Diferencijalna lipidomika HK-2 ćelija i egzosoma pod stimulacijom visoke glukoze

Abstract

Abnormalni ćelijski metabolizam lipida je veoma važan u nastanku i napredovanju dijabetesne bolesti bubrega (DKD). Međutim, sastav lipida i diferencijalna ekspresija stimulacijom renalnih tubularnih stanica i njihovih egzosoma visokom glukozom, što je vitalni dio razvoja DKD, uglavnom su nepoznati. U ovoj studiji, zasnovanoj na ciljanoj analizi lipida obilježavanjem izotopa i tandem masenom spektrometrijom, kvantificirano je ukupno 421 i 218 vrsta lipida u HK-2 ćelijama, odnosno egzosomima. Što je još važnije, rezultati su pokazali da GM3 d18:1/22:0, GM3 d18:1/16:0, GM3 d18:0/16:0, GM3 d18:1/22:1 su značajno povećani, dok su LPE18:1, LPE, CL66:4 (16:1), BMP36:3, CL70:7 (16:1), CL74:8 (16 :1) su značajno smanjene u HK{{4{{90}}}} ćelijama stimuliranim visokim glukozom. Također, PG36:1, FFA22:5, PC38:3, SM d18:1/16:1, CE-16:1, CE-18:3, CE-20:5, i CE-22:6 su značajno povećani, dok su GM3 d18:1/24:1, GM3 značajno smanjeni u egzosomima koje luče visoko glukozom stimulisane HK-2 ćelije. Nadalje, TAG, PC i CL su značajno smanjeni u egzosomima u poređenju sa HK-2 ćelijama i LPA18:2, LPI22:5, PG32:2, FFA16:1, GM3 d18:1/18:1 , GM3 d18:1/20:1, GM3 d18:0/20:0, PC40:6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE{101 }}:5, CE-20:4, CE-22:6 pronađeni su samo u egzosomima. Osim toga, ekspresija PI4P u HK-2 ćelijama je smanjena pod visokim nivoom glukoze. Ovi podaci mogu biti korisni za pružanje novih ciljeva za istraživanje mehanizama DKD.

Ključne riječi

Ciljana lipidomika; Bubrežni tubuli; Egzozomi; Dijabetička bolest bubrega.

Kliknite ovdje da kupite dodatak Cistanche za zaštitu bubrega

Uvod

Poremećaji metabolizma lipida učestvuju u nastanku i razvoju dijabetesne bolesti bubrega (DKD) [1, 2]. Promjene u sastavu staničnog lipida u bubrezima u stanju visoke glukoze mogu uzrokovati povećanje proizvodnje aktivnog kisika, mitohondrijalnu disfunkciju, pa čak i inducirati apoptozu [3, 4, 5, 6]. Iako su brojni istraživači priznali važnu ulogu bubrežnih tubula u razvoju i napredovanju DKD, nekoliko studija se bavilo ukupnom ekspresijom lipida u bubrežnim tubulima ili promjenama pod visokom stimulacijom glukozom [7, 8]. Stoga je od velike važnosti dobiti sveobuhvatne informacije o lipidima u bubrežnim tubulima, čime se dodatno rasvjetljava uloga lipida u patogenezi DKD.

Posljednjih godina, uloga egzosoma u razvoju DKD-a privlači sve veću pažnju. Egzosomi koji mogu sarađivati ​​sa autofagijsko-lizozomskim putem kako bi ublažili intracelularni stres imaju važnu ulogu u održavanju stanične homeostaze [9, 10]. U međuvremenu, oni djeluju kao nosioci za prijenos materijala i informacijsku komunikaciju između ćelija [11]. Nedavne studije su otkrile da preslušavanje između tubularnih ćelija i drugih tipova bubrežnih ćelija u nefronu može imati važnu ulogu u napredovanju bolesti [12, 13]. Iako lipidni sastav egzosoma može utjecati na njihova svojstva, on je proučavan u manjoj mjeri u usporedbi s pažnjom proteina i RNK [14]. Budući da se egzosomi koje luče različite stanice razlikuju po vrstama, sadržaju i funkcijama lipida, pojašnjavanje sastava lipida i diferencijalne ekspresije egzosoma koje luče bubrežni tubuli u stanju visoke glukoze pružilo bi teorijsku osnovu za pojašnjavanje mehanizma egzosomalne komunikacije u vezi sa bubrežnim tubulima. .

