Imuni odgovori domaćina na površinske proteine ​​S-sloja (SLP) Clostridioides Difficile

sažetak:

Clostridioides difficile, bolnički patogen, je crijevni patobiont u nastajanju koji uzrokuje dijareju uzrokovanu antibioticima. Infekcija C. difficile uključuje kolonizaciju crijeva i poremećaj crijevne epitelne barijere, što dovodi do indukcije upalnih/imunih odgovora. Ekspresija dva glavna egzotoksina, TcdA i TcdB je glavni uzrok patogenosti C. difficile. Vezanje proteina ćelijskog zida bakterija ili površinskih proteina S-sloja (SLP) kao što je SlpA sa epitelnim ćelijama domaćina je kritično za virulenciju. Osim što su toksini, ove površinske komponente su se pokazale visoko imunogenim. Nedavne studije pokazuju da C. difficile SLP igraju važnu ulogu u adheziji bakterija na epitelne ćelije crijeva, narušavanju čvrstih spojeva i modulaciji imunološkog odgovora ćelija domaćina. Ovi proteini mogu poslužiti kao nove mete za vakcine i nova terapeutska sredstva. Ovaj pregled rezimira naše trenutno razumijevanje imunološke uloge SLP-ova u izazivanju imuniteta domaćina i njihovu upotrebu u razvoju vakcina i novih terapeutika za borbu protiv infekcije C. difficile.

cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem

Kliknite ovdje za pregled proizvoda Cistanche Enhance Immunity

【Zatražite više】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Ključne riječi:

dijareja uzrokovana antibioticima; proteini ćelijskog zida; terapeutika; proteini S-sloja; vakcina

1. Uvod

Clostridioides difficile, anaerobna bakterija koja proizvodi toksin, važan je oportunistički i bolnički patobiont u crijevima koji uzrokuje simptome bolesti kao rezultat poremećaja u zdravom mikrobiomu zbog mnoštva faktora, uključujući upotrebu antibiotika, genetske, ekspozomske, mikrobne, i drugi faktori domaćina [1]. Selekcija i proliferacija C. difficile izaziva po život opasno stanje pseudomembranoznog kolitisa [2,3]. Prema najnovijim procjenama iz izvještaja Centra za kontrolu i prevenciju bolesti iz 2019., C. difficile je uzrokovao 223.900 infekcija i 12.800 smrtnih slučajeva u 2017. uz gubitak od milijardu dolara samo u Sjedinjenim Državama [4]. Liječenje prve epizode infekcije C. difficile (CDI) postiže se antibioticima. Međutim, bolest ima visok nivo recidiva – 20-30% nakon prvog tretmana inicijalnog CDI i više od 50% nakon prvog recidiva [5]. Stoga je potrebna hitna terapijska intervencija u borbi protiv CDI širom svijeta. Jedan od glavnih molekularnih faktora za patogenezu C. difficile je ekspresija i izlučivanje dva glavna toksina, TcdA i TcdB, kodiranih genima koji se nalaze unutar 19.6-kb lokusa patogenosti (PaLoc) u C. difficile genom [6]. Chandra et al. drugdje [6].

Patogeneza CDI počinje gutanjem/klijanjem spora C. difficile u vegetativne ćelije, koje klijaju u crijevima gdje proliferiraju i koloniziraju crijevnu sluznicu [1,6]. Intestinalna mukozna barijera (IMB) je prva linija urođene odbrane od patobiota. IMB domaćina se sastoji od različitih tipova epitelnih ćelija koje su međusobno čvrsto spojene čvrstim spojevima i prekrivene debelim zaštitnim slojem sluzi koju luče peharaste ćelije [1]. Poremećaj IMB-a omogućava C. difficile da se veže za površinu epitelnih ćelija gde elaboracija njenih faktora virulencije dovodi do oštećenja i ispoljavanja patogenosti C difficile [1,6]. Ćelijski zid bakterije kod mnogih gram-pozitivnih i negativnih vrsta, uključujući C. difficile, povezan je s obilnim površinski izloženim slojem proteinskih molekula koji se nazivaju proteini površinskog sloja (proteini S-sloja ili SLP), koji se pretežno sastoje od obilnog protein SlpA koji se sastoji od domena niske i velike molekularne težine, koji su raspoređeni kao parakristalni regularni dvodimenzionalni niz kako se vidi elektronskim mikroskopom [7]. Ostale komponente proteina ćelijskog zida (Cwp) u SLP sloju su manje zastupljene i slabo okarakterisane, ali takođe igraju važnu ulogu u patogenosti CD-a. Posljednjih godina, istraživanja SLP-a privukla su sve veću pažnju, jer se pokazalo da ovi proteini igraju ključnu ulogu u površinskoj adheziji, aktivaciji receptora sličnih Tollu, indukciji proizvodnje citokina i aktivaciji inflamasoma kao dio imunološkog odgovora domaćina, osim njihovog ulogu u rastu i preživljavanju bakterije [7–9].

