Dijetalna upotreba izvora metionina i Bacillus Amyloliquefaciens CECT 5940 utječe na performanse rasta, histologiju hepatopankreasa, probavu, imunitet i probavnu mikrobiotu Litopenaeus Vannamei hranjene smanjenom ishranom ribljeg brašna
Oct 30, 2023
Simple Summary: Ubrzana ekspanzija uzgoja škampa zahtijeva izvore proteina visoke nutritivne vrijednosti kako bi se formulirala hrana koja zadovoljava nutritivne potrebe škampa. Riblje brašno (FM) je glavni izvor proteina za formulacije vodene hrane. Međutim, njegova ograničena ponuda i visoka cijena potiču istraživanja o alternativnim izvorima proteina kako bi se formulirala profitabilnija hrana koja doprinosi održivosti akvakulture. Sojina sačma (SBM) i brašno od nusproizvoda peradi (PBM) korišteni su kao izvori proteina za zamjenu ribljeg brašna, ali njihova neravnoteža esencijalnih aminokiselina doprinosi niskom rastu škampa i utiče na zdravlje škampa. Stoga je svrha studije bila procijeniti učinak zamjene FM sa SBM i PBM u ishrani sa dodacima DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) i njihovim kombinacijama na performanse rasta i zdravlje juvenile Litopenaeus vannamei. Rezultati su pokazali da se FM može djelomično zamijeniti sa SBM i PBM u hrani za škampe dopunjenoj sa 0.19% MET-MET ili 0.06% MET-MET plus 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 bez negativno utječu na učinak rasta i dobrobit Litopenaeus vannamei. Ovi rezultati mogu biti zanimljivi za razvoj hrane sa malo ribljeg brašna i doprinos održivosti akvakulture.
Prednosti suplementa cistanche-povećavaju imunitet
sažetak:{{0}}sedmično ispitivanje hranjenja istraživalo je efekat zamene ribljeg brašna (FM) sojinom sačmom (SBM) i brašnom od nusproizvoda peradi (PBM) u ishrani sa dodatkom DL-Met, MET-MET (AQUAVI) ®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) i njihove kombinacije na performanse rasta i zdravlje juvenilnog Litopenaeus vannamei. Ukupno šest eksperimentalnih dijeta je formulisano prema nutritivnim potrebama L. vannamei. Ukupno 480 škampa (0.30 ± 0.04 g) nasumično je raspoređeno u 24 rezervoara (4 ponavljanja/svaka dijeta , 20 škampi/tank). Škampi su hranjeni kontrolnom prehranom (CD; 200 g/Kg ribljeg brašna) i pet dijeta sa 50% zamjenom FM uz dodatak različitih izvora metionina, probiotika (B. amyloliquefaciens CECT 5940) i njihove kombinacije: D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET-MET), D3 ({{ 69}},19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 i D5 (0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940). Škampi su se hranili D3 i škampi značajno veći konačni, sedmični prirast i konačna biomasa u poređenju sa škampima hranjenim CD (p < 0,05). Škampi hranjeni D2 do D5 povećali su visinu epitelnih ćelija hepatopankreasa (p < 0,05). Probavne enzimske aktivnosti su značajno povećane u škampi hranjenim D3 hepatopankreasa (p < 0,05). U međuvremenu, škampi hranjeni D1 imali su značajnu smanjenu regulaciju gena povezanih s imunitetom (p < 0,05). Štaviše, škampi hranjeni D3 i D5 povećali su obilje korisnih prokariotskih mikroorganizama kao što su Pseudoalteromonas i Demequina koji su povezani s metabolizmom ugljikohidrata i imunog sistema. stimulacija. Također, škampi hranjeni D3 i D5 povećali su obilje korisnih eukariotskih mikroorganizama jer su Aurantiochytrium i Aplanochytrium povezani s proizvodnjom eikozapentaenske kiseline (EPA) i dokozaheksaenske kiseline (DHA) koja igra ulogu u poticanju rasta ili jačanju kvatičnog imuniteta organizma. Stoga se riblje brašno može djelomično zamijeniti do 50% SBM i PBM u ishrani sa dodatkom 0,19% MET-MET (AQUAVI®) ili 0,06% MET-MET (AQUAVI®) plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940® (ECOBIOL®) i poboljšati produktivne performanse, zdravlje i imunitet bijelih škampa. Neophodna su dalja istraživanja kako bi se istražili sinergistički efekti aminokiselina i probiotika u prehrani uzgojenih škampa, kao i da bi se procijenilo kako SBM i PBM utječu na sastav masnih kiselina smanjene prehrane ribljeg brašna i kvalitet mišića škampa. Ipak, ove informacije mogu biti interesantne za razvoj hrane s malo ribljeg brašna za akvakulturu bez utjecaja na rast i dobrobit vodenih organizama.
Prednosti cistanche tubulosa- jača imunološki sistem
Kliknite ovdje za pregled proizvoda Cistanche Enhance Immunity
【Tražite više】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Ključne riječi: Litopenaeus vannamei; prehrana škampi; Zamjena za riblje brašno; metionin; probiotici; performanse; zdravlje; mikrobiota
1. Uvod
Uzgoj škampa dao je skoro 11,2 miliona tona 2022. godine, a pacifički bijeli škampi (Litopenaeus vannamei) su bili najreprezentativnija vrsta sa 52% ukupne proizvodnje [1]. Održivost i profitabilnost proizvodnje akvakulture zahtijevaju nabavku sirovina visoke nutritivne vrijednosti za formulaciju hrane koja zadovoljava nutritivne potrebe uzgojenih škampa [2,3]. Riblje brašno je glavni sastojak hrane za vodu zbog svoje visoke nutritivne vrijednosti [4]. Međutim, ograničena ponuda i visoka cijena ribljeg brašna zahtijevaju istraživanje alternativnih izvora za hranu koja je isplativija i doprinosi održivosti akvakulture [5,6]. Prethodne studije, uglavnom fokusirane na produktivne performanse škampa, objavile su da se riblje brašno može djelomično zamijeniti raznim životinjskim i biljnim izvorima [6]. Među biljnim izvorima proteina, sojina sačma ima visok sadržaj proteina. Međutim, prisustvo antinutritivnih faktora, loša probavljivost i neravnoteža esencijalnih aminokiselina (EAA) koja utječe na probavnu mikrobiotu, uzrokuje upalni odgovor u probavnim organima, nisku produktivnost i utječe na imuni odgovor vodenog organizma [5,7, 8]. Brašno od nusproizvoda peradi je životinjski izvor s visokim sadržajem bjelančevina s manjkom metionina i lizina, stoga bi njegova upotreba u smanjenoj hrani za riblje brašno mogla utjecati na rast i dobrobit vodenih organizama [9]. Metionin je oskudan EAA u hrani za vodu s malo ribljeg brašna i neophodan je za normalan rast [10], sintezu proteina [11] i imunološku funkciju [12] vodenih organizama. Stoga je suplementacija metionina u hrani sa malo ribljeg brašna potrebna kako bi se uravnotežile aminokiseline i smanjili negativni utjecaji na rast i metabolizam uzgojenih vodenih organizama [13]. Različiti izvori metionina su komercijalno dostupni, kao što je racemična mješavina D-Met i L-Met izomera zvanih DL-metionin (DL-Met) i mješavina četiri različita stereoizomera metionina (LD-Met-Met, DL-Met -Met, LL-Met-Met i DD-Met-Met) komercijalizirani kao AQUAVI® (Met-Met) [10]. Međutim, AQUAVI® ima bolja fizičko-hemijska svojstva kao što su vrlo niska rastvorljivost u vodi i veća apsorpcija od DL-Met [10,14]. S druge strane, prijavljeno je da suplementacija probioticima (Bacillus subtilis) ima pozitivne efekte na učinak rasta i zdravlje kod bijelih škampa (L. vannamei) i žaba bikova (Lithobates catesbeianus) hranjenih hranom s malo ribljeg brašna [15,16]. Probiotici su živi mikroorganizmi koji se koriste u hrani za vodu zbog svoje sposobnosti da poboljšaju iskorištavanje hrane, enzimsku probavu, prevenciju patogena, imunološki odgovor i rast [15]. Stoga bi uključivanje probiotika u smanjenu hranu od ribljeg brašna moglo poboljšati zdravlje i dobrobit vodenih organizama [16]. Bacillus bakterije se široko koriste u akvakulturi kao probiotici jer imaju sposobnost proizvodnje antimikrobnih spojeva i egzoenzima koji poboljšavaju probavu nutrijenata, inhibiciju patogena, modulaciju imunološkog odgovora, održavanje integriteta crijeva i posljedično učinak rasta [17]. B. amyloliquefaciens ima antibakterijsku aktivnost i proizvodi probavne enzime koji podržavaju probavu [18].
Zbog gore navedenog, alternativni izvori ribljeg brašna, u kombinaciji s mnogim aditivima, korišteni su u hrani za vodu kako bi se garantirala opskrba esencijalnim nutrijentima, poboljšale produktivne performanse, sačuvao fizičko-kemijski sastav ishrane i održao kvalitet vodenog okoliša [19]. Stoga su ishrane sa malo ribljeg brašna dopunjene različitim izvorima metionina i B. amyloliquefaciens poboljšale performanse rasta i efikasnost ishrane uzgojenih vodenih organizama [3,7,8,20,21]. Također, zabilježeni su B. amyloliquefaciens CECT 5940 i njegovi učinci na učinak rasta i zdravlje pilića [22] i nilske tilapije (Oreochromis niloticus) [21]. Međutim, nekoliko studija je potvrdilo efekte prehrane s malo ribljeg brašna i aditiva na zdravlje probave i imunološki odgovor škampa. Stoga je glavni cilj ove studije bio procijeniti učinak zamjene FM sa SBM i PBM u ishrani sa dodacima DL-Met, MET-MET (AQUAVI®), B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) i njihovih kombinacija na rast performanse, histologija hepatopankreasa, digestivna enzimska aktivnost, transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena i mikrobni sastav probavnog sistema juvenilnih pacifičkih bijelih škampa (L. vannamei).
