Poređenje razlika u sadržaju osam hemijskih komponenti u sirovim proizvodima i proizvodima prerađenim u vinu dvije vrste Cistanche Deserticola na osnovu UPLC Ⅱ

2. Metode i rezultati

2.1 Kromatografski uvjeti

UPLC analiza je izvršena pomoću aWaters ACQUITY UPLC™ BEH C18 kolona (100 mm × 2,1 mm, veličina čestica 1,7 μm). Mobilna faza se sastojala odmetanol (A)i0,1% vodeni rastvor mravlje kiseline (B)sa sljedećim gradijentom eluiranja:

0–4 min: 10% → 26% A

4–18 min: 26% → 40% A

18–20 min: 40% → 50% A

Brzina protoka:0,3 mL/min
Volumen ubrizgavanja:3 μL
Temperatura kolone:35°C
Talasna dužina detekcije:330 nm

2.2 Priprema rastvora

2.2.1 Mješovito referentno rješenje

Precizno izmjerite sljedeća standardna jedinjenja:cistanozid F, echinacoside, cistanozid A, verbascoside, tubulozid A, izoverbaskozid, 2'-acetilverbaskozid, itubulozid B. Otopiti u 50% metanolu kako bi se pripremila referentna smjesa sa sljedećim koncentracijama (µg·mL⁻¹):

Cistanozid F: 32.7

Ehinakozid: 102.4

Cistanozid A: 50.2

Verbaskozid: 80.6

Tubulozid A: 25.6

izoverbaskozid: 86.3

2'-acetilverbaskozid: 77,3

Tubulozid B: 60,8

2.2.2 Uzorak rješenja

Sirove kriške Cistancheapripremani su omekšavanjem bilja, rezanjem i sušenjem.
Cistanche kuhani na vinupripremljeno je namakanjem sirovih kriški u 30% pirinčanog vina, kuhanjem smjese na pari 12 sati, hlađenjem i ponovnim sušenjem.

Otprilike0.2 gosušenog praha (propuštenog kroz sito od 65 mesh) izvagano je u jantarnu volumetrijsku tikvicu od 50 mL, ekstrahovano sa 25 mL 50% metanola, sonicirano 40 minuta (250 W, 35 kHz) i dovedeno na težinu. Otopina je filtrirana kroz a0,22 μm membrana, a filtrat je korišten za analizu.

Napomena: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola sirove kriške; RG. Cistanche tubulosa sirove kriške; WH. Cistanche deserticola pirjana s vinom; WG. Cistanche tubulosa pirjana s vinom; Slike 4 do 7 su iste.
Slika 1 Slike ljekovitog materijala Cistanche deserticola i Cistanche tubulosa, sirovih kriški i dinstana s vinom

poznato vino cistanche koje se prodaje u Kini

Kupi odmah

Wecistanche usluga podrške - Kontaktirajte nas da dobijete uzorak ili detalje o veleprodaji
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel:+86 15292862950

2.3 Kvantitativna analiza 8 glavnih jedinjenja u sirovom i vinom prerađenom cistanche

2.3.1 Pogodnost sistema

Pod opisanim hromatografskim uslovima, teoretski broj ploče zaechinacoside exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Kromatogrami mješovitog standarda, sirovog pustinjskog Cistanchea i uzoraka prerađenog vina prikazani su na slici 2.

Peak Identification:

Cistanosid F

Echinacoside

Cistanozid A

Verbascoside

Tubulozid A

Izoverbaskozid

2'-Acetilverbaskozid

Tubulozid B

cistanche deserticola

cistanche tubulosa

2.3.2 Linearnost i granice detekcije

Standardne kalibracione krive su uspostavljene korišćenjem serijskih razblaženja referentne smeše u koncentracijama od 0,1 do 5,0 mL. Kalibracione krive su generisane crtanjemkoncentracija (X)protivvršna površina (Y). Utvrđene su granice detekcije (LOD, S/N=3) i granice kvantifikacije (LOQ, S/N=10) i potvrđena dobra linearnost u testiranim rasponima.

