Antitumorski i protuupalni efekti oligosaharida iz ekstrakta Cistanche Deserticola na ozljede kičmene moždine

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Hong Zhang, et al

Abstract

U ovoj studiji farmakološki efekti oligosaharida izCistanchedeserticolaekstraktonupala, oksidativni stres i apoptoza kod mužjaka albino pacova s ​​ozljedom kičmene moždine. Lipidna peroksidacija, GSH, katalaza, superoksid dismutaza, acetilholin esteraza, GPx, ROS i dušična kiselina su značajno izmijenjeni kod pacova s ​​ozljedom kičmene moždine. Nivoi ekspresije mRNA IL-6, TNF-, ciklooksigenaze-2, iNOS,p53, kaspaze-3, Bax i pro-NGF smanjeni su za N20 posto nakon dodavanja ekstrakta. Nivoi ekspresije proteina kaspaze-3 i pro-NGF su također smanjeni za N20 posto. Broj p53 pozitivnih ćelija bio je 1, 79, 54, 33 i 19 u grupama GI–GV, respektivno, a odgovarajući broj ćelija pozitivnih na kaspazu{16} je bio 2, 87, 51, 23 i 14. Na osnovu dosadašnjih rezultata, upotreba oligosaharida izCistanchedeserticolaekstrakt je bio efikasan protivupala, oksidativni stres i apoptoza kod ozljede kičmene moždine mužjaka albino štakora.

Ključne riječi:Cistanche deserticola, Upala Oksidativni stres, Apoptoza Štakori

1. Uvod

Ozljeda kičmene moždine uključuje oštećenje kičmene moždine koje dovodi do funkcionalne promjene s gubitkom osjeta, mišića i autonomne funkcije [1]. Osim toga, apoptoza može biti inducirana u oligodendrocitima i neuronima, što dovodi do disfunkcije kičmene moždine zbog demijelinizacije i degeneracije aksona [2,3]. Povreda kičmene moždine izaziva značajan oksidativni stres iupalanakon početka apoptoze u oligodendrocitima i neuronima [2,4]. Reaktivne vrste kiseonika (ROS) i proinflamatorni citokini se oslobađaju tokom neurodegeneracije, a mikroglija je vitalna tokom neurodegenerativnih i inflamatornih procesa [5-7]. Interleukini (IL) su važni citokini uključeni u različite imunološke procese [8]. Yune i saradnici, [9] su objavili da pro-nervni faktor rasta (pro-NGF) oslobođen iz mikroglije dovodi do apoptotske smrti ćelije. Stoga su nova i moćna terapijska sredstva protiv oksidativnog stresa iupalasu potrebni.

BiljkaCistanchedeserticolaje uobičajeno poznat kao pustinjska metlica i holoparazitski je član porodice Orobanchaceae [10].Cistanche deserticolanedostaje hlorofil i dobiva vodu i hranjive tvari na parazitski način iz bijelog saksaula (Haloxylon persicum) i crnog saksaula (Haloxylon ammodendron). TheCistanchedeserticolaVišegodišnja biljka, poznata kao Rou Cong Rong, može narasti do 160 cm veličine i ima žute cvjetove. Rasprostranjen je u Kini i Mongoliji [11] i, tradicionalna kineska medicina, odličan je resurs za liječenje nekoliko bolesti. Takođe služi kao primarni biljni tretman za jačanje Yang i toniziranje bubrega [11]. Koo et al. [12] izvijestili su da su glikozidiCistanchedeserticoladeluju kao efikasne supstance u centralnom nervnom sistemu (CNS). Nekoliko istraživača je izvijestilo o antiapoptotičkim, protuupalnim i antioksidativnim svojstvimaCistanchedeserticola[13,14]. Antioksidansi i protuupalni molekuli dobiveni iz hrane mogu poslužiti kao kemopreventivne tvari protiv kroničnih bolesti [15]. S obzirom na gore navedene terapeutske prednosti, terapeutska efikasnost oligosaharida izCistanchedeserticolaekstrakt protivupala, oksidativni stres i apoptoza istraživani su u ovoj studiji korištenjem modela albino štakora s ozljedom kičmene moždine.

