Poređenje pojedinačnih i ponovljenih doziranja antiinflamatornih humanih mezenhimalnih stromalnih ćelija pupčane vrpce u mišjem modelu polimikrobne sepse
Jul 07, 2023
Sažetak
Mezenhimalne stromalne ćelije (MSC) ublažavaju pretkliničku sepsu i akutnu ozljedu bubrega povezanu sa sepsom (SAAKI), ali klinička ispitivanja jednodoznih MSC-a nisu pokazala robusnu efikasnost. Ova studija je istraživala imunomodulatorne efekte novog MSC proizvoda (CD362-odabranih MSC-ova iz ljudske pupčane vrpce [hUC-MSC]) na modelima endotoksemije miševa i polimikrobne sepse. U početku, miševi su primali intraperitonealni (ip) lipopolisaharid (LPS), nakon čega su slijedile pojedinačne ip doze hUC-MSC-a ili nosača. Sljedeće, miševi su podvrgnuti vezivanju cekalnog crijeva i punkciji (CLP) nakon čega su uslijedile intravenske (iv) doze hUC-MSC u 4 h ili 4 i 28 h. Analize su uključivale serum/plazma testove biohemijskih indeksa, inflamatornih medijatora i AKI biomarkera NGAL; višebojna protočna citometrija peritonealnih makrofaga (LPS) i subpopulacija intrarenalnih imunoloških ćelija (CLP) i histologija/imunohistohemija bubrega (CLP). 72 h nakon injekcije LPS-a, hUC-MSCs smanjili su serumske inflamatorne medijatore i omjer M1/M2 peritonealnih makrofaga. Ponovljene, ali ne pojedinačne, doze hUC-MSC primijenjene 48 h nakon CLP-a rezultirale su nižim serumskim koncentracijama inflamatornih medijatora, nižim NGAL-om u plazmi i preokretom deplecije intrarenalnih T stanica i subpopulacija mijeloidnih stanica povezanog sa sepsom. Analiza hijerarhijskog grupisanja svih 48-h serum/plazma analita pokazala je djelomičnu ko-klasterizaciju ponovljenih doza hUC-MSC CLP životinja sa Sham grupom, ali nije otkrila jasan potpis odgovora na terapiju. Zaključeno je da su ponovljene doze CD362-odabranih hUC-MSC potrebne za modulaciju sistemskih i lokalnih imunoloških/upalnih događaja u polimikrobnoj sepsi i SA-AKI. Interindividualna varijabilnost i nedostatak efekta primjene jednokratne doze MSC u CLP modelu su u skladu sa dosadašnjim zapažanjima iz kliničkih ispitivanja u ranoj fazi.
Ključne riječi
Akutna povreda bubrega · Mezenhimalne stromalne ćelije · Regenerativna medicina · Sepsa · Upala · Ćelijska terapija
Kliknite ovdje da kupite dodatak Cistanche
Uvod
Sepsu karakterizira po život opasna disfunkcija organa zbog nereguliranog odgovora domaćina na infekciju uzrokovanu bakterijskim, gljivičnim, virusnim i parazitskim patogenima [1]. Svake godine sepsa pogađa skoro 50 miliona ljudi širom svijeta, što često dovodi do teških sistemskih posljedica i povreda organa, uključujući akutnu ozljedu bubrega (AKI), što rezultira oko 11 miliona smrtnih slučajeva [2, 3]. Mezenhimalne stromalne ćelije (MSC) su multipotentne ćelije sa ekstenzivnim imunomodulatornim svojstvima koje se mogu izolovati iz različitih tkiva [4]. Sada je dobro poznato da MSC nudi potencijalnu terapiju za modulaciju bolesti za sepsu i AKI povezanu sa sepsom (SA-AKI) [5, 6]. Nekoliko nedavnih studija koje su koristile ligaciju i punkciju cekalnog crijeva na mišu i štakoru (CLP), lipopolisaharid (LPS) ili modele fekalnog peritonitisa pokazalo je da sistemska primjena MSC ima potencijal da smanji upalu, suprotstavi bakterijsku infekciju i poboljša popravak ozlijeđenog tkiva u sepse [7–11], uključujući SA-AKI, [10, 12–15] modulacijom ravnoteže između proupalnih i antiinflamatornih stanja.
Nedavno ispitivanje na zdravim odraslim osobama potvrdilo je da preventivni intravenski (iv) tretman sa 4 × 106 MSC/kg proizvodi rane imunomodulatorne efekte na odgovor domaćina na LPS [16]. Nadalje, primjena alogenog MSC pacijentima sa septičkim šokom (NCT01849237, NCT02421484 i NCT02328612) i akutnim respiratornim distres sindromom povezanim sa sepsom (NCT01775774) pokazala je dobru sigurnost i podnošljivost u kliničkim ispitivanjima [16–19]. Uprkos ovim ohrabrujućim rezultatima, Galstyan et al. također su izvijestili da pojedinačna doza iv MSC nije spriječila smrt od disfunkcije organa povezane sa sepsom, što povećava mogućnost da bi dodatne doze mogle biti potrebne za postizanje značajne kliničke koristi [17]. Nedavno ispitivanje faze 2 bez sepse (NCT01602328) u kojem su pojedinačne doze alogenog MSC isporučene intra-vortikalno pacijentima sa sterilnim AKI nakon kardiopulmonalne bajpas operacije također nije pokazalo povoljan učinak na disfunkciju organa i preživljavanje pacijenata unatoč obećavajućim pretklinički i rezultati ispitivanja prve faze [20]. Da li bi ponovljeno doziranje tokom ranog toka sepse i drugih akutnih upalnih sindroma moglo povećati ili produžiti efekte MSC koji moduliraju bolest, ostaje relativno nedovoljno istraženo na pretkliničkim i translacijskim razinama. Nadalje, nepotpuno poznavanje mehanizma djelovanja, odgovora na dozu i optimalnih kliničkih indeksa za primjenu MSC u sepsi ograničava potencijal za dizajniranje uspješnih ispitivanja [5, 21, 22].
U trenutnoj studiji, izvršili smo pretkliničko ispitivanje antiinflamatornih efekata CD362-selektovanog MSC-a iz ljudske pupčane vrpce (hUC-MSC) na mišjim modelima sepse. Ovaj hUC-MSC odabran za površinske markere je novi terapijski proizvod koji je pokazao dokaze djelotvornosti na pacovskim modelima bakterijske pneumonije i sepse kada se primjenjuje rano nakon početka bolesti [23, 24]. Kao ispitivani lijek kliničke kvalitete (IMP), hUC-MSC je trenutno u fazi ispitivanja faze I/II kod pacijenata s umjerenim do teškim akutnim respiratornim distres sindromom (ARDS) zbog COVID-19 (NCT03042143) i kod višestrukih autoimune inflamatorne bolesti (POLARISE). Cilj nam je bio pokazati protuupalni potencijal pojedinačnih doza hUC-MSC na mišjim modelima endotoksemije/polimikrobne sepse izazvane LPS-om i CLP-om [25, 26] i, u posljednjem, utvrditi da li je druga primjena hUC-MSC tijekom rani tok bolesti rezultirao je većim ili češćim korisnim efektima na sistemsku upalu i ozljede specifične za organ, što je primjer SA-AKI.
