Rezultati i diskusija: Jednofaktorska optimizacija, hlapljivo profilisanje arome i metabolomika Cistanche Musalais

 

 

 

2 Rezultati i analiza

 

2.1 Eksperimenti sa jednim faktorom za Cistanche Musalais

Rezultati jednog faktora prikazani su na slici 2. Rastvorljive čvrste materije prvenstveno odražavaju ukupne preostale šećere i druge rastvorljive supstance preostale nakon fermentacije. Što je viši početni nivo šećera, to su veće zaostale rastvorljive čvrste materije. Na istom početnom nivou dodavanja šećera i Cistanchea, rastvorljive čvrste materije na 25 stepeni bile su nešto niže nego na 22 i 28 stepeni. Aktivnost fermentacije kvasca je veća na 25 stepeni, trošeći više šećera; međutim, zbog visoke početne vrijednosti šećera, ova potrošnja možda neće značajno smanjiti ukupnu količinu, dajući samo male razlike. Granice grešaka su se preklapale među grupama dodavanja Cistanchea od 3%, 5% i 7% bez značajnih razlika, što ukazuje da nivo dodavanja Cistanchea ima zanemarljiv uticaj na ukupne rastvorljive čvrste materije, na koje uglavnom utiče početni šećer.

 

Cistanche-msalais

 

 

Cistanche Musalais Listing Details

Wecistanche usluga podrške - najveći izvoznik cistanchea u Kini:
Email:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

Sadržaj alkohola je najdirektniji pokazatelj efikasnosti fermentacije; etanol je glavni proizvod fermentacije šećera kvasca [10]. Grupa sa 32 stepena Bx pokazala je značajno veći sadržaj alkohola od grupa sa 26 stepeni Bx i 29 stepeni Bx, jer veći početni šećer daje više fermentabilnog supstrata za proizvodnju više alkohola. Ispod 25 stepeni, sadržaj alkohola dostigao je vrhunac u gotovo svim početnim kombinacijama šećera i Cistanchea, u skladu sa LI et al. [11]. Preniska temperatura (22 stepena) potiskuje kvasac, usporava ili nepotpuno završava fermentaciju; previsoka (28 stepeni) može uzrokovati prerano opadanje kvasca ili više nusproizvoda, također smanjujući konačni prinos etanola. Na 25 stepeni, dodatak od 7% Cistanchea postigao je najveći sadržaj alkohola, što sugerira da određeni sastojci Cistanchea mogu promovirati rast kvasca i fermentativnu snagu.

Ukupna kiselost utiče na osećaj u ustima i stabilnost. Kiseline nastaju iz sirovina i mikrobnog metabolizma tokom fermentacije. Višak kiselosti uzrokuje oštre, octene note i treba je kontrolirati na nižim razinama [12]. Ukupna kiselost na 22 stepena bila je značajno viša nego na 25 i 28 stepeni jer je 22 stepena suboptimalna za bakterije mlečne kiseline (LAB). Niske temperature snažno inhibiraju rast i metabolizam LAB-a, čineći malolaktičku fermentaciju (MLF) vrlo sporom, nekompletnom, ili čak i ne započetom; posljedično, jabučna kiselina ostaje nekonvertirana, povećavajući izmjerenu ukupnu kiselost. Nasuprot tome, 25-28 stepeni je povoljan raspon za MLF. LAB su ovdje vrlo aktivni i mogu brzo i temeljito pretvoriti jabučnu kiselinu u mliječnu kiselinu [13], što rezultira nižom ukupnom kiselošću. Efekti početnog šećera i dodavanja Cistanchea na ukupnu kiselost bili su manje konzistentni u cjelini; međutim, 25 stepeni sa 7% dodatka obično je davalo umerenu kiselost. Preniska kiselost dovodi do ravnog nepca; previsoka daje oštrinu - najbolja je umjerenost.