2. Materijali i metode

2.1. Materijali

Prajmeri faktora tumorske nekroze-alfa (TNF-), IL-6, ciklooksigenaze, inducibilne sintaze dušikovog oksida (iNOS), p53, Bax, kaspaze-3, BCL-2, pro-NGF , i gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza (GAPDH) su kupljeni od Thermo Fisher Scientific (Peking, Kina). Primarna antitijela za kaspazu-3 (AV00021), p53 (P5813-100UL), monoklonsku anti-kozju/ovčiju IgG-peroksidazu (A9452) i anti-mišji IgG fluorescein izotiocijanat (FITC; F{{15} }ML) kupljeni su od Sigma-Aldrich China, Inc. (Šangaj, NR Kina).

2.2. Pacovi

Mužjaci pacova Wistar albino (180-220 g) kupljeni su od stočarske kuće West China Hospital, Sichuan University, Kina. Pacovi su dobijali hranu i vodu ad libitum. 12-h svjetlo: 12-h tamni ciklus održavan je u polipropilenskim kavezima za pacove pod relativnom vlagom. Sve eksperimente sa pacovima odobrila je etička komisija WestChina Hospital, Sichuan University, Kina. Poštivale su se sve važeće međunarodne, nacionalne i institucionalne smjernice za njegu i korištenje životinja.

2.3. Indukcija ozljede kičmene moždine

Povreda kičmene moždine izazvana je uzdužnim hirurškim rezom nakon izlaganja halotanu (1,5 procenata). Čitav operativni zahvat obavljen je na sobnoj temperaturi. Rez je napravljen od donjeg do srednjeg torakalnog pršljena na stražnjoj strani životinje. Teg od 20-25 g stavljen je na izloženu površinu Th12 na 30 minuta da izazove ozljedu. Koža i mišići su zašiveni nakon uklanjanja težine sa površine Th12, a izazvana je privremena ponovljiva paraliza u donjim ekstremitetima [16,17]. Pacovi su održavani 24 stotine odgovarajućih uslova i veterinarske kontrole.

2.4. Priprema ekstrakta Cistanche deserticola i kvantitativna analiza

BiljkaCistanchedeserticola(1 kg) je sakupljeno iz Gansuprovince, Kina, osušeno na zraku i usitnjeno u prah pomoću električne mlin. Prah je ekstrahovan u etanolu (70 posto) tokom 60 minuta, filtriran i koncentriran pod sniženim pritiskom. Koncentrat je osušen u vakuumu u prah [18]. Kvantitativna analizaCistanchedeserticolaekstrakt je izveden pomoću tečne hromatografije visokih performansi (HPLC), kao što je prethodno opisano [11].

2.5. Tretman

Eksperimentalne grupe su bile: grupa I (GI), normalni kontrolni pacovi; grupa II (GII), pacovi sa povredom kičmene moždine (lažne kontrole); i grupe III–V (GIII–V), pacovi s oštećenjem kičmene moždine koji su primali 100, 200 ili 400 mg/kg oligosaharida izCistanchedeserticolaekstrakt, respektivno. Svaka grupa je sadržavala šest štakora iCistanchedeserticolaekstrakt je oralno davan pacovima 6 uzastopnih sedmica.

2.6. Sakupljanje krvi

Na kraju tretmana, krv (5-6 ml) je sakupljena špricom od 5 ml iglom 23G1 kroz punkciju srca, a štakori su anestezirani ketamin hidrohloridom (100 mg/kg tjelesne težine) i ksilazinom (10 mg/kg tijela). težine) i žrtvovan odrubljivanjem glave.

2.7. Priprema homogenata tkiva

Na kraju tretmana, pacovi su anestezirani ketamin hidrohloridom (100 mg/kg tjelesne težine) i ksilazinom (10 mg/kg tjelesne težine) i žrtvovani dekapitacijom. Uzorci kičmene moždine (12 mm) su uzeti iz operisanog područja. Tkiva kičmene moždine su izrezana na male komade i homogenizovana u Tris-HCl puferu (pH 7,4, 50 mM) na 6000 rpm tokom 5 minuta. Homogenat je centrifugiran i supernatant je sakupljen za dalje eksperimente. Svi preparati homogenata i supernatanta su izvedeni na 4 stepena.

2.8. Biomarkeri oksidativnog stresa

Peroksidacija lipida određena je prema sadržaju malondialdehida (MDA) mjerenjem reaktivnih vrsta tiobarbiturne kiseline (TBARS). Konačni proizvod je mjeren na 534 nm [19]. ROS je određivan diklorfluoresceinskim testom [20]. Smanjeni sadržaj glutationa (GSH) određen je mjerenjem konačnog proizvoda na 405 nm [21]. Aktivnosti enzima superoksid dismutaze (SOD), glutation peroksidaze (Gpx), katalaze i acetilholinesteraze (AChE) mjerene su spektrofotometrijom [19].