2. Materijali i metode
2.1. Eksperimentalna priprema dijete
Ukupno šest eksperimentalnih dijeta je formulisano prema nutritivnim zahtevima L. vannamei [23] i preporukama proizvođača (Evonik-ova Aqua R & D grupa). Kontrolna dijeta (CD) je formulirana tako da sadrži mješavinu FM proteina (39%), SBM proteina (53%) i PBM proteina (8%) kao tipična komercijalna dijeta za škampe. SBM i PBM su bili glavni alternativni izvori proteina koji su zamijenili FM, dok je pšenično brašno korišteno kao vezivo i sastojak punila. Riblje ulje je korišteno kao glavni izvor lipida za zadovoljavanje n-3 esencijalnih potreba za škampima za masnim kiselinama. CD je imao 2{{10}0 g/Kg ribljeg brašna bez ikakvih dodataka. Ostalih pet dijeta (D1-D5) gdje su SBM i PBM zamijenili FM u 50% su dopunjeni različitim izvorima metionina, B. amyloliquefaciens, i njihovim kombinacijama. D1: 0.13% DL-MET, D2: 0.06% MET-MET (AQUAVI®), D3: 0,19% MET-MET (AQUAVI®), D4 : 0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) i D5: 0,06% MET-MET (AQUAVI®) plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®). Osim toga, omjer stabilnosti vode je procijenjen kao fizička karakteristika ishrane prethodno opisanom metodom [24]. Formulacija, približni sastav i vrijednosti stabilnosti vode eksperimentalnih dijeta prikazani su u Tabeli 1.
Tabela 1. Sastojci i približni sastav eksperimentalnih dijeta (g/kg suhe težine).
Tabela 1. Nast.
2.2. Škampi, ispitivanje hranjenja i sakupljanje uzoraka
Mladunac L. vannamei je nabavljen sa farme škampa u Sonori, Meksiko. Škampi su bili bez patogena prema procedurama opisanim u Priručniku za dijagnostičke testove za vodene životinje Svjetske organizacije za zdravlje životinja [25]. Prije pokusa hranjenja, svi škampi su aklimatizovani u laboratoriji za akvakulturu u rezervoarima 1500-L s morskom vodom pod kontroliranim uvjetima (temperatura 30 ± 0.5 ◦C, rastvoreni kiseonik Veći od ili jednak 4 mg/L, salinitet 37 g/L, pH veći ili jednak 7 i fotoperiodi od 12 svjetlosnih sati) i hranjeni komercijalnom hranom 7 dana. Na početku, 480 zdravih škampa sa (0,30 ± 0,02 g) je izglađeno 24 h i nasumično raspoređeno u 24 kružna rezervoara (volumen je 150 L) sa gustinom od 20 škampa po rezervoaru (ekvivalentno gustini od 133 škampa/m3). Postojala su četiri replika rezervoara koji su nasumično dodijeljeni za svaki dijetetski tretman. Škampi su hranjeni do sitosti sa početnim obrokom od 12% njihove biomase podijeljenim u tri obroka tokom dana (8:00, 13:00 i 16:00 h) za 56 dana, prilagođeno dnevno u zavisnosti od ostatka prisustva ili odsustva hrane. Zabilježeni su temperatura (27,84 do 28,36 ◦C), salinitet (36,98 do 37,07 g/L), otopljeni kisik (4.00 do 5,17 mg/L) i pH (7,41 do 7,84). Svaki dan se mijenjalo 30% vode. Nepojedena hrana, izmet, linjanja i mrtvi škampi uklanjani su svakodnevno. Nakon pokušaja hranjenja i perioda gladovanja od 24 sata, tri škampa su nasumično uzorkovana iz svake replike kako bi se dobilo 400 µL hemolimfe za analizu genske ekspresije [26]. Ranije iskrvavljeni škampi su aseptički secirani kako bi se dobila njihova cijela crijeva i hepatopankreas, a zatim su pohranjeni na -80 ◦C do probavne enzimske aktivnosti i analize mikrobioma. Dodatno, dvanaest (tri škampa/replikacija) cijelih škampa je nasumično uzorkovano iz svakog tretmana i fiksirano u AFA Davidson otopini za histološku analizu.
2.3. Performanse rasta
Svi škampi su izvagani i prebrojani kako bi se izračunao učinak rasta prema jednadžbama koje su objavile prethodne studije [27–29].
Konačna težina=(Σ Konačna individualna težina)/Konačni broj škampa. Sedmično povećanje težine=(konačna težina − početna težina)/broj sedmica. Specifična stopa rasta=100 × (ln konačna težina − ln početna težina)/dani eksperimenta. Stopa preživljavanja=100 × (Konačni broj škampa/Početni broj škampa). Konačna biomasa=Konačna težina × Konačan broj škampa. Unos hrane=Unos hrane (suha težina) − Prikupljena hrana (suha težina). Stopa konverzije stočne hrane=Unos hrane/Konačna biomasa.
2.4. Hepatopancreas Histology
Uzorci hepatopankreasa škampa fiksirani u Davidsonovom rastvoru obrađeni su prema metodi koju su opisali Bell i Lightner [30]. Histološki preseci debljine 4 µm su izrezani pomoću rotacionog mikrotoma (LEICA RM2115RT). Bojenje tkiva, opservacija slajdova i digitalizacija slika realizovani su prema metodi koju je opisao Casillas-Hernández [31]. Slike tkiva korišćene su za merenje visine ćelija hepatopankreasa korišćenjem digitalnog sistema slike Image-Pro Premier softver v9.0 (Media Cyvernetics Inc., Rockville, MD, SAD).
cistanche tubulosa-poboljšava imuni sistem
2.5. Aktivnost probavnih enzima
Crijeva i hepatopankreas su odvojeno homogenizirani u omjeru od 10% sa 0,9% fiziološkim rastvorom i centrifugirani na 3500 rpm 10 minuta na 4 ◦C, a supernatant je odmah analiziran za testove digestivnih enzima pomoću čitača mikroploče (Bio -Rad, Herkules, Kalifornija, SAD). Aktivnosti proteaze i lipaze su analizirane komercijalnim kompletom (Sigma-Aldrich®, Louis, MO, SAD). Aktivnost amilaze je mjerena korištenjem rastvorljivog škroba kao supstrata [32]. Ukupna koncentracija rastvorljivog proteina određena je principom vezivanja protein-boja korišćenjem goveđeg serumskog albumina kao standarda [33]. Svi testovi su rađeni u tri ponovljena uzorka. Aktivnosti digestivnih enzima se izražavaju kao U/mg proteina.
2.6. Transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena
Hemolimfa je centrifugirana na 3500 rpm tokom 10 minuta na 4 ◦C da bi se hemociti odvojili od plazme. Ukupna RNK iz hemocita ekstrahirana je TRIzol reagensom (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornija, SAD) i tretirana sa RNA-free DNase (Promega®, Madison, WI, SAD). cDNA je sintetizovana sa ukupnom RNK (500 ng) korišćenjem sistema za reverznu transkripciju ImProm-II™ (Promega®) i oligo d(T)20 (T4OLIGO). Sinteza cDNK je realizovana reverznom transkripcijom na 42 ◦C tokom 60 min; zatim je reverzna transkriptaza inaktivirana na 70 ◦C tokom 15 minuta da se zaustavi reakcija. cDNK je razrijeđena sa 80 µL ultra čiste vode, a 5 µL je korišteno kao šablon za kvantitativnu PCR (qPCR) reakciju u realnom vremenu. Transkripcijski odgovor je analiziran od pet gena povezanih s imunitetom i -aktina kao referentnog gena (Tabela 2) [34]. qPCR je sproveden na StepOne PCR sistemu u realnom vremenu (Thermo Fisher Scientific) koristeći SensiFAST™ SYBR® Hi-ROX Kit (Bioline™, London, UK). Uslovi qPCR-a bili su početna denaturacija na 95 ◦C tokom 10 minuta, nakon čega je usledilo 40 ciklusa denaturacije na 95◦C tokom 15 s, i žarenje/ekstenzija na 60 ◦C tokom 1 min. Analiza krivulje disocijacije (60–95 ◦C) pri brzini temperaturnog prelaza od 0,5 ◦C/s izvršena je za svaki par prajmera. Metoda relativne kvantifikacije korištena je za analizu ekspresije gena prema Rodriguez-Anaya [35] i Casillas-Hernández [36].
Tabela 2. Specifični prajmeri korišteni za transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena L. vannamei.
2.7. Ekstrakcija DNK i analiza sekvenciranja
Genomska DNK iz hepatopankreasa i crijeva 12 škampa po tretmanu ekstrahirana je pomoću Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe (Zymo Research, Irvine, Kalifornija, SAD), slijedeći upute proizvođača. Koncentracija DNK je kvantificirana pomoću spektrofotometra NanoDrop 2000 (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), a kvalitet DNK je procijenjen elektroforezom u agaroznom gelu (1%, w/v). Uzorci genomske DNK su zatim predati Laboratoriji za mikrobnu genomiku (CIAD, Meksiko) za pripremu biblioteke DNK i sekvenciranje koristeći standardne Illumina protokole za amplifikaciju [37]. Ukratko, V4 varijabilni region gena 16S rRNA i 18S rRNA je amplificiran PCR-om sa sljedećim prajmerima koristeći Illumina adaptere: 16S-V4_515F (50 - GTG CCA GCM GCC GCG GTA A{{ 13}} ), 16S-V4_806R (50 -TAA TCT WTG GGV HCA TCA GG-30), 18S-V9_Euk_1391F ( 50 -GTA CAC ACC GCC CGT C-30 ), i 18S-V9_EukBr (50 -TGA TCC TTC TGC AGG TTC ACC TAC-30 ). Konačno, amplikoni su kvantificirani u Qubitu, pomiješani u ekvimolarnom bazenu i sekvencionirani na Illumina Miniseq platformi pod standardnim uslovima (300 ciklusa, 2 × 150).