Ukupni flavonoidi i ukupni polifenoli direktno mjere funkcionalne sastojke i antioksidativni kapacitet, uglavnom dobiveni iz dodanog Cistanchea. Nivo dodavanja Cistanchea bio je najuticajniji: na većini početnih šećera i temperatura, grupa od 7% imala je najveći sadržaj flavonoida i polifenola, a zatim 5% i 3%. Ovo pokazuje da je povećanje Cistanche-a najefikasniji način da se poboljša funkcionalnost proizvoda. Učinak na 25 stepeni bio je bolji za ove indekse. Viša temperatura (28 stepeni) može izazvati delimičnu degradaciju/oksidaciju aktivnih materija osetljivih na toplotu; niža temperatura (22 stepena) može ometati potpunu ekstrakciju iz matrice. Da bi se maksimizirala zdravstvena vrijednost (ukupni flavonoidi i polifenoli), dodatak od 7% Cistanchea pri blagoj fermentaciji od 25 stepeni je ključ za zaštitu i efikasnu ekstrakciju ovih komponenti.

Ukratko, optimalni uslovi za tretmane bili su: početni šećer 32 stepena Bx, 25 stepeni fermentacije i 7% dodatak Cistanche. Ovo balansira efikasnost fermentacije, kvalitet proizvoda i funkcionalnost. Ovo se razlikuje od ABUDUREHEMAN et al. [14]. TANG et al. [15] pronašli su osnovne funkcionalne mikrobe u tradicionalnim Musalajima: Blautia, Leuconostoc, Lactiplantibacillus, Rhodococcus i Thermoascus; Thermoascus pokreće sintezu ključnih metabolita (glicin, acetamid, monakolin K, itd.). Otvorena fermentacija s visokim sadržajem šećera uvodi više izvora ugljika, aktivira sekundarni metabolizam, a razina šećera direktno utječe na puteve biosinteze fenola (KEGG-obogaćeni šikimat put). Wen Xiaoli [16] je primijetio da fenilpropanoidni (šikimatni) putevi potiču akumulaciju fenolnih prekursora. Okruženje sa visokim sadržajem šećera (32 stepena Bx) potiče osmotolerantne kvasce (npr. Saccharomyces) i potiskuje kontaminante. Dok se tradicionalni Musalais oslanja na Thermoascus za sintezu fenolnih kiselina [15], u Cistanche Musalais kvasac može direktno koristiti fenolne prekursore iz Cistanchea kako bi efikasno proizveo fenole [17]. Stoga su optimalni uslovi 32 stepena Bx, 25 stepeni i 7% Cistanche. U njima su rastvorljive čvrste materije bile (21,9 ± 1,1)%, alkohol (12,6 ± 0,6)% vol, ukupna kiselost (3,82 ± 0,19) g/L, ukupni flavonoidi (0,80 ± 0,01) g/L i polifenoli (0,60 ± 0,60) g/l

2.2 Volatile flavor compounds in Cistanche Musalais

Unaprijeđena online dopunska tabela 1 navodi reprezentativne komponente arome i relativne sadržaje u Cistanche Musalais naspram kontrolnih Musalais. Ukupno je identifikovano 38 aroma jedinjenja: 24 estera, 6 alkohola, 2 ketona, 2 aldehida i dr.

Esteri primarno doprinose voćnim i vinskim aromama, uključujući etil acetat, izoamil acetat i izoamil fenilacetat. Etil acetat (voćni, slatki) je bio mnogo veći u grupi B (7% Cistanche) sa 6,418% u odnosu na grupu A (kontrola) sa 2,417%. Dietil oksalat (aromatični) je detektovan samo u grupi B (0,521%). Esteri nastaju iz organskih kiselina i alkohola putem esteraza [18]. Cistanche može opskrbljivati ​​tvarima koje podstiču aktivnost esteraze ili enzimima koji učestvuju u reakcijama; njegovo dodavanje može potaknuti rast kvasaca koji proizvode ester dok suzbija ne-esterske proizvođače. U odnosu na A, B je pokazao sedam novih estera: 2-etilheksil akrilat, etil benzoilformat, etil salicilat, heksil valerat, etil miristat, etil palmitoleat i etil oleat. One su vjerovatno nastale jer su specifične masne ili aromatične kiseline iz Cistanchea služile kao supstrati za mikrobnu esterifikaciju. Određene aktivne komponente (npr. feniletanoidni glikozidi, PhG) mogu se cijepati u šećere i aglikone; aglikoni su nestabilni i dalje se transformišu mikrobno ili neenzimski u masne kiseline koje reaguju sa alkoholima da bi formirale estre [19]. Izoamil fenilacetat je ključni izvor mednih i cvjetnih nota sa niskim pragom; etil palmitat plus etil oktanoat formiraju kompozitne voćno-masne arome [20]. Niskomolekularni estri i aldehidi su kritični sekundarni proizvodi arome koji nastaju tokom fermentacije [21] i poboljšavaju voćnost Musalaisa.