Ovdje smo predstavili diferencijalnu lipidomsku analizu bubrežnih tubula i njihovih egzosoma pod visokom glukoznom stimulacijom i detektovali različito ekspresirane lipidne vrste kardiolipina (CL), monosialodiheksozil gangliozida (GM3) i holesterol estera (CE). Također smo u početku istraživali ulogu fosfoinozitida (PIP) u egzosomalnoj proizvodnji i promatrali unos tubularnih egzosoma od strane glomerularnih mezangijalnih stanica (GMC).

Cistanche dodatak

Metode

1. Ćelijska kultura

HK-2 humana bubrežna proksimalna tubularna epitelna ćelijska linija kupljena je od Centra za ćelijske resurse Šangajskog instituta za biološke nauke. HK-2 ćelije su kultivisane u Dulbecco-ovoj modifikovanoj mešavini medijuma/hranjivih sastojaka sa normalnom glukozom F-12 (DMEM/F-12) koja je dopunjena sa 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS; FSP500, ExCell). Normalna glukoza DMEM/F-12 je bila mješavina 1:1 DMEM (11966025, Gibco) i Hamovog F-12 (11765054, Gibco) koja je sadržavala 5,56 mmol/L glukoze. Ćelije su održavane na 37 stepeni u inkubatoru sa 5% CO2. Kada je postignuto 80 posto konfluencije, ćelije su sakupljene koristeći standardnu ​​proceduru digestije tripsina i pasirane u omjeru podjele od 1:2. Prolazne ćelije su kultivisane sa FBS osiromašenim egzozomima (CMS101.03, Cellmax) u 5,5 mmol·L-1 glukoze kao slijepoj kontrolnoj grupi (NG) i 30 mmol·L-1 glukoze kao visokoj glukozi grupa (HG) 48 sati.

2. Izolacija egzozoma

Diferencijalno ultracentrifugiranje je korišteno za ekstrakciju egzozoma iz supernatanata ćelijske kulture HK{{0}}. Ukratko, supernatanti kulture ćelija HK-2 su sakupljeni i uzastopno centrifugirani na 2000×g, 4 stepena tokom 10 minuta, a zatim na 10,000×g, 4 stepena za 30 min za uklanjanje ćelija, staničnih ostataka i velikih vezikula. Frakcije supernatanta su filtrirane korištenjem filtera veličine pora 0.22-μm. Filtrirani uzorci su zatim podvrgnuti ultracentrifugiranju na 110,000×g tokom 75 minuta, dva puta na 4 stepena da bi se egzosomi peletirali. Rezultirajući egzosomi su resuspendirani u maloj količini otopine fosfatnog pufera (PBS) i pohranjeni na -80 stepeni.

3. Analiza praćenja nanočestica (NTA)

Egzozomi su odmrznuti u vodenom kupatilu na 25 stepeni i stavljeni na led, nakon čega su direktno razblaženi sa 1×PBS za detekciju sa podesivim otpornim pulsnim senzorom (TRPS). Analize distribucije veličine i koncentracije egzosoma izvršene su korištenjem qNano Gold sa Izon Control Suite-om 3.3.2 kompanije Izon Science.

4. Određivanje proteina i Western blotting

Pribl. 100ul prethodno pomiješanog rastvora za krekiranje (RIPA otopina za krekiranje i 1 posto PMSF inhibitor) dodano je u uzorke ćelija i egzosoma odvojeno. Nakon pucanja u trajanju od 30 minuta, centrifugirani su na 12,000×g, 4 stepena 20 minuta. Supernatant je uzet, a koncentracije proteina su određene korištenjem kompleta za analizu proteina bicinhoninske kiseline (BCA; Beyotime) prema uputama proizvođača. Goveđi serum albumin je korišten kao standardni protein.

Uzorci proteina su frakcionisani natrijum-dodecil-sulfat poliakrilamid gel elektroforezom (SDS-PAGE). Nakon prenošenja na PVDF membranu (Millipore), inkubirani su sa različitim primarnim antitelima, anti-CD63 (EXOAB-CD63A-1, SBI; 1:1000), anti-ALIX (YT6283, Immunoway; 1:1000 ), anti-Calnexin (YT0613, Immunoway; 1:1000), anti-P62 (P0067, Sigma; 1:1000) i anti-LC3 (L7543, Sigma; 1:1000), nakon čega slijedi koza protiv zeca ili miševa Ig sekundarna antitela (180202-001, SBI; 1:5000). Specifične trake su otkrivene upotrebom poboljšane hemiluminiscentne (ECL; Beyotime) supstrata. -aktin (BM0627, Boster) je korišten kao interna kontrola. Relativni intenzitet trake mjeren je korištenjem softvera ImageJ.