Cistanche tubulosa
Materijali i metode
1. Ćelije
Anti-CD362 plus -selektovani hUC-MSC kultivisani su iz tkiva ljudske pupčane vrpce etičkog porekla dobijenog od Tissue Solutions Ltd. (Glasgow, UK). Primarna izolacija i ekspanzijske kulture CD362 plus hUC-MSC izvedene su kao što je prethodno opisano [19, 23, 27]. Kriokonzervirane bočice (1×107 u 1 mL) anti-CD362 plus odabranog hUC-MSC su odmrznute i prebačene u 9 mL fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS). Nakon analize žive/mrtve ili putem tripan plave boje ili automatskog brojača ćelija (NucleoCounter® NC-200™, Chemometec A/S, Danska), potreban broj ćelija je peletiran centrifugiranjem na 400×g tokom 5 minuta i ćelije su ponovo suspendovane u 100 ul sterilnog fiziološkog rastvora za intraperitonealnu (ip) ili iv injekciju.
2. Postupci na životinjama
Svi postupci na životinjama sprovedeni su prema licenci (br. 255/17) Etičkog odbora za eksperimentisanje na životinjama Univerziteta u Barseloni i uz odobrenje (AE19125/P082 i AE19125/P066) Regulatornog tela za zdravstvene proizvode, Irska, i odobreno od strane NUI Galway odbora za etiku istraživanja brige o životinjama. Sve procedure su obavljene u licenciranim objektima za životinje na NUI Galwayu i Univerzitetu u Barceloni.
Za LPS model endotoksemije korišteni su 10-12 sedmični mužjaci miša C57BL/6 iz Charles River Ltd., Kent, UK. Miševima je ubrizgano ip sa 5 ug/g LPS (LPS 0111:B4, kataloški br. L2630, Sigma Aldrich, UK) u 100 ul sterilnog fiziološkog rastvora. Miševi su bili smješteni u grupama od 3-5 miševa/kaveza tokom studije u individualno ventiliranim kavezima. Pojedinačne ip injekcije 2,5×105 hUC-MSC ili jednake količine vehikuluma (sterilni fiziološki rastvor) su davane 4 h nakon LPS injekcija. Životinje su praćene svaka 4 h do kraja studije uz pomoć tablice rezultata u nevolji i mjera podrške prema unaprijed određenom protokolu. Humana eutanazija je izvedena na definiranoj eksperimentalnoj krajnjoj točki ili ranije ako su životinje premašile unaprijed definirani prag težine. U vrijeme eutanazije, peritonealni eksudati su sakupljeni za analizu protočnom citometrijom pažljivim uvlačenjem 5 mL sterilnog PBS-a u i iz peritonealne šupljine.
Ligacija i punkcija cekuma (CLP) izvedena je na {{0}} sedmicama starim mužjacima C57BL/6 miševa (Charles River Ltd., UK). Miševi su primili buprenorfin {{1{{20}}}}.1 mg/kg (Richter Pharma AG, Austrija) subkutano 25-30 min prije zahvata i anestezirani su sa 1.{{8 }} posto izoflurana (sa protokom O2 od 0,5 L/min) na NUI Galwayu ili sa Anesketinom (100 mg/mL; Dechra Veterinary Products SLU, Španija) i Rampunom (20 mg/mL; Bayer, Njemačka) na Univerzitetu u Barceloni. Donja polovina abdomena je obrijana i očišćena sa 4 posto hlorheksidina ili povidon-joda i urezana 1 cm okomito duž srednje linije. Cekum je eksternaliziran, a distalnih 50 posto je ligirano korištenjem 4.0- 6.0 M šavova. Materijal slepog crijeva je otpušten 'kroz i kroz' punkcijom 21-iglom za mjerenje i izlučena je kap fekalne materije prije vraćanja cekuma u peritonealnu šupljinu i zatvaranja mišića i kože. Lažno operisani miševi prošli su identičnu proceduru, uključujući otvaranje peritoneuma i otkrivanje crijeva, ali bez podvezivanja i perforacije cekuma. Miševi su primili 0,5 mL Gelofusine (Braun Melsungen AG, Njemačka) ip instilacijom prije zatvaranja rane. Postoperativna podrška se sastojala od razblaženog buprenorfina koji se daje subkutano (sc) svakih 8-12 h do prethodno određenih krajnjih tačaka (48 ili 72 h za pojedinačne eksperimente). Primjena 1×106 hUC-MSC ili ekvivalentnih volumena vehikuluma (sterilni fiziološki rastvor) izvršena je iv preko repne vene 4 h ili 4 i 28 h nakon CLP-a. Česti nadzor i podrška vršeni su prema etički odobrenom protokolu. Humana eutanazija je izvedena na definiranoj eksperimentalnoj krajnjoj točki ili ranije ako su životinje premašile unaprijed definirani prag težine.
Doze ćelija za dva životinjska modela korišćena za studiju odabrane su na osnovu prethodnih izveštaja o humanim MSC antiinflamatornim efektima na sličnim modelima [9, 13, 14, 28, 29]. Veličine grupa za LPS studiju odabrane su empirijski na osnovu relevantnih prethodnih izvještaja za ovaj model [30, 31]. Veličina grupa za CLP studiju određena je za primarni ishod NGAL u plazmi 24 h nakon operacije. Koristeći podatke iz pilot eksperimenta, izračunata je veličina uzorka od 9 životinja po grupi kako bi se osiguralo 90 posto snage uz pretpostavku da je nivo značajnosti 5 posto i dvostrani test (http://www.3rs-reduction.co.uk/html /6__snaga_i_uzorak_veličina.html). Za odabir konačne veličine grupe od n=10 primijenjena je očekivana stopa osipanja od 10 posto.
Ekstrakt Cistanche
3. Uzimanje krvi i nabavka tkiva
Uzorci venske krvi do maksimalnog volumena od 20 μL su povremeno vađeni iz vena repa i lica aseptičnom tehnikom korištenjem 25-21 igala za mjerenje i sakupljeni su u epruvete koje sadrže heparin (VWR International, Dublin, Irska). Terminalni uzorak krvi uzet je punkcijom srca u vrijeme eutanazije. Serum je sakupljen u mikroepruvete sa serumskim gelom i aktivatorom zgrušavanja (Sarstedt, Wexford, Ireland). Uzorci plazme i seruma su pripremljeni centrifugiranjem na 10,000×g tokom 10 min. Uzorci seruma su pohranjeni na -80 stepeni i nakon toga analizirani na biohemijske parametre od strane NationWide Laboratories (Lancashire, UK). Slezena, pluća, bubrezi i jetra su secirani odmah nakon eutanazije.