2.9. Inflamatorni markeri

Nivoi TNF-a i IL-6 u serumu su određeni za sve grupe [22]. Sadržaj nitrita mjeren je kao indeks nivoa azotnog oksida (NO) i izražen je u mM [23,24]. Nivoi ekspresije mRNA TNF-, IL-6, iNOS, ciklooksigenaze-2 i GAPDH određeni su prema Moon et al. [25]. Prajmeri korišćeni u ovoj studiji prikazani su u tabeli 1.

2.10. Biomarkeri apoptoze

Nivoi ekspresije mRNA kaspaze-3, p53, bcl-2, bax, pro-NGF i GAPDH određeni su prema Moon et al. [25]. Nivoi ekspresije proteina kaspaze-3, p53, bcl-2, bax, pro-NGF i GAPDH određeni su prema Lobos et al. [26]. TUNEL bojenje kaspaze-3 i p53 izvedeno je u neuronskim sekcijama [25]. Prajmeri koji se koriste za RT-PCR dati su u tabeli 1.

2.11. Statističke analize

Vrijednosti su predstavljene kao srednje vrijednosti sa standardnom greškom srednje vrijednosti (SEM). Kontrola iCistanchedeserticolagrupe tretirane ekstraktom su upoređene korišćenjem neparnog Studentovog t-testa. Za višestruka poređenja korištena je jednosmjerna analiza varijanse (ANOVA). Smatra se da P-vrijednosti ˂0.05 ukazuju na statističku značajnost.

3. Rezultati

U ovoj studiji, terapeutska efikasnost oligosaharida izCistanche deserticolaekstrakt protivupala, oksidativnostres,i ispitivana je apoptoza kod ozljede kičmene moždine mužjaka albino pacova. Uočeno je prisustvo oligosaharida (78,68 posto), akteozida (9,29 posto), ehinakozida (6,34 posto) i 8-epiloganske kiseline (5,75 posto) uCistanche deserticolaekstrakt (slika 1). Sadržaj MDA, izmjeren kao krajnji proizvod peroksidacije lipida, bio je 22,58 nmol/g kod normalnih kontrolnih pacova (GI), i drastično je povećan za 179,5 posto kod lažnih kontrolnih pacova (GII). Tretman pacova oligosaharidima izCistanchedeserticolaekstrakt značajno smanjio sadržaj MDA za 50.1 posto u grupi GV (tabela 2, P b 0,05). Sadržaj GSH bio je 85,31 mg/g u GI grupi i drastično je smanjen za 61,1 posto u GII grupi. Tretman saCistanchedeserticolaekstrakt kod pacova sa oštećenjem kičmene moždine značajno je povećao sadržaj GSH za 121,6 posto u grupi GV (tabela 2, P b0.05).

Aktivnost SOD je bila 6,2 U/mg u grupi sa GI i značajno je smanjena za 51,1 posto u grupi sa GII. Štakori s ozljedom kičmene moždine suplementirani oligosaharidima izCistanchedeserticolaekstrakt je pokazao značajno povećanu aktivnost SOD, za 91,4 posto u grupi GV (tabela 2, P b0.05). Aktivnost katalaze iznosila je 12,8 U/g u GI grupi i značajno je smanjena za 59,3 posto u grupi sa GII. Štakori s ozljedom kičmene moždine suplementirani oligosaharidima izCistanche deserticolaekstrakti su pokazali značajno povećanu aktivnost katalaze, za 106,1 posto u GV grupi (tabela 2, P b 0.05). GPx aktivnost je bila 0,87 (mg/protein) u GI grupi i smanjena je za 55,2 posto u GII grupi. GPx aktivnost je povećana za 100 posto u grupi GV (tabela 2, P b 0,05). Aktivnost AChE bila je 9,3 (μmol/min/mg proteina) u grupi sa GI i smanjena je za 54,8 procenata u grupi sa GII. Štakori s ozljedom kičmene moždine suplementirani oligosaharidima izCistanchedeserticolaekstrakt je pokazao značajno povećanu aktivnost AChE, za 26,2, 57,1 i 107,1 posto u grupama GIII, GIV i GV (Tabela 2, P b 0,05).

