Znate li da oksidativni stres može uzrokovati ozljedu bubrega?

Za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Dio Ⅰ: Oksidativni stres nakon akutne ozljede bubrega uzrokuje poremećaj cilija pluća i njihovo oslobađanje u bronhoalveolarnu lavažnu tekućinu i ozljedu pluća, koje se pogoršava delecijom Idh2

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Uvod

Akutna povreda bubrega(AKI) se javlja u različitim kliničkim okruženjima, uključujući šok, sepsu, transplantaciju organa i vaskularnu hirurgiju [1-3]. AKI (Akutna povreda bubrega) uzrokuje oštećenje udaljenih organa, uključujući pluća, jetru, srce i mozak [4-9]. Ova udaljena povreda organa nakon AKI (Akutna povreda bubrega)prepoznat je kao glavni faktor rizika za loše ishode [5,9]; stoga je odgovarajući tretman udaljenih ozljeda organa važan za poboljšanje ishoda pacijenata sa AKI (Akutna povreda bubrega). Međutim, precizni mehanizmi uključeni u AKI (Akutna povreda bubrega)-oštećenje udaljenih organa u vezi još treba da se definiše.

Click to Cistanche za akutnu bolest bubrega i nuspojave cistanche

Cilije su projekcije izvedene iz centriola sa površine ćelije koje sadrže citoskelet (aksonem) zasnovan na mikrotubulama, okružen cilijarnom membranom. Cilije se odlikuju svojom strukturom i pokretljivošću i definiraju se ili kao nepokretne cilije (primarne trepetljike) ili kao pokretne treplje. Primarne cilije su usamljene, nepomične, bazirane na mikrotubulama 9 plus 0 aksonalne antenske organele koje strše iz ćelijske membrane i prenose ekstracelularne signale u ćeliju koordinacijom nekoliko signalnih puteva [10-12 ]. Pokretne cilije, sa višestrukom, 9 plus 2 aksonalne strukture, uglavnom se nalaze u respiratornom traktu i jajovodu i služe za transport materijala [10,13]. Sve veći broj dokaza pokazuje da su defekti u formiranju i funkciji cilija povezani s različitim ljudskim bolestima, uključujućipolicistični bolesti bubregai primarna cilijarna diskinezija [14-20]. Nadalje, nedavne studije su pokazale da se poremećaj cilija javlja pod utjecajem patoloških stanja i da je ovaj poremećaj uključen u posredovanje ozljede i disfunkcije ćelija [15-20].

