Efekti ukupnih glikozida Cistanche Deserticola na ozljede oksidativnog stresa i apoptozu stanica kod pacova sa cerebralnom ishemijom-reperfuzijom Ⅰ
Mar 15, 2024
Abstract
Cilj: Istražiti efekte i moguće mehanizmeCistanche deserticola ukupni glikozidi(GC) na oštećenje oksidativnog stresa i apoptozu nervnih ćelija kod štakora sa cerebralnomishemijska reperfuzijska povreda(CIRI).
Metode: Model okluzije srednje cerebralne arterije (MCAO) konstruiran je na modelnim štakorima metodom embolizacije šavom. Nakon što je model uspješno uspostavljen, pacovima u grupi lijekova (GC) su davani GC 50 mg/(kg·d) putem sonde 14 uzastopnih dana; pacovima u grupi lažne operacije (Sham) i grupi modela (Model) je data ista količina normalnog fiziološkog rastvora. Oralna primjena. Nakon primjene, metoda Longa skora je korištena za procjenu neurološkog deficita; pacovi su zatim žrtvovani, a TTC bojenje je izvršeno da bi se izračunao procenat površine cerebralnog infarkta; Za detekciju seruma korištena je ELISA metodamalondialdehid(MDA) sadržaj,superoksid dismutaza(SOD) iGlutation peroksidaza (GSH-Px)aktivnost; Western blot za otkrivanje faktora 2 povezanog s nuklearnim faktorom E2-(Nrf2), hem oksigenaze-1 (HO-1) i B u moždanom tkivuĆelijski limfom/leukemija-2 (Bcl-2), Bcl-2-povezani X protein (Bax) i ekspresija kaspaze-3 (Caspase-3).
Rezultati: U poređenju sa Sham grupom, grupa Model je imala povećan rezultat neurološkog deficita, povećan procenat područja moždanog infarkta,povećan sadržaj MDA, smanjene aktivnosti SOD i GSH-Px i smanjen nivo ekspresije Nrf 2, HO -1 i Bc l-2 proteina Nivoi ekspresije proteina Baxa i Caspase-3 su povećani; u poređenju sa modelnom grupom, skor neurološkog deficita pacova u GC grupi je smanjen, postotak područja cerebralnog infarkta je smanjen,Sadržaj MDA je smanjen, SOD i GS H-Px aktivnost se povećava, nivoi ekspresije proteina Nrf 2, HO -1 i Bcl - 2 su povećani, a nivoi ekspresije proteina Bax i Caspase - 3 smanjeni. Zaključak: GC mogu efikasno smanjiti cerebralnu ishemiju-reperfuziju, a njegov mehanizam može biti povezan s aktiviranjem Nrf 2 / HO - 1 puta, čime se smanjuju nivoi oksidativnog stresa i inhibiraju apoptoza nervnih ćelija.
[Ključne riječi]Cistanche deserticola ukupni glikozidi; cerebralna ishemija-reperfuzijska povreda; oksidativni stres; ćelijska apoptoza
PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE
Kliknite za više detalja
Wecistanche usluga podrške - najveći izvoznik cistanchea u Kini:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel:+86 15292862950
Kupite za više detalja o specifikacijama:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
cerebralna ishemija-reperfuzija,
CIS je bolest sa ekstremnovisok morbiditet, invalidnostistope mortaliteta. Ćelije mozga su izuzetno osjetljive na ishemiju i hipoksiju, pa je rekanalizacija cerebralnih krvnih sudova što je prije moguće najefikasniji način za rješavanje akutnog ishemijskog moždanog udara. Intravenska tromboliza i mehanička trombektomija su trenutno široko korištene metode, ali zbog relativno
Samo zbog uskog vremenskog okvira i drugih nekontrolisanih faktora<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Reperfuzija cerebralne ishemije, CIRI je vrsta oporavka cerebralnih krvnih žila od stenoze Superponirano patološko oštećenje koje se javlja tokom protoka krvi. Trenutno se vjeruje da njegov patološki mehanizam može biti povezan s toksičnošću ekscitatornih aminokiselina, preopterećenjem kalcijem, oslobađanjem inflamatornih faktora i akumulacijom slobodnih radikala kisika uzrokovanih oštećenjem mitohondrija [1], što u konačnici dovodi do uništenja krvno-moždane barijere, poremećaja mikrocirkulacije. , apoptoza nervnih ćelija i nekroza [1] 2] i niz reakcija, čime se dodatno pogoršavaju neurološki deficiti.