4. Imunološki testovi
Koncentracija lipokalina povezanog sa želatinazom u plazmi (NGAL) je kvantificirana pomoću razvojnog kompleta za razvoj Lipocalin-2/NGAL Duo-Set ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MI, SAD) prema protokolu koji je predložio proizvođač (detalji u Dodatnoj metodi) ). Za multipleks kvantifikaciju citokina i hemokina u serumu, Bio-Plex Pro mišji standardni 23-plex test (Bio-Rad, Accuscience) korišćen je prema uputstvima proizvođača. Uzorci su analizirani na Bioplex 200 multiplex ELISA sistemu (BioRad, Accuscience).
5. Polukvantitativno bodovanje sekcija bubrežnog tkiva
Obojeni dijelovi bubrega analizirani su na slijepi način svjetlosnom mikroskopijom pri 40X uvećanju koristeći Olympus BX43 mikroskop svijetlog polja (Olympus, Center Valley, PA) i softverom IS TCapture (Tucsen Photonics Co., Fujian, Kina). Za svaki bubreg, snimljeno je dvadeset nepreklapajućih polja obojenog preseka, a pozitivno obojeno područje je slepi posmatrač ocenio za (A) tubularnu dilataciju, zalivanje i nekrozu (PAS) i (B) ekspresiju NGAL [32] Bodovanje je izvršeno na 0-4 polukvantitativnoj skali (detalji u Dodatnim metodama). Prosječni rezultati su izračunati za svaki bubreg, a konačni rezultati su izraženi kao srednja vrijednost grupe ± SD.
Cistanche puder
Diskusija
Sepsa i njena česta komplikacija SA-AKI predstavljaju veliki izazov za javno zdravlje zbog kontinuiranog nedostatka efikasnih tretmana i razočaravajućih rezultata iz kasnih kliničkih ispitivanja [2, 3]. Nekoliko nedavnih pretkliničkih studija objavilo je rezultate koji ukazuju da MSC različitih izvora i njihovi proizvodi imaju pozitivne efekte na težinu bolesti i preživljavanje u modelima sepse i AKI [7, 8, 11–15]. Ipak, klinička korist MSC-a u sepsi i SA-AKI ostaje nedokazana sa samo ograničenim podacima dostupnim od ljudskih pacijenata [5]. Do danas, klinička ispitivanja su dokumentirala da je pojedinačna doza iv MSC infuzije u okruženju primjene LPS-a, sepse i ARDS-a sigurna i izvodljiva, [16-19], ali ne smanjuje izrazito smrt od zatajenja organa povezanog sa sepsom [17]. . U ovoj studiji uporedili smo efekte iv primjene jedne i dvostruke doze karakterističnog humanog MSC terapeutskog proizvoda (CD362- odabranog hUC-MSC) na mišjem CLP modelu polimikrobne sepse. U početku, u skladu sa nedavno prijavljenim rezultatima za ovaj isti MSC proizvod na pacovskim modelima bakterijske pneumonije i sepse [23, 24], potvrdili smo potencijal za ranu primjenu hUC-MSC za modulaciju sistemske upale izazvane LPS-om kod miševa. U mišjem CLP modelu polimikrobne sepse, međutim, naši rezultati su pokazali da pojedinačne doze hUC-MSC primijenjene iv 4 h nakon indukcije fekalnog peritonitisa nisu imale jasan povoljan učinak na sistemsku upalu ili organsko-specifično (bubrežno) tkivo. Nasuprot tome, primjena druge iv doze hUC-MSC 24 h kasnije rezultirala je višestrukim signalima poboljšane upale i oštećenja bubrega 48 h nakon početka sepse. Unatoč tome, korist za preživljavanje za režim dvostruke doze nije dokazana. Naši rezultati naglašavaju važnost izvođenja in vivo studija MSC terapeutskih proizvoda na više modela i izvještavanja o pozitivnim i negativnim predkliničkim ishodima kako bi se bolje informisalo o kliničkom prijevodu i dizajnu ispitivanja. Uzeti zajedno, naši rezultati također pružaju dokaz da se ograničena ili odsutna korist od ranih režima jednokratne doze antiinflamatornih MSC proizvoda u ispitivanjima sepse može barem djelomično prevladati ponovljenim doziranjem.
U mišjem LPS modelu, jedna, rana doza hUCMSC modulirala je sistemske nivoe i urođenih i adaptivnih inflamatornih medijatora najmanje 72 h, iako bez očiglednog efekta na rezultate težine i preživljavanje. Fenotipska analiza peritonealnih makrofaga pružila je dokaze da je primjena hUC-MSC povezana s predviđenim lokalnim imunomodulatornim efektom – naginjanje makrofaga prema M2 polarizaciji, što je povezano s rješavanjem upalnih ozljeda i promocijom popravka tkiva [29, 35] i vjerovatno će biti posredovano unakrsnim razgovorom MSC-a sa rezidentnim mijeloidnim ćelijama [36]. Zaista, nedavne studije su izvijestile da terapeutska imunomodulacija MSC-a u uvjetima sepse može ovisiti o njihovoj fagocitozi od strane mijeloidnih stanica (mononuklearnih fagocita) koje se zatim podvrgavaju alternativnoj aktivaciji što rezultira proizvodnjom IL-10 i drugih parakrinih anti- inflamatorni medijatori [7, 27, 37]. Iako bi bilo od interesa utvrditi da li su prednosti takve imunomodulacije povećane ponovljenim dozama hUC-MSC nakon primjene LPS-a, zaključili smo da bi eksperimentalni model koji bolje odražava razvojnu sepsu imao veći klinički značaj. Dakle, nakon što je potvrđena biološka aktivnost hUC-MSC kod miševa primjenom LPS-a, mišji CLP model je korišten za karakterizaciju protuupalnih efekata povezanih s ponovljenim doziranjem i kvantifikaciju specifičnih efekata hUC-MSC-a na bubrege u okruženju polimikrobne sepse. i SA-AKI. U našim rukama, ovaj model je bio povezan sa umjereno teškom sepsom (otprilike 70 posto, 50 posto i 40 posto preživljavanja nakon 48, 96 i 168 sati, redom, kod neliječenih životinja) bez očitog zatajenja jetre i bubrega. Naša zapažanja za model, uključujući stope mortaliteta i trendove u serumskim parametrima jetre i albuminu, u skladu su s vrlo sveobuhvatnim profiliranjem mišjeg CLP-a o kojem su izvijestili Li i sar. [38], koji takođe dokumentuje smanjenu telesnu temperaturu, krvni pritisak i broj otkucaja srca tokom prvih 48 h nakon CLP. Zanimljivo, dok Li et al. dokumentirano povećanje serumskog kreatinina i azota ureje u krvi 8 i 16 h nakon CLP-a, njihovi rezultati pokazuju da su ovi bubrežni funkcionalni biomarkeri pali na normalne (ili ispod normalne) razine za 48 h – što možda odražava evoluirajuće efekte izmijenjenog metabolizma/mišićne mase na ovi biomarkeri kako model napreduje [38]. U skladu s tim, analiza seruma/plazme i tkiva bubrega nakon 48 sati pokazala je značajnu sistemsku upalu i odgovor na oštećenje bubrega bez očitih dokaza ishemijskog oštećenja/nekroze. Ove posljednje analize pružile su najjasnije dokaze za modulacijski učinak hUCMSC režima dvostruke doze na ozbiljnost polimikrobne sepse u usporedbi s primjenom jedne doze koja se, za razliku od nedavno objavljenih rezultata u CLP modelu štakora [24], nije mogla razlikovati. iz CLP grupe tretirane slanom otopinom za sve ispitane indekse. Konkretno, klinički relevantni biomarker AKI, NGAL, pokazao se kao vrijedan diferencijator težine sepse i efekta liječenja u ovom modelu i može biti važan biomarker za buduća klinička ispitivanja ćelijskih terapija u sepsi i SA-AKI [33, 39 ].