Alkoholi kao što su izobutanol i izoamil alkohol su glavni faktori koji doprinose ukusu. Etanol, izoamil alkohol i izobutanol su bili niži u grupi B nego A. Smanjenje etanola pratilo je porast estera, što ukazuje da se tok ugljika pomjerio sa akumulacije alkohola na biosintezu estera – povoljan smjer. Viši alkoholi uglavnom potiču iz katabolizma aminokiselina razgranatog lanca (valin, leucin, izoleucin) preko Ehrlichovog puta [22]. Njihovo smanjenje može ukazivati ​​na to da je Cistanche potisnuo prekomjerni rast srodnih sojeva ili moduliran protok aminokiselina. Dok umjereni viši alkoholi mogu dodati aromu/tijelo, mnogi imaju niske pragove i neki gorak okus; izobutanol ima jaku gorčinu [23]. Dakle, niži viši alkoholi u Cistanche Musalais mogu poboljšati udobnost pijenja.

Aldehidi, ketoni i drugi spojevi su također otkriveni, ali u manjoj raznolikosti i relativnoj zastupljenosti. Grupa B je pokazala 2,5-dihidroksiacetofenon (slatki, cvjetni), odsutan u A, vjerovatno nastao mikrobnom razgradnjom Cistanche PhG (npr. ehinakozid, akteozid).

GC–MS pokazuje da je dodavanje Cistanchea značajno izmijenilo promjenjivi profil. Etil acetat (voćni, slatki) i etil palmitat (voćno-masni) su glavni doprinosili povećanju voćnosti, sa 6,42% i 3,75% u Cistanche Musalais naspram . 2.42% i 1,18% u tradicionalnom. Izobutanol (gorak) je pao sa 3,98% na 2,11%, smanjujući gorčinu i poboljšavajući ravnotežu. Nova aroma jedinjenja, kao što je 2,5-dihidroksiacetofenon, verovatno su nastala mikrobnom razgradnjom PhG-a, diverzifikujući aromu. Sve u svemu, dodavanje Cistanchea usmjerilo je fermentaciju prema proizvodnji poželjnijih estera arome.

2.3 Metabolomika Cistanche Musalais

 

2.3.1 Neisparljivi metaboliti

UPLC–MS/MS sa lokalnom bibliotekom plus javnim bazama podataka identifikovao je 11 klasa jedinjenja. Kao što je prikazano na slici 3-a, organski heterocikli su bili najzastupljeniji (28,1% identifikovanog sadržaja), zatim organske kiseline i derivati (18,6%), lipidi i molekule slične lipidima (13,8%), benzenoidi (12,3%), organska jedinjenja kiseonika (9,6%), jedinjenja benzilaka i derivati benzila (7%). (4,2%), organska jedinjenja azota (3,3%), nukleozidi/nukleotidi i analozi (1,9%) i drugi (0,8%).

Organski heterocikli su važni za aromu vina; među komponentama voćnog vina, furani i pirazini su ključni mirisi [24]. Pirazini imaju niske pragove i jake mirise; furani su nisko ključajući, visoko hlapljivi lipofili kritični za formiranje arome i potencijalno korisni za zdravlje [25]. Organske kiseline i derivati ​​su neophodni za vino; njihovi nivoi i vrste snažno utiču na ukus, boju i stabilnost [26]. Organske kiseline nastaju iz ciklusa trikarboksilne kiseline (TCA): glukoza enzimatski formira piruvat; piruvat se pretvara u acetil-CoA pomoću piruvat dehidrogenaze, zatim u TCA intermedijere (citrat, malat, sukcinat). Dodatno smo otkrili trigonelin (hipolipidemijski i hipoglikemijski) i krocin (antikancerogeno, protuupalno, antioksidativno, hepatoprotektivno/holeretičko i antidijabetičko djelovanje).