5. Transmisiona elektronska mikroskopija (TEM)

Uzorak od 5 ul je ispušten u bakarnu mrežu i inkubiran na sobnoj temperaturi 5 minuta. U bakarnu mrežu dodana je kap 2 posto acetata uran-peroksida i inkubirana na sobnoj temperaturi 1 min. Zatim je sušeno oko 20 minuta na sobnoj temperaturi i posmatrano pod nano-transmisionim elektronskim mikroskopom (Tecnai G2 Spirit BioTwin, FEI).

Ekstrakt Cistanche

6. Ciljana lipidomika

Lipidi su ekstrahovani korišćenjem modifikovane verzije Bligh i Dyerove metode [15]. Sve lipidomske analize su obavljene na Exion tečnoj hromatografiji ultra-performanse (UPLC) u kombinaciji sa SCIEX QTRAP 6500 PLUS sistemom. UPLC-MS/MS analize su obavljene u elektrosprej jonizaciji (ESI) modu, uz slijedeće uslove: gas zavjese=20, napon jonskog spreja=5,500 V , temperatura=400 stepen , gas izvora jona 1=35 i gas izvora jona 2=35. Polarni lipidi su odvojeni pomoću Phenomenex Luna 3 µm kolone silicijevog dioksida (unutrašnji prečnik 150 × 2.0 mm) sa dvije mobilne faze: mobilna faza A (kloroform: metanol: amonijum hidroksid, 89,5: 10: 0.5) i mobilna faza B (hloroform: metanol: amonijum hidroksid: voda, 55: 39: 0. 5: 5,5). Odvajanje gradijenta je provedeno na sljedeći način: gradijent je održavan sa 95 posto A tokom 5 minuta, a zatim linearno smanjen na 60 posto za 7 minuta i držan 4 minute, nakon čega je opao na 30 posto i zatim je držano 15 min. Konačno, originalni gradijent je primijenjen i održavan 5 minuta. Maseni spektrometrijski multireakcioni monitoring (MRM) uspostavljen je za različite identifikacije lipida i kvantitativnu analizu [16, 17]. Pojedinačne polarne vrste lipida su kvantificirane pozivanjem na interne standarde iste klase lipida uključujući PE-d31(16:{76}}/18:1), DMPE; PG-d31(16:{84}}/18:1), DMPG; PI-d31(16:{92}}/18:1), di-C{55}} PI; PS-d31(16:{98}}/18:1), DMPS; PA-d31(16:{{1{1{{110}}8}}4}}/18:1), PA(17:{120}}/17:0); BMP-(14:0/14:0); LPE-17:1; LPI-17:1; LPS-17:1; LPA-17:0; GM3 d18:1/18:0-d3; d31-16:0, d8-20:4; PC-d31(16:0/18:1), DMPC; SM d18:1/ d31-16:0, SM d18:1/12:0; LPC-17:0; Cer d18:1-d7/15:0; Sph-d18:1/17:0; CL 22:1(3)-14:1.

Lipidi glicerola, uključujući diacilglicerole (DAG) i triacilglicerole (TAG), kvantificirani su korištenjem modificirane verzije HPLC/MS/MS reverzne faze. Odvajanje neutralnih lipida je postignuto na Phenomenex Kinetex-C18 2.6 µm koloni (id 4.6x100 mm) korištenjem mobilne faze koja sadrži kloroform:metanol: {{19} }.1 M amonijum acetata (100:100:4), pri brzini protoka od 160 µl/min. d{13}}TAG (16:0)3; d{17}}TAG (14:0)3; d5-TAG (18:0)3 su korišteni za pojedinačne šiljke TAG-a. d5-DAG (1,3-17:0); d5-DAG (1,3-18:1) su korišteni za povećanje pojedinačnih DAG-a zasnovanih na Neutral miss MS/MS tehnologiji.

Slobodni holesterol, steroli i njihovi estri analizirani su HPLC-MS/MS, sprovedenim u modusu hemijske jonizacije atmosferskog pritiska (APCI), sa Cholesteryl-2,2,3,4,4,6-d6 Octadeconate; Holesterol-26,26,26,27,27,27-d6 kao interni standardi.