Akumulirani dokazi su to pokazalibubregishemija-reperfuzija (IR), uzrok AKI (Akutna povreda bubrega), izaziva ozljedu udaljenih organa [6-8,21]. Ozljeda udaljenih organa povezana je s upalnim odgovorima, promjenama signalnih puteva povezanih sa smrću i preživljavanjem stanice, ioksidativni stres [8,22-24]. Oksidativni stresje direktno povezan s disfunkcijom ćelijskih komponenti, što može rezultirati poremećajima organa, i prepoznato je kao jedan od glavnih uzrokabubregPovreda udaljenih organa izazvana IR [21,25,26]. To smo ranije pokazalibubregAKI izazvan IR i cisplatinom (Akutna povreda bubrega)mijenja dužinu primarnih cilija ububregepitelnih ćelija putem sastavljanja, rastavljanja i prekida (decilijacija, osipanje ili fragmentacija) cilija [17-19]. Ovi procesi su povezani sa reaktivnim vrstama kiseonika (ROS)ioksidativni stres. ovisno o koncentraciji vodikovog peroksida i stupnjuoksidativnostres; niska koncentracija H2O2 inducira produženje primarne dužine cilija, dok visoka koncentracija H, O izaziva poremećaj [17-20]. Osim toga, ustanovili smo da su oštećene primarne trepavice poremećenebubregtubularne epitelne ćelije se izlučuju u urinu i da se ovaj poremećaj i izlučivanje mogu spriječiti antioksidativnim tretmanom [17-20]. Rodriguez-Ribera i dr. također su izvijestili da su reaktivna karbonilna jedinjenja kao što je malondialdehid, proizvodoksidativni stres, izazivaju gubitak primarnih cilija kod ljudibubregćelije proksimalnih tubula [27]. Stoga smo pretpostavili da je AKI (Akutna povreda bubrega)-indukovana akutna ozljeda pluća (ALD) i ozljeda stanica povezane su s cilijama i plućnim stanicamaoksidativnostresi to prevencijuoksidativnostressmanjuje AKI (Akutna povreda bubrega)-indukovana povreda pluća. U ovoj studiji smo istražili da libubregIR-indukovani AKI (Akutna povreda bubrega)izaziva poremećaj cilija i ćelija pluća, i ako jeste, da li su ti poremećaji povezani saoksidativnoB. U tu svrhu koristili smo farmakološke i genetske pristupe, uključujući upotrebu miševa deletiranih izocitrat dehidrogenazom 2(Idh2). IDH2 je enzim lokaliziran u mitohondrijima [28]. U mitohondrijama, IDH2 katalizuje oksidativnu dekarboksilaciju izocitrata u -ketoglutarat, praćenu redukcijom NADP u NADPH, koji je kritičan faktor u tioredoksin i glutation antioksidantnom sistemu [29-32]. Osim toga, istražili smo da li prisustvo cilijarnih proteina i fragmenata u tečnosti bronhoalveolarne lavaže (BALF) ukazuje na ozljedu pluća. Ovdje po prvi put javljamo da je AKI (Akutna povreda bubrega)uzrokuje poremećaj cilija plućnih stanica i njihovo oslobađanje u BALF, kao i ozljedu pluća, koja se pogoršava delecijom IDH2.

oksidativni stres uzrokuje oštećenje bubrega

2. Materijali i metode

Priprema životinja.

Svi eksperimenti su provedeni pomoću 8-10-sedmičnih mužjaka miševa C57BL/6 (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Koreja), ženki miševa sa izbrisanim genom Idh2 (Idh2~/) i miševa divljeg tipa (dh2 plus / )miševi [28]. Miševima je omogućen slobodan pristup vodi i standardnoj klopi za miševe. Studiju na životinjama odobrio je Institucionalni komitet za njegu i korištenje životinja Nacionalnog univerziteta Kyungpook, Republika Koreja. Za izazivanje bilateralne bubrežne ishemije,bubreziizloženi su kroz rezove na bokovima pod anestezijom pentobarbital natrijumom (60 mg/kg TM), a zatim pedikulebubrezisu u potpunosti stegnuti na 35 minuta pomoću mikroaneurizma. Ista procedura, osimbubregstezanje pedikula, izvedeno je u lažnoj operaciji. Tjelesna temperatura je održavana na 36,5 stepeni -37 stepeni C tokom hirurških zahvata korištenjem uređaja za grijanje s kontroliranom temperaturom (FHC, Bowdoin, ME, USA). Nekim miševima je davan {{4 }}(2,2,6,6-Tetrametilpiperidin-1-ox-yl-4-arilamino)-2-oksoetil trifenilfosfonijum hlorid (Mito--TEMPO,{{14 }}.7 mg/kg TM; Sigma, St. Louis, MO, SAD) ili 17 i 1 h prije operacije (prethodni tretman) ili 6 h nakon operacije (poslije tretmana).

Na kraju eksperimenata, pluća ibubregtkiva su brzo zamrznuta u tečnom azotu ili perfuzijom fiksirana sa PLP (4 procenta paraformaldehida, 75 mM L-lizin, 10 mM natrijum perjodata: Sigma) rastvora za biohemijske i histološke studije, respektivno. Zamrznuta tkiva su pohranjena na -70 stepeni dok nisu bila potrebna.

Zbirka BALF-a.