 

2.3.2 PCA i OPLS-DA za neisparljive metabolite

Slika 3-b prikazuje PCA rezultate za kontrolu (A) i 7% Cistanche (B) na osnovu svih identifikovanih metabolita. Dvije glavne komponente su objasnile ~57,8% ukupne varijanse (PC1 42.8%, PC2 15.2%), što ukazuje da obuhvataju najoriginalnije informacije i predstavljaju ključne karakteristike među tretmanima [27]. Uzorci grupirani unutar grupa; A i B su jasno razdvojeni, što ukazuje na značajne metabolomske razlike zbog dodavanja Cistanchea i dobre stabilnosti sistema/pouzdanosti podataka.

Slika 3-e prikazuje OPLS-DA dalje razlikovanje grupa i skrining diferencijalnih metabolita. Svi bodovi su pali unutar intervala pouzdanosti od 95%; A i B su jasno razdvojeni, što ukazuje na značajne razlike u sastavu i obilju neisparljivih metabolita. Varijable i oznake klasa su particionirane i projektovane za diskriminaciju, podržavajući pouzdanost [28]. Slika 3-c prikazuje PLS-DA rezultat koji tretira identificirane nepromjenjive varijable kao zavisne varijable i tretmane kao nezavisne varijable, otkrivajući sličan obrazac kao PCA sa čvršćim grupiranjem. U testiranju permutacije (200 puta), metrike modela su bile R2Y=1 i Q2=0.866; nakon 200 permutacija, R2 i Q2 presjekli su pozitivnu y-osu sa vrijednostima na lijevoj strani manjim od desne, što ukazuje na valjanost. U PLS-DA, VIP vrijednosti su korištene za razlikovanje doprinosa metabolita u različitim tretmanima [30]. Opterećenja S-grafikona su identifikovala karakteristike sa velikim međugrupnim razlikama; veća udaljenost ukazuje na veći značaj. OPLS-DA je efikasno diskriminirao dva vina, pružajući snažnu osnovu za selekciju metabolita nizvodno.

 

2.3.3 Hijerarhijsko grupiranje ključnih diferencijalnih metabolita

Na osnovu OPLS-DA sa VIP > 1 i P < 0,05, identifikovano je 230 diferencijalnih jedinjenja: 125 naviše i 64 na niže. Zbog velikog broja, prvih 50 po obilju korišćeno je za hijerarhijsko grupisanje. Toplotna mapa (Slika 3-g) prikazuje svaki red kao metabolit i svaku kolonu kao uzorak [31]; crvena označava veću ekspresiju, plava nižu. Tri replika po grupi su pokazale slične boje, što ukazuje na dobru ponovljivost i konzistentne trendove. Slika 3-g sugerira da sok od grožđa pod djelovanjem mikroba proizvodi aminokiseline, glukozu, organske kiseline, terpene, itd. Tang et al. [15] detaljno opisuje prirodnu sukcesiju mikrobnih zajednica (npr. Aspergillus, Gluconobacter, kvasci) i odgovarajuće promjene metabolita tokom Musalais fermentacije. Grupa A usklađena sa ovom inherentnom mikrobnom ravnotežom. Cistanche, međutim, nije inertan; njegovi bioaktivni sastojci (npr. PhG) mogu imati antimikrobna dejstva [32], narušavajući postojeću ravnotežu. Mogrozidni izomeri (npr. izomeri mogrola), krocin B, andrografolid, itd., bili su viši u B (7%), a niži u A, vjerovatno zato što Cistancheov moćni antioksidativni kapacitet (bogat PhGs) pruža antioksidativno okruženje koje smanjuje oksidativnu degradaciju ovih molekula. L(+)-ornitin, L(+)-citrulin i vitamin B7 (biotin) bili su niži u B, ali viši u A, što sugerira da je vanjski faktor (Cistanche) poremetio izvornu mikrobnu ravnotežu, potisnuo određene funkcionalne sojeve i promijenio glavne metaboličke smjerove. Ovo ukazuje na potencijalne funkcionalne prednosti Cistanche Musalais u poređenju sa tradicionalnim Musalaisima.

