Hronični adrenergički stres i stvaranje mijeloidnih supresorskih ćelija: implikacije za imunoterapiju raka kod pasa

Abstract

Nedavne studije su istakle ključnu ulogu koju igraju simpatički nervni sistem (SNS) i adrenergički stres u posredovanju supresije imuniteta povezanog sa hroničnom upalom kod raka i drugih bolesti. Veza između hronične aktivacije SNS-a, adrenergičkog stresa i supresije imuniteta dijelom je povezana sa sposobnošću kateholamina da stimuliraju oslobađanje koštane srži i diferencijaciju supresorskih stanica izvedenih iz mijeloida (MDSC). Studije modela glodavaca otkrile su važnu ulogu signalizacije -adrenergičkih receptora u supresiji imuniteta na rak kod miševa podvrgnutih kroničnom stresu, uključujući termalni stres.

Važno je da terapijska blokada beta-adrenergičkih odgovora lijekovima kao što je propranolol može djelomično preokrenuti stvaranje i diferencijaciju MDSC, a djelimično obnoviti imunitet tumora. Klinička ispitivanja na ljudima i psima s rakom pokazala su da blokada propranolola može poboljšati odgovore na terapiju zračenjem, vakcine protiv raka i inhibitore imunoloških kontrolnih tačaka. Stoga je SNS odgovor na stres postao važan novi cilj za ublažavanje supresije imuniteta kod raka i drugih hroničnih upalnih stanja.

Simpatički nervni sistem je važan dio tijela koji kontrolira mnoge autonomne funkcije kao što su otkucaji srca, Pukagerov broj i disanje. Istovremeno, simpatički nervni sistem je takođe usko povezan sa imunitetom. Iako su fiziološki dva odvojena sistema, oni su veoma međusobno zavisni.

Kada naiđemo na hitne situacije kao što su strah, stres i opasnost, simpatički nervni sistem se budi i oslobađa adrenalin i norepinefrin. Ovi neurotransmiteri ubrzavaju rad srca i podižu nivo šećera u krvi kao odgovor na potrebe organizma. U ovom trenutku, imunološka funkcija će biti potisnuta do određene mjere kako bi se osiguralo da se energija i resursi simpatičkog nervnog sistema preferencijalno raspodijele.

U normalnim okolnostima, međutim, simpatički nervni sistem nije uvijek aktivan. Kada uđe u stanje mirovanja i oporavka, oslobađa se transformirajući faktori rasta i reumatoidni faktori koji stimulišu imuni sistem.

Osim toga, simpatički nervni sistem također može regulisati broj, vrstu i funkciju imunih ćelija djelovanjem neurotransmitera i receptora. Na primjer, noradrenalin može inhibirati imuni odgovor T ćelija kroz interakciju između 2-adrenoceptora i aktina, dok 2-adrenoceptor može stimulirati odgovor antitijela i aktivnost prirodnih ćelija ubica, te poboljšati ljudski imunitet.

Sve u svemu, simpatički nervni sistem i imunitet su usko povezani. Umjereno stanje simpatičkog uzbuđenja može regulirati imunološku funkciju i pružiti određenu pomoć za samozaštitu tijela. Stoga treba nastojati izbjegavati pretjerani stres i anksioznost i održavati pozitivno raspoloženje kako bismo održali zdravo imunološko stanje organizma. Sa ove tačke gledišta, moramo poboljšati svoj imunitet. Cistanche može značajno poboljšati naš imunitet jer polisaharidi u Cistancheu mogu regulisati imuni odgovor ljudskog imunološkog sistema, poboljšati stresnu sposobnost imunoloških ćelija i poboljšati imunitet. Baktericidno dejstvo na ćelije.

Kliknite dodatak cistanche deserticola

KLJUČNE RIJEČI

citokini, imune ćelije, makrofagi, norepinefrin, termički stres.

1|ADRENERGIČKI STRES I IMUNSKA SUPRESIJA KOD RAKA

Hronična upalna stanja povezana s rakom aktiviraju i simpatički nervni sistem (SNS) i osovinu hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlezda (HPA). Prethodne studije koje povezuju hronični stres sa supresijom imuniteta fokusirale su se prvenstveno na oslobađanje HPA i kortizola budući da su povišene koncentracije kortizola uglavnom supresivne.