Naši rezultati za učinak iv MSC na preživljavanje kod malih životinjskih modela sepse su u suprotnosti s nekim drugim izvještajima [28, 40], ali su, posebno, u skladu sa uočenim efektima alogenih MSC u kliničkim ispitivanjima na ljudima [5, 16- 18, 41]. S tim u vezi, istaknuli bismo potencijalnu ulogu pristranosti objavljivanja – konkretno, selektivnog objavljivanja rezultata koji odražavaju pozitivne efekte – kao važnog pokretača nerealnih očekivanja za efikasnost jednodoznih režima MSC i drugih naprednih terapija u najranijim fazama kliničke bolesti. prijevod [42]. Zaista, Sun et al., u nedavnoj meta-analizi 29 studija na životinjama o efikasnosti MSC terapija u sepsi, otkrili su značajnu pristrasnost u publikaciji i nedostatak jasnoće u pogledu optimalne doze ćelija među ovim pretkliničkim izvještajima [43]. Ipak, također izvještavamo o karakterističnim pozitivnim nalazima koji mogu pomoći u postizanju translacijskih ciljeva za UC-MSC u sepsi ili drugim sistemskim i organskim specifičnim upalnim bolestima, kao što su AKI, bolesti jetre ili respiratornih organa. U oba modela, ove molekularne promjene ukazuju na složene interakcije hUC-MSC sa Th1 i Th2 imunološkim odgovorom. Takvi efekti na aktivaciju T-efektorskih ćelija i ravnotežu fenotipa T pomoćnika mogu igrati ključnu ulogu u modulaciji akutne faze sepse jer neselektivna, neregulirana aktivacija imunoloških efektora što rezultira visokim nivoima cirkulirajućih citokina doprinosi zatajenju više organa [44] a, u slučaju T-ćelija, može biti praćeno široko rasprostranjenom apoptozom i kasnijim imunim nedostacima [45]. Također je pokazano da primjena MSC može smanjiti lokaliziranu upalu tkiva regulacijom homeostaze citokina i smanjenjem prometa imunih stanica u organe [44]. U skladu s tim, naša kvantitativna analiza niza populacija intrarenalnih imunoloških stanica 48 sati nakon sepse izazvane CLP-om otkrila je nedostatke uzrokovane sepsom koji utječu i na urođene i na adaptivne efektore, uključujući gubitak dvostruko negativnih T stanica koji su nedavno prijavljeni. da rano reaguju na AKI [46]. Za životinje koje su tretirane dvostrukom, ali ne i jednom dozom hUC-MSC, postojao je dokaz reverzije intrarenalne imune ćelije. Kako su slični trendovi uočeni i u plućima i slezeni, naši rezultati ukazuju na potencijal za ponovljeno iv doziranje MSC-a za široko ublažavanje iscrpljivanja imunoloških ćelija iz nelimfoidnih i limfoidnih organa – aspekt sepse koji je povezan s kasnijim mortalitetom zbog sekundarna infekcija [47, 48]. Na osnovu dodatnog zapažanja povećane ćelijske smrti među intrarenalnim CD45 plus ćelijama kod netretiranih CLP životinja, moguće je da ovo odražava direktne ili indirektne efekte hUC-MSC na smanjenje mitohondrijalne disfunkcije i pro-apoptotske signalizacije [49–51]. Ipak, bit će potrebni fokusiraniji eksperimenti kako bi se u potpunosti razjasnili mehanizmi pomoću kojih sistemska primjena MSC-a čuva broj mijeloidnih i/ili limfoidnih ćelija u sepsi i kako bi se utvrdilo mogu li se terapijski iskoristiti.
Cistanche kapsule
Uzimajući u obzir inherentnu varijabilnost, mi i drugi promatramo s pojedinačnim ishodima za mišji CLP model, pretpostavili smo da bi hijerarhijska klasterska analiza kvantitativnih očitavanja za niz cirkulirajućih medijatora povezanih s upalom u 48 h pomogla da se bolje definira karakteristični "potpis odgovora". među životinjama tretiranim MSC. Iako se 60 posto grupe koja je primala dvostruku dozu grupiralo u obrascu koji ih je odvojio od većine grupa s jednom dozom i neliječenih i bio je bliži lažnoj grupi, nije se mogao identificirati vrlo jasan multianalitni profil modulacije bolesti. Pristup analize glavnih komponenti (PCA) dao je sličan zaključak (podaci nisu prikazani). Treba priznati da podaci o životinjama koje nisu preživjele do 48 sati nisu mogli biti prikupljeni i moguće je da bi analize u jednoj ili više ranijih vremenskih tačaka mogle pružiti karakterističnije razdvajanje ispitanika/nereagatora. Ipak, ova analiza naglašava složenost inter-individualnih varijacija koje su svojstvene životinjskim modelima sepse i ćelijske terapije, čak i uz veliku pažnju na principe dobrog eksperimentalnog dizajna [52, 53], i koja odražava slične izazove sa kojima se suočava klinička primjena nove terapije sepse [18, 20, 41, 54, 55].