2.8. Bioinformatička analiza
FASTQ fajlovi iz čitanja uparenog kraja analizirani su korištenjem DADA2 paketa v1.24.0 [38]. Radni tok analize sekvence uključivao je filtriranje, dereplikaciju, zaključivanje uzorka, identifikaciju himere i spajanje čitanja uparenog kraja (PE) kako bi se grupirali u ASV-ove (varijante sekvence amplikona). DADA2 uključuje "naivnu Bayesovu" metodu koristeći SILVA baze podataka i za regiju 16S-V4 (silva_nr99_v138.1_voz_set.fa) i region 18S-V9 (silva_132.18s.99_rep_set.dada2.fa). Taksonomske informacije su analizirane sa Phyloseq V1.40.0 i paketom mikrobioma v1.18.0 kako bi se dobile alfa i beta diverzitet i vrijednosti ordinacije [37]. Beta raznolikost je sprovedena na osnovu neponderisane UniFrac udaljenosti i vizualizovana korišćenjem PCoA izgrađenog sa ggplotom u R. Konačno, multivarijantne razlike na nivou zajednice između grupa su kvantifikovane permutacionom multivarijantnom analizom varijanse (PERMANOVA) [39]. Konačna ASV tabela iz 16S sekvenci je također korištena kao ulaz za funkcionalno metagenomsko predviđanje pomoću PICRUSt-a [40]. Sadržaj KEGG puta dobijen pomoću PICRUSt-a je normaliziran i zatim korišten za dobivanje metagenomskih funkcionalnih predviđanja na različitim hijerarhijskim KEGG nivoima (1, 2 i 3) [41]. Illumina sekvenciranje korištenjem prajmera za hipervarijabilnu regiju V4 u 16S rRNA genu dalo je 976.065 PE čitanja od 150 bp što odgovara crijevu i hepatopankreasu L. vannamei sa prosjekom od 81.338 čitanja po uzorku. Nakon procesa kvalitetnog filtriranja i eliminacije himera, održavano je u prosjeku 58.235 sekvenci po uzorku, što je ekvivalentno 71,6%, i dodijeljeno je 709 ASV-a. S druge strane, iz V9-18S rDNK sekvenciranja, dobijeno je 871.699 PE čitanja od 150 bp sa prosjekom od 72.642 po uzorku. Nakon procesa analize sekvence, očitavanja su smanjena za približno 12,7%. Međutim, prilikom obavljanja taksonomske identifikacije i ASV grupiranja, većina sekvenci je odgovarala DNK domaćina (L. vannamei), eliminirajući uzorke iz hepatopankreasa. Stoga prikazani podaci o karakterizaciji eukariotske mikrobiote odgovaraju mikroorganizmima prisutnim u crijevima. Korišteni skup podataka je 12.970 sekvenci koje su dodijeljene 43 ASV-a.
2.9. Statistička analiza
Rezultati performansi rasta, visina ćelija hepatopankreasa, digestivna enzimska aktivnost i transkripcioni odgovor imuno-srodnih gena procenjeni su jednosmernom analizom varijanse (ANOVA). Ako je uočena bilo kakva značajnost, izvršen je Tukeyjev test za poređenje srednjih vrijednosti. Statistička analiza je izvršena pomoću Statgraphics Centurion XVI. Značajnost je postavljena na nivo vjerovatnoće od 95%.
3. Rezultati
3.1. Performanse rasta
Vrijednosti performansi rasta prikazane su u Tabeli 3. U poređenju sa CD-om, najveće vrijednosti performansi rasta (konačna težina, prirast i konačna biomasa) zabilježene su kod škampa hranjenih D3 i D5, koje su bile značajno veće od škampa hranjenih D1 (p < 0.05), ali bez statističke razlike sa škampima hranjenim D2 i D4 i (p > 0.05). Najniža vrijednost stope konverzije hrane uočena je kod škampa hranjenih D3, ali nije pronađena značajna razlika u FCR-u među svim dijetalnim tretmanima (p > 0.05). Dok je unos hrane značajno smanjen (p < 0,05) kod škampa hranjenih D1 i značajno povećan (p < 0,05) kod škampa hranjenih D5. Nije nađena značajna razlika u stopi preživljavanja među svim dijetalnim tretmanima (p > 0,05).
Tabela 3. Utjecaj eksperimentalne prehrane na učinak rasta Litopenaeus vannamei.
3.2. Hepatopancreatic Histology
Hepatopankreas škampa imao je dobro organizovanu strukturu (slika 1A). Osim škampi hranjenih D1, svi škampi hranjeni sa smanjenim unosom ribljeg brašna imali su veću (p < 0.05) visinu epitelnih ćelija hepatopankreasa nego CD škampi hranjeni (Slika 1B).
Slika 1. Histologija hepatopankreasa škampa L. vannamei hranjenih kontrolnom ishranom i 50% zamjenom ribljeg brašna. (A) Svjetlosne mikrofotografije uzdužnih presjeka (4 µm) hepatopankreasa obojenih hematoksilinom i eozinom pokazuju dobro organiziranu strukturu. Strelice pokazuju normalne strukture epitelnih ćelija tubula uključujući sekretorne (B-ćelije). Mjerna traka: 100 µm. (B) Ćelije visine epitela hepatopankreasa škampa. Podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SE, vrijednosti sa različitim slovima se značajno razlikuju (p < 0.05). Skraćenice: Tubuli (Tb), epitelne ćelije (EC) i B-ćelije (HpB). CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13% DL-MET), D2 (0,06% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET) , D4 (0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) i D5 (0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.3. Aktivnost digestivnih enzima
Utjecaj različitih izvora metionina u ishrani i Bacillus amyloliquefaciens na aktivnost probavnih enzima crijeva i hepatopankreasa iz hrane sa smanjenim ribljim brašnom hranjenih L. vannamei prikazan je u tabeli 4. Aktivnosti amilaze, proteaze i lipaze hepatopankreasa iz škampa hranjenih D3 su značajno viši (p < 0.05) od CD-a hranjenih škampima, dok aktivnost digestivnih enzima u crijevima nije bila pod utjecajem (p > 0.05). U hepatopankreasu od škampa hranjenih D1 uočena je najniža vrijednost amilaze i lipaze, dok su u crijevima aktivnosti digestivnih enzima imale najniže vrijednosti, ali nisu uočene značajne razlike (p > 0,05) u odnosu na CD hranjene škampima.
Tabela 4. Utjecaj eksperimentalne prehrane na aktivnost digestivnih enzima Litopenaeus vannamei.
3.4. Transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena
Utvrđen je transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena bijelih škampi hranjenih smanjenom ishranom ribljeg brašna sa aditivima i upoređeni sa CD-om hranjenih škampima (Slika 2). Osim škampa hranjenih D1, svi imunološki povezani geni analizirani u ovoj studiji imali su veću ekspresiju od CD-a hranjenih škampima. Hc i pPO su značajno (p < 0.05) povećani u škampima hranjenim D3 i D5. LGBP je značajno povećan (p < 0.05) kod škampi hranjenih D2 i D3. MnSOD je značajno povećan (p < 0,05) kod škampi hranjenih D2, D3 i D5. HSP60 je značajno povećan (p < 0,05) kod škampi hranjenih D5. Najniže vrijednosti transkripcijskog odgovora imuno-srodnih gena uočene su kod škampa hranjenih D1 u poređenju sa svim dijetalnim tretmanima.
Slika 2. Transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena kontrolne dijete hranjene škampima i 50% zamjenske dijete za riblje brašno. (A) hemocijanin (Hc), (B) prophenoloksidaza (pPO), (C) lipopolisaharid i -glukan-vezujući protein (LGBP), (D) citosolna mangan superoksid dismutaza (MnSOD) i (E) protein toplotnog šoka 6{ {11}} (HSP60). Podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± SE, vrijednosti sa različitim slovima se značajno razlikuju (p < 0.05). Skraćenice: CD (20{{30}} g/Kg FM), D1 (0,13% DL-MET), D2 (0,06% MET-MET), D3 (0,19% MET- MET), D4 (0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) i D5 (0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
3.5. Analiza digestivne mikrobiote i funkcionalno predviđanje
Analiza krivulje razrjeđivanja pokazala je da je posmatrana vrsta po uzorku dovoljna i za 16S-V4 (Slika 3A) i za 18S-V9 sekvence (Slika 4A). Što se tiče alfa raznolikosti, rezultati 16S su pokazali da su Chao1, Shannon i Simpsons indeksi hepatopankreasa viši od crijeva (Slika 3B). S druge strane, 18S rezultati su pokazali da su svi indeksi alfa raznolikosti smanjeni u crijevima škampa hranjenih hranom s malo ribljeg brašna u usporedbi s kontrolom (Slika 4B). Međutim, nije bilo značajnih razlika između tretmana ishranom u rezultatima 16S i 18S.
Slika 3. Sekvenciranje gena 16S rRNA crijeva i hepatopankreasa iz kontrolne dijete hranjene škampima i 50% zamjenske dijete za riblje brašno. (A) Kriva razrjeđivanja, (B) Alfa raznolikost i (C) Struktura mikrobiote vizualizirana korištenjem dijagrama analize glavnih koordinata (PCoA). Skraćenice: crijeva (I) i hepatopankreas (H). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) i D5 (0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 594 ).
