Određivanje akteozida i ehinakozida Cistanche Tubulosa

[sažetak]Cilj: Izgraditi metodu određivanja (efikasna komponenta na strani države i na strani ehinacee) u Cistanche Tubulosa pomoću tečne hromatografije visokih performansi. Uporediti sadržaj glavne komponente u dva staništa, četiri domaćina i četiri serije u Cistanche tubulosa. Da pruži naučne dokaze za upotrebu vrsta Cistanche tubulosa. Metode: Korištenje Kromasil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 μm) hromatografske kolone; Mobilna faza: metanol, acetonitril-1 procenat sirćetne kiseline (14∶9∶77); Brzina protoka: 1.0 mL·min-1; Talasna dužina detekcije od 334 nm; Temperatura kolone je bila 30 stepeni. Rezultati: Dvije komponente su imale dobar linearni opseg standardne krive u testu (r=0.999,9). Prosečna stopa oporavka je 96,89 odsto i 100,7 odsto, a dinarska 0,91 odsto i 1,96 odsto. Rezultati analize su pokazali da postoji značajna razlika između sadržaja glavne efikasne komponente (stateside i echinacoside) u različitim regijama, serijama i domaćinima u Cistanche tubulosa. Zaključak: Metoda je jednostavna, tačna i ponovljiva. Pruža eksperimentalnu osnovu za ljekovitu vrijednost Cistanche tubulosa.

[Ključne riječi] Cistanche tubulosa; Acteoside; Echinacoside; određivanje sadržaja

Eksperiment s cistanche deserticola

Kliknite ovdje da pogledate Cistanche proizvode

【Zatražite više】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche deserticola je prvi put zabilježen u "Shennong Materia Medica Classic" i jedan je od najčešće korištenih lijekova u receptima za toniziranje bubrega i jačanje janga. Posljednjih godina, veliko iskopavanje Cistanche deserticola dovelo je do brzog smanjenja divljih resursa. Kao zamjena za Cistanche deserticola, cjevasti cvijet Cistanche deserticola proizveden u Xinjiangu čini 60 posto ponude u zemlji.

Cistanche prah

Feniletanol glikozidi kao što su ehinakozid i ergosterol glikozidi su jedna od glavnih farmakoloških komponenti Cistanche tubulosa. Ehinozid ima neuroprotektivne efekte [3], osteoprotektivne efekte [4] i efekte protiv starenja [5]. Ergosterozid ima efekte poboljšanja oštećenja pamćenja, liječenja Alchajmerove bolesti i efekata sličnih androgenu. Cjevasti Cistanche: također poznat kao Hongliu Dayun, domaćin je raznim biljkama Tamarix L. [8-9]. Autor je HPLC metodom odredio sadržaj gornje dvije komponente u Cistanche deserticola. Metoda određivanja i rezultati daju naučnu osnovu za kontrolu kvaliteta i lekovitu vrednost ovog leka.

Feniletanol glikozid je glavna aktivna komponenta Cistanche deserticola

1 Instrument i lijek za ispitivanje

Reagens i lijek za testiranje: ehinacetin (serijski broj 111670-200401), ergosterol (broj serije 111530-200505), referentna supstanca koju obezbjeđuje Kineski institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda. Acetonitril i metanol su hromatografski čisti, dok je voda ultra čista voda; Svi ostali reagensi su analitički čisti. Profesor Ju Aihua sa Medicinskog univerziteta Unutrašnje Mongolije prikupio je i identifikovao sve medicinske materijale Cistanche deserticola. Instrument: American Agilent 1100 tečna hromatografija visokih performansi.