U ovom pregledu raspravljamo o imunološkom odgovoru domaćina na glavne komponente SlpA i druge manje zastupljene Cwps u svjetlu nedavnog saznanja o C. difficile SLP-ovima i ističemo njihov potencijal za upotrebu kao nove vakcine i terapeutske mete vrlo relevantne u patogenezi CDI.

cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem

2. Domaćin urođenih imunih odgovora protiv CDI

Pokazalo se da netoksični sojevi C. difficile (NTCD) nakon kolonizacije na životinjskim modelima pružaju zaštitu od patogenih sojeva C. difficile. Početkom 1980-ih, Wilson i Sheagren su izvijestili da su hrčci kolonizirani NTCD sojem nakon što su sterilizirani antibiotičkim cefoksitinom bili zaštićeni kada su bili izazvani toksigenim sojem C. difficile (TCD) [10]. Međutim, tretman sa drugim vrstama, kao što su C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes i toplotno ubijeni netoksični soj C. difficile NTCD, nije uspeo da zaštiti od CDI. Nadalje, zaštita je izgubljena kada je kolonizirajući NTCD steriliziran primjenom vankomicina prije izazivanja [11]. Podstaknute ovim nalazima, spore soja NTCD-M1 korišćene su kod ograničenog broja kliničkih pacijenata koji pate od rekurentnog CDI (rCDI) sa značajnim uspehom (oko 50%) [12]. Trenutno su mogućnosti liječenja CDI ograničene i u velikoj se mjeri oslanjaju na upotrebu antibiotika, kao što su vankomicin, fidaksomicin i metronidazol [13,14]. Pretjerana upotreba antibiotika dovodi do disbioze zdravog mikrobioma i dodatno pomaže u odabiru patobiota poput C. difficile koji se kasnije mogu ponovno pojaviti [1,15]. Da bi se efikasno zaobišli ovi izazovi, alternativne metode liječenja trebaju hitnu pažnju. Neke od ovih opcija liječenja uključuju neutralizaciju toksina C. difficile korištenjem monoklonskih antitijela protiv TcdB, kao što je infuzija bezlotoksumaba, koja sprječava toksinom posredovano oštećenje crijevnog epitela [16]. Još jedna fascinantna metoda je obnova zdravog mikrobioma pomoću transplantacije fekalne mikrobiote (FMT) od zdravog donora među članovima uže porodice. FMT je pokazao obećavajuće rezultate protiv rekurentnih CDI sa stopom uspješnosti do 90% [17,18]. Nažalost, ove studije nisu se bavile ulogom imunološkog odgovora domaćina u zaštiti ovih pacijenata. Stoga se može tvrditi da živi NTCD luči neke antigene/komponente ćelijskog zida koje induciraju jak imuni odgovor protiv toksigenog TCD. Slično, FMT zaštita je loše definisana. Stoga bi razumijevanje kako uvođenje FMT-a izaziva odgovore domaćina moglo pomoći u identifikaciji ključnih antigena, što zauzvrat može pomoći u boljem razumijevanju imunološkog odgovora i razvoju novih vakcina protiv CDI.

U crijevima, urođeni imuni sistem domaćina je prva linija odbrane od invazivnog patogena, koji igra ključnu ulogu u oblikovanju i postavljanju robusnog adaptivnog imunološkog odgovora domaćina [1]. Urođeni odgovor se uglavnom sastoji od tri dijela: (i) crijevnog epitela i mukoznog sloja (fizička barijera), (ii) antimikrobnih peptida, koji su produkt izlučivanja epitelnih stanica, Panethovih stanica i nekih članova crijevne mikrobiote (hemijske barijeru) i (iii) ćelijske odgovore regrutacijom urođenih imunoloških stanica kao što su neutrofili, eozinofili, makrofagi, urođene limfoidne ćelije (ILC) i dendritične ćelije (DC) koje su orkestrirane višestrukim urođenim signalnim putevima za borbu protiv patogena [invazije 1]. Ćelije domaćini nose receptore za prepoznavanje uzoraka (PRR), kao što su TLR, na svojoj površini koji prepoznaju određene očuvane bakterijske potpise na mikrobima koji se nazivaju molekularni obrasci povezani s patogenom (PAMP). Ovi PRR-ovi su također poznati kao Toll-like Receptors (TLRs). Nakon što TLR prepoznaju ove signale opasnosti (PAMP), ćelija domaćina pokreće imunološki odgovor. U tom smislu, pokazalo se da Toll-like Receptor 4 (TLR4) prepoznaje C. difficile signale opasnosti, radnju koja učestvuje u pokretanju inflamatornog odgovora domaćina. U ovom kontekstu, pokazalo se da SLP-ovi C. difficile stupaju u interakciju sa domaćinovim TLR-4 dok C. difficile flagella interaguju preko TLR5 [19,20].

cistanche koristi za muškarce - jača imuni sistem

3. Proteini S-sloja (SLP) u C. difficile

U posljednjoj deceniji, proteini površinskog sloja (S-sloja) C. difficile su dobili značajnu pažnju. SLP su prvi identifikovali Kawata et al. 1984. godine i čine oko 15% ukupne ćelijske mase [21,22]. SLP se nalaze u mnogim različitim prokariotskim vrstama. Većina SLP-ova je raspoređena na krajnjoj površini ćelija kao jedan protein u dvodimenzionalnom parakristalnom nizu [7]. Kod C. difficile, S-sloj se sastoji uglavnom od heterodimernih SlpA proteina. SlpA je heterodimer koji se sastoji od proteina visoke molekularne težine (HMW) i proteina niske molekularne težine (LMW) kodiranog jednim genom slpA; LMW SLP formira izloženi gornji sloj dok HMW SLP formira donji sloj. LMW SLP je jedinstven u C. difficile. U soju C. difficile 630, slpA lokus je regija od 36,6 kb koja sadrži 11 slpA paraloga. Nadalje, postoji dodatnih 17 paraloga koji su raštrkani po cijelom genomu [23,24]. Ovi paralogni geni se sada nazivaju proteini ćelijskog zida klostridija (CwpX), gdje X označava identificirani paralogni broj (X=1–29) i opisani su u Tabeli 1. Međutim, četiri prethodno karakterizirana Cwps poznata kao SlpA, Cwp66, Cwp84 i CwpV su imenovani prije nego što je usvojena ova nova konvencija o imenovanju [23]. Svi Cwps su tipični proteini koji sadrže N-terminalni signalni peptid i tri navodna domena za vezivanje ćelijskog zida sa značajnom sličnošću sa HMW SLP [25,26]. Različiti sojevi C. difficile pokazali su varijacije u slpA lokusu i dokumentovano je oko 12 različitih tipova kaseta S-sloja. Ostalih 28 Cwps djeluju kao dodatne komponente, koje su usidrene u polimeriziranom parakristalnom sloju, koji čini ~5-20% S-sloja [7].

