Istraživanje terapeutskih efekata i mehanizma Yishen Tonglong dekocije na benignu hiperplaziju prostate kod pacova putem signalnog puta IL-6/STAT3
Dec 17, 2025
Abstract
Cilj:Istražiti, putem transduktora interleukina (IL)-6/signala i aktivatora signalnog puta transkripcije (STAT)3, meliorativne efekte i mehanizam Yiqi Wenshen Tonglong decokcije (ovdje skraćeno Yishen Tonglong decoction) na benignu hiperplaziju prostate (BPH).
Metode:Mužjaci Sprague-Dawley (SD) pacova su kastrirani i zatim supkutano ubrizgani testosteron propionatom kako bi se uspostavio model BPH. Pacovi su nasumično raspoređeni u sljedeće grupe (n=12/grupa): model; Yishen Tonglong Decoction grupe niske i visoke doze (15 i 30 g/kg); STAT3 aktivatorska grupa (Colivelin, 1 mg/kg); i kombinovana decokcija Yishen Tonglong visokih doza (30 g/kg) + Colivelin (1 mg/kg) grupa. Dodatnih 12 muških SD pacova služilo je kao lažno operirana grupa. Nakon tretmana specifičnih za grupu sa Yishen Tonglong Decoction i/ili Colivelinom, procijenili smo indeks prostate (PI) i odnos estradiola (E2)/testosterona (T); procijenjena histomorfologija prostate i fibroza s hematoksilin-eozin (HE) i Massonovim trihromnim bojenjem; izmjerena ekspresija Ki-67 imunohistohemijom; kvantificirani nivoi IL-6 i IL-1 u tkivu prostate i serumu pomoću ELISA; i detektovane proteine kolagena I/III i IL-6/STAT3 putem Western blotinga.
Rezultati:U poređenju sa lažnim, grupa modela pokazala je izraženu hiperplaziju i fibrozu prostate, uz značajno povećanje PI, Ki-67 optičke gustine, tkiva/seruma IL-6 i IL-1, kolagena I/III, IL-6 proteina i p-STAT3/STAT3, uz značajno smanjenje E2/T <0. (500ll P <0). U poređenju sa modelnom grupom, i niske i visoke doze Yishen Tonglong decokcije su ublažile hiperplaziju i fibrozu, smanjile PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kolagen I/III, IL-6 protein i p-STAT3/STAT3, i povećale E2/T (svi P < 0,05). Dekocija sa visokim dozama dala je veća poboljšanja od niske doze (P < 0,05). Sam Colivelin je pogoršao hiperplaziju i fibrozu i dodatno povećao PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kolagen I/III, IL-6 i p-STAT3/STAT3 dok je smanjio E2/T (P < 0,05). Istodobna primjena Colivelina umanjila je dobrobiti odvarka u visokim dozama, značajno pogoršavajući sve gore navedene indekse u poređenju sa samim dekocijom visokih doza (P < 0,05).
zaključak:Yishen Tonglong decoction ublažava upalu i poboljšava patologiju BPH kod pacova, barem djelomično potiskivanjem aktivacije IL-6/STAT3 signalnog puta.
Ključne riječi:IL-6/STAT3 signalizacija; Yishen Tonglong decoction; benigna hiperplazija prostate; biljka za lečenje problema sa prostatitisom
Herb Cistanche suplementi
Više detalja o novoj tcm biljci za zdravlje prostate
Uvod
Benigna hiperplazija prostate (BPH) je uobičajeno opstruktivno stanje donjeg urinarnog trakta kod sredovečnih i starijih muškaraca, karakterizirano proliferacijom epitela i strome i povećanjem prostate, što dovodi do oklevanja, učestalosti i hitnosti mokrenja što značajno narušava kvalitetu života [1,2]. Upala je ključni pokretač patogeneze BHP; potiče proliferaciju glatkih mišića epitela i strome i fibrozno remodeliranje. Stoga su antiinfektivne i antiinflamatorne strategije efikasne za prevenciju i liječenje BHP [3,4].
IL-6 je pleiotropni proinflamatorni citokin široko izražen u ćelijama tkiva. Aktivira STAT3 za pokretanje upalnih programa [5]. Inhibiranje IL-6/STAT3 aktivacije smanjuje nizvodno proinflamatorne medijatore, prekida upalne kaskade, smanjuje imunološku infiltraciju i fibrozu povezanu s hipertrofijom i na kraju usporava progresiju BPH [6,7]. Dakle, IL-6/STAT3 je racionalna terapijska meta u BPH.