Uzorku su dodani hloroform: metanol: (1:1), 2,4 M hlorovodonična kiselina i 0.25 M EDTA, nakon čega je usledilo mlevenje na niskim temperaturama. Uzorak je centrifugiran nakon inkubacije 3 sata na 4 stepena, nakon čega je ekstrahirana donja organska faza. Za drugu ekstrakciju je dodat hloroform, nakon čega je slijedilo ispiranje organske faze korištenjem 1N hlorovodonične kiseline:metanola (1:1). Organska faza je sušena u vakuumskom rotacionom koncentratoru. Kao što je ranije objavljeno, 40 posto metilamin:voda:n-butanol:metanol (36:8:9:47) korišteno je za deacilaciju i analizirano Thermo ICS{17}} jonskom hromatografijom. Za izgradnju eksterne kalibracione krive za kvantitativne analiza. Analizu je podržao Lipidall Technologies Company Limited.

7. Fluorescentna mikroskopija

Da bi se vizualiziralo unos egzosoma u GMC (Sicencell), jednaka količina egzosoma koje luče HK-2 ćelije sa ili bez stimulacije visoke glukoze označene su sa PKH67 (mini67, Sigma) prema uputama proizvođača. Obeleženi egzosomi su kultivisani sa GMC tokom 24 sata. Konfluentni GMC su isprani tri puta sa PBS, nakon čega su ćelije fiksirane sa 4 posto paraformaldehida i držane van svjetla 30 minuta. Ćelije su isprane tri puta sa PBS i obojene sa DAPI (28718903, Solarbio) 4-6min. Nakon tri puta pranja, konfluentni GMC su fotografisani pomoću Nikon C2 konfokalnog mikroskopa.

8. Statistička analiza

GraphPad 7.0 je primijenjen za statističku analizu i mapiranje. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SEM. Za poređenje između ove dvije grupe korišten je Studentov t-test. P-vrijednost < 0.05 smatrana je statističkom značajnošću.

Cistanche kapsule

Diskusija

Naša studija pruža različito eksprimirane vrste lipida HK{{0}} ćelija i egzozoma pod visokom stimulacijom glukozom, o kojima ranije nije bilo izvještaja. Zanimljivo, vrste GM3, kao što su GM3 d18:1/22:0, GM3 d18:1/16:0, GM3 d18:0/16:0 , GM3 d18:1/22:1 su značajno povećani u visoko stimuliranim glukozom HK-2 ćelijama, a GM3 d18:1/24:1, GM3 su značajno smanjeni u njihovim egzosomima. Osim toga, GM3 d18:1 /18:1, GM3 d18:1/20:1 i GM3 d18:0/20:0 pronađeni su samo u egzozomima. GM3 je najrasprostranjeniji gangliozid u tijelu, koji se sastoji od glukoze, galaktoze i sijalične kiseline koju karakteriziraju sijalične grupe povezane sa strukturom ceramidnog skeleta [18]. Uključen je u regulaciju različitih ćelijskih funkcija, uključujući signalnu transdukciju, proliferaciju, diferencijaciju i apoptozu. Prema nedavnim studijama, koncentracija GM3 u serumu je viša kod pacijenata sa dijabetesom tipa 2, hiperlipidemijom i pretilih pacijenata, dok GM3 može potaknuti uklanjanje inzulinskih receptora i smanjiti inzulinsku signalizaciju [19]. Naši rezultati su ukazali na povišene nivoe svih diferencijalno eksprimiranih GM3 vrsta u HK-2 ćelijama pod visokom glukoznom stimulacijom, posebno povećanje GM3 sa bočnim lancem (22:0) koje je bilo najočiglednije. Zhang et al. [20] također su primijetili povišenu ekspresiju GM3 d18:1/22:0 u korteksu bubrega miševa s dijabetičkom nefropatijom, što je bilo u skladu s našim rezultatima. Studija pacova sa dijabetesom tipa 2 izazvana streptozotocinom koju su proveli Anela et al. [21] su pronašli nepromijenjeni GM3 u glomerulima, ali su značajno povećali ekspresiju GM3 u bubrežnim tubulima, što je u skladu s našim nalazima o promjenama GM3 u bubrežnim tubulima. Kwak et al. [22] su otkrili smanjenje GM3 sadržaja glomerula kod dijabetičkih štakora izazvanih streptozotocinom, praćeno gubitkom selektivne filtracijske barijere naelektrisanja u glomerulima. Važno je napomenuti da uloga GM3 u glomerulima i bubrežnim tubulima može varirati. GM3 je takođe važan deo lipidnog splava [23]. Promjene u nivoima ekspresije GM3 u lipidnim splavovima mijenjaju aktivnosti Na plus -glukoznog kotransportera tipa 2 (SGLT2) i bubrežnog Na plus /K plus /Cl-kotransportera, koji su oba zavisna od lipidnog rafta [24]. Neki istraživači su pretpostavili da veća koncentracija GM3 povećava aktivnosti SGLT2 i Na plus /K plus /Cl-kotransporter, što dovodi do povećane tubularne reapsorpcije i hidrostatskog tlaka eferentne arteriole, a zatim uzrokuje ozljedu bubrežnih tubularnih stanica oštećenjem tubuloglomerularne ravnoteže. Kumari et al. [25] su otkrili da GM3 u egzosomima mokraće pacijenata pokazuje značajnu razliku između DKD i dijabetes melitusa. Uzeto zajedno, budućim istraživanjima trebalo bi se pozabaviti uloga povećane ekspresije GM3 pod visokim nivoom glukoze u bubrežnim tubulima.