Treba priznati neka ograničenja studije. Prije svega, fokusirali smo se na istraživanje in vivo efekata CD362-odabranog hUC-MSC-a jer je ovaj ćelijski proizvod podvrgnut kliničkim ispitivanjima za druge bolesti uzrokovane upalom, uključujući ARDS povezan sa COVID-19-. Ovaj dizajn studije onemogućio je sticanje daljeg uvida u komparativne efekte, kod sepse i SA-AKI, ćelijskog proizvoda testiranog s onima neselektiranog hUC-MSC ili sa MSC izvedenim iz koštane srži ili drugih tkiva. Drugo, kako su korištene ćelijske doze odabrane na osnovu prethodnih studija protuupalnih učinaka humanih MSC kod miševa, nije moguće utvrditi da li višestruka primjena većeg ili nižeg broja ćelija daje veću korist. Konačno, kako su veličine grupa za eksperimente CLP modela bile sposobne da adresiraju efekte hUC-MSC na sistemski inflamatorni biomarker težine sepse/SA-AKI, moguće je da bi veće veličine grupa jasnije definirale efekte ponovljenih doza na preživljavanje. Iako ova pitanja dodatno naglašavaju potrebu za uzastopnim pretkliničkim eksperimentima koji se pridržavaju što je moguće bliže ključnih parametara potrebnih za optimalan dizajn kliničkog ispitivanja, rezultati koje ovdje predstavljamo podržavaju kontinuirani fokus na režime s više doza antiinflamatornog MSC u sepsi i SA-AKI.
Reference
1. Singer, M., Deutschman, CS, Seymour, CW, Shankar-Hari, M., Annane, D., Bauer, M., Bellomo, R., Bernard, GR, Chiche, JD, Coopersmith, CM, Hotchkiss , RS, Levy, MM, Marshall, JC, Martin, GS, Opal, SM, Rubenfeld, GD, van der Poll, T., Vincent, JL, & Angus, DC (2016). Treća međunarodna konsenzus definicija za sepsu i septički šok (sepsa-3). The Journal of the American Medical Association, 315(8), 801–810. https://doi.org/10.1001/jama.2016.0287
2. Hoste, EA, Bagshaw, SM, Bellomo, R., Cely, CM, Colman, R., Cruz, DN, Edipidis, K., Forni, LG, Gomersall, CD, Govil, D., Honore, PM, Joannes-Boyau, O., Joannidis, M., Korhonen, AM, Lavrentieva, A., Mehta, RL, Palevsky, P., Roessler, E., Ronco, C., et al. (2015). Epidemiologija akutne ozljede bubrega kod kritično bolesnih pacijenata: multinacionalna AKI-EPI studija. Intenzivna medicina, 41(8), 1411–1423. https://doi.org/ 10.1007/s00134-015-3934-7
3. Rudd, KE, Johnson, SC, Agesa, KM, Shackelford, KA, Tsoi, D., Kievlan, DR, Colombara, DV, Ikuta, KS, Kissoon, N., Finfer, S., Fleischmann-Struzek, C ., Machado, FR, Reinhart, KK, Rowan, K., Seymour, CW, Watson, RS, West, TE, Marinho, F., Hay, SI, et al. (2020). Globalna, regionalna i nacionalna incidencija i mortalitet sepse, 1990-2017: Analiza za proučavanje globalnog tereta bolesti. Lancet, 395(10219), 200–211. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(19)32989-7
4. Arutyunyan, I., Elchaninov, A., Makarov, A., & Fatkhudinov, T. (2016). Pupčana vrpca kao potencijalni izvor za terapiju baziranu na mezenhimskim matičnim stanicama. Stem Cells International, 2016, 6901286. https://doi.org/10.1155/2016/6901286
5. Fazekas, B., & Grifn, MD (2020). Terapije bazirane na mezenhimalnim stromalnim stanicama za akutnu ozljedu bubrega: napredak u posljednjoj deceniji. Kidney International, 97(6), 1130–1140. https://doi.org/10. 1016/j.kint.2019.12.019
6. Hickson, LJ, Herrmann, SM, McNicholas, BA, & Grifn, MD (2021). Napredak prema kliničkoj primjeni mezenhimalnih stromalnih stanica i drugih regenerativnih terapija koje moduliraju bolest: Primjeri iz područja nefrologije. Kidney360, 2(3), 542–557. https://doi.org/10.34067/kid.0005692020
7. Weiss, ARR, Lee, O., Eggenhofer, E., Geissler, E., Korevaar, SS, Soeder, Y., Schlitt, HJ, Geissler, EK, Hoogduijn, MJ, & Dahlke, MH (2020). Diferencijalni efekti toplotno inaktiviranih, msc sa nedostatkom sekretoma i metabolički aktivnih msc u sepsi i alogenoj transplantaciji srca. Matične ćelije, 38(6), 797–807. https://doi.org/10.1002/stem.3165
8. Jerkić, M., Gagnon, S., Rabani, R., Ward-Able, T., Masterson, C., Otulakowski, G., Curley, GF, Marshall, J., Kavanagh, BP, & Lafey, JG (2020). Mezenhimalne stromalne ćelije pupčane vrpce djelimično ublažavaju sistemsku sepsu povećavajući ubijanje peritonealnih makrofaga putem indukcije hem oksigenaze-1 kod pacova. Anesteziologija, 132(1), 140–154. https://doi.org/10.1097/ ALN.0000000000003018
9. Wu, KH, Wu, HP, Chao, WR, Lo, WY, Tseng, PC, Lee, CJ, Peng, CT, Lee, MS i Chao, YH (2016). Ekspresija vremenske serije signalizacije receptora 4 nalik na toll kod septičkih miševa tretiranih mezenhimskim matičnim ćelijama. Šok, 45(6), 634–640. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000546
10. Chang, CL, Leu, S., Sung, HC, Zhen, YY, Cho, CL, Chen, A., Tsai, TH, Chung, SY, Chai, HT, Sun, CK, Yen, CH, & Yip , HK (2012). Utjecaj apoptotičkih mezenhimskih matičnih stanica dobivenih iz masnoće na ublažavanje oštećenja organa i smanjenje mortaliteta kod sindroma sepse štakora uzrokovanog punkcijom cekalnog crijeva i ligacijom. Journal of Translational Medicine, 10, 244. https://doi. org/10.1186/1479-5876-10-244