Tabela 1. Pretpostavljene funkcije gena za 29 čašica pronađenih u genomima Clostridium difficile 630.

Tabela 1. Nast.

4. Ekspresija i varijacija soja proteina ćelijskog zida

U C. difficile soju 630, objavljeno je da je eksprimirano oko devet gena koji kodiraju Cwps [25]. Dok su cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 i cwp25 geni eksprimirani na površini ćelije u normalnim uslovima rasta [44], cwp66 i cwp5 geni su eksprimirani, ali nisu pronađeni u ekstraktima ćelijske površine. U posebnoj studiji, Biazzo et al. analizirane čašice koje su raštrkane po čitavom genomu C. difficile. Oni su uočili da su cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 i cwp25 geni eksprimirani i imaju dobro očuvane sekvence, dok su cwp17, cwp26, cwp27, cwp29 imali značajne nivoe ekspresije između gena cwp28 i cwp28. ribotipovi i bili su manje konzervirani [45]. Mnogi geni lokusa slpA pokazuju značajne varijacije između sojeva, posebno područja izloženih površini. Na primjer, pokazalo se da slpA, cwp66, secA2 i cwp2 imaju velike varijacije unutar slpA lokusa (koji formira 10-kb kasetu); do sada je pronađeno 12 divergentnih varijanti ove kasete kao rezultat homologne rekombinacije između različitih genotipova [46]. Prema Karjalainen et al., cwp66 pokazuje samo 33% identiteta između sojeva [26]. Varijanta cwp2 zamijenjena je 23,8 kb predviđenim klasterom gena za glikozilaciju S-sloja u slpA lokusu [46]. SlpA je najzastupljeniji SLP koji se nalazi u ekstraktima ćelijske površine C. difficile i glavni je sastojak C. difficile SLP. Zreli protein se cijepa nakon sekrecije u HMW i formira se LMW protein djelovanjem proteaze Cwp84 kako bi se formirao heterodimerni kompleks H/L kompleksa, koji polimerizira da formira S-sloj [47] (Slika 1). Inaktivacija cwp84 gena u C. difficile 630∆erm rezultirala je S-slojem koji se sastoji samo od nezrelog jednolančanog SlpA sa izmijenjenom morfologijom kolonije, što ukazuje na važnu ulogu Cwp84 u formiranju zrelog S-sloja [32]. Prisustvo secA2 gena u slpA lokusu važno je za transport SlpA i drugih Cwps-a kroz citoplazmatsku membranu [48].

Slika 1. SLP-ovi C. difficile posreduju u adheziji i aktivaciji imunih ćelija. Nastali SlpA peptid se cijepa proteazom Cwp84 u LMW i HMW podjedinicu, koja formira zreli SlpA kompleks SLP sloja ćelijskog zida [31-33]. SLP-ovi posreduju u adheziji preko TLR4, remete čvrsti spoj intestinalnih epitelnih ćelija i dalje aktiviraju dendritske ćelije/makrofage, koji zauzvrat proizvode različite citokine i hemokine što dovodi do indukcije Th1/Th2 i humoralnog odgovora [9,27]. Interleukin (IL), dendritske ćelije (DC), niske molekulske težine (LMW), visoke molekulske težine (HMW), Toll-like receptor 4 (TLR4).

5. Funkcije proteina S-sloja

SLP su uključeni u različite funkcije u biologiji C. difficile (vidi tabelu 1), kao što su integritet ćelije, transport, formiranje pora i sidrišta, degradacija, adhezija/invazija ćelije domaćina, izbjegavanje imunološkog sistema i zaštita od konkurentskih mikroorganizama [22] . Pechineet al. otkrivena antitijela protiv N-terminalnih i C-terminalnih domena Cwp66 antigena u serumu pacijenata sa bolešću asociranom na Clostridium difficile (CDAD) [49]. U drugoj studiji, Wright et al. razdvojio Cwps koristeći 2D-PAGE i identifikovao nekoliko Cwp-ova (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19) koji su reagovali sa serumima pacijenata inficiranih sojem C. difficile ribotipa 017, što sugeriše indukciju snažnog imunološkog odgovora [550 protiv SLP]. Nedavno su Kirk et al. identificirali su dva soja C. difficile kojima je nedostajao S-sloj i koji nisu bili osjetljivi na bakteriocin koji formira pore i depolarizira konkurentske bakterijske stanice. Međutim, ovi sojevi C. difficile pokazali su značajno povećanu osjetljivost na lizozim i antimikrobni peptid LL-37 i nisu proizveli simptome bolesti CDI u modelu infekcije hrčka [51]. Nedavna studija je istraživala efekte SlpA izolovanog iz tri toksikogena soja (RT126, RT001, RT084) na ekspresiju proteina čvrstog spoja (TJ) i indukciju proinflamatornih citokina u ćelijskoj liniji humanog karcinoma debelog crijeva HT{23}} . Tretman SlpA značajno je smanjio nivoe ekspresije claudins familije i JAM-A proteina čvrstog spoja (Slika 1) [9]. Osim toga, SlpA protein je povećao nivoe ekspresije TLR-4 i inducirao lučenje TNF-, IL-1 i IL-8. Ovi rezultati pokazuju da je patogeneza posredovana SlpA proteinom i inducirana inflamatorna reakcija u crijevima [9]. Stoga je razumno tvrditi da su SLP-ovi neophodni za patogenost C. difficile i imunološke odgovore.

cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem

6. Imuni odgovor na SLP

Nedavna istraživanja su istakla važnu ulogu SlpA ne samo u preživljavanju i rastu bakterija, već iu oblikovanju imunološkog odgovora domaćina. Pristupi zasnovani na imunoproteomiji su pokazali prisustvo anti-SLP antitela u serumu šest pacijenata inficiranih ribotipom C. difficile 017, što sugeriše da su SLP proteini imunodominantni i eksprimirani tokom infekcije [50]. Studija koju su vodili Bruxelles et al. pokazao povišen nivo anti-SlpA antitela kod pacijenata sa CDI u poređenju sa zdravim pacijentima [52]. U drugoj studiji, Negm et al. detektovala IgG antitijela u serumima od ukupno 327 osoba sa CDI protiv SLP ekstrakta iz različitih sojeva C. difficile [53]. Pored SlpA, izloženi C-terminalni domen drugog najzastupljenijeg proteina Cwp66 je veoma varijabilan dok je N-terminalni domen dobro očuvan. Pokazalo se da su varijabilni C-terminalni domeni Cwp66 i Cwp84 imunogeni kod ljudi [49,54]. Pored toga, kod pacijenata sa CDI, srednji ukupni nivoi anti-Cwp66 i anti-Cwp84 bili su niži od zdrave kontrolne grupe što ukazuje na zaštitnu prirodu antitela. Stoga, SLP, posebno SlpA, i druge komponente imaju važnu ulogu u imunološkoj odbrani i potencijalne su mete za razvoj imunoterapije i vakcine, kao što je opisano u sljedećim odjeljcima.

7. SLP-ovi posreduju u adheziji C. difficile

C. difficile inicira infekciju prianjanjem na epitelne ćelije crijeva što dovodi do kolonizacije. U tom smislu, bakterijski SLP-ovi kao što su SlpA i Cwp66 igraju ključnu ulogu u adheziji. Prijavljeno je da varijacije u SLP-ovima posebno SlpA u izolovanim sojevima C. difficile pokazuju promjene u adherenciji [55]. Pokazalo se da SLP vezuju različite ćelijske linije, kao što su ljudske gastrointestinalne ćelijske linije Hep-2 i Vero ćelija, i mnoge proteine ​​ekstracelularnog matriksa. Nadalje, tretman anti-HMW-SLP antitelima inhibirao je prianjanje C. difficile. Pored toga, predtretman ćelija domaćina sa prečišćenim SlpA podjedinicama ili anti-SlpA antitelima je takođe sprečio prianjanje na C. difficile [55]. Najveći homolog člana SlpA porodice proteina je CwpV protein, koji se eksprimira na fazno varijabilan način. U posebnoj studiji, pokazano je da C-terminalni repetitivni domen CwpV proteina posreduje agregaciju C. difficile. Nadalje, ovaj domen varira između sojeva i identificirano je pet antigenski različitih tipova ponavljanja [40].

Pokazalo se da još jedan imunogeni protein nazvan Cwp66 ima svojstva adhezije. Prečišćeni Cwp66 i antitela protiv N-terminalnih i C-terminalnih domena inhibirali su prianjanje C. difficile na kultivisane Vero ćelije što ukazuje na svojstva adhezije Cwp66 [29].

8. Indukcija upalnih odgovora

Bianco et al. pokazao ulogu SLP-a u procesu upale. U toj studiji, SLP iz hipervirulentnih i epidemijskih (H/E) ili ne-H/E sojeva C. difficile pročišćeni su i proučavani u ljudskim monocitima i dendritskim ćelijama (MDDC) izvedenim iz monocita u smislu indukcije imunomodulatornih citokina [interleukin (IL)-1 , IL-6 i IL- 10] [56]. Studija je pokazala da SLP ne samo da induciraju sazrijevanje MDDC-a, s pojačanom aktivnošću predstavljanja antigena, već također izazivaju lučenje visokih nivoa IL-10. Međutim, nisu nađene značajne razlike u aktivaciji monocita i MDDC preparatima SLP od H/E i ne-H/E sojeva, što sugerira da SLP ne doprinose povećanju ozbiljnosti bolesti [56]. U drugoj studiji, Ausiello et al. ekstrahirao SLP iz kliničkog izolata C253 i pokazao da SLP izaziva lučenje pojačanih nivoa IL-1 i IL-6 proinflamatornih citokina u monocitima u mirovanju i inducira sazrijevanje ljudskih MDDC-a, te pojačanu proliferaciju T ćelije [57]. Nadalje, ovi tretirani MDDC-i također oslobađaju povišene količine IL-10 i IL-12p70 i izazivaju mješoviti Th1/Th2 imuni odgovor. TLR-4 je igrao važnu ulogu u SLP-posredovanoj aktivaciji DC-a. Pokazalo se da SLP-ovi ne mogu aktivirati DC izolovane od TLR4-mutantnih C3H/HeJ miševa i nisu uspjeli inducirati naknadni Th imuni odgovor sugerirajući da SLP-ovi aktiviraju urođeni i adaptivni imunitet posredovan TLR4 receptorom [19]. U drugoj studiji, na makrofagima je pokazano da SLP iz C. difficile izazivaju odgovor klirensa u smislu sekrecije proinflamatornih citokina i hemokina uz povećanu migraciju makrofaga i fagocitotsku aktivnost [58]. Tretman inhibitorom p38 preokrenuo je ove odgovore sugerirajući ulogu signalnih molekula u SLP-posredovanim odgovorima [58]. Vrlo nedavna studija je izvijestila o aktivaciji inflamasoma od strane C. difficile SLP na način ovisan o dozi. Nadalje, pokazano je da mikrodomene bogate holesterolom (lipidni splavovi) na ćelijskim membranama pomažu u vezivanju SLP-a na ćelijsku membranu. Ovo se zasnivalo na fluorescentnoj mikroskopiji, gdje je pokazano da tretman metil- -ciklodekstrinom (M CD) koji iscrpljuje membranski holesterol smanjuje vezivanje SLP-a, što sugerira da SLP regrutuju lipidne splavove, kritične za kolonizaciju C. difficile i aktivaciju inflamasoma [59 ]. Ove studije tvrde da SLP-ovi C. difficile mogu aktivirati urođene i adaptivne imune odgovore, koji su djelimično posredovani TLR4, sugerirajući važnu ulogu SLP-a u izazivanju imunološkog odgovora. Stoga, ovi rezultati također sugeriraju potencijal SLP-a kao kandidata za vakcinu protiv CDI.