Cistanche deserticola ukupni glikozidi (glikozidi cistanche, GC) su izvedeni iz tradicionalne kineske medicine Herba Cistanche Glavni aktivni sastojak ekstrahira se iz stabljika i korijena inča). Prethodne studije su pokazale da GC mogu učinkovito inhibirati lipidnu peroksidaciju, poboljšati funkciju mitohondrija, ukloniti višak slobodnih radikala kisika, inhibirati oslobađanje upalnih citokina, smanjiti citotoksičnost, antitrombocitnu agregaciju, inhibirati proliferaciju stanica, inhibirati nivoe hormona i crvenu apoptozu. čime imaju anti-aging, anti-tumorske, antidepresivne, jačaju imunitet, poboljšavaju ishemijske kardiovaskularne i cerebrovaskularne bolesti, poboljšavaju sposobnosti učenja i pamćenja i kognitivne funkcije, te poboljšavaju reprodukciju [3].
Studije su pokazale da GC mogu smanjiti oksidativna oštećenja stanica i održati integritet krvno-moždane barijere.
[4]; GC mogu efikasno poboljšati vitalnost ćelija i blokirati upalu i apoptozu izazvanu nakon ishemije-reperfuzije [5]; Nrf 2 igra važnu ulogu u protuupalnim i antioksidativnim procesima [6]. Na osnovu gornje pozadine, ovaj članak ima za cilj dalje proučavanje efekata i mogućih puteva GC na oksidativni stres i apoptozu nakon CIRI repliciranjem CIRI modela.
1 Materijali i metode
1. 1 Lijekovi i reagensi GC (SN-5692, čistoća 98%, Western
Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2% rastvor boje trifeniltetrazolijum klorida (TTC) (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), ELISA komplet (Beijing Boosen Co., Ltd.), komplet za kvantitativnu analizu BCA proteina (USA Cell Signaling Technology Company), zečja anti-mišja antitijela Bcl-2, Bax, Caspas antitijela kao što su e-3, Nrf 2, HO-1 i kozja anti-zečja sekundarna antitijela su kupljena od Proteintech kompanija iz Sjedinjenih Država.
1. 2 instrumenta
Centrifuga (model: TDL-40B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), Čitač mikroploča (Model: Max-M5, American Molecular Devices Company), SDS-PAGE instrument za elektroforezu (model: DYY-7C, Kompanija Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), gel skener (model: 4466611, US BIO-RAD Company).
1. 3 životinje
Mužjaci pacova Wistar [SCXK (Peking) 2019-0010], čista sorta, stari 8 sedmica, tjelesna težina 250-280 g.
1. 3 metode
1. 3. 1 Grupiranje i modeliranje
Pacovi su podijeljeni u lažnu grupu (Sham), grupu modela (Model) i grupu lijekova (GC) korištenjem jednostavne metode randomizacije. U svakoj grupi bilo je 15 pacova. Odgajani su adaptivno 1 sedmicu i potom modelirani. Strogo gladujući i gladujući 12 sati prije operacije, Grupa Model i GCs grupa su koristili metodu embolizacije šavom [7] za stvaranje okluzije srednje moždane arterije (okluzija srednje cerebralne arterije). okluzija, MCAO) model pacova, uklanjanje embolusa je izvršeno nakon 2 sata ishemije kako bi se postigla reperfuzija. , zabilježite vrijeme početka reperfuzije. Rana je zašivena, koža je dezinficirana jodoforom, a životinje su vraćene u kavez i uzgojene, a zatim perfuzirane 24 h. Operacija za pacove u Sham grupi bila je ista kao i za model pacove, ali nije izvršeno začepljenje. Konačno, 10 štakora u svakoj grupi zadržano je za naredne eksperimente.
1. 3. 2. Način administracije
Uzmite GC prah i dodajte čistu vodu da pripremite rastvor od 15 mg/mL. Preliminarne studije su pokazale da je doza od 50 mg/(kg·d) bolja od ostalih doznih grupa [8], tako da je doza odabrana za ovaj eksperiment ista kao i prije. Pacovima u grupi GCs je davan GC gavažom nakon 24 sata ishemije i reperfuzije, a pacovima u grupi Sham i Grupi Model je davan jednak volumen normalnog fiziološkog rastvora putem sonde tokom 14 dana.