Međutim, sada postoji sve veća svijest da SNS i adrenergički stres također igraju važnu ulogu u imunosupresiji povezanoj s upalom kod raka.1–7 Glavni posrednici imunološke supresije povezane sa SNS su kateholamini, prvenstveno norepinefrin (NOR) i epinefrin, djelujući preko beta-adrenergičkih receptora (-AR).4,8–11 Ovi receptori su široko izraženi u normalnim ćelijama, uključujući mnoge imune ćelije. Mijeloidne ćelije i njihove funkcije su posebno pogođene NOR signalizacijom putem -AR-a, i indukcijom njihovih imunosupresivnih stanja nakon trajne -AR signalizacije čime se indirektno potiskuju imuni odgovori prilagođeni tumoru, posebno oni T ćelija. Stoga će se ovaj pregled fokusirati na ulogu SNS-a i adrenergičkog stresa u posredovanju supresije imuniteta kod raka i kronične upale, te na strategije za farmakološki ciljanje ovog puta.

Pokretanje SNS-adrenergičkog odgovora na stres počinje kada se amigdala aktivira izlaganjem stresorima kronične upale, posebno proinflamatornim citokinima kao što su TNF- i IL-6.12–14 Amigdala zatim prenosi signale na lokus coeruleus koji zauzvrat aktivira simpatičke neurone u kičmenoj moždini, koji na kraju inerviraju medulu nadbubrežne žlijezde i u nekim slučajevima direktno tumorske ćelije (Slika 1). Aktivacija ovog puta pokreće oslobađanje kateholamina (uglavnom norepinefrina (NOR) i epinefrina) iz medule nadbubrežne žlijezde u krvotok. Ovi cirkulirajući kateholamini, kao i oni koji se također oslobađaju na nervnim završecima, vezuju se za dva adrenergička receptora, 1-AR i 2-AR2, koji su primarni signalni molekuli za imunosupresivne efekte adrenergičke aktivacije.11,13

2|ADRENERGIČKI STRES I POVEZANOST SA RAKOM

Razumijevanje veze između aktivacije SNS i adrenergičkog stresa i imuniteta na rak rezultat je slučajnih zapažanja u studijama raka glodavaca.15–20 Repasky i drugi su primijetili da tumori kod miševa rastu sporije kada su miševi smješteni na željenoj višoj temperaturi okoline (termoneutralno; 30 C) radije nego na uobičajenim ljudima ugodnim sobnim temperaturama (npr. 22 C), koje su termički stresne za miševe.17,21–25 Dakle, tipični uslovi uzgoja miševa izlažu miševe hroničnom hipotermalnom stresu, koji zauzvrat aktivira SNS i Oslobađanje kateholamina, pokrećući supresiju tumorskog imuniteta, što dovodi do ubrzanog rasta tumora i metastaza.21,25,26 Ova seminalna zapažanja su tako pružila prve eksperimentalne dokaze koji povezuju stres SNS i potisnuti imunitet tumora.

Naknadne studije su pružile daljnji uvid u vezu kateholamina i imunosupresije. Nedavno je objavljeno da signalizacija putem beta-adrenergičkih receptora (posebno 2-AR) na mijeloidnim stanicama dovodi do mobilizacije MDSC iz koštane srži u krvotok.4,8 Trajno izlaganje povišenim koncentracijama kateholamina također promovirao dalju diferencijaciju MDSC u imunosupresivniji polimorfonuklearni (PMN)-MDSC i monocitni (M)-MDSC i makrofage unutar tumorskih tkiva i sekundarnih limfoidnih organa, uključujući slezenu.4,8,27 Genetska ablacija {{10} }AR receptor je djelimično obnovio tumorski imunitet kod miševa, čime je potvrđena ključna uloga ovog receptora u imunološkoj regulaciji. Važno je da je farmakološka blokada 1-AR i 2-AR neselektivnim beta-blokatorom propranololom također obnovila imunitet tumora, efekat koji je rekapituliran na više mišjih modela.8,27–30