9. Odgovori antitela protiv CDI

Nekoliko imunoloških studija ukazuje da infekcija i ishod C. difficile zavise od intenziteta imunološkog odgovora domaćina, ključnog faktora u patogenosti CDI. Stoga, nemogućnost razvoja snažnog odgovora antitijela može biti prognoza za ozbiljnost i recidiv bolesti [60]. U tom smislu, nivoi antitela protiv glavnih toksina su u korelaciji sa recidivom i težinom bolesti [61,62]. Antitela protiv površinskih komponenti C. difficile prijavljena su u serumu pacijenata sa CDI iu ranijim studijama [63]. Drudy et al. procijenio humoralni imuni odgovor na C. difficile SLP ekstrakte u kohorti od 146 pacijenata od 55 pacijenata s dijarejom povezanom s C. difficile (CDAD), 34 pacijenta sa asimptomatskim nosiocima i 57 kontrolnih subjekata [64]. Studija je izolovala ekstrakciju SLP frakcija visoke i niske MW, koje su sadržavale uglavnom obilan protein SlpA. Oni su mjerili serumska antitijela koristeći enzimski imunosorbentni test (ELISA) u ovoj kohorti i nisu našli značajne razlike u serumskim nivoima IgM, IgA ili IgG antitijela. Zanimljivo je da su pacijenti sa rekurentnim epizodama CDAD-a imali značajno niže nivoe IgM-anti-SLP od pacijenata sa pojedinačnim epizodama. Studija je zaključila da treba uraditi dalje studije kako bi se odredili odgovori specifičnih anti-SLP antitijela i zaštitne studije korištenjem SLP-ova C. difficile [64].

Pasivna i aktivna imunizacija korištenjem izolovanih ekstrakata HMW i LMW SLP-a pokazala je ohrabrujuće rezultate s povećanom stopom preživljavanja u modelima izazivanja smrtonosnih hrčaka. O'Brien et al. pokazao zaštitni odgovor anti-SLP antitela na infekciju C. difficile kod hrčaka, gde je preživljavanje bilo značajno produženo u grupama tretiranim anti-SLP u poređenju sa kontrolnim grupama [65]. Pokazalo se da je zaštitni efekat antiseruma kroz pojačanje fagocitoze C. difficile [65]. Eidhin i saradnici, koristeći aktivnu imunizaciju, testirali su sirovi ekstrakt SLP koji sadrži ekvimolarne količine komponenti LMW i HMW peptida SlpA kao vakcinu sa različitim sistemskim i mukoznim adjuvansima kod zlatnih sirijskih hrčaka i BALB/c mišjih modela. Studija je izvijestila o skromnoj do slaboj stimulaciji antitijela unutar različitih režima, a modeli miša su pokazali jači odgovor antitijela na SLP u poređenju sa hrčcima [66]. U drugoj studiji, Brunet al. ispitali in vivo adjuvantnu aktivnost dva peptida koji se sastoje od domene za vezivanje receptora toksina A (TxA (C314)) i fragmenta SLP-36 kDa iz C. difficile soja C253 protiv fibronektin-vezujućeg proteina A (FnbpA ), zaštitni antigen vakcine protiv Staphylococcus aureus [67]. Procijenili su odgovor korištenjem intranazalnih i subkutanih puteva i otkrili da oba fragmenta povećavaju proizvodnju cirkulirajućih anti-FnbpA IgG i IgA. Zaključili su da ovi fragmenti, kada se koriste kao pomoćna sredstva, različito utiču i polariziraju imunološki sistem [67]. U drugoj studiji, Shirvan et al. generisala i eksprimirala specifična rekombinantna antitela protiv SLP-ova kao što su Cwp66 i SlpA iz proteina C. difficile 630 koristeći fag displej i pokazala da ova rekombinantna antitela reaguju na SLP i njihove komponente na soj-specifičan način sa visokom specifičnošću [68].