1. 3. 3 Neurološki deficit
Longa metoda bodovanja [7] korištena je za bodovanje 24 sata nakon operacije, a model pacova sa ocjenama od 1 do 3 zadržani su za naredne eksperimente. Rezultat nakon posljednje doze. 0 bodova: Nema
Neurološki simptomi; 1 bod: blagi neurološki deficit, kontralateralni prednji ekstremitet se savija i podiže kada se rep podigne, a adukti ramena; 2 boda: umjeren neurološki deficit, kontralateralni prednji ekstremitet se savija i podiže kada se rep podigne, adukcija ramena, kružno okretanje na suprotnu stranu lezije pri hodu; 3 boda: teški neurološki deficit, naginjanje na suprotnu stranu lezije prilikom hodanja; 4 boda: nesvjesne i autonomne aktivnosti.
1. 3. 4 Određivanje procenta površine moždanog infarkta
Nakon posljednje primjene, 4 štakora iz svake grupe su nasumično odabrana, duboko anestezirana, obezglavljena, a mozak im je brzo uklonjen.
Brzo zamrznite moždano tkivo u frižideru od -20 stepeni na 20 minuta. Nakon što je moždano tkivo relativno fiksirano, izvadite ga. Počevši od sjecišta prednjeg pola mozga do optičke hijazme, i od čela do potiljka, prerežite mozak štakora duž koronalne ravni. Izrežite na 5 moždanih kriški debljine 2 mm, uronite u 2% rastvor TTC, stavite u vodeno kupatilo na 37 stepeni da se farbaju 15 minuta, okrenite ih i bojite još 15 minuta. Konačno, kriške mozga su uronjene u 4% rastvor paraformaldehida i fiksirane 12 sati prije nego što su fotografirane. Normalno moždano tkivo je prikazano crvenom, a infarktno moždano tkivo bijelom. Koristite softver za slike da analizirate i izračunate stopu infarkta svakog dijela mozga. Stopa infarkta=površina infarkta/ukupna površina moždanog preseka × 100%.
1. 3. 5 Detekcija indikatora vezanih za oksidativni stres
Anestezirajte štakora, uzmite 4 mL krvi iz abdominalne aorte, alikvote u čiste EP epruvete i stavite u frižider na 4 stepena 0. Centrifugirajte na 3 500 r/min 5 h na 4 stepena 15 minuta, uzmite supernatant i na kraju zadržite serum od 3 pacova u svakoj grupi. Sadržaj malondialdehida (MDA) i superoksid dismutaze (superoksid dismutaze) određen je metodom rada ELISA kita. e dismutase,
SOD), aktivnost glutation peroksidaze (glutation peroksidaze, GSH-Px).
1. 3. 6 Western blot detekcija
Oksidativni stres i proteini povezani sa apoptozom su mjereni kako bi se izmjerila ekspresija Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax i kaspaze -3 proteina u moždanom tkivu. Iz svake grupe su odabrana po tri štakora i uzeta je odgovarajuća količina kore velikog mozga sa oboljelog područja, dodana je otopina za lizu i izračunata je koncentracija proteina nakon ekstrakcije proteina. Nakon elektroforeze proteinskog gela, prenošenje na membranu, blokiranje rastvorom za blokiranje tokom 2 h, ispiranje, a zatim inkubiranje sa primarnim antitelom na 4 stepena preko noći, sledećeg dana, TBST je uklonjen, ispran i dodato je sekundarno antitelo za inkubaciju tokom 2 h. Postavite ciljnu traku na analizator slike da analizirate sivu vrijednost. Izračunajte relativnu vrijednost sive trake, relativnu vrijednost sive trake=ciljnu vrijednost sive trake / vrijednost unutrašnje referentne sive trake.
1. 4 Metode statističke analize
Aplikacija podataka SPSS 25. 0 softver za analizu podataka, a statistički grafikoni u ovom članku nacrtani su softverom GraphPad Prism 8. Rezultati podataka koji su u skladu s normalnom distribucijom izraženi su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija. Jednofaktorska analiza varijanse korišćena je za poređenje između više uzoraka, a LSD-t za poređenje između dva nezavisna uzorka. Test, sa P < 0. 05 ukazuje da je razlika statistički značajna.