 

2.3.4 Funkcionalne komponente

Neciljana metabolomika ne samo da je razjasnila mehanizme formiranja ukusa, već je i identifikovala obogaćene bioaktivne komponente, pružajući direktnu hemijsku osnovu za razvoj proizvoda. Trigonelin je bio značajno povećan u eksperimentalnoj grupi, sa dokumentovanim hipoglikemijskim, hipolipidemijskim i neuroprotektivnim efektima [33]. Crocin, snažan antioksidans topiv u vodi, također je značajno povećan, poznat po protuupalnim, anksiolitičkim i potencijalnim antikancerogenim aktivnostima. Pod optimalnim procesom (7% na 25 stepeni), ukupni flavonoidi i ukupni fenoli dostigli su 0,80 g/L i 0,60 g/L, respektivno, značajno povećavajući antioksidativni kapacitet u odnosu na tradicionalni proizvod. Ova obogaćenja potiču od Cistanchea (npr. PhGs, polisaharidi) [4–5] i mogu također odražavati mikrobnu biotransformaciju i obogaćivanje tokom fermentacije.

 

2.3.5 Vulkanski dijagram ključnih diferencijalnih metabolita

Grafikon vulkana vizualizira promjene u obilju metabolita. Koristeći VIP veći od ili jednak 1 i P < 0,05, identifikovano je 230 diferencijalnih jedinjenja: 125 regulisanih naviše i 64 niže (Slika 3-e). X-osa je log2 puta promjena, a y-osa je -log10 P. Metaboliti sa značajno povećanom regulacijom sa FC većim ili jednakim 1 i P < 0,05 su crveni; značajno smanjeno sa FC Manje ili jednako 1 i P < 0,05 su plave boje; beznačajne su sive. Prvih 20 sa najizraženijim promjenama pod P < 0,05 i VIP > 1 navedeni su u Dodatnoj tabeli 2. Najveća regulacija bila je derivat glikozida (Log2FC=2.60; FC=6.06), glikozid izveden iz feniletanoidnog glikozida, koji snažno sugerira direktno porijeklo Cistanchea. Cistanche je bogat PhG kao što su ehinakozid i akteozid; tokom fermentacije ovi prototipovi mogu biti podvrgnuti hidrolizi, transferu glikozila ili preuređivanju kako bi se stvorili takvi novi glikozidni derivati. Diferencijalni metaboliti uključivali su višestruke aminokiseline i derivate-npr. (E)-N5-(1-aminoetiliden)-L-ornitin (Log2FC=1.76, gore), trigoneloksazolidin (Log2FC=1.80, gore) i metionin etil ester (Log2FC, dolje, Tal. 1-41). [15], koji je primijetio da biosinteza aminokiselina u sredinama s visokim sadržajem šećera podupire formiranje okusa. Dodavanje cistanchea može pružiti dodatni dušik ili prekursore, ne samo povećavajući protok kroz puteve aminokiselina, već usmjeravajući prema specifičnim konverzijama koje daju karakteristična jedinjenja okusa izvedena iz aminokiselina.

 

2.3.6 Obogaćivanje KEGG puta

KEGG obogaćivanje ključnih diferencijalnih metabolita (Slika 3-i) istaknulo je 20 najboljih puteva: ABC transporteri, biosinteza aminokiselina, biosinteza arginina, metabolizam purina, biosinteza aminoacil-tRNA, metabolizam D-amino kiselina, metabolizam triptofana, metabolizam triptofana i metabolizam arginina biosinteza alkaloida tropana/piperidina/piridina, metabolizam cijanoaminokiselina, biosinteza flavonoida, metabolizam 2-oksokarboksilne kiseline, biosinteza glukozinolata, biosinteza flavona i flavonola, metabolizam kofeina, razgradnja lizina/razgradnje razgradnje lizina iluta, a metabolizam i metabolizam vitamina B6. Boje: plava za metabolizam; narandžasta za obradu informacija o okolišu; zelena za obradu genetskih informacija. Među njima, ABC transporteri, biosinteza aminokiselina, biosinteza arginina, metabolizam purina, biosinteza aminoacil-tRNA i metabolizam D-amino kiselina bili su značajni, sa obogaćenim brojem jedinjenja od 138, 128, 23, 101 i 52, respektivno. ABC transporteri posreduju u transmembranskom transportu jezgra u mikrobnim membranama, vođeni hidrolizom ATP-a za pomicanje supstrata (šećeri, aminokiseline, antibiotici), direktno utičući na sticanje nutrijenata i prilagođavanje okoline [34]. Gluconobacter efikasno preuzima etanol i pokreće octenu fermentaciju preko ABC transportera [35]. Biosinteza aminoacil-tRNA je ključni korak u prevođenju koji ograničava brzinu. Metabolizam aminokiselina igra ključnu ulogu u fermentaciji voća i vina; njegovi proizvodi se mogu transformirati u karakteristična jedinjenja arome kao što je geraniol, što ga čini ključnim putem za formiranje arome [36].