Yishen Tonglong decoction je klasična kineska biljna formula s tradicionalnim funkcijama njeguje Yin i podržava Yang, tonizira Qi i bubrege i potiče cirkulaciju krvi uz ublažavanje vlage. Klinički se koristi za disuriju zbog vlažne vrućine i zastoja krvi s nedostatkom Qi bubrega, a zabilježeno je i da ublažava upalu prostate i hiperplastične promjene u BHP [8]. Osim BPH, inhibira proliferaciju ćelija raka prostate kod ljudi, potiče apoptozu i suzbija invaziju i migraciju [9]. Mrežna farmakologija i molekularna veza sugeriraju da ključni ciljevi relevantni za modulaciju bolesti prostate uključuju AKT1, IL-6 i VEGFA, između ostalih [10]. Na osnovu ovog teoretskog obrazloženja i prethodnih dokaza, pretpostavili smo da Yishen Tonglong decoction poboljšava BPH supresijom IL-6/STAT3 signalizacije. Ovu hipotezu smo testirali na modelu BPH kod pacova.
Materijali i metode
Životinje
Mužjaci SD pacova, SPF grade, 200–230 g, stari 6–7 sedmica, nabavljeni su od Daoke Pharmaceutical Technology (Guangdong) Co., Ltd. (SCXK [Yue] 2022-0060). Pacovi su držani na manje od ili jednako 4 po kavezu u ciklusima od 12 sati svjetlo/mrak, 50-60% vlažnosti i 23-25 stepeni.
Reagensi i instrumenti
Yishen Tonglong izvarak sirovog bilja: Anemarrhena asphodeloides (Zhi Mu), Phellodendron chinense (Huang Bai), Cinnamomum cassia (Rou Gui), Rehmannia glutinosa pripremljeni korijen (Shu Di Huang), Cornus officinalis (Shan Yacoso op Yu), PoShan Yacos (Shan YacosoF) Ling), kora Paeonia suffruticosa (Mu Dan Pi), Achyranthes bidentata (Niu Xi), Aconitum carmichaeli obrađeni bočni korijen (Fu Zi), Sparganium stoloniferum (San Leng), Curcuma zedoaria (E Zhu), sjeme Prunus persica (Tao Ren), Lisca semaria (Tao Ren), Alisca plantago-aquatica (Ze Xie). Izvor: Peking Tongrentang (Anguo) Chinese Herbal Slices Co., Ltd.
Colivelin (HY-P1061), MCE (SAD).
Testosteron propionat (čistoća 98%, T7260); ELISA setovi za pacove IL‑1 (SEKR-0002), E2 (SEKR-0107), T (SEKSM-0003), Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.
HE komplet za bojenje (ab245880), anti-p-STAT3 (ab76315), Massonov komplet (ab150669), anti-STAT3 (ab68153), anti-kolagen I (ab270993), anti-Ki-b1667, anti-Ki-b1667 (ab184993), anti‑IL‑6 (ab259341), sekundarni HRP magarca protiv zeca (ab205722), IL‑6 ELISA pacova (ab234570), Abcam (SAD).
Anti‑‑aktin (AF5003), Beyotime (Šangaj).
Parafinski mikrotom HS‑2205 (Olabao, Jinan), mikroskop KP‑PH100S (Shenzhen KEPUS), UMR‑9600 čitač mikroploča (Hangzhou Youmi), PowerPac Basic 1645050 i PROTEAN napajanja (Bio‑Rad, SAD).
BPH model i grupisanje
Pacovi su anestezirani natrijum pentobarbitalom (45 mg/kg, 3% w/v, intraperitonealno), testisi su eksteriorisani i hirurški uklonjeni. Nakon 3 dana oporavka, pacovi su svakodnevno primali potkožne injekcije testosteron propionata (5 mg/kg u maslinovom ulju) tokom 21 dana. Veliko povećanje i histopatološka hiperplazija potvrdili su uspjeh modeliranja BHP [11]. Lažni štakori su podvrgnuti rezu skrotuma bez orhidektomije i primali su maslinovo ulje.