Efekti eksperimentalne ishrane na strukturu mikrobiote određeni su korištenjem UniFrac udaljenosti i vizualizirani korištenjem PCoA dijagrama. Rezultati su otkrili jasno razdvajanje između eksperimentalnih ishrana, ali bez značajnih razlika u prokariotskim zajednicama iz crijeva ili hepatopankreasa (Slika 3C) kao i eukariotskoj mikrobioti iz crijeva (Slika 4C). Međutim, analiza beta raznolikosti pokazala je jasno odvajanje između prokarionih zajednica iz crijeva i hepatopankreasa (Slika 3C).
Slika 4. Sekvenciranje gena 18S rRNA u crijevima iz kontrolne dijete hranjene škampima i 50% zamjenske dijete za riblje brašno. (A) Kriva razrjeđivanja, (B) Alfa raznolikost i (C) Struktura mikrobiote vizualizirana korištenjem dijagrama analize glavnih koordinata (PCoA). Skraćenica: Crijevo (I). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 ({{20}}.{{27 }}6% MET-MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) i D5 (0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 594 ).
Na osnovu rezultata prokariotske mikrobiote, identificirano je ukupno 19 različitih tipova bakterija. Proteobakterije su bile dominantni tip u crijevima škampa, dok su Proteobakterije i Actinobacteria bile dominantne vrste u hepatopankreasu škampa. U crijevima škampa hranjenih D3 i D5, uočeno je povećanje relativne brojnosti Actinobacteria, dok je relativna brojnost Bacteroidota blago smanjena. Kod atopankreasa hepa škampa hranjenih D1, D2 i D4, uočeno je blago povećanje relativne brojnosti Bacteroidota, dok je kod hepatopankreasa račića hranjenih D3 i D5 relativna brojnost Actinobacteria povećana (Slika 5A). Na nivou roda, Pseudoalteromonas je bio najzastupljeniji u crijevima škampa, dok je Demequina bio najzastupljeniji u hepatopankreasu škampa. Demequina je imala mali porast u crijevima škampa hranjenih D3 i D5, dok su Lysinimicrobium i Ruegeria bili povećani u hepatopankreasu škampa hranjenih D3 i D5 (Slika 5B). Rezultati funkcionalnih kategorija (KEGG nivo 2) pokazali su da su bakterijske sekvence povezane sa ćelijskim procesima i putevima metabolizma (Slika 5C i Dodatna tabela S1). Metabolizam aminokiselina, metabolizam ugljikohidrata, kofaktori i metabolizam vitamina bili su najzastupljeniji u putevima metabolizma, dok je pokretljivost stanica bila najzastupljenija u ćelijskim procesima. Nakon uklanjanja očitavanja sekvenciranja iz DNK domaćina, uočena su tri tipa eukariotske mikrobiote. SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria) tip je bio najzastupljeniji u svim crijevima škampa, međutim povećanje tipa Opisthokonta uočeno je u crijevima škampa hranjenih D5 (Slika 6A). Na nivou roda, Aplanochytrium je bio najzastupljeniji u crijevima škampa hranjenih od D2 do D5, ali je brojnost bila znatno veća u D5. Nekultivisani alveolat obogaćen je CD-om hranjenim crijevima škampa. Auranti ochytrium je bio najzastupljeniji u D2 do D4 sa većom zastupljenošću u D3. Konačno, Ebria je bila najzastupljenija u crijevima škampa hranjenih D1 (slika 6B).
Slika 5. Prokariotska mikrobiota crijeva i hepatopankreasa iz kontrolne dijete hranjene škampima i 50% zamjenske dijete za riblje brašno. (A) Prvih deset u obilju phyla. (B) Analiza toplotne karte prvih 40 rodova, i (C) Analiza toplotne karte predviđanja funkcije zasnovana na analizi KEGG puteva. Skraćenice: crijevo (I) i hepatopankreas (H). CD (200 g/Kg FM), D1 ({{20}}.13% DL-MET), D2 (0.06% MET -MET), D3 (0,19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) i D5 (0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
Slika 6. Eukariotska mikrobiota crijeva iz kontrolne dijete hranjene škampima i 50% zamjenske dijete za riblje brašno. (A) Phyla obilje. (B) Analiza toplotne karte obilja rodova. Skraćenica: crijevo (I). SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria). CD (200 g/Kg FM), D1 (0.13% DL-MET), D2 (0.06% MET -MET), D3 (0.19% MET-MET), D4 (0,13% DL-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940) i D5 (0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940).
4. Diskusija
4.1. Performanse rasta
Prethodne studije su procjenjivale efekte smanjene ishrane ribljeg brašna dopunjene različitim dijetalnim izvorima metionina na učinak rasta L. vannamei, kao što je hrana za škampe sa 5% do 10% ribljeg brašna i dopunjena nivoom između {{15 }}.15% i 1,7% MET-MET (AQUAVI®) ili 3% DL-MET [2,3,8,20,42,43]. Ipak, studija sa sličnim uslovima uzgoja koja je koristila mlade škampe (L. vannamei) s početnom težinom od 0,98 ± 0.02 g, predloženo je 0 .20% MET-MET (AQUAVI®) za bolje performanse rasta kada su škampi hranjeni smanjenom količinom hrane za riblje brašno [20]. DL-MET je dokazan na maloljetnim škampima s početnom težinom od 3.0 g što ukazuje na nivoe između 0.{{50}}6–0.3 0% za dobar produktivan odgovor kada su škampi hranjeni smanjenom količinom hrane za riblje brašno [2]. S druge strane, efekti B. amyloliquefaciens (104 i 1{{90}}3 UFC/mL) rastvorenog u vodi sistema bio floka za uzgojenu L. vannamei su bili objavljeno [44,45], ali nema izvještaja o efektima ovog probiotika dodanog smanjenom količinom hrane za riblje brašno na performanse rasta L. vannamei. Stoga je ova studija procijenila učinak zamjene FM SBM i PBM u ishrani škampa sa dodatkom 0,13% DL-MET (D1), 0,06% MET-MET (D2), 0,19% MET-MET (D3) i prema preporukama proizvođača koristili smo kombinacije od 0,13% DL-MET plus 0,1% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ekvivalentno 109 UFC/g) (D4) i 0,06% MET-MET plus 0,1% B. amyloliquefaciens CECT 5940 (D5). Sve ishrane sa smanjenim unosom ribljeg brašna dopunjene izvorima metionina i probioticima pokazale su dobre vrednosti stabilnosti vode. Stoga su dijeta sa smanjenom količinom ribljeg brašna procijenjena u ovoj studiji u skladu s prethodnim izvještajima i svi tretmani ishranom pokazali su dobar odgovor u rastu škampa. Ipak, škampi hranjeni D1 imali su niže parametre performansi, dok su škampi hranjeni D3 i D5 imali veće parametre. Značajan nizak učinak rasta kod škampi hranjenih D1 može biti povezan sa lošim unosom hrane zbog nedostatka metionina koji uzrokuje smanjenje ukusa smanjene hrane za riblje brašno [20]. Visok učinak rasta kod škampa D3 u poređenju sa škampima hranjenim D1 i D2 mogao bi biti posljedica nedostatka i izvora metionina. Gore navedeno može biti zato što je objavljeno da MET MET dipeptid ima nisku rastvorljivost u vodi i visoku bioraspoloživost, što se može efikasno iskoristiti od strane škampa promovišući bolje vrednosti performansi rasta [2,10,14]. Škampi hranjeni D5 su također imali visoke performanse rasta čak i sa istim nivoom metionina i izvorom u D2, ali sa dodatkom 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940. Visok učinak rasta mogao bi biti posljedica korisnih svojstava probiotika, koja uključuju antimikrobnu aktivnost i proizvodnju -amilaze, celulaze i proteaze koje povećavaju svarljivost i apsorpciju nutrijenata [46]. Također, prethodna studija je objavila da je B. amyloliquefaciens proizvođač metionina [47] i to bi moglo doprinijeti održavanju ravnoteže ove EAA u D5. Štaviše, objavljeno je da mješavina aditiva za stočnu hranu može poboljšati učinkovitost rasta vodenih organizama [48–50] i brojlera [51]. Stoga bi zamjena 50% FM sa SBM i PBM u ishrani sa dodatkom 0,19% MET-MET i 0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 mogla poboljšati iskorištavanje nutrijenata i posljedično učinak rasta škampa. Važno je napomenuti da SBM i PBM imaju visok nivo masnih kiselina, ali n-3 dugolančanih polinezasićenih masnih kiselina imaju manjak ovih izvora proteina [52]. U tom kontekstu, neophodna su dalja istraživanja kako bi se utvrdilo kako upotreba SBM i PBM utječe na sastav masnih kiselina smanjene prehrane ribljeg brašna i na kvalitet mišića škampa.
cistanche koristi za muškarce - jača imuni sistem
4.2. Hepatopancreatic Histology
Hepatopankreas škampa je probavni organ i igra važnu ulogu u izlučivanju probavnih enzima, transportu nutrijenata, skladištenju i apsorpciji, stoga je njegova funkcija ključna za rast i zdravlje škampa [30,53]. Međutim, zabilježeno je da smanjena prehrana s ribljim brašnom može promijeniti strukturnu morfologiju organa za varenje i narušiti fiziološke uvjete u vodenim organizmima što rezultira usporavanjem rasta [54]. Histologija hepatopankreasa analizirana je kao pokazatelj učinka rasta, zdravlja i nutritivnog statusa škampa. Oštećenje u strukturi hepatopankreasa nije uočeno, B ćelije su bile najzastupljenije ćelije hepatopankreasa i njihova visina epitela se značajno povećala u svim dijetalnim tretmanima, s izuzetkom škampa hranjenih D1, koji su imali sličan odgovor kao kod kontrolne dijete. Rezultati sugeriraju da je hepatopankreas osjetljiv na uključivanje različitih izvora metionina u ishrani i B. amyloliquefaciens u smanjenu ishranu ribljeg brašna, povećavajući B ćelije, utječući na lučenje probavnih enzima, apsorpciju i asimilaciju nutrijenata i iskorištavanje hrane kao što je navedeno u drugim studijama kada se koristi alternativni izvori i aditivi ribljeg brašna [53,55–58]. Štaviše, objavljeno je da bi suplementacija metioninom mogla smanjiti promjene hepatopankreasa zbog njegovog nedostatka u ishrani sa malo ribljeg brašna [8]. Stoga, prema histološkoj analizi, nema dokaza o toksičnosti uzrokovanoj smanjenom ishranom ribljeg brašna dopunjenom različitim dijetalnim izvorima metionina i B. amyloliquefaciens u L. vannamei hepatopancreasu.