ROS je izmjeren i izražen u relativnim fluorescentnim jedinicama (RFUs): intracelularni ROS je bio 44,23 u GI grupi, što je povećano za 349 posto u GII grupi. Suplementacija oligosaharidima izCistanchedeserticolaekstrakti značajno smanjuju intracelularne nivoe ROS-a za 61,9 procenata u grupi GV (slika 2A, P b 0.05). Sadržaj nitrita mjeren je kao indeks nivoa NO i izražen u mmM. Nivo NO bio je 3,7 (mM) u grupi sa GI, što je povećano za 349 procenata u grupi sa GII. Suplementacija oligosaharidima izCistanchedeserticolaekstrakt značajno smanjio nivoe NO za 63,6 procenata u grupi GV (slika 2B, P b 0.05).

Nivoi IL-6 i TNF-a su izmjereni i izraženi kao pg/mg proteina. Nivoi IL-6 i TNF-a su značajno povećani, za 912,7 odnosno 695,4 posto, u grupi sa GII. Međutim, dodatak oligosaharidima izCistanchedeserticolaekstrakt značajno smanjio nivo IL{{0}} i TNF-a za N60 procenat u GI grupi u poređenju sa GII grupom (slika 3, P b 0.{{16 }}5). Ekspresija mRNA inflamatornih markera, kao što su IL-6, TNF-, ciklooksigenaza-2, i iNOS, je kvantificirana i izražena kao promjene na nagibu. Nivoi ekspresije mRNA IL 6, TNF-, ciklooksigenaze-2 i iNOS povećani su za 0.72-, 0.81-,0.54- , i 0.67-preklopiti u GII grupi, respektivno. SupplementationwithCistanchedeserticolaekstrakt je smanjio nivoe ekspresije mRNA IL{{0}}, TNF-, ciklooksigenaze-2 i iNOS za N20 procenata u GV grupi u poređenju sa GII grupom (slika 4, P b 0,05).

Određena je i ekspresija mRNA apoptotičkih markera kaspaze{{0}}, p53,bcl-2, bax i pro-NGF. Nivoi ekspresije mRNA p53, kaspaze-3, bax i pro-NGF povećani su za 0.97-,1.{{10}}, 1.{101} {12}} i 0.76- puta u GII grupi, respektivno, a nivo ekspresije bcl-2 mRNA je smanjen za 0.67-put . Tretman ekstraktom značajno je smanjio nivoe ekspresije mRNA p53, kaspaze-3, bax i pro-NGF za N30 procenata, dok je nivo ekspresije bcl-2 mRNA povećan za 178 procenata (Slika 5, P b 0,05). Na osnovu western blotanalize, nivoi kaspaze-3 i pro-NGF proteina su značajno povećani, za 0.95-puta i 0.68- puta, u GII grupi, respektivno. Suplementacija oligosaharidima odCistanchedeserticolaekstrakt značajno smanjio nivoe ekspresije kaspaze{{0}} i pro-NGF proteina za N20 procenata u GI grupi u poređenju sa grupom GII (Slika 6, P b 0,05). TUNEL test bojenja je korišten za otkrivanje broja p53- i kaspaza-3- pozitivnih ćelija. Broj p53- pozitivnih ćelija bio je 1, 79, 54, 33 i 19 u grupama GI–GV, respektivno. Broj kaspaza{14}}pozitivnih ćelija bio je 2, 87, 51, 23 i 14 u grupama GI–GV, respektivno (slike 7–8, P b 0,05).

4. Diskusija

U ovoj studiji, terapeutska efikasnost oligosaharida izCistanchedeserticolaekstrakt protivupala, oksidativni stres i apoptoza kod ozljede kičmene moždine mužjaka albino pacova. Liuet al. [27] izvijestili su da bi suplementacija antioksidansima mogla biti efikasna protiv nekoliko neurodegenerativnih bolesti. Prisustvo ehinakozida (feniletanoid glikozida) je prijavljeno uCistanchedeserticolaekstrakt [10], a nekoliko istraživača je pokazalo protuupalna i antinociceptivna svojstvaCistanche deserticola[28,29]. U ovoj studiji, uočeno je da su oligosaharidi, akteozid, ehinakozid i 8-epiloganska kiselina glavni sastojci ekstrakta Cistanche deserticola.