Studije su takođe identifikovale STAT3 kao ključni signalni put u mijeloidnim ćelijama aktiviran -AR signalizacijom kao odgovor na SNS stres.4,8,27,28 Aktivacija STAT3 puta pokreće nekoliko nizvodnih efektorskih puteva, što dovodi do sticanja dodatnih imunosupresivnih funkcije MDSC i makrofaga povezanih s tumorom.31 Ovi pojačano regulirani imunosupresivni putevi uključuju VEGF, IL-4 i IL-5, CCR4 i FoxP3 puteve.8 Tretman propranolol blokovima -AR-posredovana aktivacija STAT3 i na taj način sprečava MDSC i makrofage da steknu potpuno imunosupresivni fenotip.31 Takođe je važno napomenuti da su efekti farmakološke blokade -AR reverzibilni, tako da se izloženost lijekovima mora održati kako bi se generirali i održali puni efekti obnove imunološke funkcije u životinje oboljele od raka.

3|SUPRESORNE ĆELIJE IZ MIJELOIDA I NJIHOVA ULOGA U RAKU

Supresorske ćelije izvedene iz mijeloida sastoje se prvenstveno od populacija mijeloidnih ćelija koje podsjećaju na nezrele neutrofile i monocite, oslobođene iz koštane srži kao odgovor na kroničnu upalu, uključujući upalu povezanu s rakom i kroničnim infekcijama.32–36 Proširene populacije MDSC mogu se otkriti u cirkulaciju i sekundarne limfoidne organe i tumorsko tkivo kod glodara, pasa i ljudi s različitim karcinomima (Slika 2).33–35,37–40 Broj MDSC je također hronično povišen kod kroničnih infekcija i drugih izvora kronične upale.33–35, 41,42

Stvaranje i oslobađanje MDSC iz koštane srži djelomično je pokrenuto određenim mijeloidnim faktorima rasta, uključujući GM-CSF, G-CSF, IL-3 i IL-6.33,35 U fiziološkim uslovima, MDSC služi važnu regulatornu ulogu za suzbijanje prekomjerne upale i promovira zacjeljivanje tkiva.36,43 Kada se MDSC mobiliziraju i regrutuju kao odgovor na oštećenje tkiva ili infekciju, oni igraju važnu ulogu u rješavanju kronične upale.33,35,36 U slučaju neprestane upale povezane s rakom, akumulacija sve većeg broja visoko imunosupresivnih MDSC ometa funkciju stanica koje predstavljaju antigen kao što su dendritske ćelije, i direktno i indirektno narušavaju funkciju T stanica, B stanica i NK stanica.33–35

Supresorske ćelije izvedene iz mijeloida teško je u potpunosti definirati protočnom citometrijom, jer se nijedan marker ne može koristiti za nedvosmislenu identifikaciju MDSC. Kod ljudi su identificirane dvije populacije MDSC, CD11b plus CD14CD66b plus populacija ćelija definisanih kao PMN-MDSC, i druga populacija CD11b plus CD14 plus HLA-DRloCD15 ćelija definisana kao M-MDSCs.35,37,42 Markeri Općenito prihvaćeni MDSC kod miševa uključuju CD11b plus Ly6G plus Ly6Clo za PMN-MDSC i CD11b plus Ly6GLy6C plus za MMDSC.34,37 Manje se zna o psećim MDSC, ali nekoliko izvještaja ukazuje da se imunosupresivne MDSC populacije mogu identificirati kao CD11b plus MHC-ćelije. koji se može dalje podklasificirati, sa PMN-MDSC klasifikovanim kao CADO48A plus CD14-, a M-MDSC kao CADO48A-CD14 plus . 38–40

Funkcionalna imunološka supresija je ključna karakteristika koja se koristi za definiranje MDSC. Najrasprostranjeniji funkcionalni test koristi ko-kulturu pročišćenog MDSC-a s T ćelijama aktiviranim mitogenom, gdje je supresija T-ćelija (proliferacija, oslobađanje citokina) primarno očitavanje.44 Ovaj test mjeri i efekte direktnog kontakta između stanice i stanice. MDSC, kao i imunosupresivni efekti njihovih izlučenih citokina. Ovi testovi su važni za funkcionalno definisanje MDSC, ali su tehnički teški za dosledno izvođenje i često zahtevaju upotrebu sortiranih ćelija za preciznija merenja.