2 Metode i rezultati

2.1 Hromatografski uslovi i test prilagodljivosti sistema

Kromatografska kolona: Kromasil C18 hromatografska kolona (4,6 mm × 250 mm,5 μm）; Mobilna faza: acetonitril metanol 1 procentni rastvor octene kiseline (9:14:77); Talasna dužina detekcije je 334 nm; Protok brzina: 1,0 mL · min-1; Temperatura kolone 30 stepeni ; Zapremina ubrizgavanja 20 μL. Teoretski broj ploča ne bi trebao biti manji od 5000 na osnovu proračuna glikozida ehinacee Stepen razdvajanja dvije farmakološke komponente je dobar, sa stepenom odvajanja većim od 1,5 od susjednih vrhova (vidi sliku 1-3)

Slika 1. Kromatogram referentne supstance ehinacetina

Slika 2 Kromatogram referentne supstance ergosterola

Slika 3. Kromatogram Cistanche deserticola

2.2 Priprema otopine uzorka

Precizno izmjerite oko 0,5 g praha Cistanche deserticola (prosijanog kroz sito od 60 mesh) i stavite ga u smeđu konusnu tikvicu od 100 mL. Precizno dodati 50 mL mobilne faze, izmeriti masu, sonikirati 40 minuta i staviti na sobnu temperaturu; Ponovo odvažite masu, koristite mobilnu fazu da nadoknadite gubitak težine, dobro promućkajte, filtrirajte, ponovo uzmite filtrat i ostavite na stranu.

2.3 Priprema referentnog rastvora

Precizno izmjerite odgovarajuću količinu referentnog materijala ehinacetina i ergosterola i dodajte mobilnu fazu da pripremite otopinu koja sadrži približno {{0}}.14 mg ehinacetina i 0,10 mg ergosterola po 1 mL, respektivno.

2.4 Inspekcija linearnog odnosa

Precizno izmjerite 6,4 mg referentne supstance ehinacee i 3.0 mg referentne supstance ergosterola, respektivno, stavite ih u volumetrijsku tikvicu od 10 mL, razrijedite mobilnom fazom i ravnomjerno protresite; Precizno sisati 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 i 3.0 mL odnosno u volumetrijsku tikvicu od 5 mL, razblažiti do skale mobilnom fazom i promućkati; Odnosno apsorbirajte 20 μ Ubrizgajte L uzorak i izmjerite prema gore navedenim hromatografskim uslovima. Y-osa predstavlja površinu vrha, a X-osa predstavlja volumen ubrizgavanja. Nacrtajte standardnu ​​krivu. Izmjereni podaci pokazuju da je količina ehinacetina 0,26 μg-7.75 μ Postoji dobar linearni odnos između površine pika i volumena injekcije između g, a jednačina regresije je Y=831.41X21. 88, R2=0.9999; Količina ergosterol glikozida je 0,30 μ g-7.50 μ Postoji dobar linearni odnos između površine vrha i zapremine injekcije između g, a jednačina regresije je Y=671.53X plus 158,71, R{ {39}}.9999.

Echinoside, glavna hemijska komponenta Cistanche deserticola

2.5 Test preciznosti

Precizno izmjerite 0,5 g gore navedenog ljekovitog praha, pripremite rastvor za ispitivanje prema metodi opisanoj u "2.2", ubrizgajte 6 uzastopnih puta i zabilježite vršne površine 2 komponente. Dinarski procenat vršne površine njegovog ehinakozida je 1,46 procenata; Sadržaj ergosterol glikozida je 1,62 posto.

2.6 Test stabilnosti

Uzmite {{0}}.5 g uzorka praha i pripremite rastvor za ispitivanje prema metodi opisanoj u "2.2". Ubrizgajte uzorak na 0, 1, 2, 4, 8 i 12 sati nakon pripreme. Rezultati su pokazali da je RSD procenat vršne površine ehinacetina 1,5 procenata; Sadržaj ergosterol glikozida je 2,0 posto.

2.7 Test ponovljivosti

Precizno izmjerite 6 uzoraka praha iz iste serije proizvedene u Minfengu, Hotanu, Xinjiangu, svaki teži približno 0.5 g. Pripremite i izmjerite površinu vrha prema metodi pod "2.2". Izračunajte dinarski procenat vršne površine ehinakozida u 6 uzoraka kao 1,85 procenata i ergosterola kao 1,93 procenata.