Defekti ponašanja i apoptoza poboljšani TNF-om uočeni su u neuronskim ćelijama SH-SY5Y nakon tretmana ehinakozidom [30,31]. Nan et al. [32] izvijestili su o smanjenju nivoa TNF-, T-tau i IL-1 kod pacijenata s Alchajmerovom bolešću i poboljšanom oporavku hipokampalne atrofije i kognitivnih sposobnosti nakon suplementacije sa Cistanche herba. Terapeutski efektiCistanchedeserticolaekstrakt naupala, oksidativni stres i apoptoza nisu ranije prijavljeni. Ovo je prvi izvještaj o farmakološkim efektimaCistanchedeserticolaekstrakt u modelu ozljede kičmene moždine.

Nekoliko istraživača je izvijestilo da je tretman akteozidom značajno smanjio oksidativni stres i crijevni stresupalamiševi izazvani inflamatornom bolešću crijeva [33]. Nam et al. [34] su izvijestili da je protuupalno djelovanje izoakteozida iz Abeliophyllum distichum u ljudskim mastocitima. Protuupalni fenilpropanoidni glikozidi iz listova Clerodendron trichotomum su prijavljeni u modelu miševa [35]. Zhou et al. [36] su objavili da je antiinflamatorna aktivnost oligosaharida u ćelijama makrofagaRAW 264.7. Oligosaharidni monomeri su prijavljeni za inhibicijuupalau makrofagima stimulisanim LPS kroz supresiju MAPK i NF-κB puteva [37].

Fahnestock et al. [38] izvijestili su da je pro-NGF dominantna forma u mozgu i da je povećana kod pacijenata s Alchajmerovom bolešću. Nekoliko cijepanih proteina, pored pro-NGF, aktiviraju anti-apoptotičke ćelijske odgovore [39]. Odnos između zrelog NGF- i pro-NGF igra ključnu ulogu u balansiranju preživljavanja ćelija i stope smrti [40]. Ke Zhang et al. [18] izvijestili su o smanjenom formiranju tumora i dužem životnom vijeku miševa uz dodatakCistanchedeserticolaekstrakt. Neuroprotektivni efektiCistanchedeserticolaekstrakt o ozljedama uzrokovanim neurotoksinima su ranije prijavljeni [41]. Xuan i Liu et al. [42] prijavili su poboljšanja u imunološkoj funkciji, pamćenju, učenju i antioksidaciji kod miševa koji su suplementirani saCistanchedeserticolaekstrakt. Suplementacija ekstraktom Cistanche deserticola smanjila je MDA i povećala nivoe GPx i SOD u modelu ishemija-reperfuzije pacova. Nadalje, uočena je smanjena regulacija kaspaze-3, uz istovremeno povećanje omjera bax/BCL-2 [43], što je u skladu s našim nalazima koji pokazuju smanjene nivoe oksidativnih, upalnih i apoptotičkih markera u kralježnici pacovi sa ozljedom pupčane vrpce dopunjeni saCistanchedeserticolaekstrakt.

5. Zaključak

Ukratko, kvantitativna analiza je otkrila prisustvo oligosaharida, akteozida, ehinakozida i 8-epiloganske kiseline uCistanchedeserticolaekstrakt.Upala, oksidativni stres i markeri apoptoze su značajno smanjeni kod pacova s ​​ozljedom kičmene moždine kojima su dodani oligosaharidi iz ekstrakta Cistanche deserticola.

Ograničenja studije

Ova studija, iako otkriva antitumorsko i protuupalno djelovanje,Cistanchedeserticolaekstrakt ima neka ograničenja. Nismo procijenili akutni efekatCistanchedeserticolaekstrakt na tumor iupalakod povrede kičmene moždine.

Finansiranje

Ovu studiju podržava Nacionalna fondacija za prirodne nauke Kine (Grant br. 31370984, 81501879, 31870961, GZ1219), Odeljenje za nauku i tehnologiju provincije Sečuan (br. 2015HH004) Naučno-istraživački projekat Komisije za zdravlje i planiranje porodice Sichuan Provin 100097).

Konkurentni interesi

Svi autori izjavljuju da nemaju suprotstavljene interese.

Doprinosi autora

Hong Zhang, Zhou Xiang, Xin Duan i Juan li Jiang su sproveli eksperimente i izradili rukopis. Yi Ming Xing, Cheng Zhu i Qiang Song prikupili su preglede literature, izvršili analizu sirovih podataka i interpretaciju podataka. Qin Rong Yu je revidirao intelektualni sadržaj rukopisa.