4.3. Analiza digestivnih enzima
Probavna aktivnost enzima je fiziološki proces koji poboljšava probavu i apsorpciju hranjivih tvari, te je stoga ključni faktor za promicanje performansi rasta škampa [59]. Ipak, prethodne studije su izvijestile da je aktivnost probavnih enzima značajno smanjena sa smanjenom ishranom ribljeg brašna bez dodataka aditiva [60,61]. Aktivnosti digestivnih enzima korištene su kao indikator probavne funkcije škampa. U ovoj studiji, škampi hranjeni D3 poboljšali su (p < 0,05) aktivnost hepatopankreasnih digestivnih enzima u poređenju između svih grupa, a nisu nađene značajne razlike u aktivnosti intestinalnih digestivnih enzima. Sve u svemu, niska aktivnost probavnih enzima uočena je u oba organa škampa hranjenih D1. U skladu s ovim rezultatima, suplementacija metioninom povećala je aktivnost probavnih enzima u crvenoj morskoj oradi (Pagrus major) [62], amuru (Ctenopharyngodon idella) [63], bijelim škampima (L. vannamei) [2,3,20] i rohu riba (Labeo rohita) [59]. Učinci hrane obogaćene B. amyloliquefaciens na aktivnost probavnih enzima škampa nisu prijavljeni kod L. vannamei, ali je poznato da probiotici povećavaju aktivnost probavnih enzima i poboljšavaju korištenje hrane i probavu [64]. Osim toga, nekoliko radova ocjenjivalo je različite vrste hrane za akvakulturu obogaćene aditivima u kombinaciji s probioticima i pokazalo je povećanje probavnog procesa. [48,50]. Ipak, kod pilića brojlera sa organskim kiselinama, probioticima i kombinacijama dokazane su nedosljednosti u aktivnostima probavnih enzima, vjerovatno zbog indukcionog nivoa aditiva u hrani i kombinacija koje su bile na suboptimalnim nivoima [51]. Ova studija je također izvijestila o nedosljednosti u aktivnosti hepatopankreasnih digestivnih enzima kod škampa hranjenih D3, D4 i D5. Međutim, rezultati sugeriraju da prethodno spomenuta suplementacija ne utječe na probavu škampi.
4.4. Transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena
Transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena je veoma važan za dobijanje podataka o zdravstvenom statusu škampa [35]. Međutim, prijavljeno je da ishrana sa malo ribljeg brašna umanjuje imunološki i antioksidativni odgovor škampa zbog neuravnoteženih nutrijenata, visokih antinutritivnih faktora i sadržaja vlakana koji utiču na unos hrane, ukus i probavljivost [56,65–67]. Prethodno smo istraživali efekte izvora i nivoa proteina na gene povezane s imunitetom (Hc, pPO, LGBP), antioksidativni kapacitet (MnSOD) i toleranciju na stres (HSP60) i sugerirali da odbrambeni mehanizmi nisu pogođeni kada su škampi hranjeni hranom koja sadrži biljne proteine (30-35%) u srednjim količinama [35]. S druge strane, objavljeno je da ishrana sa malo ribljeg brašna ima štetne efekte na imuni odgovor škampa kada se riblje brašno smanji sa 250 g/kg na 100 g/kg [68]. Bez obzira na to, antioksidativni odgovor je moduliran bez utjecaja na oksidativni status jetre i crijeva kada je evropski brancin (Dicentrarchus labrax) hranjen s niskim sadržajem ribljeg brašna uz dodatak DL-Met nivoa 12% ispod njihovog utvrđenog zahtjeva [69]. Također, imunološki odgovor i antioksidativni kapacitet su poboljšani kada su bijeli škampi (L. vannamei) [8] i nilska tilapija (O. niloticus) [14] hranjeni hranom sa malo ribljeg brašna sa 0,15% MET-MET. Štaviše, studija je pokazala da je nilska tilapija (O. niloticus) hranjena ishranom sa malo ribljeg brašna, dopunjenom Spirulinom platensis i B. amyloliquefaciens, poboljšala imunološki odgovor i antioksidativni kapacitet, ali je smanjila toleranciju na stres [21]. Rezultati ove studije otkrili su da su transkripcijski odgovori gena koji se odnose na imunitet, antioksidativni kapacitet i toleranciju na stres poboljšani kada su škampi hranjeni D2, D3, D4 i D5, što je zanimljivo jer to ukazuje da suplementacija metioninom i probioticima može pozitivno modulirati odbrambeni mehanizmi, smanjujući afekte uzrokovane niskim sadržajem ribljeg brašna. Nasuprot tome, nizak transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena uočen kod škampa hranjenih D1 mogao bi biti posljedica manjka metionina. Međutim, s obzirom na produktivne performanse, najbolji dijetetski tretmani mogu biti D3 i D5 bez utjecaja na rast i zdravlje škampa.
4.5. Analiza digestivne mikrobiote i funkcionalno predviđanje
Probavni sistem škampa ugošćuje zajednice mikroorganizama u kojima dominiraju bakterije, ali mogu biti prisutni i eukariotski mikroorganizmi koji grade veliki mikrobni ekosistem nazvan mikrobiota [70]. Mikrobiota probavnog sistema škampa utiče na imunitet ili otpornost, proizvodnju korisnih metabolita i varenje i asimilaciju nutrijenata [71,72]. Ishrana je jedan od glavnih faktora životne sredine koji utiču na mikrobiotu probavnog sistema škampa [73]. Ova studija je procijenila efekte ishrane sa malo ribljeg brašna na raznolikost, strukturu i relativnu brojnost prokariotskih i eukariotskih mikroorganizama iz crijeva i hepatopankreasa L. vannamei koristeći 16S i 18S sekvenciranje. Rezultati studije sugeriraju da se raznolikost i struktura mikrobiote (prokariotske i eukariotske) ne razlikuju između dijetalnih tretmana. Međutim, poređenje beta raznolikosti utvrdilo je da je crijevna prokariotska mikrobiota grupirana odvojeno od hepatopankreatične prokariotske mikrobiote, što ukazuje na jedinstvenu ekološku nišu prema probavnom organu škampa [74]. Stoga, specijalizirani mikroorganizmi u crijevima i hepatopankreasu pomažu poboljšanju energije koju domaćin efikasno dobiva i metaboličkim procesima neophodnim za rast, imunološki odgovor, probavu nutrijenata i asimilaciju [75]. Kao što će biti objašnjeno u nastavku, rezultati studije sugeriraju da bi se brojnost i prokariotskih i eukariotskih mikroorganizama mogla povećati i pomoći škampima da efikasno koriste hranjive tvari iz prehrane s malo ribljeg brašna za metaboličke procese neophodne za dobivanje energije, rast, imunitet, probavu i ishranu. Prema obilju prokariota u svim uzorcima crijeva i hepatopankreasa, najzastupljeniji tip je bio Proteobacteria, dok je tip Actinobacteria imao veće prisustvo u uzorcima hepatopankreasa. Ovi rezultati su u skladu s prethodnom studijom [36], a također je opisano da su ove vrste bile dominantne kod mladih i odraslih škampa (Penaeus monodon) [76]. Pseudoalteromonas koji pripada tipu Proteobacteria je digestivni enzim (proteaze, amilaze, -galaktozidaze i fosfolipaze) koji proizvodi mikroorganizam koji doprinosi varenju nutrijenata škampa [77–79]; također je zabilježeno da doprinosi sintezi polinezasićenih masnih kiselina (PUFA) i kratkolančanih masnih kiselina (SCF) [80,81]. Ruegeria, koja pripada tipu Proteobacteria, proizvodi aktivnost triesteraze, doprinoseći probavnim procesima domaćina, kao i antibakterijskom djelovanju protiv Vibrio anguillarum [82]. Demequina koja pripada tipu Actinobacteria može proizvoditi -amilazu, ksilanazu i celulazu, koje su uključene u apsorpciju i korištenje ugljikohidrata [83–86]. Prema hemotaksonomskom i genomičkom profilu, Lysinimicrobium se može smatrati subjektivnim sinonimom za Demequina [87] i stoga bi mogao imati isti doprinos aktivnosti probavnih enzima i varenju ugljikohidrata. Uloga prokariotskih mikroorganizama u probavnom sistemu škampa usko je povezana s predviđanjima funkcija u bazi podataka KEGG, a to su metabolizam aminokiselina, ugljikohidrata, kofaktora i vitamina, kao i pokretljivost stanica. Probavna proizvodnja enzima i sinteza esencijalnih masnih kiselina ukazuju na korisnu ulogu mikrobiote u zdravlju i imunološkoj stimulaciji probavnog sistema škampa. Štaviše, procesi stanične pokretljivosti kao što su bakterijska hemotaksa i sklapanje flagela, mogli bi podržati prokariotske mikroorganizme u prilagođavanju probavnom okruženju domaćina [88]. Prema tome, ishrana sa malo ribljeg brašna, dopunjena sa 0,19% MET-MET ili 0,06% MET-MET plus probiotik (B. amyloliquefaciens) bi pomogla u blagotvornoj ulozi prokariotskih zajednica u probavnom sistemu škampa.