2.3.3 Preciznost

Pokazalo se šest ponovljenih injekcija miješanog referentnog rastvorarelativne standardne devijacije (RSD)vršnih područja u rasponu od0,48% do 2,14%, što ukazuje na odličnu preciznost instrumenta.

2.3.4 Stabilnost

Uzorci rješenjasirovi Cistanche prah (serija br.. 160901)analizirani su u 0, 2, 4, 8, 12 i 24 sata. RSD vršne površine za svih 8 jedinjenja kretale su se od0,71% do 1,93%, potvrđujestabilnost rastvora u roku od 24 sata.

Tabela 1. Informacije o uzorcima Cistanche materijala

2.3.5 Ponovljivost

Šest nezavisno pripremljenih replika iste Cistanche serije pokazalo je dobru ponovljivost. Prosečan sadržaj (mg·g⁻¹) i RSD bili su sledeći:

2.3.6 Test oporavka

Oporavak je testiran spikingomšest replika Cistanche praha (0,1 g)sa poznatim koncentracijama 8 referentnih spojeva. Prosječni oporavak kretao se od95,56% do 102,71%, sa dinarima između1,44% i 2,97%, ukazujućiodlična pouzdanost ekstrakcije i kvantifikacije.

Napomena: A. Mešovita referenca; B. Sirova Cistanche deserticola; C. Pirjana Cistanche deserticola u vinu; 1. Cistancheside F; 2. Echinacoside; 3. Cistancheside A; 4. Verbascoside; 5. Tubulozid A; 6. Izoverbaskozid; 7. 2΄-acetilverbaskozid; 8. Tubulozid B.

2.3.7 Kvantifikacija aktivnih jedinjenja u sirovom u odnosu na prerađeno vino

Svaki uzorak je testiran u duplikatu. 8 ciljnih jedinjenja kvantificirano je u10 serija Cistanche deserticola(sirovi i prerađeni u vinu) i10 serija Cistanche tubulosa. Rezultati su sažeti u tabeli 3, koja nudi uvid u:

Specifične razlike u sastavu

Promjene u fitokemijskom sadržaju nakon prerade vina

Analitički otisak prsta za kontrolu kvaliteta Cistanchea

Tabela 2. Kalibracijske krive, koeficijenti korelacije (r), linearni rasponi, LOD i LOQ za osam spojeva

2.4 Komparativna analiza hemijskog sastava između Cistanche vrsta

Da istražitefitokemijske razlikeizmeđuCistanche deserticolaiCistanche tubulosa, koncentracije osam ključevafeniletanoidni glikozidiod10 serija sirovih i prerađenih uzorakasvake vrste su vizualizirane pomoćukutijasti prikazi (slika 3). Statistička analiza je pokazala da, osim za2'-acetilverbaskoziditubulozid B, pokazala je većina drugih spojevaznačajne razlike (P < 0,05)između dvije vrste u sirovom i prerađenom obliku.

konkretno:

Usirova Cistanche, sadržajcistanozid F, ehinakozid, izoverbaskozid, tubulozid A i verbaskozidbioznatno nižeinC. deserticolau poređenju saC. tubulosa(P < 0,05).

Theuzorci prerađeni vinomodražavala slične trendove.

Posebno,cistanozid Aje pronađen naviši nivoi uC. deserticolai bioneotkriveninC. tubulosa, sugerirajući da može poslužiti kao ajedinjenje potencijalnog markeraza diferencijaciju vrsta.

PLS-DA kemometrijska analiza vrsta Cistanche

A Diskriminantna analiza parcijalnih najmanjih kvadrata (PLS-DA)izvršeno je korištenjem podataka o koncentraciji osam spojeva. Rezultatbodovni grafikoni (slika 4A)pokazalo da jesu sirovi i prerađeni uzorci obje vrstene grupišu se u jasno odvojene grupe.

međutim,testovi slučajne permutacije (slika 4B)otkrio da je model bionije previše opremljen, kao prave vrijednostiR²Y i Q²bile su veće od onih kod permutiranih modela. Relativnoniske Q² vrijednostipredložitiograničena predvidljivost, vjerovatno zbogvarijabilnost unutar grupeipreklapajući rasponi spojevaizmeđu sirovih i prerađenih oblika.

