedinjenja, može postojati više načina da dekokcija biljke Cistanche djeluje antidepresivno i podstiče sposobnost učenja. Oksidativni stres utječe na mnoge stanične funkcije neurona, a prekomjerna proizvodnja reaktivnih vrsta kisika (ROS) uzrokuje oštećenje stanica, apoptozu i smrt [43]. Ehinakozid ekstrahovan iz stabljike C. salsa pokazuje neuroprotektivni efekat smanjenjem proizvodnje ROS i apoptoze posredovane mitohondrijama [44]; acetonid, izuzetno jak antioksidativni spoj, mogao bi biti dijelom odgovoran za neuroprotektivni učinak[45]. Osim tradicionalne metode dekokcije, primjena modernih farmaceutskih metoda kao što su kapsule glikozida s kontroliranim oslobađanjem može pojačati učinak biljnog odvarka, jer se bioaktivni sastojci mogu probaviti i razgraditi u gastrointestinalnom traktu [37].

1. Zaključci

U ovoj studiji smo otkrili da dekocije C. deserticola

YCMa i C. tubulosa su ispoljile antidepresivno dejstvo i poboljšale prostorno učenje i sposobnost pamćenja u modelu miša, a dekocije C. deserticola YCMa i C. tubulosa su imale značajan uticaj na HPA osu;

C. deserticola YCMa pokazala je jaču farmakološku funkciju. C. deserticola i C. tubulosa mogu imati potencijal razvoja kao alternativnih lijekova za terapiju depresije.

Otkrivanje

Stavovi izraženi ovdje su stavovi autora i ne odražavaju nužno stavove bilo koje od ovih agencija.

Sukobi interesa

Autori izjavljuju da nemaju sukoba interesa.

Priznanja

Ovaj projekat je podržan grantovima Nacionalne fondacije za prirodne nauke (81503333) i Projektom podrške nauke i tehnologije u autonomnoj regiji Xinjiang Uygur (Kina) (200840102-15).

Reference

[1] RC Kessler, KA McGonagle, S. Zhao, et al., "Doživotna i 12-mjesečna prevalencija DSM-III-R psihijatrijskih poremećaja u Sjedinjenim Državama: rezultati Nacionalnog istraživanja komorbiditeta," Arhiva Opća psihijatrija, vol. 51, br. 1, str. 8–19, 1994.

[2] HK Manji, GJ Moore, G. Rajkowska i G. Chen, "Neuroplastičnost i ćelijska otpornost kod poremećaja raspoloženja", Molekularna psihijatrija, vol. 5, br. 6, str. 578–593, 2000.

[3] JD Rosenblat, RS McIntyre, GS Alves, KN ​​Fountoulakis i AF Carvalho, "Izvan monoamina-novi ciljevi za depresiju otpornu na tretman: sveobuhvatan pregled," Current Neuropharmacology, vol. 13, br. 5, str. 636–655, 2015.

[4] K. Wilson i P. Mottram, "Poređenje nuspojava selektivnih inhibitora ponovnog preuzimanja serotonina i tricikličnih antidepresiva kod starijih depresivnih pacijenata: meta-analiza," International Journal of Geriatric Psychiatry, vol. 19, br. 8, str. 754–762, 2004.

[5] S. Vezmar, B. Miljković´, K. Vucičević´ et al., "Farmakokinetika i efikasnost fluvoksamina i amitriptilina u depresiji", Journal of Pharmacological Sciences, vol. 110, br. 1, str. 98–104, 2009.

[6] CH Halsted, "Dodaci prehrani i funkcionalna hrana: 2 strane novčića?" American Journal of Clinical Nutrition, vol. 77, str. 1001S–1007S, 2003.

[7] J.-S. Tian, ​​C.-C. Liu, H. Xiang et al., "Istraživanje antidepresivnog efekta ulja sjemenki morske krkavine kroz metabolomički pristup baziran na GC-MS u kombinaciji sa multivarijantnom analizom," Food and Function, vol. 6, br. 11, str. 3585–3592, 2015.

[8] Y. Hou, MA Aboukhatwa, D.-L. Lei, K. Manaye, I. Khan i

Y. Luo, "Prirodni flavonoli antidepresivi moduliraju BDNF i

beta-amiloid u neuronima i hipokampusu dvostrukih TgAD miševa," Neuropharmacology, vol. 58, br. 6, str. 911-920, 2010.

[9] J. Wattanathorn, P. Chonpathompikunlert, S. Muchimapura,

A. Priprem i O. Tankamnerdthai, "Piperin, potencijalna funkcionalna hrana za poremećaje raspoloženja i kognitivnih poremećaja", Food and Chemical Toxicology, vol. 46, br. 9, str. 3106–3110, 2008.

[10] M. Shirai, Y. Kawai, R. Yamanishi i J. Terao, "Pristup novoj funkcionalnoj hrani za kontrolu stresa 5. Profili antioksidativne aktivnosti antidepresivnih biljaka i njihovih aktivnih komponenti," Journal of Medical Investigation, vol. 52, str. 249–251, 2005.