Bilo je teško okarakterisati obilje eukariotskih mikroorganizama sekvenciranjem 18S gena jer je u ovoj studiji otkrivena velika količina DNK L. vannamei. Nadalje, uobičajeno je u metabarkodiranju fekalne DNK da se DNK mikroeukariota u fecesu razgrađuje brže od DNK domaćina i dodatni koraci kao što su cijepanje ili blokiranje DNK domaćina pomoću restrikcijskih enzima ili blokirajućih prajmera su neophodni prije ili nakon amplifikacije [89 ]. Ipak, rezultati studije pružaju uvid u mikroeukariotske zajednice probavnog sistema škampa. SAR tip je bio najzastupljeniji u crijevima škampa hranjenih hranom s malo ribljeg brašna. Aurantiochytrium je imao veću zastupljenost u crijevima škampa hranjenih D3, dok je Aplanochytrium bio najzastupljeniji u crijevima škampa hranjenih D5. Osim toga, Ebria je bila najrasprostranjenija u crijevima škampa hranjenih D1. Aurantiochytrium je proizvođač eikozapentaenske kiseline (EPA) [90], dok Aplanochytrium proizvodi dokozaheksaensku kiselinu (DHA) [91]. Ove masne kiseline igraju bitnu ulogu u promicanju rasta ili jačanju imuniteta vodenih organizama; također, EPA i DHA pomažu vodenim organizmima da smanje faktore upale i smanje upalu [90]. S druge strane, Ebria ima unutrašnji čvrsti silicijumski kostur, što bi moglo rezultirati lošom probavom od strane vodenih organizama [92], što bi moglo smanjiti učinak rasta škampa hranjenih D1. Eukariotski mikroorganizmi žive kao komenzali ili mutualisti u probavnom sistemu i tkivima morskih beskičmenjaka, ali je vjerovatno da potječu iz obalne vode koja je korištena za navodnjavanje ribnjaka sa škampima, kao što je prethodno opisano [93]. Međutim, upotreba ishrane koja je ekološki prihvatljiva i obogaćena aditivima i probioticima mogla bi da kontroliše rast štetnih mikroalgi u probavnom sistemu škampa i njegovom okruženju [94]. Ovo se slaže sa rezultatima studije, koji pokazuju da ishrana sa malo ribljeg brašna dopunjena sa 0.13% DL-MET povećava obilje Ebrije što utiče na produktivne performanse i zdravlje škampa, dok ishrana sa suplementom 0.19% METMET ili 0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens bi pomogli korisnim ulogama eukariotskih zajednica u probavnom sistemu škampa.
cistanche koristi za muškarce - jača imuni sistem
5. Zaključci
Riblje brašno bi moglo biti djelimično zamijenjeno do 50% SBM i PBM u hrani za škampe sa dodatkom MET-MET i/ili B. amyloliquefaciens CECT 5940 bez štetnih efekata na performanse rasta. U poređenju sa kontrolnom ishranom, škampi hranjeni smanjenom ishranom ribljeg brašna sa 0.19% MTE-MET i 0,06% MET-MET plus 0,10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 imali su 43% odnosno 40% više finalne biomase. Štaviše, škampi hranjeni smanjenom ishranom od ribljeg brašna sa dodatkom MET-MET i/ili B. amyloliquefaciens CECT 5940 imali su bolju visinu epitelnih ćelija hepatopankreasa, aktivnost probavnih enzima, transkripcioni odgovor gena povezanih sa imunitetom i korisnu mikrobiotu za probavni sistem. Dalja istraživanja su neophodna kako bi se istražili stepenovani nivoi izvora metionina i sinergistički efekti aminokiselina i probiotika u smanjenoj ishrani ribljeg brašna za uzgajane škampe. Također, bilo bi zanimljivo procijeniti kako SBM i PBM utječu na sastav masnih kiselina smanjene prehrane ribljeg brašna i na kvalitet mišića škampa. Ipak, ove informacije mogu biti interesantne za razvoj hrane s malo ribljeg brašna za akvakulturu bez utjecaja na rast i dobrobit vodenih organizama.
Reference
1. FAO. Stanje svjetskog ribarstva i akvakulture 2022. Ka plavoj transformaciji; FAO: Rim, Italija. [CrossRef]
2. Xie, J.-J.; Lemme, A.; On, J.-Y.; Yin, P.; Figueiredo-Silva, C.; Liu, Y.-J.; Xie, S.-W.; Niu, J.; Tian, L.-X. Nivo ribljeg brašna može se uspješno smanjiti u bijelim škampima (Litopenaeus vannamei) ako se dodaju DL-Metionin (DL-Met) ili DL-MetionylDL-Metionin (Met-Met). Aquac. Nutr. 2017, 24, 1144–1152. [CrossRef]
3. Lu, J.; Zhang, X.; Zhou, Q.; Cheng, Y.; Luo, J.; Masagounder, K.; On je.; Zhu, T.; Yuan, Y.; Shi, B.; et al. Dijetalni dodatak DL-metionil-DLmetionina mogao bi poboljšati performanse rasta pod strategijama niske količine ribljeg brašna modulacijom TOR signalnog puta Litopenaeus vannamei. Aquac. Nutr. 2021, 27, 1921–1933. [CrossRef]
4. Cho, JH; Kim, IH Riblje brašno-nutritivna vrijednost. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2011, 95, 685–692. [CrossRef] [PubMed]
5. Song, X.; Ye, H.; Jin, F.; Li, H.; Kim, Y.-S.; Xiao, J.; Guo, Z. Efekti fermentirane sojine sačme i gvanozin 50 -monofosfata na rast, zdravlje crijeva i antistresnu sposobnost Penaeus vannamei u ishrani sa malo ribljeg brašna. Akvakultura 2022, 548, 737591. [CrossRef]
6. Yao, W.; Yang, P.; Zhang, X.; Xu, X.; Zhang, C.; Li, X.; Leng, X. Učinci zamjene dijetalnog ribljeg brašna proteinom Clostridium autoethanogenum na rast i kvalitet mesa pacifičkih bijelih škampa (Litopenaeus vannamei). Akvakultura 2022, 549, 737770. [CrossRef]
7. Zhang, J.; Yang, H.; Yan, Y.; Zhang, C.; Ye, J.; Sun, Y. Efekti probiotika ribljeg porijekla na performanse rasta, imunološki odgovor i zdravlje crijeva škampa (Litopenaeus vannamei) hranjenih ribljim brašnom djelimično zamijenjenim sojinim brašnom. Aquac. Nutr. 2020, 26, 1255–1265. [CrossRef]
8. Ji, R.; Wang, Z.; He, J.; Masagounder, K.; Xu, W.; Mai, K.; Ai, Q. Učinci suplementa DL-metionil-DL-metionina na učinak rasta, imunološki i antioksidativni odgovor bijelih škampa (Litopenaeus vannamei) hranjenih s malo ribljeg brašna. Aquac. Rep. 2021, 21, 100785. [CrossRef]
9. Chaklader, R.; Siddik, MAB; Fotedar, R. Potpuna zamjena ribljeg brašna brašnom od nusproizvoda peradi utjecala je na rast, kvalitet mišića, histološku strukturu, antioksidativni kapacitet i imunološki odgovor juvenile barramundi, Lates calcarifer. PLoS ONE 2020, 15, e0242079. [CrossRef]
10. Niu, J.; Lemme, A.; On, J.-Y.; Li, H.-Y.; Xie, S.-W.; Liu, Y.-J.; Yang, H.-J.; Figueiredo-Silva, C.; Tian, L.-X. Procjena bioraspoloživosti novog Met-Met proizvoda (AQUAVI®Met-Met) u poređenju sa dl-metioninom (dl-Met) u bijelim škampima (Litopenaeus vannamei). Akvakultura 2018, 484, 322–332. [CrossRef]
11. Skiba-Cassy, S.; Geurden, I.; Panserat, S.; Seiliez, I. Neravnoteža metionina u ishrani mijenja regulaciju transkripcije gena uključenih u metabolizam glukoze, lipida i aminokiselina u jetri kalifornijske pastrmke (Oncorhynchus mykiss). Akvakultura 2016, 454, 56–65. [CrossRef]
12. Machado, M.; Serra, CR; Oliva-Teles, A.; Costas, B. Metionin i Triptofan igraju različite modulatorne uloge u urođenom imunološkom odgovoru i signaliziranju apoptoze evropskog brancina (Dicentrarchus labrax)—in vitro studija. Front. Immunol. 2021, 12, 660448. [CrossRef]
13. Zhou, Y.; He, J.; Su, N.; Masagounder, K.; Xu, M.; Chen, L.; Liu, Q.; Ye, H.; Sun, Z.; Ye, C. Efekti DL-metionina i metionin hidroksi analoga (MHA-Ca) na rast, profile aminokiselina i ekspresiju gena povezanih sa sintezom taurina i proteina kod šarana (Cyprinus carpio). Akvakultura 2021, 532, 735962. [CrossRef]
14. Guo, T.-Y.; Zhao, W.; On, J.-Y.; Liao, S.-Y.; Xie, J.-J.; Xie, S.-W.; Masagounder, K.; Liu, Y.-J.; Tian, L.-X.; Niu, J. Dijetalna suplementacija dl-metionil dl-metioninom povećala je učinak rasta, antioksidativnu sposobnost, sadržaj esencijalnih aminokiselina i poboljšala raznolikost crijevne mikrobiote kod nilske tilapije (Oreochromis niloticus). Br. J. Nutr. 2020, 123, 72–83. [CrossRef]
15. Lin, J.; Zeng, Q.; Zhang, C.; Song, K.; Lu, K.; Wang, L.; Rahimnejad, S. Efekti suplementacije Bacillus subtilis u ishrani baziranoj na sojinoj sačmi na učinak rasta, probavljivost ishrane i zdravlje crijeva kod žabe Lithobates catesbeianus. Aquac. Rep. 2020, 16, 100273. [CrossRef]
16. Tao, X.; He, J.; Lu, J.; Chen, Z.; Jin, M.; Jiao, L.; Masagounder, K.; Liu, W.; Zhou, Q. Efekti Bacillus subtilis DSM 32315 (Gutcare®) na performanse rasta, antioksidativni status, imunološku sposobnost i funkciju crijeva za juvenile Litopenaeus vannamei hranjene dijetama s visokim/niskim sadržajem ribljeg brašna. Aquac. Rep. 2022, 26, 101282. [CrossRef]