BALF je sakupljen nakon eutanazije miševa injekcijom predoziranja pentobarbital natrijuma. Propuštanje pluća je procijenjeno određivanjem koncentracije proteina i broja ćelija u BALF. Za prikupljanje BALF-a, bronh lijevog pluća je potpuno stegnut pomoću mikroaneurizma. Igla je umetnuta u traheju i 0.8 ml hladnog fosfatnog pufera (PBS) polako je ubrizgan u desni plućni režanj. BALF je sakupljen uvlačenjem klipa šprica jednom. Ukupan broj ćelija i koncentracija proteina u BALF-u su odmah analizirani pomoću hematocitometra i kompleta za analizu BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, SAD). BALF je držan na -70 stepenu dok nije bio potreban za Western blotting analizu.

Bubregfunkcija. Krv je sakupljena od miševa pomoću hepariniziranog šprica. Koncentracija azota uree u krvi (BUN) u plazmi određena je pomoću Vitros 250 Chemistry Analyzer (Johnson& Johnson, New Brunswick, NJ, SAD).

Periodično bojenje po Schiffu (PAS) i hematoksilinom i eozinom (H&E).

PLP-fiksiranbubrega plućna tkiva su umotana u parafin, izrezana na 3- μm debele dijelove pomoću mikrotoma (Leica, Bensheim, Njemačka) i postavljena na staklene pločice.Bubrega dijelovi pluća su obojeni PAS i H&E. Thebubregoštećenjaskor je slijepo evaluiran od strane istraživača kao što je prethodno opisano [3,19].

Western blot analiza.

Western blotting je izveden kao što je prethodno opisano [3]. Antitijela koja su korištena za western bloting su sljedeća: anti-4-hidroksilna nominalna (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, USA), anti- -tubulin (Santa Cruz, Kalifornija, SAD) , antiacetilirani -tubulin (ac- -tubulin, Sigma), anti-mangan zavisna superoksid dismutaza (MnSOD; Calbiochem, San Diego, Kalifornija, SAD), antikatalaza (Fitzgerald, Concord, MA, USA) , protein sličan ADP-ribozilacijskom faktoru 13B (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, SAD), anti-izocitrat dehidrogenaza 2 (IDH2; Santa Cruz), antioptička atrofija 1 (Opal; BD Bioscience, San Diego, CA ), anti-fisija 1 (Fis1; Sigma), anti-dinaminski povezan protein 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, SAD) i anti-gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, SAD).

Imunofluorescentno bojenje.

Nakon deparafinizacije, sekcije su inkubirane u PBS-u koji sadrži {{0}}.2 posto Triton X-100(Sigma) u trajanju od 1 min, a zatim isprani u PBS-u 10 minuta. Da bi se izložio epitop antigena, sekcije su kuvane u 10 mm natrijum citratnom puferu (pH 6,0) tokom 10 minuta, ohlađene 20 minuta, a zatim tri puta isprane PBS-om po 5 minuta pri svakom pranju. Sekcije su blokirane sa 3 procenta goveđeg serumskog albumina u PBS (blokirajući pufer) tokom 30 minuta i zatim inkubirane sa anti-Arll3b antitelom na 4 stepena preko noći. Nakon ispiranja, sekcije su inkubirane sa FITC-konjugiranim kozjim anti-zečjim IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) 60 minuta, a zatim isprani 3 puta sa PBS-om po 5 minuta svaki. Ćelijska jezgra su obojena upotrebom 4'-6-diamidino-2-fenilindola (DAPI; Sigma).

Mjerenje superoksida u plućnom tkivu.

Nivoi superoksida mjereni su korištenjem dihidroetidija (DHE; Sigma) kao što je prethodno opisano 【33,34】. Ukratko, 10 μM DHE u 1 ml prethodno zagrijanog (37 stepeni) PBS je dodano u 96- ploču sa bunarima koja sadrži 20 ul lizata plućnog tkiva. Ploča je očitana svakih 10 minuta ukupno 30 minuta na filterima ekscitacije/emisije od 530 nm/620 nm.

Mjerenje IL-6.

Nivoi IL-6 u plazmi i BALF određivani su ELISA testom korištenjem ELISA kompleta za analizu prema uputstvima proizvođača (BD Bioscience).