Imuni odgovor i zaštita u modelu hrčka koji koristi Cwp84 proteazu kao antigen procijenjen je na nekoliko načina imunizacije [69]. Studija je otkrila različite titre antitela na osnovu puteva imunizacije. Najbolja zaštita uočena je rektalnim putem imunizacije. Nadalje, imunizirane grupe hrčaka rezultirale su 26% slabijom i sporijom kolonizacijom crijeva C. difficile nakon izazivanja C. difficile sa značajno većom stopom preživljavanja (33% većom) od neimuniziranih grupa [69].

cistanche biljka koja povećava imuni sistem

10. Anti-C zasnovan na SLP-ovima. difficile Therapeutics

Specifična terapija zasnovana na antitijelima za neutralizaciju C. difficile može biti efikasna strategija. Kandalaft et al. koristili jednodomenska antitijela za ciljanje SLP-ova [70]. Grupa je pripremila panel SLP-specifičnih jednodomenskih antitijela (VHH) iz hipervirulentnog soja C. difficile QCD-32g58 (027 ribotip). Njihovi rezultati su pokazali veliki broj VHH vezanih za QCD-32g58 epitope koji se nalaze na LMW podjedinici SLP sa visokim afinitetom. Nadalje, izvijestili su da ovi VHH imaju specifičnost vezivanja za ribotipove 001 i 027, a podskup ovih VHH antitijela je široko reaktivan na 012, 017, 023 i 078 ribotipove. Pokazalo se i da ovi VHH inhibiraju pokretljivost C. difficile QCD-32g58 in vitro [70].

Razvoj drugog preciznog antibakterijskog agensa Av-CD291.2 od strane Kirka et al. prijavljeno je da specifično ubija C. difficile i sprečava kolonizaciju kod miševa [51]. Pokazalo se da Av-CD291.2 ubija različite izolate C. difficile na osnovu prisustva SLP sekvenci u sojevima C. difficile. Autori tvrde da su identifikovali SLP null mutante koji sadrže tačkastu mutaciju u genu slpA, koji su otporni na Av-CD291.2 agense. Ovi mutanti su također imali defekte sporulacije, ali su bili u stanju da koloniziraju crijevni trakt uprkos smanjenju virulencije u modelu hrčka [51]. Nadalje, oni su konstruirali panel Avidocin-CD koji ubija različite sojeve C. difficile na način ovisan o SLP sekvenci, što sugerira važnu ulogu ovih antibakterijskih lijekova zasnovanih na SLP-ovima u prevenciji CDI [51].

11. Završne napomene i kritična neodgovorena pitanja

Domaćin razvija snažan specifični imuni odgovor protiv C. difficile toksina i površinskih komponenti. Pokazalo se da SLP-ovi imaju ulogu u adheziji ćelija, indukciji različitih citokina kroz aktivaciju TLR4 i aktivaciji urođenog i humoralnog imunološkog odgovora. Međutim, potrebne su studije o aktivaciji odgovora T-ćelija od strane SLP-a da bi se dalje secirala uloga CD4 i CD8 ćelija. Na osnovu aktivacije humoralnog odgovora, ova neutralizirajuća antitijela protiv toksina i površinskih komponenti mogu spriječiti kliničke znakove CDI. Studije koje koriste aktivnu ili pasivnu imunizaciju protiv SLP-a pokazale su obećavajuće rezultate, što ukazuje da se strategija može dalje razviti u nove terapeutike protiv patogenosti CDI. Mnogo pažnje je posvećeno SlpA kao kandidatu za vakcinu; međutim, zbog velike varijabilnosti sekvence SlpA između sojeva, vakcina možda neće biti efikasna protiv svih ribotipova. Stoga će možda biti potrebne vakcine zasnovane na epitopu da bi se zaobišao ovaj problem. U tom smislu, jednodomenska antitela (VHH) protiv SLP su održive opcije, koje vezuju LMW-SLP podjedinicu C. difficile sa visokom specifičnošću i pokazalo se da inhibiraju pokretljivost sojeva C. difficile. Trenutno, razumijevanje mehaničke uloge SLP-a i njihovih paraloga u CDI patogenezi, adheziji i T-ćelijskom odgovoru je još uvijek u početnim fazama i uglavnom ostaje neistraženo. Potrebne su daljnje studije da se seciraju molekularne funkcije i specifični imunološki odgovori SLP-ova, kako bi se potaknuo brzi razvoj novih ciljeva vakcine/lijekova i terapeutika za borbu protiv infekcija C. difficile.

Reference

1. Chandra, H.; Sharma, KK; Tuovinen, OH; Sun, X.; Shukla, P. Pathobionts: Mehanizmi preživljavanja, ekspanzije i interakcije s domaćinom s fokusom na Clostridioides difficile. Gut Microbes 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; Citron, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Preklasifikacija Clostridium difficile kao Clostridioides difficile (Hall i O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Oren, A.; Garrity, GM Obavijest o promjenama u taksonomskom mišljenju koje je ranije objavljeno izvan IJSEM-a. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Centri za kontrolu i prevenciju bolesti. Prijetnje otpornosti na antibiotike u Sjedinjenim Državama, 2019. 2019. Dostupno na internetu: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (pristupljeno 8. septembra 2022.).