Supresorske ćelije izvedene iz mijeloida koriste više mehanizama za suzbijanje imunoloških odgovora. Jedan mehanizam uključuje oslobađanje imunosupresivnih citokina, kao što su TGF- i IL-10, koji djeluju na direktnu supresiju funkcije T-ćelija.34,35,39,45 Ovi citokini također promoviraju stvaranje i preživljavanje regulatornih T-ćelija (Tregs), koji su takođe veoma imunosupresivni.27,37,46,47 Nadalje, MDSC često prekomjerno eksprimiraju programirani ligand ćelijske smrti 1 (PD-L1), koji snažno potiskuje T ćelije i NK ćelije koje eksprimiraju srodni receptor PD{{15 }}.34,35,37,48 Kod nekih vrsta, uključujući pse, MDSC prekomjerno eksprimiraju enzim arginazu 1 (ARG-1), što dovodi do lokalnog iscrpljivanja L-arginina u tkivima, izazivajući potisnutu T-ćeliju funkciju i smrt.35,39,48,49 Ekspresija reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) od strane MDSC takođe može dovesti do direktnog ubijanja T-ćelija.34,35,48 Konačno, MDSC takođe inhibira imunitet tumora pretvaranjem adenozin trifosfata (ATP) u adenozin, posredovan enzimima ektonukleotidaze CD39 i CD73. Za razliku od adenozin trifosfata, koji je imunološki aktivan molekul koji stimulira antitumorski imunitet, adenozin je imunosupresivni molekul koji potiskuje antitumorski imunitet posredovan T-ćelijama. Stoga, MDSC koristi višestruke, neredundantne puteve za suzbijanje imunoloških odgovora kod raka i kroničnih infekcija.

4|KLINIČKA PRIMJENA Β-BLOKADE U IMUNOTERAPIJI RAKA

S obzirom na uvjerljive dokaze iz studija na glodavcima da adrenergički stres i oslobađanje kateholamina igraju ključnu ulogu u suzbijanju tumorskog imuniteta, postoji više mogućnosti za terapijsko ciljanje na ovaj put. Istraživanja na glodavcima su pokazala da neselektivni beta-blokator propranolol, široko korišćeni srčani i kardiovaskularni lijek sa dobrom sigurnošću, može prekinuti SNS-adrenergički-MDSC put i ublažiti imunološku supresiju tumora.4,8,9,50 Za Na primjer, u jednoj studiji liječenje propranololom je preokrenulo regrutaciju MDSC u tumorsko i limfoidno tkivo, usporilo rast potkožnih tumora i blokiralo tumorske metastaze.8 Osim toga, primjena propranolola zajedno s vakcinama protiv tumora poboljšala je imunitet vakcine i akumulaciju T ćelija unutar tumora. tkiva.51–54 Slični efekti poboljšanja imuniteta uočeni su kada se propranolol davao istovremeno sa imunoterapijom ICI (inhibitor imunske kontrolne tačke).4,26–28,55 Važno je da su studije takođe pokazale da farmakološka aktivacija SNS puta korišćenjem beta -agonisti kao što je izoproterenol, stimulisali su rast tumora povezan sa većom mobilizacijom MDSC iz koštane srži i akumulacijom u tumorskim tkivima. Ovi nalazi stoga pružaju dodatne mehanističke dokaze koji povezuju odgovor na adrenergički stres i supresiju imuniteta raka.8

Nekoliko velikih retrospektivnih studija naglasilo je potencijalne prednosti primanja beta-blokatora za preživljavanje raka, iako treba napomenuti da nisu sve studije identifikovale zaštitni efekat.56–58 Štaviše, podaci o životinjskim modelima i rezultati kliničkih ispitivanja iz upotrebe propranolol kao adjuvantna imunoterapija u kombinaciji sa terapijom zračenjem je nedavno objavljen, što je potaknulo novo interesovanje za propranolol kao imunoterapijski agens.59–63 Uobičajeni biomarker imunološke korelacije u ovim studijama je smanjenje broja cirkulirajućih MDSC-a, kao i smanjenje imunosupresivna funkcionalnost. Imunološka aktivnost blokade je također prijavljena kada se koristi u kombinaciji s vakcinama protiv tumora i sa ICI. Na primjer, u brojnim studijama na glodarima, pokazalo se da podizanje temperature okoline na termoneutralnu temperaturu glodara (npr. 30 C) povećava efikasnost ICI imunoterapije.16–18,20– 22,25,26,64 Dakle, postoji značajan dokaz da -adrenergička blokada može biti važno oruđe u stimulaciji imuniteta tumora kod raznih karcinoma. Međutim, također je važno napomenuti da svi beta-blokatori ne mogu biti jednako efikasni u imunoterapiji raka, jer selektivniji antagonisti (npr. 2-AR antagonisti) možda neće biti tako efikasni kao mješoviti 1-AR i 2-AR antagonisti kao što je propranolol.