Statistika.

Svi podaci su analizirani pomoću softvera GraphPad Prism 7 (San Diego, CA, USA). Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost±standardna greška srednje vrijednosti (SEM). Statistička analiza je izvršena korištenjem Studentovog t-testa i jednosmjerne analize varijanse uz Tukeyjev post hoc postupak. Razlike su se smatrale statistički značajnim kada su p-vrijednosti bile<>

3. Rezultati

1. IR bubrega uzrokuje ozljedu pluća.

Očekivano, značajna morfološka oštećenjabubrezi(Sl. 1A i B) i povećanje BUN u plazmi (Slika 1C) uočeno je 4 i 24 h nakon 35 minuta bilateralnebubregishemija. U plućima je uočeno povećanje neutrofila i zadebljanje alveolarnog zida 4 i 24 h nakonbubregishemija (slika 1D). Pored toga, uočeno je povećanje ekspresije lokusa G6D kompleksa limfocitnog antigena 6 (Ly6G, marker za monocite, granulocite i neutrofile) u plućnom tkivu na način koji je zavisan od vremena reperfuzije (Sl. 1E i F). Koncentracija interleukina-6 (IL-6) u plazmi se nakon toga povećalabubregIR, sa maksimumom 4 h nakon ishemije (slika 1G). Koncentracije I-6 i proteina, kao i ukupan broj ćelija u BALF-u postepeno su se povećavali 4 i 24 h nakon ishemije bubrega (slika 1H-J). Stopa preživljavanja 24 h nakon 35 minbubregIR je bio približno 92 posto (podaci nisu prikazani).

Kadabubregishemijsko vrijeme je produženo na 45 min, postishemični porast koncentracije BUN-a u plazmi i koncentracije ukupnog proteina i broja ćelija u BALF-u bio je veći od onih nakon 35 minuta ishemije (slika 1K-M). Ovi podaci ukazuju da je ozljeda pluća uzrokovanabubregIR povreda zavisi od stepenabubregpovreda.

Slika 1. Histološko i funkcionalno oštećenje pluća nakon IR bubrega. C57BL/6 mužjaci miševa podvrgnuti su 35 (A–M) i 45 (K–M) min bilateralnoj bubrežnoj ishemiji ili lažnoj operaciji. Bubreg4 i 24 h nakon operacije uzeti su pluća, krv i BALF. BALF je sakupljen kako je opisano u materijalima i metodama. (A–J) Miševi su žrtvovani ili 4 ili 24 h nakon 35 minuta ishemije. (A, B)Bubregpreseci (3 μm) su obojeni PAS, ibubregOštećenje cevi je postignuto. (C, K) Koncentracije BUN su mjerene u plazmi. (D) Presjeci pluća (3 μm) su obojeni H&E. (E, F) Ekspresija Ly6G u plućnom tkivu analizirana je Western blottingom. GAPDH je korišten kao kontrola opterećenja. Gustine traka su mjerene pomoću softvera ImageJ. (G, H) Koncentracija IL-6 je izmjerena u plazmi i BALF. (I, J, L, M) Koncentracija proteina i ukupan broj ćelija izmjereni su u BALF. (K–M) Miševi su žrtvovani 4 h nakon 35 ili 45 minuta ishemije. Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" naspram="" lažnog.="" †p="">< 0,05="" naspram="" 4="" h="" nakon="" ishemije="" ili="" ishemije="" u="" trajanju="" od="" 35="">