11. Hall, SR, Tsoyi, K., Ith, B., Padera Jr., RF, Lederer, JA, Wang, Z., Liu, X., & Perrella, MA (2013). Mezenhimalne stromalne ćelije poboljšavaju preživljavanje tokom sepse u odsustvu hem oksigenaze-1: Važnost neutrofila. Matične ćelije, 31(2), 397–407. https://doi.org/10.1002/stem.1270
12. Zhang, G., Zou, X., Huang, Y., Wang, F., Miao, S., Liu, G., Chen, M., & Zhu, Y. (2016). Ekstracelularni vezikuli izvedeni iz mezenhimalnih stromalnih stanica štite od akutne ozljede bubrega kroz antioksidaciju tako što povećavaju aktivaciju nrf2/are kod pacova. Istraživanje bubrega i krvnog pritiska, 41(2), 119–128. https://doi.org/10. 1159/000443413
13. Luo, CJ, Zhang, FJ, Zhang, L., Geng, YQ, Li, QG, Hong, Q., Fu, B., Zhu, F., Cui, SY, Feng, Z., Sun, XF , & Chen, XM (2014). Mezenhimalne matične ćelije ublažavaju akutnu ozljedu bubrega uzrokovanu sepsom kod miševa. Šok, 41(2), 123–129. https://doi. org/10.1097/SHK.00000000000000080
14. Condor, JM, Rodrigues, CE, Sousa Moreira, R., Canale, D., Volpini, RA, Shimizu, MH, Camara, NO, Noronha Ide, L., & Andrade, L. (2016). Tretman mezenhimskim matičnim stanicama dobivenim od humanog Whartonovog želea ublažava ozljedu bubrega uzrokovanu sepsom, ozljedu jetre i endotelnu disfunkciju. Translaciona medicina matičnih ćelija, 5(8), 1048–1057. https://doi.org/10.5966/sctm. 2015-0138
15. Zullo, JA, Nadel, EP, Rabadi, MM, Baskind, MJ, Rajdev, MA, Demaree, CM, Vasko, R., Chugh, SS, Lamba, R., Goligorsky, MS, & Ratliff, BB (2015. ). Sekretom endotelnih progenitornih ćelija ugrađenih u hidrogel i mezenhimalnih matičnih ćelija daje uputstva za polarizaciju makrofaga u endotoksemiji. Translaciona medicina matičnih ćelija, 4(7), 852–861. https://doi.org/10. 5966/sctm.2014-0111
16. Perlee, D., van Vught, LA, Scicluna, BP, Maag, A., Lutter, R., Kemper, EM, van 't Veer, C., Punchard, MA, Gonzalez, J., Richard, MP , Dalemans, W., Lombardo, E., de Vos, AF, i van der Poll, T. (2018). Intravenska infuzija ljudskih adipoznih mezenhimskih matičnih ćelija modifikuje odgovor domaćina na lipopolisaharide kod ljudi: randomizirana, jednoslijepa, paralelna grupa, placebo kontrolirana studija. Matične ćelije, 36(11), 1778–1788. https:// doi.org/10.1002/stem.2891
17. Gennadiy Galstyan, PM, Parovichnikova, E., Kuzmina, L., Troitskaya, V., Gemdzhian, E., & Savchenko, V. (2018). Rezultati pilotskog randomiziranog ruskog kliničkog ispitivanja mezenhimalnih stromalnih stanica kod pacijenata s teškom neutropenijom sa septičkim šokom (RUMCESS). International Journal Blood Research and Disorders, 5(1), 33. https://doi.org/10.23937/2469-5696/1410033
18. McIntyre, LA, Stewart, DJ, Mei, SHJ, Courtman, D., Watpool, I., Granton, J., Marshall, J., Dos Santos, C., Walley, KR, Winston, BW, Schlosser, K., Fergusson, DA, & Canadian Critical Care Trials Group, & Canadian Critical Care Translational Biology Group. (2018). Ćelijska imunoterapija za septički šok. Kliničko ispitivanje faze I. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 337–347. https://doi.org/10. 1164/cccm.201705-1006OC
19. Matthay, MA, Calfee, CS, Zhuo, H., Thompson, BT, Wilson, JG, Levitt, JE, Rogers, AJ, Gotts, JE, Wiener-Kronish, JP, Bajwa, EK, Donahoe, MP, McVerry , BJ, Ortiz, LA, Exline, M., Christman, JW, Abbott, J., Delucchi, KL, Caballero, L., McMillan, M., et al. (2019). Liječenje alogenim mezenhimskim stromalnim stanicama za umjereni do teški akutni respiratorni distres sindrom (START studija): randomizirano ispitivanje sigurnosti faze 2a. The Lancet Respiratory Medicine, 7(2), 154–162. https://doi.org/10. 1016/S2213-2600(18)30418-1
20. Swaminathan, M., Staford-Smith, M., Chertow, GM, Warnock, DG, Paragamian, V., Brenner, RM, Lellouche, F., FoxRobichaud, A., Atta, MG, Melby, S., Mehta, RL, Wald, R., Verma, S., Mazer, CD, i istražitelji, A.-A. (2018). Alogene mezenhimske matične stanice za liječenje AKI nakon kardiohirurgije. Journal of the American Society of Nephrology, 29(1), 260–267. https://doi.org/10.1681/ASN.2016101150
21. Gotts, JE i Matthay, MA (2018). Ćelijska terapija sepse. Korak bliže. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 280–281. https://doi.org/10.1164/rccm. 201710-2068ED
22. Griffin, MD, & Swaminathan, S. (2020). Uredništvo: Inovativni biološki lijekovi i lijekovi za ciljanje upale bubrega. Frontiers in Pharmacology, 11, 38. https://doi.org/10.3389/fphar.2020.00038
23. Horie, S., Masterson, C., Brady, J., Loftus, P., Horan, E., O'Flynn, L., Elliman, S., Barry, F., O'Brien, T. , Lafey, JG, & O'Toole, D. (2020). CD362( plus ) mezenhimalne stromalne ćelije iz pupčane vrpce za e. coli pneumonija: Utjecaj režima doziranja, pasaža, krioprezervacije i antibiotske terapije. Istraživanje i terapija matičnih ćelija, 11(1), 116. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01624-8