 

3 Zaključci

Korištenje Hotan crvenog grožđa iCistanche, optimalni proces za Cistanche Musalais je definisan kao početni šećer 32 stepena Bx, temperatura fermentacije 25 stepeni i dodavanje 7% Cistanchea, dajući alkohol (12,6 ± 0,6)% vol, ukupna kiselost (3,82 ± 0,19) g/L, ukupni flavonoidi (0,80 ± 1) ph po/L, (0,60 ± 0,00) g/L. GC-MS je identifikovao 38 aroma jedinjenja (24 estra, 6 alkohola, 2 ketona, 2 aldehida, ostali). U odnosu na tradicionalne Musalais, ključni estri su bili značajno veći kod Cistanchea, npr. etil acetat (6,42% vs{. 2.42%) i etil palmitat (3,75% vs {. 1.18%), dok su viši alkoholi kao što je izobutanol bili niži (2,11% vs. 3.98%). Metabolomičari su identifikovali 230 značajno različitih metabolita (VIP veći ili jednak 1, P < 0,05): 125 pojačano regulisanih (npr. mogrol izomeri, krocin B) i 64 niže regulisano (npr. L(+)-ornitin, L(+)-citrulin). Obogaćivanje KEGG-om ukazuje na primarno grupisanje u ABC transporterima i putevima biosinteze aminokiselina. Funkcionalni aktivni sastojci uključujući trigonelin, krocin, flavonoide i polifenole značajno su obogaćeni Cistanche Musalaisom, što ukazuje na potencijalne zdravstvene koristi; Biosinteza aminokiselina igra važnu ulogu u oblikovanju karakterističnog okusa. Za dublju atribuciju ključnih mirisa, budući rad bi trebao uključivati ​​plinsku hromatografiju–olfaktometriju (GC–O) kako bi se odredila aktivnost mirisa/doprinos (npr. faktori FD) obilnih isparljivih tvari i ciljani kvantitativni MS (npr. MRM) za apsolutnu kvantitaciju trigonelina, krocina, itd., za bolju procjenu zdravlja.

Poreklo eksternih spektralnih/metabolitskih resursa koji se koriste za identifikaciju metabolita (prema bazama podataka citiranim u Metodama 1.3.8.3):

Baza podataka o ljudskom metabolomu (HMDB 5.0): https://hmdb.ca/ - sveobuhvatna, besplatno dostupna baza podataka sa 220.945 unosa metabolita uključujući hemijske, kliničke i biohemijske podatke; podržava pretraživanje teksta, sekvence, strukture, MS i NMR; povezan sa KEGG, PubChem, MetaCyc, ChEBI, PDB, UniProt i GenBank. Povezane baze podataka: DrugBank, T3DB, SMPDB, FooDB.

LIPIDNE MAPE: https://www.lipidmaps.org/ - besplatan resurs o lipidomici otvorenog pristupa. LMSD sada premašuje 50.000 kuriranih lipidnih struktura sa detaljnom klasifikacijom, unakrsnim vezama i poreklom; pruža MS analizu, crtanje strukture, spektralne baze podataka, puteve i alate za nomenklaturu/klasifikaciju.

mzCloud – Advanced Mass Spectral Database: https://www.mzcloud.org/ - podržava spektar, strukturu, podstrukturu, stablo i m/z pretraživanja. Trenutna skala: 32.330 jedinjenja, 51.002 stabla i 16.531.567 spektra (+ povećanje u 2024.). Optimizirano za Firefox/Chrome desktop pretraživače. Copyright © 2013–2025 HighChem LLC.