2. IR bubregauzrokuje poremećaj cilija epitelnih stanica pluća i ovi fragmenti se oslobađaju u BALF.

Isječci plućnog tkiva i predmeti napunjeni BALF-om su imuno obojeni anti-ADP-ribozilacionim faktorom sličnim proteinu 13B (Arl13B, marker cilija) antitelom. Arll3B pozitivni signali uočeni su na luminalnom dijelu alveola i terminalnim bronhiolama pluća (slika 2A). Gubitak Arl13B-pozitivnog signala uočen je u plućimabubregMiševi izloženi IR (slika 2A). Ovaj gubitak Arll13B-pozitivnog signala se postepeno povećavao nakon togabubregishemija tokom vremena (slika 2A). U BALF-u, različite dužine Arl13B-pozitivnih čestica su uočene nakon ishemije bubrega, a broj Arl13B-pozitivnih čestica u BALF-u se postepeno povećavao tokom vremena nakon ishemije (Sl.2B i C). Ekspresija Arl13B, acetiliranog -tubulina (ac- -tubulina, granulocita i neutrofila) u plućnom tkivu je uočena na način koji zavisi od vremena reperfuzije (Sl.1E i F). Koncentracija interleukina-6 (IL-6) u plazmi je povećana nakonbubregIR, sa maksimumom 4 h nakon ishemije (slika 1G). Koncentracije I-6 i proteina, kao i ukupan broj ćelija u BALF-u postepeno su se povećavali 4 i 24 h nakon ishemije bubrega (slika 1H-J). Stopa preživljavanja 24 sata nakon 35 minuta IR bubrega bila je približno 92 posto (podaci nisu prikazani).

Kadabubregishemijsko vrijeme je produženo na 45 min, postishemični porast koncentracije BUN-a u plazmi i koncentracije ukupnog proteina i broja ćelija u BALF-u bio je veći od onih nakon 35 minuta ishemije (slika 1K-M). Ovi podaci ukazuju da je ozljeda pluća uzrokovanabubregIR povreda zavisi od stepenabubregpovreda.

Slika 2. Poremećaj cilija pluća i njihovih fragmenata i proteina koji se oslobađaju u BALF nakon IR bubrega.C57BL/6 mužjaci miševa podvrgnuti su ili 35 minuta bilateralne ishemije bubrega ili lažnoj operaciji. Plućno tkivo i BALF su sakupljeni 4 i 24 h nakon operacije, kako je opisano u Materijalima i metodama. (A) Presjeci pluća (5 μm) podvrgnuti su imunofluorescentnom bojenju korištenjem anti-Arl13B antitijela; zelena označava Arl13B-pozitivnu. DAPI boja (4′,6-diamidino-2-fenilindol; plava) korištena je za vizualizaciju jezgara ćelija. Vrhovi strelica ukazuju na cilije. (B) BALF (10 ul) je stavljen na staklenu pločicu koja je imunofluorescentno obojena upotrebom anti-Arl13B antitijela; zelena označava Arl13B-pozitivnu (n=3). (C) Broj Arl13B-pozitivnih čestica je izbrojan pod fluorescentnim mikroskopom (n=3). (D–G) Ekspresije Arl13B, acetiliranog- -tubulina (ac- -tub) i -tubulina (-tub) u BALF analizirane su Western blottingom. Gustine traka su mjerene pomoću softvera ImageJ. Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM (n=3). *p < 0.05="" naspram="" lažnog.="" †p="">< 0,05="" naspram="" 4="" h="" nakon="" ishemije.="" o:="" alveole,="" tb:="">

3. IR bubrega povećava nivoe superoksida i oksidativnog stresa u plućnom tkivu i BALF.

BubregIR je povećao nivo super-oksida u plućnom tkivu (Sl. 3A), dok je smanjio ekspresiju IDH2 (Sl. 3B i C), ali ne i MnSOD i katalaze (Slika, 3B.DE). Ovi nalazi ukazuju da je povreda pluća izazvana IR-om bubrega povezana s povećanjem nivoa ROS ioksidativni stresu plućima. U prilog tome, nivo 4-hidroksi nominalnog (4-HNE), produkta peroksidacije lipida, u plućnom tkivu značajno se povećao 4 i 24 h nakonbubregishemija(Sl.3F-D). 4-HNE je uočen u gotovo svim područjima plućnog tkiva, uključujući alveole i bronhiole (sl. 3H i D. Nadalje, ekspresija 8-hidroksi-2'-deoksiguanozina ({{ 7}}OhdG), dobro poznati marker oksidacije DNK kao oksidiranog derivata deoksi-gvanozina, povećan je iu citosolu i u jezgrima u ćelijama plućnog epitela nakonbubregishemija (Sl.3J i K. U BALF-u, 4-HNE ekspresija se također povećala nakonbubregishemijana način koji zavisi od vremena reperfuzije (slika 3L, M). Nadalje, kada je vrijeme ishemije bubrega produženo na 45 minuta, postishemično povećanje ekspresije 4-HNE u plućima bilo je veće od onog nakon 35 minuta nakonbubregishemija (slika 3N, O). Ovi rezultati pokazuju da su i mitohondrijska DNK i nuklearna DNK oksidativno povrijeđene povećanim stvaranjem ROS-a i oštećenjima u sustavima uklanjanja, što sugerira da je oštećenje cilija plućnih epitelnih stanica povezano soksidativni stres.