[11] PS Kumar, T. Praveen, NP Jain i B. Jitendra, "Pregled o Griffonia simplicifollia - idealnom biljnom antidepresivu", Međunarodni časopis za farmaciju i prirodne nauke, 2010.

[12] Z.-L. Jin, N. Gao, W. Xu et al., "Vezivanje receptora i transportera i profili aktivnosti albiflorina ekstrahovanog iz Radix Paeonia Alba," Scientific Reports, vol. 6, ID članka 33793, 2016.

[13] S.-H. Lin, M.-L. Chou, W.-C. Chen et al., "Ljekovita biljka, Melissa officinalis L. poboljšava depresivno ponašanje pacova u testu prisilnog plivanja putem regulacije serotonergičkog neurotransmitera," Journal of Ethnopharmacology, vol. 175, član br. 9741, str. 266–272, 2015.

[14] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan i M.-H. Su, "Hipoholesterolemijski efekti ekstrakta Cistanche tubulosa, kineske tradicionalne sirove medicine, kod miševa", American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, br. 6, str. 1125–1138, 2009.

[15] LI Xia, MA Yong-Qing, YX Song, JF Shui i LI Xiu-Wei, "Učinak različitih regulatora rasta biljaka na omjer preživljavanja presađivanja sadnica haloxyfop ammodendrona i omjer parazita cistanche deserticola", Journal of Chinese Medicinski materijali, vol. 32, str. 1651–1654, 2009.

[16] Q. Xiong, S. Kadota, T. Tani i T. Namba, "Antioksidativni efekti feniletanoida iz Cistanche deserticola", Biološki i farmaceutski bilten, vol. 19, br. 12, str. 1580–1585, 1996.

[17] Y. Wu, L. Li, T. Wen i Y.-Q. Li, "Zaštitni efekti ehinakozida na hepatotoksičnost izazvanu ugljen-tetrahloridom kod pacova," Toxicology, vol. 232, br. 1-2, str. 50–56, 2007.

[18] T. Wang, C. Chen, M. Yang, B. Deng, GM Kirby i X. Zhang, "Etanolni ekstrakt Cistanche tubulosa posreduje nivoe polnih hormona pacova indukcijom steroidogenih enzima testisa", Pharmaceutical Biology, vol. 54, br. 3, str. 481–487, 2016.

[19] L. Gu, WT Xiong, YL Zhuang, JS Zhang i X. Liu, "Efekti ekstrakta Cistanche deserticola na erektilni odgovor penisa kod kastriranih pacova", Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 29, br. 2, str. 557–562, 2016.

[20] SG Lin, SF Ye, JM Huang, et al., "Kako kineski lijekovi koji toniziraju bubrege inhibiraju apoptozu dopaminergičkih neurona?" Neural Regeneration Research, vol. 8, br. 30, str. 2820–2826, 2013.

[21] C.-R. Wu, H.-C. Lin i M.-H. Su, "Preokret vodenim ekstraktima Cistanche tubulosa od deficita u ponašanju u modelu štakora nalik Alchajmerovoj bolesti: značaj za taloženje amiloida i funkciju centralnog neurotransmitera", BMC komplementarna i alternativna medicina, vol. 14, str. 1–11, 2014.

[22] DR Lara, LW Bisol, i LR Munari, "Antidepresiv, stabilizirajući raspoloženje i kognitivni efekti vrlo niske doze sublingvalnog ketamina u refraktornoj unipolarnoj i bipolarnoj depresiji," International Journal of Neuropsychopharmacology, vol. 16, br. 9, str. 2111–2117, 2013.

[23] W. Lin, C. Yao, J. Cheng, S. Kao, F. Tsai i H. Liu, "Molekularni putevi povezani sa promocijom dugovječnosti i kognitivnim poboljšanjem Cistanche tubulosa u Drosophila",

Phytomedicine, vol. 26, str. 37–44, 2017.

[24] JF Cryan, C. Mombereau i A. Vassout, "Test suspenzije repa kao model za procjenu aktivnosti antidepresiva: Pregled farmakoloških i genetskih studija na miševima", Neuroscience and Biobehavioral Reviews, vol. 29, br. 4-5, str. 571–625, 2005.

[25] CV Vorhees i MT Williams, "Morisov vodeni labirint: procedure za procjenu prostornih i srodnih oblika učenja i pamćenja", Nature Protocols, vol. 1, br. 2, str. 848–858, 2006.

[26] R. Morris, "Razvoj procedure vodenog lavirinta za proučavanje prostornog učenja kod pacova," Journal of Neuroscience Methods, vol. 11, br. 1, str. 47–60, 1984.

[27] A. Wolf, B. Bauer, EL Abner, T. Ashkenazy-Frolinger i A.