Važno je da su naši rezultati također pokazali da su neke vrste CL, uključujući CL66:4(16:1), CL70:7(16:1) i CL74:8(16:1) bile značajno smanjene u visokom glukozom stimuliranom HK{ {13}} ćelija. U poređenju sa HK{14}} ćelijama, CL je značajno smanjen u egzosomima. CL se gotovo u potpunosti nalazi u unutrašnjoj membrani mitohondrija i važan je dio održavanja strukture mitohondrija. Ima važnu ulogu u elektronskoj provodljivosti, proizvodnji adenozin trifosfata, energetskom metabolizmu i apoptozi [26, 27]. Kod dijabetesa, mitohondrijalne morfološke promjene i disfunkcija često su praćene patološkom promjenom CL [28,29]. Proksimalne bubrežne tubularne epitelne ćelije zahtijevaju dovoljno ATP-a za održavanje aktivnog transporta i reapsorpcije različitih supstanci. Kao ćelije koje troše veliku energiju, proksimalne bubrežne tubularne epitelne ćelije bogate su mitohondrijima [30]. Mitohondrijska fragmentacija je uočena u proksimalnim tubularnim epitelnim stanicama u ranom dijabetesu. Zhang et al. [31] su otkrili da je CL esencijalan za održavanje tubularne mitohondrijalne funkcije kod miševa s dijabetesom tipa 1. Naši rezultati mogu pružiti novu teorijsku osnovu za proučavanje mehanizma oštećenja mitohondrija DKD.

Egzosomi imaju važnu ulogu u održavanju ćelijske homeostaze sarađujući sa autofagijom-lizozomskim putem. Prethodne studije su otkrile da promene u nivoima ekspresije PIPs mogu uticati i na izlučivanje egzosoma i na ćelijsku autofagiju regulacijom transformacije MVB [32, 33, 34]. Nina i dr. [35] su otkrili da u PC-3 ćelijama, inhibicija PIKfyvea, čiji je supstrat PI3P, povećava sekreciju egzosoma i inducira sekretornu autofagiju, pokazujući na taj način da su ovi putevi usko povezani PIP-ovima. Na osnovu gore navedenog, uočili smo promjene u PIP-ovima, egzozomalnoj produkciji i autofagiji u HK-2 ćelijama stimuliranim visokom glukozom. Naši rezultati su pokazali da visok nivo glukoze stimuliše i lučenje egzosoma i aktivaciju autofagije u HK-2 ćelijama, dok je uočeno značajno smanjenje ekspresije PI4P. Neophodne su daljnje studije kako bi se istražio regulacijski mehanizam egzozoma-autofagije PIP-ova uključenih u stimulaciju visoke glukoze.