Od: ' Antitumor ianti-inflamatornoefekti oligosaharida izCistanchedeserticolaekstrakt o ozljedi kičmene moždine' byHong Zhang, et al

---H. Zhang et al. / Međunarodni časopis za biološke makromolekule 124 (2019) 360–367

Reference

[1] MO Krucoff, S. Rahimpour, MW Slutzky, VR Edgerton, DA Turner, Poboljšanje oporavka nervnog sistema kroz neurobiologiju, trening neuralnog interfejsa i neurorehabilitaciju, Front. Neurosci. 10 (2016) 584.
[2] TY Yune, JY Lee, MH Jiang, DW Kim, SY Choi, TH Oh, Sistemska primjena PEP-1-SOD1 fuzijskog proteina poboljšava funkcionalni oporavak inhibicijom smrti neuronskih ćelija nakon povrede kičmene moždine, Free Radic. Biol. Med. 45 (2008) 1190–1200.

[3] SM Lee, TY Yune, SJ Kim, DW Park, YK Lee, YC Kim, YJ Oh, GJ Markelonis, TH Oh, Minociklin smanjuje smrt stanica i poboljšava funkcionalni oporavak nakon traumatske ozljede kičmene moždine kod štakora, J. Neurotrauma 20 (2003) 1017–1027.

[4] F. Bao, D. Liu, Peroksinitrit stvoren u kičmenoj moždini pacova izaziva smrt neurona i neurološke deficite, Neuroscience 115 (2002) 839–849.