17. De Oliveira, MJK; Sakomura, NK; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Soares, L.; Viana, G. Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 sam ili u kombinaciji sa antibioticima za promociju rasta poboljšava performanse brojlera pod izazovom enteričkih patogena. Poult. Sci. 2019, 98, 4391–4400. [CrossRef]
18. Silva, TFA; Petrillo, TR; Yunis-Aguinaga, J.; Marcusso, P.; Claudiano, GDS; de Moraes, FR; de Moraes, JRE Efekti probiotika Bacillus amyloliquefaciens na performanse rasta, hematologiju i intestinalnu morfometriju kod nilske tilapije uzgojene u kavezima. Lat. Am. J. Aquat. Res. 2015, 43, 963–971. [CrossRef]
19. Bai, S.; Katya, K.; Yun, H. Aditivi u hrani za vodu. U praksi ishrane i ishrane u akvakulturi; Woodhead Publishing: Sawston, UK, 2015; str. 171–202. [CrossRef]
20. Wang, L.; Ye, L.; Hua, Y.; Zhang, G.; Li, Y.; Zhang, J.; He, J.; Liu, M.; Shao, Q. Učinci dijetetskog dl-metionil-dl-metionina (Met-Met) na performanse rasta, sastav tijela i hematološke parametre bijelih škampa (Litopenaeus vannamei) hranjenih ishranom zasnovanom na biljnim proteinima. Aquac. Res. 2019, 50, 1718–1730. [CrossRef]
21. Al-Deriny, SH; Dawood, MA; Zaid, AAA; El-Tras, WF; Paray, BA; Van Doan, H.; Mohamed, RA Sinergistički efekti Spirulina platensis i Bacillus amyloliquefaciens na performanse rasta, histomorfologiju crijeva i imunološki odgovor nilske tilapije (Oreochromis niloticus). Aquac. Rep. 2020, 17, 100390. [CrossRef]
22. Sun, Y.; Zhang, Y.; Liu, M.; Li, J.; Lai, W.; Geng, S.; Yuan, T.; Liu, Y.; Di, Y.; Zhang, W.; et al. Efekti dijetetskih dodataka Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 na performanse rasta, antioksidativni status, imunitet i aktivnost probavnih enzima brojlera hranjenih dijetama od kukuruznog, pšeničnog i sojinog brašna. Poult. Sci. 2022, 101, 101585. [CrossRef]
23. NRC (Nacionalno istraživačko vijeće). Potrebe za nutrijentima ribe i škampa; National Academic Press: Washington, DC, SAD, 2011. [CrossRef]
24. Guo, J.; Davis, R.; Starkey, C.; Davis, DA Učinkovitost različitih obloženih materijala za sprječavanje ispiranja nutrijenata za komercijalnu ishranu pacifičkih bijelih škampa Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 52, 195–203. [CrossRef]
25. Međunarodna kancelarija za epizootiku; Komisija za standarde zdravlja vodenih životinja. Priručnik za dijagnostičke testove za vodene životinje. Office international des épizooties. 2022. Dostupno na mreži: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-andmanuals/aquatic-manual-online-access/ (pristupljeno 1. septembra 2022.).
26. Martinez-Porchas, M.; Ezquerra-Brauer, M.; Mendoza-Cano, F.; Higuera, JEC; Vargas-Albores, F.; Martinez-Cordova, LR Učinak dopune heterotrofnog i fotoautotrofnog bio floka, na proizvodni odgovor, fiziološko stanje i kvalitet nakon žetve škampa bijele noge, Litopenaeus vannamei. Aquac. Rep. 2020, 16, 100257. [CrossRef]
27. Peña-Rodríguez, A.; Elizondo-González, R.; Nieto-López, MG; Ricque-Marie, D.; Cruz-Suárez, LE Praktične dijete za održivu proizvodnju smeđih škampa, Farfantepenaeus californiensis, mladih u prisustvu zelene makroalge Ulva clathrata kao prirodne hrane. J. Appl. Phycol. 2017, 29, 413–421. [CrossRef]
28. Piérri, V.; Valter-Severino, D.; Goulart-De-Oliveira, K.; Manoel-Do-Espírito-Santo, C.; Nascimento-Vieira, F.; Quadros-Seiffert, W. Uzgoj morskih škampa u sistemu biofloc tehnologije (BFT) pod različitim alkalitetima vode. Braz. J. Biol. 2015, 75, 558–564. [CrossRef] [PubMed]
29. Gonzalez-Galaviz, JR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Perez, MB; Lares-Villa, F.; Borquez-López, RA; Gil-Núñez, JC Efekat genotipa i izvora proteina na performanse pacifičkih bijelih škampa (Litopenaeus vannamei). Ital. J. Anim. Sci. 2020, 19, 289–294. [CrossRef]
30. Bell, TA; Lightner, DV A Handbook of Normal Penaeid Shrimp Histology; Organizacija Ujedinjenih nacija za hranu i poljoprivredu: Rim, Italija, 1988.
31. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Gonzalez-Galaviz, JR; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Borquez-López, RA; Gil Núñez, JC; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Ibarra-Gámez, JC; Barrios, RMM Učinci visoke koncentracije ugljičnog dioksida na performanse i histologiju tkiva škampa Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2021, 52, 3991–3996. [CrossRef]
32. Xiao, Z.; Storms, R.; Tsang, A. Kvantitativna škrobno-jodna metoda za mjerenje aktivnosti alfa-amilaze i glukoamilaze. Anal. Biochem. 2006, 351, 146–148. [CrossRef]
33. Bradford, MM Brza i osjetljiva metoda za kvantitaciju mikrogramskih količina proteina koristeći princip vezivanja protein-boja. Anal. Biochem. 1976, 72, 248–254. [CrossRef]
34. Zhang, S.-P.; Li, J.-F.; Wu, X.-C.; Zhong, W.-J.; Xian, J.-A.; Liao, S.-A.; Miao, Y.-T.; Wang, A.-L. Efekti različitih nivoa lipida u ishrani na rast, preživljavanje i ekspresiju gena koji se odnose na imunitet kod pacifičkih bijelih škampa, Litopenaeus vannamei. Ribe Školjke. Immunol. 2013, 34, 1131–1138. [CrossRef]
35. Anaya, LR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Lares-Jiménez, LF; Luna-Nevarez, P.; Gonzalez-Galaviz, JR Efekat genetske linije, izvora proteina i nivoa proteina na rast, preživljavanje i ekspresiju gena povezanu sa imunitetom Litopenaeus vannamei. J. World Aquac. Soc. 2020, 51, 1161–1174. [CrossRef]
36. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Flores-Pérez, MB; Garcia-Clark, JG; Rodriguez-Anaya, LZ; Lares-Villa, F.; BorquezLópez, RA; Gil-Núñez, JC; Gonzalez-Galaviz, JR Transkripcijski odgovor imuno-srodnih gena u Litopenaeus vannamei uzgojenim u recirkulacijskim akvakulturnim sistemima s povišenim CO2. Rev. Bras. de Zootec. 2021, 50, 20200197. [CrossRef]
37. Guzmán-Villanueva, LT; Escobedo-Fregoso, C.; Barajas-Sandoval, DR; Gomez-Gil, B.; Peña-Rodríguez, A.; Martínez-Diaz, SF; Balcazar, JL; Quiroz-Guzmán, E. Procjena mikrobne dinamike i ekspresije gena antioksidativnih enzima nakon primjene probiotika kod uzgojenih pacifičkih bijelih škampa (Litopenaeus vannamei). Akvakultura 2020, 519, 734907. [CrossRef]
38. Callahan, BJ; Mcmurdie, PJ; Rosen, MJ; Han, AW; Johnson, AJA; Holmes, SP DADA2: Zaključak uzorka visoke rezolucije iz podataka amplikona Illumina. Nat. Metode 2016, 13, 581–583. [CrossRef]
39. Lahti, L.; Shetty, S. Microbiome R paket; Izdanje (3.16); Bioconductor: Boston, MA, SAD, 2017. [CrossRef]
40. Langille, MGI; Zaneveld, J.; Caporaso, JG; McDonald, D.; Knights, D.; Reyes, JA; Clemente, JC; Burkepile, DE; Vega Thurber, RL; Knight, R.; et al. Prediktivno funkcionalno profiliranje mikrobnih zajednica korištenjem sekvenci gena markera 16S rRNA. Nat. Biotechnol. 2013, 31, 814–821. [CrossRef]
41. Cornejo-Granados, F.; Lopez-Zavala, AA; Gallardo-Becerra, L.; Mendoza-Vargas, A.; Sánchez, F.; Vichido, R.; Brieba, LG; Viana, MT; Sotelo-Mundo, RR; Ochoa-Leyva, A. Mikrobiom pacifičkih bijelih škampa otkriva različit sastav bakterijske zajednice između divljih, akvakulturnih i AHPND/EMS stanja izbijanja. Sci. Rep. 2017, 7, 1–15. [CrossRef]
43. Façanha, FN; Oliveira-Neto, AR; Figueiredo-Silva, C.; Nunes, AJ Utjecaj gustine naseljenosti škampa i stupnjevanih nivoa metionina u ishrani na učinak rasta Litopenaeus vannamei uzgojenog u sistemu zelene vode. Akvakultura 2016, 463, 16–21. [CrossRef]
43. Nunes, AJP; Sabry-Neto, H.; Masagounder, K. Sirovi proteini u ishrani sa malo ribljeg brašna za juvenile Litopenaeus vannamei mogu se smanjiti dobro izbalansiranim suplementacijom esencijalnih aminokiselina. J. World Aquac. Soc. 2019, 50, 1093–1107. [CrossRef]
44. Llario, F.; Falco, S.; Sebastiá-Frasquet, M.-T.; Escrivá, J.; Rodilla, M.; Poersch, LH Uloga Bacillus amyloliquefaciens na Litopenaeus vannamei tokom sazrevanja sistema biofloka. J. Mar. Sci. inž. 2019, 7, 228. [CrossRef]
45. Llario, F.; Romano, LA; Rodilla, M.; Sebastiá-Frasquet, MT; Poersch, LH Primjena Bacillus amyloliquefaciens kao probiotika za Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) uzgajan u biofloc sistemu. Iran. J. Fish. Sci. 2020, 19, 904–920.