Razvijaju se novi alati i pristupi, uključujući ciljane imunoterapije za pse oboljele od raka, a psi su sada široko prepoznati kao važan spontani model velikih životinja za istraživanje novih pristupa liječenju raka kod ljudi.65–68 Vrijednost pasa kao modela imunološkog raka proizilazi dijelom iz njihovog 'obrazovanog' imunološkog sistema, oblikovanog prethodnim vakcinama, infekcijama i godinama, slično kao ljudski imuni sistem. Osim toga, biološko ponašanje tumora kod pasa više liči na ljudske odgovore na rak, posebno u vezi s tumorskim metastatskim procesima.68 Na primjer, model karcinoma pasa korišten je za imunoterapiju kod raka kostiju i raka mozga.69–74

Iako se većina istraživanja koja istražuju MDSC nastavljaju provoditi na ljudima i miševima, nedavni rad je istaknuo mogućnosti za daljnja istraživanja koja će se provesti na psima. Na primjer, koncentracije MDSC-a su u pozitivnoj korelaciji s opterećenjem karcinoma dojke kod pasa, što sugerira moguću priliku za korištenje nivoa MDSC-a kao biomarkera za identifikaciju pacijenata sa uznapredovalim nivoom bolesti i metastaza.75 Cirkulirajući broj MDSC-a također je povećan kod pasa s melanomom. 39 Izvještaj Goularta et al sveobuhvatno je opisao MDSC populacije kod pasa,76 uključujući upotrebu RNA sekvenciranja i PMN-MDSC i M-MDSC populacija da bi se dalje definirala njihova imunološka svojstva.40 Osim stimulacije metastaza raka, MDSC je također bio umiješan u promicanje tumorske angiogeneze i tumorske imunosupresije kod karcinoma dojke pasa, dijelom kroz STAT3 signalne puteve.75

Nekoliko studija je ispitivalo upotrebu propranolola kao prenamijenjenog agensa za liječenje raka kod pasa. Većina dosadašnjih studija fokusirala se na antiangiogena svojstva propranolola, za liječenje agresivnog karcinoma kod pasa poznatog kao hemangiosarkom.62,77 In vitro, propranolol ispoljava značajno antiangiogeno djelovanje i na netransformirane endotelne stanice i na ćelije hemangiosarkoma. .62 Što se tiče upotrebe propranolola kao imunomodulatornog lijeka, nedavno smo izvijestili da je liječenje pasa s tumorima mozga propranololom (plus losartanom) i vakcinom protiv tumora rezultiralo objektivnom stopom odgovora tumora od 20 posto, bez dodatnog liječenja, zajedno sa 60 posto ukupne stope biološkog odgovora.78 Dakle, postoje klinički dokazi da imunoterapija propranololom može imati kliničke koristi kod pasa s agresivnim karcinomima i može također funkcionirati kao djelotvoran adjuvans vakcine kod pasa.

5|ZAKLJUČCI

Naše razumijevanje o tome kako kronični adrenergički stres oblikuje imunitet tumora uvelike je napredovalo u posljednjih nekoliko godina. Identificirani su ključni putevi koji povezuju kateholamine i beta-adrenergičku signalizaciju s mobilizacijom MDSC i STAT3-posredovanom diferencijacijom, što pruža nove mogućnosti za farmakološku manipulaciju SNS puta za imunoterapiju raka. Pretklinički i klinički podaci iz studija na glodavcima, psima i ljudima ukazuju na to da liječenje neselektivnim blokatorom (propranolol) može ispoljiti antitumorsko imunološko djelovanje kada se koristi samostalno ili u kombinaciji sa terapijom zračenjem, terapijom ICI i vakcinacijom protiv tumora. Ovi nalazi sugeriraju da adrenergička blokada može biti efikasna i lako implementirana strategija za poboljšanje liječenja raka općenito, korištenjem ili prenamijenjenih lijekova ili lijekova posebno dizajniranih da ciljaju ključne korake u kaskadi adrenergičke signalizacije.

