Učinci sirovog polisaharida iz Cistanche Deserticola na virusnu vakcinu protiv šapa i šapa, antitijela i podgrupu T ćelija

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

ZHANG Ai-Lian; BA Xue-li; WANG Dan-yang; ZHAO Bing

Bolest slinavke i šapa (FMD)je bolest uzrokovanavirus slinavke i šapa (FMDV)koji se širi među papcima, ozbiljno ugrožavajući zdravlje stoke i prouzrokujući ogromne ekonomske gubitke. Vakcinacija se široko koristi kao efikasno sredstvo za prevenciju slinavke i šapa i postigla je izuzetne rezultate. Zbog slabe imunogenosti antigena inaktiviranog virusom slinavke i šapa, često je potrebno dodati adjuvans koji bi igrao svoju ulogu [1-2]. Trenutno, najčešće korišteni adjuvans u komercijalnim vakcinama protiv slinavke i šapa je uljna emulzija ISA-206, koja je aktivator ćelija i također može poboljšati humoralni imuni odgovor, ali su njeni nuspojave relativno velike. Iako postoji mnogo vrsta pomoćnih sredstava, kao što su obično korišteni adjuvansi (adjuvansi aluminijske soli, emulzije ulje-voda, itd.) i novi adjuvansi (MF59, biljni polisaharidi, itd.), pomoćna sredstva koja se koriste za vakcine protiv slinavke i šapa još uvijek su ograničeni, uglavnom uključujući aluminijum hidroksid, Span, lako mineralno ulje, itd., svi imaju različite nedostatke, kao što su nezadovoljavajući imunološki učinak ili visoko toksični i nuspojave [3-4]. Stoga postoji hitna potreba za razvojem visokoučinkovitih, niskotoksičnih novih adjuvansa za vakcine protiv slinavke i šapa kako bi se poboljšao imunološki zaštitni učinak vakcine, što je od pozitivnog značaja zaprevenciju i liječenje slinavke i šapa.

Kineska medicinaherbal ima široku perspektivu primjene u prevenciji i liječenju zaraznih bolesti. Kineska biljna medicina ima dugu istoriju lečenja bolesti ljudi i životinja. U oblasti istraživanja adjuvansa za vakcine, domaći i strani istraživači su ekstrahovali polisaharide iz raznih kineskih biljnih lekova kako bi proučavali njihove adjuvantne efekte, kao što su ginseng polisaharidi, astragalus polisaharidi, tuckahoe polisaharidi, epimedium polisaharidi, i otkrili da, itd. imunološke funkcije ljudi i životinja. Ima dobar promotivni efekat i postaje novi kandidat za pomoćno sredstvo [5-7].

cistanche (Cistanche deserticola YCMa)je biljka porodice Dang. To je uobičajeno korišten hranjivi kineski biljni lijek i koristi se kao hranjiva hrana za dugotrajnu konzumaciju od strane ljudi. Posljednjih godina istraživači su obavili dosta istraživanja o hemijskoj strukturi i farmakološkoj aktivnosti polisaharida iz Cistanchea i otkrili da njegovi aktivni sastojci uglavnom uključuju polisaharide, ukupni feniletanoidni glikozid, alkaloide itd., među kojima je i sadržaj polisaharida. relativno visoka i može se podesiti. Imuni sistem ima antioksidativne i anti-aging efekte [8-9].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)

Preliminarne studije su otkrile da kombinacija sirovog pustinjskog polisaharida cistanche i OVA imuniziranih miševa značajno povećava nivo OVA-specifičnih antitijela, a kompatibilnost s vakcinom protiv gripa može povećati nivo antitijela u vakcini protiv gripa [10-11]. S obzirom na to, u ovoj studiji korišten je sirovi polisaharid Cistanche deserticola kao kandidat za pomoćno sredstvo za inaktivirano cjepivo protiv slinavke i šapa i odabrani adjuvansi topljivi u vodi sa značajnim djelovanjem na jačanje imuniteta i malim nuspojavama, tako daSirovi polisaharid iz Cistanche deserticola može se efikasno koristiti kao novi adjuvans za vakcine protiv slinavke i šapa.

Priprema sredstva

U ovoj studiji,Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola (CDCP)je u kombinaciji savirusa slinavke i šapaza pripremu vakcina. ICR miševi su imunizirani mišićnim putem. Otkriveni su efekti imunizacije na humoralni i ćelijski imuni odgovor miševa i uočena je njihova sigurnost. Razvoj novog sigurnog adjuvansa za vakcinu protiv slinavke i šapa pruža referencu.

Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na nivo FMDV-specifičnih antitijela u serumu

Nivo serumskih IgG pokazao je postepeni trend rasta 14 dana, 21 dan i 28 dana nakon početne epidemije (Slika 1). 14 i 21 dan nakon inicijalne imunizacije, nivo antitela FMDV Ag/CDCP grupe bio je značajno viši nego u grupi bez adjuvansa FMDV-Ag (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). 28 dana nakon inicijalne imunizacije, u poređenju sa FMDV-Ag bez adjuvansa, nivo IgG antitela na FMDV-Ag/CDCP je značajno povećan (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola (CDCP) na proliferaciju limfocita slezene

21 dan nakon inicijalne imunizacije, MTT metoda je korištena za otkrivanje efekta proliferacije sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola na limfocite slezene. Kao što je prikazano na slici 2, nakon FMDV-Ag stimuliranih limfocita slezene in vitro, indeks stimulacije limfocita FMDV-Ag/CDCP grupe bio je značajno veći od FMDV-Ag grupe bez adjuvansa (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). Nakon stimulacije ConA i LPS-om, može značajno povećati proliferaciju limfocita slezene (P<>

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na ekspresiju CD4 plus i CD8 plus T ćelija

21 dan nakon inicijalne imunizacije, testirani su efekti CDCP i FMDV-Ag na CD4 plus i CD8 plus T ćelije u slezeni miševa. Rezultati su prikazani na slici 3-A D. Odnos CD3 plus , CD4 plus , CD3 plus , CD8 plus T ćelija podskupova u FMDV-Ag/CDCP grupi bio je značajno veći nego kod FMDV-Ag adjuvansa -slobodna grupa (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). Grupa bez adjuvansa FMDV-Ag nije pojačala ekspresiju CD4 plus i CD8 plus T ćelija.

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na CD4 plus, CD44 plus i CD8 plus CD44 plus efektorske podskupove T stanica

Da bi se uočio efekat sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola na efektorske T ćelije, korišćena je protočna citometrija za detekciju ekspresije CD4 plus , CD44 plus i CD8 plus , CD44 plus u ćelijama slezene miševa nakon imunizacije. Rezultati su prikazani na slici 4-AD. Procenti CD4 plus , CD44 plus i CD8 plus , CD44 plus u FMDV Ag/CDCP grupi bili su značajno veći od onih u grupi bez adjuvansa FMDV-Ag (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na rast miševa

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05). Miševi u FMDV Ag/CDCP grupi nisu imali granulome na mjestu injekcije, a miševi u grupivirusa slinavke i šapagrupa vakcine koja je sadržavala ISA 206 uljni adjuvans imala je granulome na mjestu injekcije.

Adjuvansi se već dugo koriste u raznim vakcinama, mogu pomoći vakcinama da imaju imunološki učinak, smanje dozu cjepiva i imaju vrlo važnu ulogu u prevenciji i epidemiji zaraznih bolesti [3]. Sa razvojem novih vakcina, bilo u oblasti istraživanja veterinarskih vakcina ili istraživanja humanih vakcina, zahtevi za kvantitetom i kvalitetom adjuvansa za vakcine su sve veći i veći. Idealan novi adjuvans treba da ima efikasan stimulativni efekat na ćelijski ili humoralni imunitet organizma, da ima dugotrajan i stabilan efekat, da smanji broj imunizacija, da ima manje nuspojava, da se lako proizvodi i lako ubrizgava [13] .

Uvirusa slinavke i šapainaktiviranim vakcinama, uljni adjuvansi se obično dodaju kako bi se poboljšao imunitet vakcine, ali postoje nedostaci kao što je visok imuni stres. U poređenju sa uljnim adjuvansima, vodeni adjuvansi su jednostavni za upotrebu, mogu se mešati sa antigenima vakcine u bilo kom omjeru, ne trebaju emulgiranje i lako se ubrizgavaju. Stoga adjuvansi za vodu imaju dobre izglede za primjenu u vakcinama protiv FMDV. Kineski biljni polisaharidi imaju dobre imunomodulatorne efekte, u kombinaciji sa svojim prednostima u pogledu sigurnosti, pleiotropije i nezavisnosti, i postaju vruća tačka u istraživanju novih adjuvansa za vakcine [14]. U polju istraživanja adjuvansa za vakcinu protiv FMDV, neki kineski biljni polisaharidi se koriste u istraživanju novih adjuvansa. Na primjer, polisaharidi astragalusa se koriste kao pomoćna sredstva za vakcine protiv FMDV. Oralna imunizacija može poboljšati humoralni i ćelijski imunitet, a male doze mogu inhibirati zrelost dendritičkih stanica, visoke doze mogu unaprijediti njihovu zrelost.