Kao glasnik, egzosomi imaju važnu ulogu u intracelularnoj signalizaciji i funkcionalnim promjenama u razvoju DKD [36, 37, 38]. Fluorescentno smo označili egzosome koje oslobađaju HK-2 ćelije i demonstrirali njihovo parakrino preuzimanje od strane GMC-a. U poređenju sa svojim matičnim ćelijama, egzosomi imaju poseban sastav, što ih čini stabilnijim i funkcionalnijim zbog bogatog holesterola, sfingolipida, zasićenih fosfolipida i domena lipidnog rafta [39]. Čak i male promjene u sastavu lipida mogu utjecati na svojstva membrane, te tako imati veliki utjecaj na njenu funkciju. U ovoj studiji smo otkrili da su TAG, PC i CL značajno smanjeni u egzosomima u poređenju sa matičnim ćelijama HK-2, dok je 13 vrsta lipida uključujući LPA18:2, LPI22:5, PG32:2, FFA16: 1, GM3 d18:1/18:1, GM3 d18:1/20:1, GM3 d18:{{30}}/20:0, PC40: 6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE-20:5, CE-20:4, CE-22:6 su otkriveni samo u egzosomi. Rad predstavljen ovdje pruža osnovu za dalju analizu parakrinih uloga egzosoma koje oslobađaju tubularne stanice.

Cistanche puder

Zaključci

U zaključku, naša studija je pokazala važnost lipidomičke analize u pružanju novih ciljeva za istraživanje patogeneze DKD. Dalja istraživanja o funkciji diferencijalno izraženih lipida, kao i sveobuhvatne studije lipida na drugim ćelijama u nefronu i njihovim egzosomima mogu pružiti novu perspektivu koja bi dodatno razjasnila mehanizam DKD.

Reference

1. Stephanie Eid, Kelli M. Sas, Steven F. Abcouwer, Eva L. Feldman, Thomas W. Gardner, Subramaniam Pennathur. et al. Novi uvid u mehanizme dijabetičkih komplikacija: uloga lipida i metabolizam lipida. Diabetologia. 2019; 62(9): 1539-49.

2. Krisztian Stadler, Ira J. Goldberg, Katalin Susztak. Razvoj razumijevanja doprinosa metabolizma lipida dijabetičkoj bolesti bubrega. Curr Diab Rep. 2015; 15(7): 40.

3. Michal Herman-Edelstein, Pnina Scherzer, Ana Tobar, Moshe Levi, Uzi Gafter. Promijenjen metabolizam lipida u bubrezima i bubrežna akumulacija lipida u humanoj dijabetičkoj nefropatiji. J Lipid Res. 2014; 55(3): 561-72.

4. G Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Alessia Fornoni. Preslušavanje između lipida i mitohondrija kod dijabetesne bolesti bubrega. Curr Diabetes Rep. 2019; 19:144.

5. Kerri J. Grove, Paul A. Voziyan, Jeffrey M. Spraggins, Suwan Wang, Paisit Paueksakon, Raymond C. Harris. et al. Dijabetička nefropatija izaziva promjene u lipidnim profilima glomerula i tubula. J Lipid Res. 2014; 55(7): 1375-85.

6. Kelli M. Sas, Jiahe Lin, Thekkelnaycke M. Rajendiran, Tanu Soni, Viji Nair, Lucy M. Hinder. et al. Zajedničke i različite interakcije lipida i lipida u plazmi i zahvaćenim tkivima u dijabetičkom mišjem modelu. J Lipid Res. 2018; 59(2): 173-83.

7. Joseph V. Bonventre. Možemo li ciljati oštećenje tubula kako bismo spriječili pad funkcije bubrega kod dijabetesa? Semin Nephrol. 2012; 32(5): 452-62.

8. Bi-Cheng Liu, Tao-Tao Tang, Lin-Li Lv, Hui-Yao Lan. Povreda bubrežnih tubula: pokretačka snaga ka hroničnoj bolesti bubrega. Kidney International. 2018; 93(3): 568-79.

9. Nina Pettersen Hessvik, Alicia Llorente. Trenutno znanje o biogenezi i oslobađanju egzosoma. Cell Mol Life Sci. 2018; 75(2): 193-208.

10. Leila Salimi, Ali Akbari, Nassrollah Jabbari, Behnam Mojarad, Ali Vahhabi, Sławomir Szafert. et al. Sinergije u egzosomima i putevima autofagije za ćelijsku homeostazu i metastaze tumorskih ćelija. Cell Biosci. 2020; 10:64.

11. Suresh Mathivanan, Hong Ji, Richard J. Simpson. Egzozomi: ekstracelularne organele važne u međućelijskoj komunikaciji. J Proteomics. 2010; 73(10): 1907-20.