[5] L. Qin, Y. Liu, T. Wang, SJ Wei, ML Block, B. Wilson, B. Liu, JS Hong, NADPH oksidaza posreduje neurotoksičnost izazvanu lipopolisaharidima i ekspresiju proinflamatornih gena u aktiviranoj mikrogliji, J. Biol . Chem. 279 (2004) 1415–1421.
[6] ML Block, JS Hong, Microglia iupala-posredovana neurodegeneracija: višestruki okidači sa zajedničkim mehanizmom, Prog. Neurobiol. 76 (2005) 77–98.
[7] KJ Min, HK Pyo, MS Yang, KA Ji, I. Jou, EH Joe, Gangliozidi aktiviraju mikrogliju putem protein kinaze C i NADPH oksidaze, Glia 48 (2004) 197–206.
[8] J. Hussein, M. El-Banna, TA Razik, ME El-Naggar, Biokompatibilni nanokristali cink oksida stabilizirani preko hidroksietil celuloze za ublažavanje dijabetičkih komplikacija, Int. J. Biol. Macromol. 107 (Pt A) (2018) 748–754.
[9] TY Yune, JY Lee, GY Jung, SJ Kim, MH Jiang, YC Kim, YJ Oh, GJ Markelonis, TH Oh, Minociklin ublažava smrt oligodendrocita inhibirajući proizvodnju pro-nervnog faktora rasta u mikrogliji nakon ozljede kičmene moždine, J. Neurosci. 27 (2007) 7751–7761.
[10] GQ Sheng, JR Zhang, XP Pu, J. Ma, CL Li, Zaštitni efekat verbaskozida na neurotoksičnost izazvanu 1-metil-4-fenilpiridinijum jonima indukovanu neurotoksičnost u PC12 ćelijama, Eur. J.Pharmacol. 451 (2002) 119–124.
[11] Y. Jiang, PF Tu, Analiza hemijskih sastojaka u vrstama Cistanche, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[12] KA Koo, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee, YC Kim, In vitro neuroprotektivne aktivnosti feniletanoidnih glikozida iz Callicarpa dichotoma, Planta Med. 71 (2005) 778–780.
[13] Q. Dong, J. Yao, JN Fang, K. Ding, Strukturna karakterizacija i imunološka aktivnost dva polisaharida koja se ekstrahuju hladnom vodom izCistanchedeserticolaYC Ma, Ugljikohidrat. Res. 342 (2007) 1343–1349.
[14] LW Lin, HT Lin, FH Tsai, WH Wang, CR Wu, Antinociceptivna i antiinflamatorna aktivnost uzrokovanaCistanchedeserticolakod glodara, J. Ethnopharmacol. 83 (2002) 177–182.
[15] J. Hussein, M. El-Bana, E. Refaat, ME El-Naggar, Sinteza nanoemulzije na bazi karvakrola za liječenje neurodegenerativnih poremećaja kod eksperimentalnog dijabetesa, J. Funct. Foods 37 (2017) 441–448.
[16] M. Sakanaka, P. Zhu, B. Zhang, TC Wen, F. Cao, YJ Ma, K. Samukawa, N. Mitsuda, J. Tanaka, M. Kuramoto, H. Uno, R. Hata, Intravenous infuzija dihidro-ginsenozida Rb1 sprječava kompresivnu ozljedu kičmene moždine i ishemijsko oštećenje mozga kroz povećanje VEGF-a i Bcl-xL, J. Neurotrauma 24 (2007) 1037–1054.
[17] S. Naruo, K. Okajima, Y. Taoka, M. Uchiba, T. Nakamura, H. Okabe, K. Takagi, Prostaglandin E1 smanjuje ozljedu kičmene moždine uzrokovanu traumom kompresije kod štakora uglavnom inhibiranjem aktivacije neutrofila, J. Neurotrauma 20 (2) (2003) 221–228.
[18] K. Zhang, X. Ma, W. He, H. Li, S. Han, Y. Jiang, H. Wu, L. Han, T. Ohno, N. Uotsu, K. Yamaguchi, Z. Ma , P. Tu, Extracts ofCistanchedeserticolamože antagonizirati imunosenescenciju i produžiti životni vijek kod miševa sklone starenju 8 (SAM-P8), Evid. Based Complement. Alternat. Med. 2014 (2014), 601383.
[19] T. Kaddour, K. Omar, AT Oussama, H. Nouria, B. Iméne, A. Abdelkader, Akutna neurotoksičnost izazvana aluminijumom kod pacova: tretman vodenim ekstraktom Arthrophytum (Hammada scoparia), J. Acute Dis. 5 (6) (2016) 470–482.
[20] TV Arutyunyan, AF Korystova, LN Kublik, MKh Levitman, VV Shaposhnikova, YN Korystov, Taxifolin i fucoidan ukidaju povećanje proizvodnje reaktivnih vrsta kiseonika u aorti štakora izazvano zračenjem, Bull. Exp. Biol. Med. 160 (2016) 635–638.
[21] M. Erden Inal, A. Akgün, A. Kahraman, Efekti egzogenog glutationa na smanjeni nivo glutationa, glutation peroksidaze i glutation reduktaze štakora različite starosti i spola nakon Γ-zračenja cijelog tijela, J. Am . starenje doc. 26 (2003) 55–58.
[22] J. Tavakkol Afshari, N. Ghomian, A. Shameli, MT Shakeri, MA Fahmidehkar, E. Mahler, R. Khoshnavaz, M. Emadzadeh, Određivanje koncentracije interleukina{1}} i faktora tumorske nekroze-alfa u Iransko-horasanijski pacijenti s preeklampsijom, BMC trudnoća, porođaj 5 (2005.) 14.
[23] D. Medhat, J. Hussein, ME El-Naggar, MF Attia, M. Anwar, YA Latif, HF Booles, S. Morsy, AR Farrag, WKB Khalil, Z. El-Khayat, Efekat Au-dekstrana NPS kao antitumorski agens protiv EAC i solidnog tumora kod miševa biohemijskim procjenama i histopatološkim istraživanjima, Biomed. Pharmacother. 91 (2017) 1006–1016.
[24] TI Shaheen, MI El-Naggar, JS Hussein, M. El-Bana, E. Emara, Z. El-Khayat, MMG Fouda, H. Ebaid, A. Hebeish, Procjena antidijabetika; in vivo studija nanočestica zlata i jezgra-ljuske srebro-zlato na dijabetičkim štakorima izazvanim streptozotocinom, Biomed. Pharmacother. 83 (2016) 865–875.
[25] YJ Moon, JY Lee, MS Oh, YK Pak, KS Park, TH Oh, TY Yune, Inhibicijaupalai oksidativni stres ekstraktom radiksa Angelica dahuricae smanjuje apoptotičku smrt stanica i poboljšava funkcionalni oporavak nakon ozljede kičmene moždine, J. Neurosci. Res. 90 (1) (2012) 243–256.
[26] E. Lobos, C. Gebhardt, A. Kluge, K. Spanel-Borowski, Ekspresija izoforma faktora rasta nerva (NGF) u materici štakora tokom trudnoće: akumulacija prekursora proNGF, Endokrinologija 146 (4) (2005) 1922–1929.
[27] J. Liu, E. Head, AM Gharib, W. Yuan, RT Ingersoll, TM Hagen, CW Cotman, BN Ames, Gubitak pamćenja kod starih pacova povezan je s raspadom mitohondrija mozga i oksidacijom RNK/DNK: djelomični preokret od strane hranjenje acetil-L-karnitinom i/ili R-_-lipoičnom kiselinom, Proc. Natl. Akad. Sci. USA 99 (2002) 2356–2361.
[28] ZD Nan, KW Zeng, SP Shi, MB Zhao, Y. Jiang, PF Tu, Feniletanoid glikozidi s protuupalnim djelovanjem iz stabljikeCistanchedeserticolauzgajan u pustinji Tarim, Fitoterapia 89 (2013) 167–174.
[29] XM Wu, XM Gao, KWK Tsim, PF Tu, Arabinogalaktan izolovan iz stabljikaCistanchedeserticolaindukuje proliferaciju kultiviranih limfocita, Int. J. Biol. Macromol. 37 (2005) 278–282.
[30] M. Deng, JY Zhao, PF Tu, Y. Jiang, ZB Li, YH Wang, Echinacoside spašava SHSY5Y neuronske ćelije od apoptoze izazvane TNF-alfa, Eur. J. Pharmacol. 505 (2004) 11–18.
[31] X. Geng, X. Tian, ​​P. Tu, X. Pu, Neuroprotektivni efekti ehinakozida u mišjem MPTP modelu Parkinsonove bolesti, Eur. J. Pharmacol. 564 (2007) 66–74.