Istraživači su također koristili polisaharide iz Baizua i polisaharide izEucommiakao pomoćna sredstva zavirusa slinavke i šapavakcinu kako bi istražili njihov učinak na jačanje imuniteta [15-17]. Zbog velikih razlika u sadržaju aktivnih sastojaka različitih kineskih biljnih lijekova, opsežni skrining kineskih biljnih lijekova s ​​imunološkom aktivnošću kako bi se pronašli odgovarajući adjuvansi od velikog je značaja za prevenciju bolesti i zdravlje ljudi, a također je i žarište istraživanja u području vakcinologija. U ovom eksperimentu, aSirovi polisaharid iz Cistanche deserticolaizabran je kao pomoćni kandidat zavirusa slinavke i šapavakcine, a sprovedena je i eksperimentalna studija adjuvantnog efekta. Prevencija i liječenje zaraznih bolesti uglavnom zavise od humoralnog imunološkog odgovora posredovanog B limfocitima i ćelijskog imunološkog odgovora posredovanog T limfocitima [18-20].

Zbogvirusa slinavke i šapavakcina zapravo koristi mišićnu imunizaciju u proizvodnji, mišićni put se koristi za imunizaciju miševa u eksperimentu, a učinak povećanja imuniteta CDCP-a se procjenjuje procjenom učinka CDCP-a na proizvodnju antitijela i podskupove T-ćelija, te se procjenjuje njegova sigurnost. Preliminarna zapažanja. Rezultati studije su pokazali da sirovi polisaharid Cistanche cistanche može povećati nivo antitijela specifičnih za FMDV 14 i 21 dan nakon imunizacije, te da nema značajne razlike između efekta i nivoa ISA-206 adjuvansa ; nivo antitela 28 dana nakon imunizacije je niži od nivoa ISA{4}} pomoćnog ulja, što pokazuje daSirovi polisaharid iz Cistanche deserticola može poboljšati nivo humoralnog imunitetau određenom vremenskom periodu nakon imunizacije. Brzina proliferacije limfocita je u pozitivnoj korelaciji sa nivoom indeksa stimulacije. U MTT eksperimentu,Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola može promovirati proliferaciju limfocitastimulisan antigenom FMDV, ConA i LPS. U eksperimentu podgrupe T ćelija, CDCP ne samo da može povećati ekspresiju CD4 plus i CD8 plus T ćelija, već i povećati nivoe CD4 plus, CD44 plus i CD8 plus, CD44 plus efektorskih T ćelija, i nema značajne razlike iz ISA-206 grupe adjuvansa; u sigurnosti U seksualnim eksperimentima ustanovljeno je da su miševi iz grupe vakcine koja je sadržavala ISA-206 imala granulome na mjestu injekcije, dok grupa vakcina koja je sadržavala CDCP vodeni adjuvans nije pronašla granulome, što je preliminarno ukazivalo daSirovi polisaharid iz Cistanche deserticola ima dobru sigurnost. Za dalju sigurnost potrebno je provesti relevantne eksperimente kako bi se potvrdilo.

Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticolane samo da je poboljšao humoralni imuni odgovor, već je i povećao nivo proliferacije limfocita, povećao nivo CD4 plus i CD8 plus podskupina T ćelija, aktivirao efektorske T ćelije i nisu pronađeni granulomi na mestu injekcije nakon injekcije. Miševi normalno rastu i nemaju abnormalno ponašanje. Ovi rezultati istraživanja daju osnovu za dalja istraživanjaSirovi polisaharid iz Cistanche deserticolakao novi adjuvans zavirusa slinavke i šapavakcine i takođe pružaju korisnu referencu za primenu polisaharidnih adjuvansa u drugim vakcinama.

Referenca

［1］Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, et al. Vakcine protiv slinavke i šapa［J］. Vet Microbiol, 2017, 206:102-112.

［2］Park JH. Zahtjevi za poboljšane vakcine protiv epidemije slinavke i šapa［J］. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. Adjuvansi za vakcine protiv virusa slinavke i šapa: nedavni napredak［J］. Expert Rev Vaccines, 2014, 13（11）:1377-1385.

［4］Parid AS. Vakcinacija protiv virusa slinavke i šapa: strategije i učinkovitost［J］. Expert Rev Vaccines, 2009, 8:347-365.

［5］Licciardi PV, Underwood JR. Lijekovi biljnog porijekla: nova klasa imunoloških pomoćnih sredstava［J］. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

［6］Sun B, Yu S, Zhao D, et al. Polisaharidi kao pomoćna sredstva za vakcinu［J］. Vakcina, 2018, 36:5226-5234.

［7］Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ, et al. Imunomodulatorne funkcije polisaharida lišća Ginkgo bilobe na vvIBDV vakcini［J］. ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

［8］Tu PF, Jiang Y, Guo YH, et al. Istraživanje i industrijski razvoj Cistanche［J］. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

［9］Zhang W, Huang J, Wei W, et al. Ekstrakcija, pročišćavanje, karakterizacija i antioksidativna aktivnost polisaharida iz Cistanche tubulosa［J］. Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.