Određivanje sadržaja pet spojeva u sjemenu Rehmanniae i utvrđivanje njegovog HPLC otiska prsta

Tabela 3 Rezultati testa oporavka (n=6)

2.4 Određivanje uzorka

Sakupljenih šest serija Rehmanije pripremljeno je prema metodi pod "2.2.2" i uzorkovano i određeno prema hromatografskim uslovima pod "2.1". Rezultati određivanja sadržaja prikazani su u Tabeli 4. Rezultati pokazuju da je među pet komponenti, sadržaj glikozida D rehmanije najveći, u rasponu od 0.460% do {{1 0}}.730%; sadržaj leonuri glikozida je drugi, u rasponu od 0,100% do 0,270%, a sadržaj dvije komponente u uzorcima iz različitih proizvodnih područja se značajno ne razlikuje. U uzorku SX1, osim ehinakozida, sadržaj ostale četiri komponente je značajno veći od sadržaja drugih serija uzoraka; sadržaj ehinakozida, cistanhezida A i verbaskozida u Rehmannia glutinosa iz različitih proizvodnih područja je prilično različit i nepravilan.

BILJA CISTANCHE SODOBRA KVALITETNA KONZISTENTNOST

2.5 Uspostavljanje i procjena sličnosti HPLC otiska prsta Rehmannia glutinosa

Kromatogrami i podaci višekomponentnog određivanja sadržaja u Rehmannia glutinosa uvezeni su u softver "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition)" i odabran je kromatogram testnog uzorka SX1 kao referentni spektar. Širina vremenskog prozora je postavljena na 0.10 min, a metoda medijane je korištena za generiranje superponiranih spektra i referentnih spektra. Identificirana su ukupno 23 uobičajena vrha (vidi sliku 3). Sličnost između otisaka prstiju uzorka Rehmannia glutinosa i referentnog je bila 0,904~0,950, što ukazuje da su uzorci Rehmannia glutinosa iz različitih proizvodnih područja i između sirove Rehmannia glutinosa i kuhane Rehmannia glutinosa bili slični i da su imali dobru konzistentnost.

Tabela 4 Rezultati određivanja sadržaja 5 komponenti u sjemenu Rehmanniae/%

13. rehmannioside D; 17. leonurid; 19. ehinakozid; 20. kastanozid A; 21. acteoside

Slika 3 Preklapanje HPLC hromatograma 6 serija Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) i reference (R)

3 Diskusija

3.1 Izbor hromatografskih uslova

U ovoj studiji su ispitivana četiri sistema mobilne faze, acetonitril-voda, acetonitril-0.1% rastvor mravlje kiseline, metanol-voda i metanol-0.1% rastvor mravlje kiseline. Rezultati su pokazali da pet komponenti ima dobre efekte razdvajanja u sistemu acetonitrila; u poređenju sa sistemom mobilne faze acetonitril-voda, pikovi glikozida rehmannia glutinosa i matičnjaka u mobilnoj fazi acetonitrila-0.1% rastvora mravlje kiseline bili su uži i imali su dobru vršnu simetriju. Istovremeno, zbog različite apsorpcije ultraljubičastog zračenja pet komponenti, sadržaj komponenti uvelike varira. Kako bi se preciznije odredio sadržaj svake komponente i osiguralo da je intenzitet apsorpcije pet komponenti ravnomjerno raspoređen na istom kromatogramu, ultraljubičasta apsorpcijarehmannia glikozid D, glikozid matičnjaka, ehinakozid, cistanhezid A i verbaskozid je analiziran i odabrano je određivanje varijabilne talasne dužine, odnosno 0-24 min, prvi izdvojeni rehmannia glikozid je određen na 203 nm, a 24-40 min, odvojeni ehinakozid, cistanhezid A i verbaskozid određeni su na 330 nm. Pored toga, ova studija je takođe istraživala efekte ekstrakcije metanola, 70% rastvora metanola, 50% rastvora metanola i 50% rastvora acetonitrila kao rastvarača za ekstrakciju. Rezultati su pokazali da 70% rastvor metanola kao rastvarač za ekstrakciju može bolje rastvoriti komponente koje se ispituju, a ekstrahovani uzorak ima manje nečistoća. Stoga je ova studija odabrala 70% metanola kao rastvarač za ekstrakciju, acetonitril-0.1% rastvor mravlje kiseline kao sistem mobilne faze i koristila varijabilnu talasnu dužinu za određivanje sadržaja pet komponenti u Rehmaniji.