Slika 3. Oksidativni stres u plućnom tkivu nakon IR bubrega. C57BL/6 mužjaci miševa podvrgnuti su 35 (A–O) i 45 (N, O) min bilateralnoj bubrežnoj ishemiji ili lažnoj operaciji.Pluća ibubregsakupljeni su 4 i 24 h nakon 35 min ili 45 min ishemije. (A-M) Miševi su žrtvovani ili 4 ili 24 h nakon 35 minuta ishemije. (A) Nivo superoksida u plućnom tkivu je izmjeren kako je opisano u Materijalima i metodama (n=3-5). (B–E) Ekspresija IDH2, katalaze i MnSOD u plućnom tkivu analizirana je Western blottingom (n {{10}}). GAPDH je korišten kao kontrola opterećenja. (C–E) Gustine traka su izmjerene pomoću softvera ImageJ. (F, G) 4-Ekspresija HNE u plućima analizirana je Western blottingom, a gustina trake je izmjerena korištenjem ImageJ (n=4). (H–K) Presjeci pluća (3 μm) su imunohistohemijski obojeni anti-4-HNE i 8-OHdG antitijelima i kontraobojeni hematoksilinom; smeđa označava 4-HNE- i 8-OHdG-pozitivnu (n {{20}}). (I, K) Intenzitet 4-HNE- i 8-OHdG-pozitivnih signala izmjeren je pomoću programa i-Solution (n=3). (L, M) 4-HNE ekspresija u BALF-u je analizirana Western blottingom, a gustina trake je izmjerena korištenjem ImageJ (n=3). (N, O) Miševi su žrtvovani 4 h nakon 35 min ili 45 min ishemije. 4-Ekspresija HNE u plućima je analizirana Western blottingom, a gustina trake je izmjerena korištenjem ImageJ (n=3). Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM (n =3–5). *p < 0,05="" naspram="" lažnog.="" †p="">< 0,05="" naspram="" 4="" h="" nakon="" ishemije="" ili="" 35="" minuta="" ishemije.="" (za="" tumačenje="" referenci="" na="" boju="" u="" ovoj="" legendi="" slike,="" čitalac="" se="" upućuje="" na="" web="" verziju="" ovog="">

U ćelijama, mitohondrijama. glavna intracelularna organela koja proizvodi ROS normalno prolazi kroz fuziju i fisiju kako bi se prilagodila fiziološkim i patološkim uvjetima. Oštećenje u ovim procesima fuzije i fisije može izazvati disfunkciju i oštećenje ćelija[36]. Prethodne studije su to pokazaleoksidativnostresnarušava normalnu dinamiku mitohondrijalne fuzije i fisije, što rezultira mitohondrijalnom disfunkcijom i ozljedom stanica [32,36-38]. Pokušali smo procijeniti mitohondrijalnu dinamiku određivanjem ekspresije proteina koji regulira fisiju i fuziju. Ekspresije Fis1 i Drp1, koje regulišu fisiju mitohondrija, bile su značajno povećane u plućima miševa sabubregishemija(Sl.4A-C). Međutim, ekspresija OPA1, koja reguliše mitohondrijalnu fuziju, nije značajno izmenjena IR bubrega (Sl. 4A, D). Ovi podaci ukazuju da je ravnoteža mitohondrijalne fuzije i fisije u plućnim ćelijama poremećena kao rezultat AKI (Akutna povreda bubrega).