Dalje PLS-DA modeliranje i VIP analiza

Konstruirani su odvojeni PLS-DA modeli za sirove i obrađene uzorke obje vrste za istraživanjehemijske razlike specifične za vrstu. Uočeno je sljedeće:

Bodovi (slike 5A i 5C)pokazaorazličito grupisanjeizmeđuC. deserticolaiC. tubulosau sirovom i prerađenom obliku.

Validacija modela (slike 5B i 5D)potvrđena dobra prediktivna snaga bez prenamjene.

Varijabilna važnost u projekcijama (VIP) dijagramima (slike 6A i 6B)identifikovala ključna jedinjenja koja doprinose diskriminaciji vrsta:

Zasirovi uzorci: Cistanozid A, cistanozid F, echinacoside, iverbascosidebili najinformativniji.

Zauzorci prerađeni vinom: Cistanozid Aitubulozid Bigrao dominantne uloge.

2.5 Utjecaj prerade vina na fitohemiju Cistanchea

Zbog značajnih varijacija u sadržaju spojeva između serija,uparena poređenjanapravljeni su između sirovih i obrađenih uzoraka vinaista serija. Rezultati, vizualizirani korištenjemviolinski zapleti (slika 7), otkrio sljedeće:

UC. deserticola, nivoi2'-acetilverbaskozid, cistanozid A, cistanozid F, ehinakozid, tubulozid A i verbaskozid značajno smanjenanaknadna obrada (P < 0,05), doktubulozid B povećana.

UC. tubulosa, nivoi2'-acetilverbaskozid, ehinakozid i verbaskozidtakođesmanjena, dokizoverbaskozid i tubulozid B povećanaznačajno (P < 0,05).

Ovi nalazi ukazuju na to da prerada vina može dovesti dohidroliza, izomerizacija, ilihemijska transformacijaaktivnih sastojaka.

3. Diskusija

PremaIzdanje Kineske farmakopeje iz 2020, Cistanche deserticolamora sadržavati ne manje od0.3%kombinovanog sadržajaehinakozid i verbaskozid, dokCistanche tubulosamora sadržavati ne manje od1.5%od ova dva jedinjenja. U ovoj studiji, svi sirovi i prerađeni uzorci - osim jedne serije (180710) - ispunjavali su ove standarde.

Uprkosvarijabilnost od serije do serijeunutar svake vrste (neki spojevi su se razlikovali i do 10 puta, kao što su tubulozid A i izoverbaskozid), statistički značajne razlike u sadržaju jedinjenja konzistentno su uočene između ove dvije vrste. Ovo potvrđuje toporijeklo vrste je glavni faktorutiče na fitokemijski sastav.

Osim toga,cistanozid Abiootkriven samo uC. deserticolai odsutan uC. tubulosa, čineći ga avrijedan marker za autentifikaciju vrste, posebno u postavkama farmakognostike ili kontrole kvaliteta.

🔬 Utjecaj prerade vina na hemijski sastav

Nakon prerade vina, obje vrste su pokazale dosljedan trend:

Smanjeni nivoiod:
Cistanozid F, ehinakozid, cistanozid A, verbaskozid, tubulozid A i 2'-acetilverbaskozid

Povećani nivoiod:
Tubulozid B i izoverbaskozid

Ovi trendovi mogu biti rezultathemijska hidroliza, degradacija, ilistrukturno preuređenjetokom procesa parenja. Zanimljivo, theveličina i smjer promjena varirali su među serijama, vjerovatno zbog razlika u:

Početne koncentracije jedinjenja

Morfologija biljke (veličina, debljina)

Osetljivost na uslove obrade

Ovo naglašava važnoststandardiziranje parametara obradei dirigovanjeocjene kvaliteta specifične za serijutokom biljne pripreme.