IZJAVA O SUKOB INTERESA

Autori izjavljuju da nema sukoba interesa.

IZJAVA O DOSTUPNOSTI PODATAKA

Nije primjenjivo.

REFERENCE

1. Chen M, Singh AK, Repasky EA. Isticanje potencijala kroničnog stresa da se minimizira terapijski odgovor na radioterapiju kroz povećanu imunosupresiju i otpornost na zračenje. Rakovi (Bazel). 2020;12:3853-3870.

2. Bucsek MJ, Giridharan T, MacDonald CR, et al. Pregled uloge simpatičke regulacije imunoloških odgovora kod infektivnih bolesti i autoimunosti. Int J Hipertermija. 2018;34:135-143.

3. Manni M, Maestroni GJ. Simpatička nervna modulacija urođenog i adaptivnog imunološkog odgovora kože na peptidoglikan, ali ne i lipopolisaharide: uključenost beta-adrenoceptora i značaj u upalnim bolestima. Brain Behav Immun. 2008;22: 80-88.

4. Mohammadpour H, MacDonald CR, McCarthy PL, et al. Signalizacija beta2- adrenergičkih receptora reguliše metaboličke puteve koji su kritični za funkciju supresorskih ćelija koje potiču iz mijeloida unutar TME. Cell Rep. 2021;37:109883.

5. Mohammadpour H, Sarow JL, MacDonald CR, et al. Aktivacija beta2-adrenergičkih receptora na donorskim ćelijama poboljšava akutni GvHD. JCI Insight. 2020;5:1-26.

6. Ortega E, Galvez I, Martin-Cordero L. Adrenergička regulacija urođenih/upalnih odgovora posredovanih makrofagom u gojaznosti i vježbanju u ovom stanju: uloga beta2 adrenergičkih receptora. Endocr Metab meta za lijekove protiv imunološkog poremećaja. 2019;19:1089-1099.

7. Qiao G, Chen M, Mohammadpour H, et al. Hronični adrenergički stres doprinosi metaboličkoj disfunkciji i iscrpljenom fenotipu u T ćelijama u mikrookruženju tumora. Cancer Immunol Res. 2021;9: 651-664.

8. Mohammadpour H, MacDonald CR, Qiao G, et al. Signalizacija posredovana beta2 adrenergičkim receptorom reguliše imunosupresivni potencijal supresorskih ćelija koje potiču iz mijeloida. J Clin Invest. 2019;129: 5537-5552.

9. Mohammadpour H, O'Neil R, Qiu J, et al. Blokada beta2-adrenergičkog receptora domaćina pojačava efekat transplantata protiv tumora kroz modulaciju APC. J Immunol. 2018;200:2479-2488.

10. Barbieri A, Robinson N, Palma G, Maurea N, Desiderio V, Botti G. Može li beta-2-adrenergički put biti nova meta u borbi protiv SARS-CoV-2 hiperinflamatornog sindroma? - naučene lekcije rak. Front Immunol. 2020;11:588724.

11. Molinoff PB. Svojstva, distribucija i regulacija podtipova alfa- i beta-adrenergičkih receptora. Droge. 1984;28(suppl 2):1-15.

12. Kyrou I, Tsigos C. Hormoni stresa: fiziološki stres i regulacija metabolizma. Curr Opin Pharmacol. 2009;9:787-793.

13. Tsigos C, Kyrou I, Kassi E, et al. Stres: endokrina fiziologija i patofiziologija. U: Feingold KR, Anawalt B, Boyce A, et al., ur. Endotekst. MDText je izdavač, online forum; 2000.

14. Hu P, Lu Y, Pan BX, Zhang WH. Novi uvidi u ključnu ulogu amigdale u depresiji i anksioznom poremećaju uzrokovanom upalom. Int J Mol Sci. 2022;23:1-20.

15. Eng JW, Reed CB, Kokolus KM, et al. Stres uzrokovan temperaturom smještaja pokreće terapijsku rezistenciju kod mišjih tumorskih modela kroz aktivaciju beta2-adrenergičkih receptora. Nat Commun. 2015;6:6426.

For more information:1950477648nn@gmail.com