2.8 Dodavanje uzorka i test oporavka

Precizno izmjerite 6 uzoraka ljekovitog praha iz iste serije proizvedene u Minfengu, Hotanu, Xinjiangu, pri čemu svaki uzorak teži približno 0.1 g. Dodati određenu količinu ehinacetina i ergosterola i pripremiti testnu otopinu prema metodi opisanoj u "2.2". Prosečne stope oporavka bile su 96,89 procenata i 100,7 procenata, respektivno, pri čemu je procenat dinara bio 0,91 procenat i 1,96 procenata, respektivno. (Pogledajte tabele 1-2)

Tabela 1 Rezultati testa oporavka glukozida sokom ananasa

Tabela 2. Rezultati testa oporavka ergosterol glikozida

2.9 Određivanje uzorka

Uzmite ljekoviti prah Cistanche deserticola iz svake epruvete i radite prema metodi u "2.2". Izmjereni rezultati prikazani su u tabeli 3.

Tabela 3 Određivanje ehinacetina i ergosterozida u Cistanche deserticola

3 Diskusija

3.1 Izbor mobilne faze

Upoređena su dva seta mobilnih faza: 1) metanol acetonitril 1% rastvor sirćetne kiseline (14:9:77); (2) Metanol: 1 posto mravlje kiseline (21,5:78,5). Rezultati su pokazali da je eluiranje mobilnom fazom (1) rezultiralo umjerenim relativnim vremenom zadržavanja, manjim brojem pikova nečistoća i dobrim razdvajanjem dvije komponente.

3.2 Izbor uslova ekstrakcije

Upoređeni su efekti različitih metoda ekstrakcije (refluks zagrijavanja, ultrazvuk) i vremena ekstrakcije (40 min, 50 min) na sadržaj aktivnih sastojaka korištenjem mobilne faze kao rastvarača za ekstrakciju. Konačno, ustanovljeno je da iako je najveći sadržaj izmjeren nakon zagrijavanja i refluksa u trajanju od 50 minuta, nije bilo izbora zbog lošeg oblika vrha. Sadržaj mjeren ultrazvukom 40 minuta i ultrazvukom 50 minuta je sličan, pa je kao uvjet ekstrakcije odabran ultrazvuk u trajanju od 40 minuta.

3.3 Istraživanje je pokazalo

Kineska trava cistanche

Da različiti domaćini i staništa imaju značajne razlike u sadržaju ehinakozida i ergosterola u Cistanche deserticola, što ukazuje da na kvalitet ljekovitog materijala značajno utiču lokacija i domaćin. Stoga je sistematsko proučavanje korelacije između porijekla, domaćina i kvaliteta ljekovitog materijala Cistanche tubulosa od velikog značaja za odabir optimalnih biljaka domaćina i vrednovanje kvaliteta Cistanche tubulosa.

referenca

[1] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei, et al. Napredak istraživanja Cistanche deserticola [J]. Istraživanje procjene droga, 2013, 36 (6): 469-475

[2] Song Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Napredak istraživanja hemijskih komponenti Cistanche tubulosa [J]. Xinjiang Traditional Chinese Medicine, 2010, 28 (01): 76-78

[3] ZHU M,LUC,LIW. Prolazna izloženost ehinakozidu je dovoljna da aktivira Trk signalizaciju i zaštiti neuronalne ćelije od rotenona [J].J Neurochem,2013,124(4): 571-580. [4] LIF YANG X,YANG Y,etal.Antiosteoporotička aktivnost ehinakozida kod pacova sa ovariektomijom [J].Phytomedicine, 2013,20(6):549-557.

[5] XIE H, ZHU H, CHENG C, et al. Ehinakozid usporava ćelijsko starenje ljudskih fibroblastičnih ćelija MRC-5[J]. Pharmazie,2009,64(11):752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian, et al. Poboljšanje poremećaja sticanja pamćenja izazvanog skopolaminom od strane celiaozida [J]. Kineski farmakološki bilten, 2001, 17 (6): 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui, et al. Napredak istraživanja u liječenju osteoporoze sa Cistanche deserticola [J]. Časopis Univerziteta tradicionalne kineske medicine Liaoning, 2016, 18 (3): 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei, et al. RAPD analiza parazitske Cistanche deserticola na različitim vrstama Tamarixa [J]. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2009, 34 (3): 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun, et al. Status istraživanja i izgledi o karakteristikama staništa, parazitskim mehanizmima i transportu nutrijenata Cistanche deserticola [J] Kineski časopis za tradicionalnu kinesku medicinu, 2012, 37 (19): 2831-2835