Priprema i administracija
Jedan recept za Yishen Tonglong decoction sadržavao je: Zhi Mu, Huang Bai, Shan Zhu Yu, Shan Yao, Fu Ling, Mu Dan Pi, Wang Bu Liu Xing, Ze Xie (svaki po 15 g); Niu Xi, Shu Di Huang, Tao Ren (svaki po 20 g); Fu Zi, San Leng, E Zhu, Rou Gui (svaki po 10 g). Bilje je dva puta prepareno vodom, filtrati su spojeni i koncentrirani do 1,5 ili 3,0 g/mL. Colivelin je otopljen u fiziološkom rastvoru do 0,1 mg/mL.
Grupe sa niskim i visokim dozama dekokcija: gavaža 15 ili 30 g/kg (10 mL/kg pri 1,5 ili 3,0 g/mL), plus intraperitonealni fiziološki rastvor (10 mL/kg).
Colivelin grupa: fiziološki rastvor za gavažu (10 mL/kg) plus intraperitonealni Colivelin 1 mg/kg (10 mL/kg od 0,1 mg/mL).
Visoka doza + Colivelin grupa: gavaža 30 g/kg dekokcije plus Colivelin 1 mg/kg ip
Grupe lažnih i modela: fiziološki rastvor za gavažu i fiziološki rastvor za ip (10 mL/kg).
Svi tretmani su bili jednom dnevno tokom 21 dana.
Indeks prostate i E2/T; Zbirka uzoraka
Dvadeset četiri sata nakon završnog tretmana, pacovi su anestezirani (kao gore). Tjelesna masa i vlažna težina prostate su zabilježeni za izračunavanje PI=vlažne težine prostate/tjelesne mase. Sakupljena je krv iz abdominalne aorte, centrifugirana (2000 o/min, 15 min) da bi se dobio serum. E2 i T su izmjereni ELISA i E2/T izračunati; preostali serum je pohranjen na -80 stepeni. Otprilike 0,7 g tkiva prostate je naglo zamrznuto u tekućem dušiku za proteinske testove; ostatak je fiksiran, dehidriran, umotan u parafin i izrezan na ~5 μm.
ON i Massonovo bojenje
Deparafinizacija u ksilenu i gradiranim etanolima (100%, 90%, 80%, 75%) praćena je hidratacijom. Sekcije su obojene HE i Massonovim kompletima prema uputama proizvođača (svaka po 3 slajda), zatim oprane, dehidrirane, očišćene i montirane za mikroskopiju.
Imunohistohemija za ćelijsku proliferaciju
Nakon deparafinizacije/hidratacije, rezovi su tretirani sa 3% H2O2, blokirani kozjim serumom i inkubirani preko noći sa anti-Ki-67 (1:150). Detekcija je koristila SP komplet sa DAB hromogenom. Slike su dobijene, a optička gustoća Ki-67 je kvantificirana pomoću ImageJ.
ELISA za IL‑6 i IL‑1 u prostati i serumu
Smrznuto tkivo prostate je mljeveno, homogenizirano u RIPA puferu i centrifugirano (3000 rpm, 20 min) da bi se dobili ukupni proteinski lizati. Koncentracije proteina određene su BCA. Alikvoti (0,2 mL) lizata tkiva i odmrznutog seruma analizirani su na IL-6 i IL-1 pomoću ELISA.
Western blot za proteine kolagena I/III i IL‑6/STAT3 puta
Denaturirani uzorci (100 stepeni) su razdvojeni SDS-PAGE i prebačeni u nitrocelulozu. Membrane su podijeljene prema molekularnoj težini za kolagen I, kolagen III, ‑aktin, IL‑6, STAT3 i p-STAT3. Nakon 3% blokade BSA, primijenjena su primarna antitijela, a zatim sekundarna antitijela konjugirana s HRP. Trake su vizualizirane hemiluminiscencijom i kvantificirane pomoću ImageJ.
Statistika
Podaci su analizirani pomoću SPSS 26.0 sa jednosmjernim ANOVA i SNK-q post hoc testovima.
Rezultati
Uspjeh modeliranja BHP: U poređenju sa lažnim, grupa modela pokazala je očito povećanje veličine prostate i histološku hiperplaziju i fibrozu. PI, Ki-67 optička gustina, prostata/serum IL-6 i IL-1, kolagen I/III, IL-6 i p-STAT3/STAT3 su svi značajno povišeni, dok je E2/T smanjen (P < 0,05).