12. Maja Kosanović, Alicia Llorente, Sofija Glamočlija, José M. Valdivielso, Milica Božić. Ekstracelularni vezikuli i renalna fibroza: odiseja ka novom terapijskom pristupu. Int J Mol Sci. 2021; 22(8): 3887.

13. Lin-Li Lv, Ye Feng, Min Wu, Bin Wang, Zuo-Lin Li, Xin Zhong. et al. Egzozomalna miRNA-19b-3p tubularnih epitelnih ćelija potiče aktivaciju M1 makrofaga kod ozljede bubrega. Cell Death Differ. 2020; 27(1): 210-26.

14. Raghu Kalluri, Valerie S. LeBleu. Biologija, funkcija i biomedicinska primjena egzosoma. Nauka. 2020; 367(6478): eaau6977.

15. Jieli Lu, Sin Man Lam, Qin Wan, Lixin Shi, Yanan Huo, Lulu Chen. et al. Ciljana lipidomika s visokom pokrivenošću otkriva nove prediktore lipida u serumu i disregulaciju lipidnog puta koja prethodi nastanku dijabetesa tipa 2 kod normoglikemičnih odraslih Kineza. Diabetes Care. 2019; 42(11): 2117-26.

16. Sin Man Lam, Raoxu Wang, Huan Miao, Bowen Li, Guanghou Shui. Integrirana metoda za direktno ispitivanje homeostaze sfingolipida u tkivima srca i mozga miševa kroz postnatalni razvoj do reproduktivnog starenja. Anal Chim Acta. 2018; 1037: 152-58.

17. Sin Man Lam, Zehua Wang, Jie Li, Xun Huang, Guanghou Shui. Sekvestracija polinezasićenih masnih kiselina u membranskim fosfolipidima larve Caenorhabditis elegans dauer slabi biosintezu eikosanoida za produženo preživljavanje. Redox Biol. 2017; 12: 967-77.

18. Masako Nishikawa, Makoto Kurano, Takahiro Nitta, Hirotaka Kanoh, Jin-ichi Inokuchi, Yutaka Yatomi. Nivoi GM3(d18:1-16:0) i GM3(d18:1-24:1) u serumu mogu biti povezani sa limfomom: Eksplorativna studija sa hematološkim bolestima. Sci Rep. 2019; 9: 6308.

19. Takashige Sato, Yutaka Nihei, Masakazu Nagafuku, Seiichi Tagami, Rina Chin, Mitsunobu Kawamura. et al. Cirkulirajući nivoi gangliozida GM3 u metaboličkom sindromu: pilot studija. Obes Res Clin Pract. 2008; 2(4): 231-38.

20. Biyu Hou, Ping He, Peng Ma, Xinyu Yang, Chunyang Xu, Sin Man Lam. et al. Sveobuhvatno lipidomsko profiliranje bubrega u ranoj fazi dijabetičke nefropatije. Front Endocrinol (Lozana). 2020; 11: 359.

21. Anela Novak, Nikolina Režić Mužinić, Vedrana Cikeš Čulić, Joško Božić, Tina Tičinović Kurir, Lejla Ferhatović. et al. Bubrežna distribucija gangliozida GM3 u pacovskim modelima dijabetesa tipa 1 i 2. J Physiol Biochem. 2013; 69: 727-35.

22. Dong Hoon Kwak, Young Il Rho, Oh Deog Kwon, Seon Ho Ahan, Ju Hung Song, Young Kug Choo. et al. Smanjenje gangliozida GM3 u dijabetičkim glomerulima pacova izazvanim streptozotocinom. Life Sci. 2003; 72(17): 1997-2006.

23. Yong Chen, Jie Qin, Zheng W. Chen. Fluorescentno-topografski NSOM direktno vizualizuje polaritete vrha i doline GM1/GM3 splavova u fluktuacijama ćelijske membrane. J Lipid Res. 2008; 49(10): 2268-75.

24. Pia Welker, Alexandra Böhlick, Kerim Mutig, Michele Salanova, Thomas Kahl, Hartmut Schlüter. et al. Bubrežna aktivnost kotransportera Na plus -K plus -Cl- - i promet izazvan vazopresinom zavise od lipida. Am J Physiol Renal Physiol. 2008; 295(3): F{9}}F802.

25. Sangeeta Kumari, Ajeet Singh. Egzozomalna lipidomika urina otkriva markere za dijabetičku nefropatiju. Current Metabolomics. 2018; 6: 131-39.