24. Gonzalez, H., Keane, C., Masterson, CH, Horie, S., Elliman, SJ, Higgins, BD, Scully, M., Lafey, JG, & O'Toole, D. (2020). CD362( plus ) mezenhimalne stromalne stanice dobivene iz pupčane vrpce ublažavaju polimikrobnu sepsu izazvanu ligacijom i punkcijom slepog crijeva. International Journal of Molecular Sciences, 21(21). https://doi.org/10.3390/ijms21218270
25. Lewis, AJ, Seymour, CW i Rosengart, MR (2016). Trenutni mišji modeli sepse. Hirurške infekcije, 17(4), 385–393. https://doi.org/10.1089/sur.2016.021
26. Remick, DG, & Ward, PA (2005). Procjena modela endotoksina za proučavanje sepse. Šok, 24 (Suppl 1), 7–11. https:// doi.org/10.1097/01.shk.0000191384.34066.85
27. de Witte, SFH, Luk, F., Sierra Parraga, JM, Gargesha, M., Merino, A., Korevaar, SS, Shankar, AS, O'Flynn, L., Elliman, SJ, Roy, D. , Betjes, MGH, Newsome, PN, Baan, CC i Hoogduijn, MJ (2018). Imunomodulacija terapijskim mezenhimalnim stromalnim stanicama (MSC) se pokreće fagocitozom msc od strane monocitnih stanica. Matične ćelije, 36(4), 602–615. https:// doi.org/10.1002/stem.2779
28. Zhao, X., Liu, D., Gong, W., Zhao, G., Liu, L., Yang, L., & Hou, Y. (2014). Toll-like receptor 3 ligandi, poli(I:C), poboljšavaju imunosupresivnu funkciju i terapeutski efekat mezenhimalnih matičnih ćelija na sepsu putem inhibicije mir-143. Matične ćelije, 32(2), 521–533. https://doi.org/10.1002/stem.1543
29. Nemeth, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, PS, Mayer, B., Parmelee, A., Doi, K., Robey, PG, Leelahavanichkul, K., Koller, BH, Brown, JM, Hu, X., Jelinek, I., Star, RA i Mezey, E. (2009). Stromalne stanice koštane srži ublažavaju sepsu putem reprogramiranja makrofaga domaćina ovisnog o prostaglandinu E(2) kako bi se povećala njihova proizvodnja interleukina{4}}. Medicina prirode, 15(1), 42–49. https://doi.org/10.1038/nm.1905
30. Fletcher, AL, Elman, JS, Astarita, J., Murray, R., Saeidi, N., D'Rozario, J., Knoblich, K., Brown, FD, Schildberg, FA, Nieves, JM, Heng , TS, Boyd, RL, Turley, SJ, & Parekkadan, B. (2014). Transplantacije fibroblastičnih retikularnih ćelija limfnih čvorova pokazuju snažnu terapijsku efikasnost kod visoko mortalitetne mišje sepse. Science Translational Medicine, 6(249), 249ra109. https:// doi.org/10.1126/scitranslmed.3009377
31. Gonzalez-Rey, E., Anderson, P., Gonzalez, MA, Rico, L., Buscher, D., & Delgado, M. (2009). Ljudske odrasle matične ćelije izvedene iz masnog tkiva štite od eksperimentalnog kolitisa i sepse. Gut, 58(7), 929–939. https://doi.org/10.1136/gut.2008. 168534
32. Kaucsar, T., Godo, M., Revesz, C., Kovač, M., Mocsai, A., Kiss, N., Albert, M., Krenacs, T., Szenasi, G., & Hamar, P. (2016). Odnos lipokalina povezan sa želatinazom urina i plazme je osjetljiv i specifičan marker subkliničke akutne ozljede bubrega kod miševa. PLoS One, 11(1), e0148043. https://doi.org/10.1371/journ al.pone.0148043
33. Park, HK, Kim, S., Lee, S.-S., Kim, H.-J., Ahn, H.-S., Song, JY, Um, T.-H., Cho, C .-R., Jung, H., Koo, H.-K., Sim, YS, Song, J.-U., & Park, J.-H. (2015). Da li plazma NGAL pomaže u predviđanju akutne povrede bubrega kod pacijenata sa sepsom?: Sistematski pregled i meta-analiza. European Respiratory Journal, 46(suppl 59), PA2148. https://doi.org/10.1183/13993003.congr ess-2015.PA2148
34. Koeze, J., van der Horst, ICC, Keus, F., Wiersema, R., Dieperink, W., Kootstra-Ros, JE, Zijlstra, JG, & van Meurs, M. (2020). Lipokalin povezan s plazma neutrofilnom želatinazom na prijemu u jedinicu intenzivne njege kao prediktor progresije akutne ozljede bubrega. Clinical Kidney Journal, 13(6), 994–1002. https://doi. org/10.1093/ckj/sfaa002
35. Lee, KY (2019). M1 i M2 polarizacija makrofaga: mini-pregled. Medicinska biološka nauka i inženjerstvo, 2(1), 1–5. https://doi.org/10.30579/mbse.2019.2.1.1
36. Eggenhofer, E., Luk, F., Dahlke, MH, & Hoogduijn, MJ (2014). Život i sudbina mezenhimskih matičnih ćelija. Frontiers in Immunology, 5, 148. https://doi.org/10.3389/fmmu.2014.00148
37. Luk, F., de Witte, SF, Korevaar, SS, Roemeling-van Rhijn, M., Franquesa, M., Strini, T., van den Engel, S., Gargesha, M., Roy, D. , Dor, FJ, Horwitz, EM, de Bruin, RW, Betjes, MG, Baan, CC, & Hoogduijn, MJ (2016). Inaktivirane mezenhimske matične ćelije održavaju imunomodulatorni kapacitet. Matične ćelije i razvoj, 25(18), 1342–1354. https://doi.org/10.1089/scd. 2016.0068
38. Li, JL, Li, G., Jing, XZ, Li, YF, Ye, QY, Jia, HH, Liu, SH, Li, XJ, Li, H., Huang, R., Zhang, Y., & Wang, H. (2018). Procjena biomarkera povezanih s kliničkom sepsom u modelu septičkog miša. Časopis za međunarodna medicinska istraživanja, 46(6), 2410–2422. https://doi.org/10.1177/0300060518764717
39. Cai, L., Rubin, J., Han, W., Venge, P., & Xu, S. (2010). Porijeklo višestrukih molekularnih oblika u urinu HNL/NGAL. Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 5(12), 2229–2235. https://doi.org/10.2215/CJN.00980110
40. Capcha, JMC, Rodrigues, CE, Moreira, RS, Silveira, MD, Dourado, P., Dos Santos, F., Irigoyen, MC, Jensen, L., Garnica, MR, Noronha, IL, Andrade, L. , & Gomes, SA (2020).