MS Hartz, "Sveobuhvatna baterija za testiranje ponašanja za procjenu učenja i pamćenja kod miševa 129S6/Tg2576", PLoS ONE, vol. 11, br. 1, ID članka e0147733, 2016.

[28] BP Rourke, GC Young i AA Leenaars, "Poteškoće u učenju u djetinjstvu koje predisponiraju one koji pate na depresiju i rizik od samoubistva kod adolescenata i odraslih," Journal of Learning Disabilities, vol. 22, br. 3, str. 169–175, 1989.

[29] R. D'Hooge i PP De Deyn, "Primjena Morrisovog vodenog lavirinta u proučavanju učenja i pamćenja", Brain Research Reviews, vol. 36, br. 1, str. 60–90, 2001.

[30] JC Shih, K. Chen i MJ Ridd, "Monoamin oxidase: from genes to behavior," Annual Review of Neuroscience, vol. 22, str. 197–217, 1999.

[31] SR Bornstein, WC Engeland, M. Ehrhart-Bornstein, i JP Herman, "Disociation of ACTH and glucocorticoids," Trends in Endocrinology and Metabolism, vol. 19, br. 5, str. 175–180, 2008.

[32] S. Whirledge i JA Cidlowski, "Glukokortikoidi, stres i plodnost", Minerva Endocrinologica, vol. 35, br. 2, str. 109–125, 2010.

[33] L. Wang, H. Ding, H. Yu et al., "Cistanches Herba: Chemical Constituents and Pharmacological Effects", Chinese Herbal Medicines, vol. 7, br. 2, str. 135–142, 2015.

[34] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao i C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Jedan od najboljih farmaceutskih darova tradicionalne kineske medicine," Frontiers in Pharmacology, vol. 7, član 41, 2016.

[35] HM Shi, J. Wang, MY Wang, PF Tu i XB Li, "Identifikacija vrsta Cistanche pomoću hemijskog i inter-jednostavnog niza ponovljenih otisaka prstiju," Biological and Pharmaceutical Bulletin, vol. 32, br. 1, str. 142–146, 2009.

[36] JG Choi, M. Moon, HU Jeong, MC Kim, SY Kim i

MS Oh, "Cistanches Herba poboljšava učenje i pamćenje izazivanjem faktora rasta nerava," Behavioral Brain Research, vol. 216, br. 2, str. 652–658, 2011.

[37] Q. Guo, Y. Zhou, C.-J. Wang i saradnici, "Otvorena, neplacebo kontrolisana studija na kapsulama glikozida cistanche tubulosa (Memoregain®) za liječenje umjerene Alchajmerove bolesti", American Journal of Alzheimer's Disease and other Dementias, vol. 28, br. 4, str. 363–370, 2013.

[38] M. Popoli, M. Gennarelli i G. Racagni, "Modulacija sinaptičke plastičnosti stresom i antidepresivima", Bipolarni poremećaji, vol. 4, br. 3, str. 166–182, 2002.

[39] AJ Cleare, A. McGregor i V. O'Keane, "Neuroendokrini dokazi o povezanosti između hipotireoze, smanjene centralne 5-HT aktivnosti i depresije," Clinical Endocrinology, vol. 43, br. 6, str. 713–719, 1995.

[40] NL Lopez-Duran, M. Kovacs i CJ George, "Disregulacija osovine hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda u depresivne djece i adolescenata: meta-analiza," Psychoneuroendocrinology, vol. 34, br. 9, str. 1272–1283, 2009.

[41] N. Barden, "Implikacija osovine hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda u fiziopatologiji depresije", Journal of Psychiatry and Neuroscience, vol. 29, br. 3, str. 185–193, 2004.

[42] M. Zhu, C. Lu i W. Li, "Prolazna izloženost ehinakozidu je dovoljna da aktivira Trk signalizaciju i zaštiti neuronske ćelije od rotenona," Journal of Neurochemistry, vol. 124, br. 4, str. 571–580, 2013.

[43] T.-H. Lu, C.-C. Su, F.-C. Tang i saradnici, "Hloroctena kiselina pokreće apoptozu u neuronskim ćelijama putem signalnog signalnog puta endoplazmatskog retikuluma izazvanog reaktivnim vrstama kiseonika", Chemico-Biological Interactions, vol. 225, str. 1–12, 2015.

[44] Y.-H. Wang, Z.-H. Xuan, S. Tian i G.-H. Du, "Ehinakozid štiti od 6- mitohondrijalne disfunkcije izazvane hidroksidopaminom i inflamatornih odgovora u PC12 ćelijama putem smanjenja proizvodnje ROS", Komplementarna i alternativna medicina zasnovana na dokazima, vol. 2015, ID članka 189239, 9 strana, 2015.

[45] WF Chiou, LC Lin, i CF Chen, "Akteozid štiti endotelne ćelije od oksidativnog stresa izazvanog slobodnim radikalima," Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 56, br. 6, str. 743–748, 2004.