3.2 Analiza rezultata određivanja uzorka

Iz rezultata određivanja vidi se da je nakon parenja, osim blagog povećanja sadržaja ehinakozida, značajno smanjen sadržaj ostale četiri komponente, posebno leonurizida i cistanhezida A; sadržaj glikozida rehmanije D i cistanhezida A u Rehmannia glutinosa iz istog proizvodnog područja bio je neznatno različit, a sadržaj leonurizida, ehinakozida i verbaskozida značajno se razlikovao; sadržaj ehinakozida u Rehmannia glutinosa iz proizvodnog područja Henan bio je značajno veći nego u uzorcima iz proizvodnog područja Shanxi, a sadržaj ostale četiri komponente bio je neznatno drugačiji. Istovremeno, prema HPLC otisku prsta ustanovljenom u ovoj studiji, sličnost između 6 serija uzoraka Rehmannia i kontrolnog otiska prsta bila je 0.904~0.950, što ukazuje da je glavna hemikalija komponente 6 serija uzoraka Rehmannia prije i nakon obrade bile su vrlo konzistentne.

Ukratko, metoda određivanja sadržaja i HPLC otisak prsta utvrđeni u ovoj studiji su tačni, pouzdani i imaju dobru specifičnost. Mogu se koristiti za karakterizaciju promjena u komponentama i stepena prerade Rehmannia glutinosa prije i nakon obrade, te pružaju tehničku podršku za kontrolu kvaliteta Rehmannia glutinosa. Međutim, ova studija ima nedostatke male serije uzoraka i nepotpunu pokrivenost proizvodnih područja, što zahtijeva dalju analizu i provjeru.

Reference

[1] Kineski komitet za farmakopeju. Farmakopeja Narodne Republike Kine: Tom 1 [S]. Peking: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Istraživanje historijske evolucije imena prerađene Rehmannia glutinosa i proučavanje njene djelotvornosti [J]. Kineska patentna medicina, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe, et al. Napredak istraživanja Rehmannia glutinosa i analiza predviđanja njenih markera kvaliteta [J]. Kineska patentna medicina, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Napredak istraživanja hemijskog sastava i farmakoloških efekata Rehmannia glutinosa [J]. Kineska herbalna medicina, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangl. Napredak istraživanja hemijskih komponenti i farmakoloških efekata Rehmannia glutinosa［J］.

Istraživanje evaluacije droga, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei, et al. Analiza kemijskih komponenti svježe Rehmannia glutinosa, sirove Rehmannia glutinosa i kuhane Rehmannia glutinosa od strane UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Kineska patentna medicina, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei, et al. Prepoznavanje uzoraka otiska prsta i višekomponentno određivanje sadržaja različitih obrađenih proizvoda Rehmannia glutinosa［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Napredak istraživanja hemijskih komponenti i farmakoloških efekata Rehmannia glutinosa［J］. Kineska herbalna medicina, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian, et al. Komparativna studija hemijskih komponenti Rehmannia glutinosa prije i nakon obrade UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Novi kineski lijekovi i klinička farmakologija, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan, et al. Dinamička akumulacija komponenti nukleozida i aminokiselina u Rehmannia glutinosa na osnovu UPLC-TQ-MS［J］. Kineska biljna medicina, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Studija o tehnologiji obrade i mehanizmu "devet parenja i devet izlaganja" Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Univerzitet Šandong, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan, et al. HPLC Istovremeno određivanje sadržaja osam komponenti u Rehmannia glutinosa i njenim različitim prerađenim proizvodima UPLC analizom otiska prsta i određivanjem sadržaja komponenti sa više indeksa [J]. Kineski medicinski materijali, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Procjena kvaliteta Rehmannia glutinosa na osnovu UPLC otiska prsta i višeindeksnog određivanja sadržaja komponenti [J]. Kineski medicinski materijali, 2021, 44 (4): 917-923.