41. Schlosser, K., Wang, JP, Dos Santos, C., Walley, KR, Marshall, J., Fergusson, DA, Winston, BW, Granton, J., Watpool, I., Stewart, DJ, McIntyre, LA, Mei, SHJ, & Canadian Critical Care Trials, G., & Canadian Critical Care Translational Biology, G. (2019). Efekti liječenja mezenhimalnim matičnim stanicama na sistemske nivoe citokina u fazi 1 sigurnosnog ispitivanja eskalacije doze pacijenata sa septičkim šokom. Intenzivna medicina, 47(7), 918–925. https://doi.org/10.1097/CCM.0000000000003657
42. van Rhijn-Brouwer, FCC, Gremmels, H., Fledderus, JO, & Verhaar, MC (2018). Karakteristike mezenhimalnih stromalnih stanica i regenerativni potencijal kod kardiovaskularnih bolesti: Implikacije za staničnu terapiju. Transplantacija ćelija, 27(5), 765–785. https:// doi.org/10.1177/0963689717738257
43. Sun, XY, Ding, XF, Liang, HY, Zhang, XJ, Liu, SH, Bing, H., Duan, XG i Sun, TW (2020). Efikasnost terapije mezenhimalnim matičnim ćelijama za sepsu: meta-analiza pretkliničkih studija. Istraživanje i terapija matičnih ćelija, 11(1), 214. https://doi.org/ 10.1186/s13287-020-01730-7
44. Laroye, C., Gibot, S., Reppel, L., & Bensoussan, D. (2017). Sažeti pregled: Mezenhimalne stromalne/matične ćelije: novi tretman za sepsu i septički šok? Matične ćelije, 35(12), 2331–2339. https:// doi.org/10.1002/stem.2695
45. Brady, J., Horie, S., & Lafey, JG (2020). Uloga adaptivnog imunološkog odgovora u sepsi. Eksperimentalna medicina intenzivne njege, 8 (Suppl 1), 20. https://doi.org/10.1186/s40635-020-00309-z
46. Martina, MN, Noel, S., Saxena, A., Bandapalle, S., Majithia, R., Jie, C., Arend, LJ, Allaf, ME, Rabb, H., & Hamad, AR (2016. ). Dvostruko negativne alfa-beta T ćelije su rani odgovor na Aki i nalaze se u ljudskim bubrezima. Journal of the American Society of Nephrology, 27(4), 1113–1123. https://doi.org/10.1681/ ASN.2014121214
47. Hotchkiss, RS, Tinsley, KW, Swanson, PE, Schmieg Jr., RE, Hui, JJ, Chang, KC, Osborne, DF, Freeman, BD, Cobb, JP, Buchman, TG, & Karl, IE (2001. ). Apoptoza izazvana sepsom uzrokuje progresivno duboko iscrpljivanje B i CD4 plus T limfocita kod ljudi. The Journal of Immunology, 166(11), 6952–6963. https://doi.org/10.4049/jimmunol.166.11.6952
48. Condotta, SA, Cabrera-Perez, J., Badovinac, VP, & Grifth, TS (2013). Imunitet posredovan T-ćelijama i uloga TRAIL-a u imunosupresiji izazvanoj sepsom. Critical Reviews in Immunology, 33(1), 23–40. https://doi.org/10.1615/critrevimmunol.20130 06721
49. Khosrojerdi, A., Soudi, S., Hosseini, AZ, Eshghi, F., Shafee, A., & Hashemi, SM (2021). Imunomodulatorno i terapijsko djelovanje mezenhimskih matičnih stanica na disfunkciju organa u sepsi. Šok, 55(4), 423–440. https://doi.org/10.1097/SHK.0000000000 001644
50. Nie, P., Bai, X., Lou, Y., Zhu, Y., Jiang, S., Zhang, L., Tian, N., Luo, P., & Li, B. (2021.) . Mezenhimske matične ćelije ljudske pupčane vrpce smanjuju oksidativna oštećenja i apoptozu kod dijabetičke nefropatije aktivacijom Nrf2. Istraživanje i terapija matičnih ćelija, 12(1), 450. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02447-x
51. dos Santos, CC, Murthy, S., Hu, P., Shan, Y., Haitsma, JJ, Mei, SH, Stewart, DJ, & Liles, WC (2012). Mrežna analiza transkripcionih odgovora izazvanih tretmanom eksperimentalne sepse mezenhimskim matičnim ćelijama. American Journal of Pathology, 181(5), 1681–1692. https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.08.009
52. von Kortzfeisch, VT, Karp, NA, Palme, R., Kaiser, S., Sachser, N., & Richter, SH (2020). Poboljšanje reproduktivnosti u istraživanju na životinjama dijeljenjem studijske populacije u nekoliko 'mini-eksperimenata'. Scientifc Reports, 10(1), 16579. https://doi.org/10. 1038/s41598-020-73503-4
53. Tanavde, V., Vaz, C., Rao, MS, Vemuri, MC, i Pochampally, RR (2015). Istraživanje korištenjem mezenhimalnih matičnih/stromalnih stanica: metrika kvaliteta prema razvoju referentnog materijala. Citoterapija, 17(9), 1169–1177. https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2015. 07.008
54. Pickkers, P., Heemskerk, S., Schouten, J., Laterre, PF, Vincent, JL, Beishuizen, A., Jorens, PG, Spapen, H., Bulitta, M., Peters, WH, i van der Hoeven, JG (2012). Alkalna fosfataza za liječenje akutne ozljede bubrega uzrokovane sepsom: prospektivno randomizirano dvostruko slijepo, placebom kontrolirano ispitivanje. Critical Care, 16(1), R14. https://doi.org/10.1186/cc11159
55. Pickkers, P., Mehta, RL, Murray, PT, Joannidis, M., Molitoris, BA, Kellum, JA, Bachler, M., Hoste, EAJ, Hoiting, O., Krell, K., Ostermann, M ., Rozendaal, W., Valkonen, M., Brealey, D., Beishuizen, A., Meziani, F., Murugan, R., de Geus, H., Payen, D., et al. (2018). Utjecaj ljudske rekombinantne alkalne fosfataze na 7-dnevni klirens kreatinina kod pacijenata sa akutnom ozljedom bubrega povezanom sa sepsom: randomizirano kliničko ispitivanje. The Journal of the American Medical Association, 320(19), 1998–2009. https://doi.org/10.1001/jama.2018.14283
Barbara Fazekas1 · Senthilkumar Alagesan2 · Luke Watson2 · Olivia Ng1,2 · Callum M. Conroy1,2 · Cristina Català3 · Maria Velascode Andres3 · Neema Negi1 · Jared Q. Gerlach4 · Sean O. Hynes5,6 · Francisco Lozano ·3 Stephen J. Elliman2 · Matthew D. Grifn1,9,10
1 Institut za regenerativnu medicinu u CÚRAM Centru za istraživanje medicinskih uređaja, Medicinski fakultet, Nacionalni univerzitet Irske Galway, Galway, Irska
2 Orbsen Therapeutics Ltd., Galway, Irska
3 Institut d'Investigations Biomèdiques August Pi i Sunyer, Barselona, Španija
4 Glycoscience Group, Nacionalni centar za nauku o biomedicinskom inženjerstvu, Nacionalni univerzitet Irske Galway, Galway, Irska
5 Disciplina patologije, Medicinski fakultet, Nacionalni univerzitet Irske Galway, Galway, Irska
6 Odsjek za histopatologiju, Univerzitetske bolnice Galway, Galway, Irska
7 Servei d'Immunologia, Hospital Clínic de Barcelona, Barcelona, Španija
8 Department de Biomedicina, Universitat de Barcelona, Barcelona, Španija
9 Odsjek za nefrologiju, Zdravstvena grupa Univerziteta Saolta, Univerzitetske bolnice Galway, Galway, Irska
10 Nacionalni univerzitet Irske Galway, REMEDI, Biomedicinske nauke, Corrib Village, Dangan, Galway H91 TK33, Irska