Terapeutski efekti Yishen Tonglong dekocije: I doze od 15 i 30 g/kg ublažile su povećanje prostate i fibrozu. Ovi tretmani su značajno snizili PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kolagen I/III, protein IL-6 i p-STAT3/STAT3 i povećali E2/T (P < 0,05). Visoka doza je proizvela superiorne efekte u odnosu na nisku dozu (P < 0,05).
Efekti aktivacije STAT3: Colivelin je pogoršao hiperplaziju i fibrozu prostate i dodatno povećao inflamatorne i fibrotične markere uz smanjenje E2/T u odnosu na model (P < 0,05).
Antagonizam od strane Colivelina: Istodobno liječenje s Colivelinom je oslabilo prednosti dekokcije visoke doze, podižući inflamatorne/fibrotične indekse i smanjujući E2/T u poređenju sa samim dekokcijom visoke doze (P < 0,05).
Diskusija
Mehanističko obrazloženje: Os IL-6/STAT3 je centralni upalni put koji je uključen u remodeliranje tkiva prostate. Vezivanje IL-6 aktivira JAK/STAT3 signalizaciju, pokreće transkripciju proinflamatornih i profibrotičkih gena, podstiče epitelnu/stromalnu proliferaciju, infiltraciju imunoloških ćelija i depoziciju ekstracelularnog matriksa. Naši nalazi – poboljšanje sa biljnom formulom i pogoršanje stanja sa STAT3 aktivatorom – podržavaju uzročno-mehaničku vezu u kojoj Yishen Tonglong decoction ublažava BHP tako što prigušuje aktivaciju IL‑6/STAT3.
Perspektiva biljne formule (biljka za liječenje problema s prostatitisom): Biljke koje se nalaze u komponentama pružaju komplementarna djelovanja relevantna za BPH i upale slične prostatitisu:
Čišćenje i antiinflamatorno čišćenje vlažnom toplotom: Zhi Mu (Anemarrhena), Huang Bai (Phellodendron), Mu Dan Pi (Paeonia kora), Ze Xie (Alisma).
Qi/bubrežna tonifikacija i endokrina modulacija: Shu Di Huang (Rehmannia), Shan Zhu Yu (Cornus), Shan Yao (Dioscorea), Fu Ling (Poria).
Aktivacija krvi i antifibrotički potencijal: San Leng (Sparganium), E Zhu (Zedoary), Tao Ren (jezgra breskve), Wang Bu Liu Xing (Vaccaria).
Zagrijavanje Janga i poboljšanje mikrocirkulacije: Rou Gui (cimet), Fu Zi (akonit, prerađen).
Podrška tetiva/kosti i karlična cirkulacija: Niu Xi (Achyranthes).
Ova sinergija može zajedno smanjiti upalne citokine (IL-6, IL-1), proliferaciju (Ki-67) i fibrozu (kolagen I/III), što je u skladu sa supresijom signalizacije IL-6/STAT3 uočenom u Western blotovima. Porast E2/T sugerira djelomični rebalans spolno-steroidnog miljea, što također može utjecati na dinamiku rasta prostate.
Klinički prijevod i ograničenja: Dok ovi pretklinički podaci obećavaju za BPH i potencijalno za upalu nalik prostatitisu, ekstrapolacija na ljude zahtijeva oprez. Konverzija doze, kontrola kvaliteta preparata sa više biljaka i interakcije lekovitog bilja zahtevaju dalje proučavanje. Ipak, dokazi usmjereni na put (korist od dekocije, šteta od STAT3 aktivacije i očitavanja putanje) jačaju teorijsku osnovu za kliničko istraživanje ovog biljnog pristupa liječenju problema s prostatitisom i BHP.
Zaključak
Yishen Tonglong dekocija ublažava hiperplaziju prostate i fibrozu kod bPH štakora inhibiranjem aktivacije IL-6/STAT3 i smanjenjem upalne i profibrotičke signalizacije, uz djelotvornost ovisno o dozi. Ovi nalazi pružaju mehaničku podršku za njegovu tradicionalnu upotrebu i moderno obrazloženje zasnovano na putevima za daljnji razvoj biljne terapije za BPH i stanja povezana s prostatitisom.
Reference
[1–13] Kako je navedeno u originalnom tekstu.