46. Gharib-Naseri, K.; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Kheravii, S.; Swick, RA; Choct, M.; Wu, S.-B. Modulacije gena koje se odnose na integritet crijeva, apoptozu i imunitet su u osnovi korisnih učinaka Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 kod brojlera hranjenih na ishrani s različitim nivoima proteina u modelu izazivanja nekrotičnog enteritisa. J. Anim. Sci. Biotechnol. 2020, 11, 104. [CrossRef]
47. Ajogwu, TMC; Ekwealor, CC; Mbah, AN; Madukwe, EJ; Ekwealor, IA Skrining vrsta bacila koje proizvode metionin iz nigerijskih fermentiranih začina hrane i efekti nekih kulturnih parametara na akumulaciju metionina. Am. J. Food Nutr. 2020, 9, 16–22. [CrossRef]
48. Yu, M.-C.; Li, Z.-J.; Lin, H.-Z.; Wen, G.-L.; Ma, S. Učinci dijetalnih bacila i ljekovitog bilja na rast, aktivnost probavnih enzima i biokemijske parametre seruma škampa Litopenaeus vannamei. Aquac. Int. 2008, 16, 471–480. [CrossRef]
49. Yılmaz, S.; Ergun, S.; Yigit, M.; Çelik, E. Učinak kombinacije dijetetskog Bacillus subtilis i trans-cimetne kiseline na urođeni imunološki odgovor i otpornost kalifornijske pastrmke, Oncorhynchus mykiss na Yersinia ruckeri. Aquac. Res. 2020, 51, 441–454. [CrossRef]
50. Zare, R.; Kenari, AA; Sadati, MY Utjecaj dijetetske octene kiseline, proteina (probiotika) i njihove kombinacije na performanse rasta, crijevnu mikrobiotu, probavne enzime, imunološke parametre i sastav masnih kiselina u sibirskoj jesetri (Acipenser baerii, Brandt, 1869). Aquac. Int. 2021, 29, 891–910. [CrossRef]
52. Rođan, P.; Soisuwan, K.; Thongprajukaew, K.; Theapparat, Y.; Khongthong, S.; Jeenkeawpieam, J.; Salaeharae, T. Utjecaj organskih kiselina ili probiotika samih ili u kombinaciji na performanse rasta, probavljivost nutrijenata, aktivnosti enzima, crijevnu morfologiju i crijevnu mikrofloru u brojlerskih pilića. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2018, 102, e931–e940. [CrossRef] [PubMed]
52. Hong, Y.; Chu, J.; Kirby, R.; Sheen, S.; Chien, A. Efekti zamjene proteina ribljeg brašna mješavinom nusproizvoda peradi i fermentirane sojine sačme na učinak rasta i nutritivnu strukturu tkiva azijskog brancina (Lates calcarifer). Aquac. Res. 2021, 52, 4105–4115. [CrossRef]
53. Burri, L.; Berge, K.; Chumkam, S.; Jintasataporn, O. Efekti različitih nivoa uključivanja hrane u kril brašnu na rast i morfologiju hepatopankreasa Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2020, 51, 4819–4823. [CrossRef]
55. Murashita, K.; Matsunari, H.; Fukada, H.; Suzuki, N.; Furuita, H.; Oku, H.; Rønnestad, I.; Yoshinaga, H.; Yamamoto, T. Utjecaj biljne prehrane s malo ribljeg brašna na fiziologiju probave kod žutorepa Seriola quinqueradiata. Akvakultura 2019, 506, 168–180. [CrossRef]
55. Rahimnejad, S.; Yuan, X.; Wang, L.; Lu, K.; Song, K.; Zhang, C. Dodavanje chitooligosaharida u ishrani s malo ribljeg brašna za pacifičke bijele škampe (Litopenaeus vannamei): Učinci na rast, urođeni imunitet, histologiju crijeva i ekspresiju gena povezanih s imunitetom. Ribe Školjke. Immunol. 2018, 80, 405–415. [CrossRef]
56. Peña-Rodríguez, A.; Pelletier-Morreeuw, Z.; García-Luján, J.; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Guzmán-Villanueva, L.; Escobedo regoso, C.; Tovar-Ramírez, D.; Reyes, AG Procjena sirovog ekstrakta nusproizvoda Agave lechuguilla kao dodatka hrani za mlade škampe Litopenaeus vannamei. Aquac. Res. 2019, 51, 1336–1345. [CrossRef]
57. Ray, GW; Liang, D.; Yang, Q.; Tan, B.; Dong, X.; Chi, S.; Liu, H.; Zhang, S.; Rimei, L. Učinci zamjene ribljeg brašna dijetalnim koncentratom proteina soje (SPC) na rast, serumske biokemijske indekse i antioksidativne funkcije za mlade škampe Litopenaeus vannamei. Akvakultura 2020, 516, 734630. [CrossRef]
59. Ambasankar, K.; Dayal, JS; Vasagam, KK; Sivaramakrishnan, T.; Sandeep, KP; Panigrahi, A.; Ananda Raja, R.; Burri, L.; Vijayan, KK Rast, sastav masnih kiselina, ekspresija gena vezana za imunitet, histološki i hematološki indeksi Penaeus vannamei hranjenog stepenastim nivoima antarktičkog krila u dvije različite koncentracije ribljeg brašna. Akvakultura 2022, 553, 738069. [CrossRef]
59. Noor, Z.; Noor, M.; Khan, SA; Younas, W.; Ualiyeva, D.; Hassan, Z.; Yousafzai, AM Dodatci ishrani metionina poboljšavaju performanse rasta, urođeni imunitet, probavne enzime i antioksidativne aktivnosti rohua (Labeo rohita). Fish Physiol. Biochem. 2021, 47, 451–464. [CrossRef]
60. Yun, H.; Shahkar, E.; Hamidoghli, A.; Lee, S.; Won, S.; Bai, SC Evaluacija dijetetske sojine sačme kao zamjene ribljeg brašna za mlade škampe bijele noge, Litopenaeus vannamei uzgojene u bioflok sistemu. Int. Aquat. Res. 2017, 9, 11–24. [CrossRef]
61. Hu, X.; Yang, H.-L.; Yan, Y.-Y.; Zhang, C.-X.; Ye, J.-D.; Lu, K.-L.; Hu, L.-H.; Zhang, J.-J.; Ruan, L.; Sun, Y.-Z. Utjecaj fruktooligosaharida na rast, imunitet i crijevnu mikrobiotu škampa (Litopenaeus vannamei) hranjenih ribljim brašnom djelimično zamijenjenim sojinim brašnom. Aquac. Nutr. 2019, 25, 194–204. [CrossRef]
62. Mamauag, REP; Gao, J.; Nguyen, BT; Ragaza, JA; Koshio, S.; Ishikawa, M.; Yokoyama, S. Dodaci dl-metionina i metionin dipeptida u ishrani su efikasni za razvoj i rast larvi i juvenilne orade, Pagrus major. J. World Aquac. Soc. 2012, 43, 362–374. [CrossRef]
63. Wu, P.; Tang, L.; Jiang, W.; Hu, K.; Liu, Y.; Jiang, J.; Kuang, S.; Tang, W.; Zhang, Y.; Zhou, X.; et al. Odnos metionina u ishrani i rasta, probave, apsorpcije i antioksidativnog statusa u crijevnim i hepatopankreatičnim tkivima amura (Ctenopharyngodon idella). J. Anim. Sci. Biotechnol. 2017, 8, 1–14. [CrossRef]
64. Encarnação, P. Functional Feed Additives in Aquaculture Feeds. U Aquafeed formulaciji; Academic Press: Cambridge, MA, SAD, 2016; str. 217–237. [CrossRef]
65. Xie, S.; Wei, D.; Yin, P.; Zheng, L.; Guo, T.; Liu, Y.; Tian, L.; Niu, J. Dijetalna zamjena ribljeg brašna poremećena sinteza proteina i imunološki odgovor juvenilnih pacifičkih bijelih škampa, Litopenaeus vannamei na niskom salinitetu. Comp. Biochem. Physiol. Dio B Biochem. Mol. Biol. 2018, 228, 26–33. [CrossRef]
66. Ayiku, S.; Shen, J.; Tan, B.-P.; Dong, X.-H.; Liu, H.-Y. Učinci smanjenja prehrambenog ribljeg brašna uz dodatak kvasca na rast Litopenaeus vannamei, imunološki odgovor i otpornost na bolesti protiv Vibrio harveyi. Microbiol. Res. 2020, 239, 126554. [CrossRef]