26. Aleksandar V. Panov, Sergej I. Dikalov. Kardiolipin, po hidroksilnim radikalima, i lipidna peroksidacija u mitohondrijskim disfunkcijama i starenju. Oxid Med Cell Longev. 2020; 2020: 1323028.

27. Giuseppe Paradies, Valeria Paradies, Francesca M. Ruggiero, Giuseppe Petrosillo. Uloga kardiolipina u mitohondrijskoj funkciji i dinamici u zdravlju i bolesti: molekularni i farmakološki aspekti. Ćelije. 2019; 8(7): 728.

28. Edgard M Mejia, Hieu Nguyen, Grant M Hatch. Biosinteza kardiolipina kod sisara. Chem Phys Lipids. 2014; 179: 11-6.

29. G. Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Shamroop K. Mallela, Xiaochen Liu, Judith Molina, Alexis Sloan. et al. Nedostatak ATP-vezujuće kasete A1 uzrokuje kardiolipinsku mitohondrijalnu disfunkciju u podocitima. J Clin Invest. 2019; 129(8): 3387–400.

30. Alejandra Guillermina Miranda-Díaz, Ernesto Germán Cardona-Muñoz, Fermín Paul Pacheco-Moisés. Uloga kardiolipina i oštećenja mitohondrija u transplantaciji bubrega. Oxid Med Cell Longev. 2019; 2019: 3836186.

31. Guanshi Zhang, Jialing Zhang, Rachel J. DeHoog, Subramaniam Pennathur, Christopher R. Anderton, Manjeri A. Venkatachalam. et al. DESI-MSI i METASPACE ukazuju na abnormalnosti lipida i promijenjene komponente mitohondrijske membrane u dijabetičkim bubrežnim proksimalnim tubulima. Metabolomics. 2020; 16(1): 11.

32. Johan-Owen De Craene, Dimitri L. Bertazzi, Séverine Bär, Sylvie Friant. Fosfoinozitidi su glavni akteri u prometu membrane i lipidnim signalnim putevima. Int J Mol Sci. 2017; 18(3): 634.

33. Kay O. Schink, Kia-Wee Tan, Harald Stenmark. Fosfoinozitidi u kontroli dinamike membrane. Annu Rev Cell Dev Biol. 2016; 32: 143-71.

34. Tore Skotland, Nina P. Hessvik, Kirsten Sandvig, Alicia Llorente. Egzozomalni sastav lipida i uloga eterskih lipida i fosfoinozitida u biologiji egzosoma. J Lipid Res. 2019; 60(1): 9-18.

35. Nina Pettersen Hessvik, Anders Øverbye, Andreas Brech, Maria Lyngaas Torgersen, Ida Seim Jakobsen, Kirsten Sandvig. et al. Inhibicija PIKfyve-a povećava oslobađanje egzosoma i inducira sekretornu autofagiju. Cell Mol Life Sci. 2016; 73: 4717-37.

36. Margherita AC Pomatto, Chiara Gai, Benedetta Bussolati, Giovanni Camussi. Ekstracelularni vezikuli u patofiziologiji bubrega. Front Mol Biosci. 2017; 4:37.

37. Xiaoming Wu, Yanbin Gao, Liping Xu, Wanyu Dang, Huimin Yan, Dawei Zou. et al. Egzozomi iz glomerularnih endotelnih stanica tretiranih visokom glukozom pokreću epitelno-mezenhimsku tranziciju i disfunkciju podocita. Sci Rep. 2017; 7: 9371.

38. Xiao-ming Wu, Yan-bin Gao, Fang-qiang Cui, Na Zhang. Egzozomi iz glomerularnih endotelnih ćelija tretiranih visokom količinom glukoze aktiviraju mezangijalne ćelije da promovišu renalnu fibrozu. Biol Open. 2016; 5(4): 484-91.

39. Tore Skotland, Kirsten Sandvig, Alicia Llorente. Lipidi u egzosomima: Sadašnje znanje i put naprijed. Prog Lipid Res. 2017; 66: 30-41.

Weidong Wang, Tingting Li, Zhijie Li, Hongmiao Wang, Xiaodan Liu

Odjel za nefrologiju, Prva pridružena bolnica Kineskog medicinskog univerziteta, 155 North Nanjing Street, Shenyang, Liaoning, NR Kina, 110001