 

Reference

[18] Fan GS, Wu QH, Liu PX, et al. Napredak u istraživanju uloge lipaze u sintezi estera u Baijiu. Časopis Kineskog instituta za nauku o hrani i tehnologiju. 2021;21(1):351–360.
[19] Xue J, Wang YA, Jia XH, et al. Klasifikacija i napredak istraživanja feniletanoidnih glikozida. Journal of Pharmaceutical Research. 2018;37(5):282–290.
[20] Liu CY, Zhao XQ, Kong LR, et al. Utjecaj dudove rakije na hlapljive komponente okusa i kvalitet kobasica sušenih na zraku. Nauka o hrani. 2023;44(6):244–253.
[21] Ren YT, Qiao ML, Sun ZY, et al. Zakon formiranja viših alkohola tokom fermentacije Baijiu laganog okusa. Industrija hrane i fermentacije. 2023;49(4):38–44.
[22] Cao WY, Shu N, Yang YM, et al. Sveobuhvatno vrednovanje devet sorti grožđa na osnovu osnovnih fizičkih i hemijskih pokazatelja, boje i isparljivih jedinjenja. Izvještaj o istraživanju. 2023;13(2):121–144.
[23] Zhou R, Yuan Q, Jin XY, et al. Analiza komponenti arome jakog – sos – okusa odležanog Baijiua. China Brewing. 2020;39(7):137–143.
[24] Luo Y, Kong LH, Xue RQ, et al. Gorčina u alkoholnim pićima: profili percepcije, sastojci i doprinosi. Trendovi u prehrambenoj nauci i tehnologiji. 2020;96:222–232.
[25] Huang YH, Kao TH, Chen BH. Razvoj GC–MS/MS metode u kombinaciji sa HS–SPME–strelicom za proučavanje formiranja furana i 10 derivata u model sistemima i komercijalnoj hrani. Hemija hrane. 2022;395:133572.
[26] Robles A, Fabjanowicz M, Chmiel T, et al. Određivanje i identifikacija organskih kiselina u uzorcima vina: problemi i izazovi. TrAC trendovi u analitičkoj hemiji. 2019;120:115630.
[27] Shao SX, Xu MT, Lin YP, et al. Diferencijalna analiza komponenti arome Huangguanyin oolong čaja različitog geografskog porijekla korištenjem elektronskog nosa i HS–SPME–GC–MS. Nauka o hrani. 2023;44(4):232–239.
[28] Ni RJ, Zhan P, Tian HL. Efekti vremena prženja na hlapljiva jedinjenja ukusa u ulju pržene paprike analizirani GC-IMS i multivarijantnom statistikom. Nauka o hrani. 2022;43(6):279–286.
[29] Jin WG, Liu JX, Sun HY, et al. Karakterizacija hlapljivih organskih spojeva u ulju divovske daždevnjaka pogrešnog uljem kikirikija pomoću GC-IMS i kemometrije. Nauka o hrani. 2023;44(10):368–376.
[30] Zhang Y, Tong XY, Chen BJ, et al. HS–GC–IMS za otiske prstiju i varijacije okusa u perikarpu Citrus reticulata tokom skladištenja uz različitu fermentaciju Aspergillus niger. Hemija hrane. 2023;18:100653.
[31] Lu YA, Liu SJ, Lin LM, et al. Diferencijalni metaboliti Prunella vulgaris se povećavaju u različitim fazama na osnovu UPLC-MS/MS. China Journal of Chinese Materia Medica. 2024;49(10):2734–2744.
[32] Chen L, Jiang XQ, Yuan T, et al. Učinak i mehanizmi kineske medicine i njenih aktivnih sastojaka u pojačavanju antibakterijskog djelovanja antibiotika: pregled. Kineski časopis eksperimentalnih tradicionalnih medicinskih formula. 2025;31(11):305–313.
[33] Yang SQ, Liu W, Song MR, et al. Efekti trigonelina na invaziju i migraciju ćelija karcinoma bubrežnih ćelija putem NF-κB/MMP-9 signalizacije. Kineski časopis za gerijatriju. 2024;44(8):1998–2004.