[32] L. Nan, W. Jianping, M. Jun, G. Zhiqiang, J. Chao, Y. Lie, F. Xiaojie, Neuroprotektivni efekti terapije cistanches herba na pacijente sa umjerenom Alchajmerovom bolešću, Evid. Based Complement. Alternat. Med. (2015) 103985.

[33] M. Hausmann, F. Obermeier, DH Paper, K. Balan, N. Dunger, K. Menzel, K. Rogler, In vivo tretman s biljnim feniletanoidnim akteozidom poboljšava crijevniupalakod kolitisa izazvanog dekstran sulfatom natrijuma, Clin. Exp. Immunol. 148 (2) (2007) 373–381.

[34] SY Nam, HY Kim, MS Yoou, AH Kim, BJ Park, HJ Jeong, HM Kim, Antiinflamatorni efekti izoakteozida iz Abeliophyllum distichum, Immunopharmacol. Immunotoxicol. 37 (3) (2015) 258–264.
[35] KH Kim, S. Kim, MY Jung, IH Ham, WK Whang, Anti-inflamatorni fenilpropanoidni glikozidi iz listova Clerodendron trichotomum, Arch. Pharm. Res. 32 (1) (2009) 7–13.
[36] R. Zhou, X. Shi, Y. Gao, N. Cai, Z. Jiang, X. Xu, Protuupalna aktivnost guluronatnih oligosaharida dobijenih oksidativnom razgradnjom iz alginata u ćelijama mišjih makrofaga aktiviranih lipopolisaharidom RAW 264,7, J. Agric. Food Chem. 14;63 (1) (2015) 160–168.
[37] W. Wang, P. Liu, C. Hao, L. Wu, W. Wan, X. Mao, Neoagaro-oligosaharidni monomeri inhibirajuupalau makrofagima stimulisanim LPS-om kroz supresiju MAPK i NF-κB puteva, Sci. Rep. 7 (7) (2017), 44252.
[38] M. Fahnestock, B. Michalski, B. Xu, MD Coughlin, Prekursorski pronervni faktor rasta je dominantni oblik faktora rasta živaca u mozgu i povećan je kod Alchajmerove bolesti, Mol. Cell. Neurosci. 18 (2001) 210–220.
[39] R. Lee, P. Kermani, KK Teng, BL Hempstead, Regulacija preživljavanja ćelija pomoću izlučenih proneurotrofina, Science 294 (2001) 1945–1948.
[40] MV Chao, M. Bothwell, Neurotrofini: cijepati ili ne cijepati, Neuron 33 (2002) 9–12.
[41] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Hepatoprotektivna aktivnost feniletanoida izCistanchedeserticola, Planta Med. 64 (2) (1998) 120–125.
[42] GD Xuan, CQ Liu, Istraživanje o efektu feniletanoidnih glikozida (PEG)Cistanchedeserticolao anti-agingu kod ostarjelih miševa izazvanih D-galaktozom, J. Chin. Med. Mater. 31 (9) (2008) 1385–1388.
[43] Q. Yu, X. Li, X. Cao, Kardioprotektivni efekti ekstrakta bogatog feniletanoidnim glikozidimaCistanchedeserticolakod infarkta miokarda izazvanog ishemijom reperfuzijom kod pacova, Ann. Vasc. Surg. 34 (2016) 234–242.