5. Shields, K.; Araujo-Castillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Rekurentna infekcija Clostridium difficile: od kolonizacije do izlječenja. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Chandra, H.; Sorg, JA; Hasett, DJ; Sun, X. Regulatorni transkripcijski faktori patogeneze Clostridioides difficile s fokusom na regulaciju toksina. Crit. Rev. Microbiol. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilson, J.; Barwinska-Sendra, A.; Kirk, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; El Omari, K.; Wagner, A.; et al. Struktura i sklop S-sloja kod C. difficile. Nat. Commun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Karakteristike i imunološke uloge proteina površinskog sloja u Clostridium difficile. Ann. Lab. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimirad, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Yadegar, A.; Ghalavand, Z.; Zali, MR Protein A površinskog sloja iz hipervirulentnih ribotipova Clostridioides difficile izaziva značajne promjene u ekspresiji gena uskih spojeva i upalnog odgovora u ljudskim intestinalnim epitelnim stanicama. BMC Microbiol. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Wilson, KH; Sheagren, JN Antagonizam toksigenog Clostridium difficile prema netoksičnom C. difficile. J. Infect. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Zaštita hrčaka od Clostridium difficile ileokolitisa prethodnom kolonizacijom nepatogenim sojevima. J. Med. Microbiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Seal, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Liječenje relapsirajuće Clostridium difficile dijareje primjenom netoksičnog soja. EUR. J. Clin. Microbiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnson, S.; Lavergne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, CP; Wilcox, MH Smjernice za kliničku praksu Američkog društva za infektivne bolesti (IDSA) i Društva za epidemiologiju zdravstvene zaštite Amerike (SHEA): 2021. Fokusirane ažurirane smjernice o upravljanju infekcijom Clostridioides difficile kod odraslih. Clin. Zaraziti. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristea, A.; Guery, B.; Krutova, M.; Norén, T.; Allerberger, F.; Coia, JE; et al. Evropsko društvo za kliničku mikrobiologiju i infektivne bolesti: ažuriranje dokumenta sa smjernicama za liječenje infekcije Clostridioides difficile kod odraslih iz 2021. Clin. Microbiol. Zaraziti. 2021, 27 (Suppl. 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patouni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Neuspjeh liječenja i recidiv infekcije Clostridium difficile nakon liječenja vankomicinom ili metronidazolom: sistematski pregled dokaza. Int. J. Antimicrob. Agenti 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: Nova terapija monoklonskim antitijelima za prevenciju rekurentne infekcije Clostridium difficile. Biologika 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Sistematski pregled sa meta-analizom: Dugoročni rezultati transplantacije fekalne mikrobiote za infekciju Clostridium difficile. Aliment. Pharmacol. Ther. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Quraishi, MN; Widlak, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Price, M.; Sharma, N.; Iqbal, TH Sistematski pregled sa metaanalizom: Efikasnost transplantacije fekalne mikrobiote u liječenju rekurentne i refraktorne infekcije Clostridium difficile. Aliment. Pharmacol. Ther. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Ryan, A.; Lynch, M.; Smith, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; et al. Uloga TLR4 u infekciji Clostridium difficile i prepoznavanju proteina površinskog sloja. PLoS Patog. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, PA; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Clostridium difficile flagele pretežno aktiviraju TLR5-povezan NF-κB put u epitelnim ćelijama. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Demonstracija i preliminarna karakterizacija pravilnog niza u ćelijskom zidu Clostridium difficile. FEMS Microbiol. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sára, M.; Sleytr, UB proteini S-sloja. J. Bacteriol. 2000, 182, 859–{5}}. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Poxton, IR; Fairweather, NF Predložena nomenklatura za proteine ​​ćelijskog zida Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monot, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Vallenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. Reanotacija sekvence genoma Clostridium difficile soja 630. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Paxton, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. Molekularna karakterizacija proteina površinskog sloja iz Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Karjalainen, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Molekularna i genomska analiza gena koji kodiraju površinski usidrene proteine ​​iz Clostridium difficile. Zaraziti. Immun. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Willing, SE; Candela, T.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesnage, S.; Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile površinski proteini su usidreni za ćelijski zid pomoću CWB2 motiva koji prepoznaju anjonski polimer PSII. Mol. Microbiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Shone, CC; Acharya, KR Cwp2 iz Clostridium difficile pokazuje prošireni trodomenski nabor i ćelijsku adheziju in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

30. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Karakterizacija proteina ćelijske površine Clostridium difficile sa adhezivnim svojstvima. Zaraziti. Immun. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guan, Z.; On, Y.; Yu, W.; Cui, G.; et al. Gen cwp66 utiče na ćelijsku adheziju, toleranciju na stres i otpornost na antibiotike kod Clostridioides difficile. Microbiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagan, RP; Storck, EM; Heal, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW Hemijske sonde biogeneze površinskog sloja u Clostridium difficile. ACS Chem. Biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kirby, JM; Ahern, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Freeman, Z.; Acharya, KR; Shone, CC Cwp84, površinski povezana cisteinska proteaza, igra ulogu u sazrijevanju površinskog sloja Clostridium difficile. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, površinski povezan protein Clostridium difficile, je cisteinska proteaza s degradirajućom aktivnošću na proteinima ekstracelularnog matriksa. J. Bacteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Mihelić, M.; Lindić, N.; Borišek, J.; Perdih, A.; Pretnar, G.; Müller, U.; Turk, D. CWB2 modul za sidrenje ćelijskog zida je otkriven kristalnim strukturama proteina ćelijskog zida Clostridium difficile Cwp8 i Cwp6. Struktura 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Vjerovatni model poravnanja lokalnog niza koji pojednostavljuje procjenu statističke značajnosti. PLoS Comput. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, DG; Haynes, CA; Finlay, BB; Strynadka, NC Kristalna struktura enteropatogenog kompleksa intimin-receptora Escherichia coli. Nature 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Willing, SE; Tate, EW; Fairweather, NF Uloga cisteinskih proteaza Cwp84 i Cwp13 u biogenezi ćelijskog zida Clostridium difficile. J. Bacteriol. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 domeni: Složenost u umjerenosti. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

40. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. Nove uloge SH2 i SH3 domena u vezivanju lipida. Ćelije 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reynolds, CB; Emerson, JE; de la Riva, L.; Fagan, RP; Fairweather, NF Protein ćelijskog zida Clostridium difficile CwpV je antigenski varijabilan između sojeva, ali pokazuje očuvanu funkciju podsticanja agregacije. PLoS Patog. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Shone, CC; Acharya, KR Molekularna struktura domene glikozid hidrolaze Cwp19 iz Clostridium difficile. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Zhu, D.; Bullock, J.; On, Y.; Sun, X. Cwp22, novi enzim za umrežavanje peptidoglikana, igra pleiotropnu ulogu u Clostridioides difficile. Environ. Microbiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finn, RD; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Eddy, SR; Mistry, J.; Mitchell, AL; Potter, SC; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; et al. Baza podataka porodica proteina Pfam: ka održivijoj budućnosti. Nukleinske kiseline Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Čekaj, R.; Begum, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brown, K.; Fairweather, N. Proteomska analiza proteina ćelijske površine iz Clostridium difficile. Proteomika 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Tedde, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pizza, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL Diverzitet cwp lokusa u kliničkim izolatima Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dingle, KE; Didelot, X.; Ansari, MA; Eyre, DW; Vaughan, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubchik, T.; Bowden, R.; et al. Rekombinacijsko prebacivanje S-sloja Clostridium difficile i novog klastera glikozilacijskih gena otkriveno velikim sekvenciranjem cijelog genoma. J. Infect. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brown, KA; Fairweather, NF Strukturni uvid u molekularnu organizaciju S-sloja iz Clostridium difficile. Mol. Microbiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile ima dva paralelna i bitna Sec sekrecijska sistema. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmée, M.; Collignon, A. Imunološka svojstva površinskih proteina Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brown, K.; Fairweather, NF Imunoreaktivni proteini ćelijskog zida Clostridium difficile identificirani ljudskim serumima. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirk, JA; Gebhart, D.; Buckley, AM; Lok, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Nova klasa preciznih antimikrobnih sredstava redefinira ulogu Clostridium difficile S-sloja u virulenciji i održivosti. Sci. Transl. Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hoys, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Imunogena svojstva prekursora površinskog sloja Clostridium difficile i testovi vakcinacije na životinjskim modelima. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hamed, MR; Dilnot, EM; Shone, CC; Marszalowska, I.; Lynch, M.; Loscher, CE; Edwards, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; et al. Profiliranje Humoralnih imunoloških odgovora na Clostridium difficile-specifične antigene pomoću proteinske mikromrežne analize. Clin. Vaccine Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Varijabilnost površinskih proteina Clostridium difficile i odgovor specifičnih serumskih antitijela kod pacijenata s bolešću povezanom s Clostridium difficile. J. Clin. Microbiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merrigan, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. Protein površinskog sloja A (SlpA) je glavni faktor prianjanja Clostridium difficile na ćelije domaćina. PLOS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Imunomodulatorne aktivnosti proteina površinskog sloja dobijenih iz epidemijskih i hipervirulentnih sojeva Clostridium difficile. J. Med. Microbiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Proteini površinskog sloja iz Clostridium difficile induciraju inflamatorne i regulatorne citokine u ljudskim monocitima i dendritskim ćelijama. Mikrobi inficiraju. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Collins, LE; Lynch, M.; Marszalowska, I.; Kristek, M.; Rochfort, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE Proteini površinskog sloja izolovani iz Clostridium difficile indukuju reakcije klirensa u makrofagima. Mikrobi inficiraju. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huang, K.; Chen, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, WC; Tsai, PJ Membranski holesterol je ključan za vezivanje proteina površinskog sloja Clostridium difficile i izazivanje aktivacije inflamasoma. Front. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Možemo li identificirati pacijente s visokim rizikom od ponovne infekcije Clostridium difficile? Clin. Microbiol. Zaraziti. 2012, 18 (Suppl. 6), 21–27. [CrossRef]

61. Wult, M.; Norén, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. Odgovor IgG antitijela na toksine A i B kod pacijenata sa infekcijom Clostridium difficile. Clin. Vaccine Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Blair, B.; Leney, M.; Knauber, M.; Reilly, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, CP; Katchar, K.; Baxter, R.; et al. Serumsko anti-toksin B antitijelo korelira sa zaštitom od rekurentne infekcije Clostridium difficile (CDI). Vaccine 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. Imunoblot analiza odgovora serumskog imunoglobulina G na površinske proteine ​​Clostridium difficile kod pacijenata sa dijarejom povezanom sa antibioticima. J. Clin. Microbiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Odgovor ljudskih antitijela na proteine ​​površinskog sloja u infekciji Clostridium difficile. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, NE; Kelleher, DP Pasivna imunizacija hrčaka protiv infekcije Clostridium difficile korištenjem antitijela na proteine ​​površinskog sloja. FEMS Microbiol. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Aktivna imunizacija hrčaka protiv infekcije Clostridium difficile korištenjem proteina površinskog sloja. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brun, P.; Scarpa, M.; Grillo, A.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 i SLP-36kDa pojačavaju imuni odgovor na antigen koji se istovremeno primjenjuje. J. Med. Microbiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. Izolacija rekombinantnih antitijela usmjerenih protiv površinskih proteina Clostridium difficile. Braz. J. Microbiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné, S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hoys, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Imunizacija hrčaka protiv infekcije Clostridium difficile korištenjem Cwp84 proteaze kao antigena. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faasen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logan, SM; Tanha, J. Ciljanje proteina površinskog sloja s jednodomenskim antitijelima: potencijalni terapijski pristup protiv bolesti povezane s Clostridium difficile. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]