Slika 4. Promjena dinamike mitohondrija u plućima nakon IR bubrega. C57BL/6 mužjaci miševa podvrgnuti su ili 35 minuta bilateralne ishemije bubrega ili lažne operacije.Pluća su uzeta 4 i 24 h nakon ishemije. (A–D) Ekspresije Drp1, Fis1 i OPA1 u plućnim tkivima analizirane su Western blottingom. GAPDH je korišten kao kontrola opterećenja. Gustine traka su mjerene pomoću softvera ImageJ. Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM (n=4). *p < 0.05="" naspram="" lažnog.="" †p="">< 0,05="" naspram="" 4="" h="" nakon="">

4. Tretman antioksidansom specifičnim za mitohondrije smanjuje ozljedu pluća uzrokovanu IR-om bubrega i poremećaj plućnih cilija.

Da se potvrdi uloga mitohondrijaoksidativnostresonbubregIR-inducirana ozljeda pluća i poremećaj cilija epitelnih stanica pluća, testirali smo da li pretretman (Slika 5A-D ili post-tretman (Slika 5J-L) s Mito-TEMPO, antioksidansom specifičnim za mitohondrije, inhibira bubrege IR izazvanoksidativnostres, I-6 proizvodnja i decilijacija u plućima C57BL/6 mužjaka miševa. Prethodni tretman (Slika, 5A-D), ali ne i naknadni tretman (Slika 5J-L), sa Mito-TEMPO, značajno je inhibirao povećanje koncentracija BUN i IL-6 u plazmi (Slika 5A i B) kao kao i koncentracija IL-6, ukupna koncentracija proteina i ukupan broj ćelija u BALF-u (Slika, 5C-E). Ekspresije Arl13B, ac{15}}tubulina i -tubulina u BALF miševa prethodno tretiranih Mito-TEMPO bile su manje od onih kod miševa tretiranih nosačem (slika 5F-I). U ovoj studiji, a 6-h naknadni tretman nije zaštitio plućabubregIR(Sl.5J-L). Ovi rezultati ukazuju da je rana proizvodnja ROS-a, njegova akumulacija ioksidativnostresmože značajno doprinijeti AKI (Akutna povreda bubrega)-indukovana povreda pluća. Nivoi superoksida i ekspresija 4-HNE u plućnom tkivu (Slika 6A-C) i BALF (Slika 6D i E) bili su manji kod miševa prethodno tretiranih Mito-TEMPO nego kod miševa tretiranih nosačem. Ovi rezultati ukazuju na tobubregIR-inducirana ozljeda pluća i decilijacija epitelnih stanica pluća povezani su s mitohondrijalnimoksidativnostres.

Slika 5. Prevencija bubrežne IR-inducirane povrede pluća i poremećaja cilija Mito-TEMPO, antioksidansom ciljanim na mitohondrije. C57BL/6 mužjaci miševa podvrgnuti su 35 min bilateralne bubrežne ishemije.Nekim miševima je davan Mito-TEMPO (Mito-T, 0.7 mg/kg TM, ip) bilo 17 i 1 h prije ishemije, dva puta, (A–I) ili 6 h nakon ishemije (J– L). Pluća, BALF i krv su uzeti 24 h nakon ishemije. (A, J) Izmjerena je koncentracija BUN u plazmi. (B, C) Koncentracije IL-6 u plazmi i BALF mjerene su korištenjem ELISA kompleta za analizu. (D, E, K, L) Izmjerena je koncentracija proteina i broj ćelija u BALF. (F–I) Ekspresije Arl13B, acetiliranog{{10}}tubulina (ac- -tub) i -tubulina (-tub) u BALF analizirane su Western blottingom. Gustine traka su mjerene pomoću softvera ImageJ. Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM (n=4). *p < 0,05="" u="" odnosu="" na="">

KLIKNITE OVDJE ZA DIO Ⅱ