Prednje talamičke jezgre: kritični supstrat za neprostorno upareno pamćenje kod pacova, 2. dio

2|MATERIJALI I METODE

2.1|Životinje i uslovi smeštaja

Mužjaci Long-Evans pacova (stari 12 mjeseci; prosječno 630 g) bili su smješteni u grupama od po tri ili četiri u Makrolon kavezima (48 28 22 cm) na obrnutom 12-h svjetlo-tamnom ciklusu (svjetlo se uključuje u 20 sati). ).

Testiranje ponašanja odvijalo se u tamnoj fazi svjetlosnog ciklusa, pet sesija sedmično; zapažanja su potvrdila da su pacovi bili relativno aktivniji tokom mračne faze. Pacovi su održavani na 85% tjelesne težine slobodnog hranjenja s vodom ad libitum; hrana je bila ad libitum prije i poslije operacije za postoperativni oporavak.

Hirurgija je proces liječenja bolesti i poboljšanja fizičkog zdravlja. Proces oporavka nakon operacije zahtijeva posebnu pažnju. Osim fizičkog oporavka, dobro se osjećati također zahtijeva fokusiranje na oporavak pamćenja. Postoji snažna veza između postoperativnog oporavka i pamćenja.

Tokom operacije, faktori kao što su reakcija organizma na nevolje i efekti anestetika često utiču na memorijsku funkciju mozga. Nakon što se tijelo oporavi, obratite pažnju na pravilnu ishranu, umjereno vježbanje i adekvatan san. Tokom perioda oporavka izvan bolnice, morate nastaviti izbjegavati pretjerane aktivnosti i održavati ugodno stanje tijela.

Osim životnih navika, razumna psihološka prilagođavanja također pomažu u obnavljanju zdravlja i pamćenja. Opustite se, održavajte miran um i pomozite sebi da se prilagodite oporavku pamćenja. Istovremeno, trebali biste aktivno sudjelovati u rekreativnim aktivnostima i komunicirati s rođacima i prijateljima kako biste održali mozak aktivnim i poboljšali svoje kognitivne i memorijske sposobnosti. Ova aktivnost se može postepeno povećavati i može se raditi u osnovi jednom sedmično.

Ukratko, proces oporavka nakon operacije zahtijeva sveobuhvatnu pažnju. Održavanje dobrih životnih navika i psiholoških prilagodbi igra vrlo važnu ulogu u promicanju fizičkog oporavka i oporavka pamćenja. Suočimo se s tim pozitivno, s punim povjerenjem i nadom. Moramo poboljšati pamćenje, a Cistanche deserticola može značajno poboljšati pamćenje, jer Cistanche deserticola također može regulisati ravnotežu neurotransmitera, kao što je povećanje nivoa acetilholina i faktora rasta. Ove supstance su veoma važne za pamćenje i učenje. Osim toga, meso također može poboljšati protok krvi i promovirati isporuku kisika, što može osigurati da mozak dobije dovoljno hranjivih tvari i energije, čime se poboljšava vitalnost i izdržljivost mozga.

Kliknite saznajte načine za poboljšanje funkcije mozga

Sve procedure su bile u skladu sa odobrenim smjernicama Komiteta za etiku životinja Univerziteta u Canterburyju. Četiri grupe pacova ustanovljene su slučajnim rasporedom nakon upoznavanja prije operacije u lavirintu radijalne ruke (RAM) i pisti. Četiri grupe su bile bilateralne lezije ATN-a sa ili bez traga između mirisa i predmetnog stimulansa kada su obučavane u zadatku upareni-saradnik i odgovarajuće dvije grupe Sham-lezija.

Konačne veličine uzorka bile su (1) lažno-bez traga=7 (tj. grupa lažnih lezija bez intervala između mirisnih i objektnih stimulansa koji se koriste u zadatku upareni-saradnik); (2) Sham-Trace=7 (Shamlesion grupa je dobila 10- trag između prezentacije mirisa i stimulusa objekta); (3) ATN-No Trace=8; i (4) ATN-Trace=9. Dodatna ATN lezija pacova je isključena zbog neispunjavanja kriterija lezije (vidi dolje).

2.2|Operacija

Pacovi su anestezirani izofluranom (indukcija 4%; održavanje 2,5%) i stavljeni u stereotaksički aparat sa atraumatskim šipkama za uši (Kopf, Tujunga, CA). Šipka incizora je postavljena na 7,5 mm ispod interauralne linije kako bi se minimiziralo oštećenje forniksa.

U svakoj hemisferi, dvije infuzije bile su usmjerene na anteroventralno jezgro (AV; gornje i donje), a jedna infuzija usmjerena je na anteromedijalno jezgro (AM). Svaka operacija koristila je jednu offior anterior-posterior (AP) koordinata u odnosu na Bregma-Lambda udaljenost pojedinog pacova (sve vrijednosti inmm). Za AV lezije, AP koordinate su bile: 2,20 za B–L 6,9–7,2; 2,25 za B–L 7,3 do 7,6; 2,30 za B–L Veće ili jednako 7,7. AV infuzije su napravljene na 5,68 i 5,73 ispod dure i 1,52 lateralno od srednje linije.

Infuzija AM je napravljena {{0}}.1 mm više anteriorno od AV koordinate, na 5,76 ispod dure i 1,16 lateralno; prva AM lezija je napravljena nakon završetka svih AVinfuzija i počela je kontralateralno od posljednjeg mjesta AV lezije. 0.15 M N-metil-d-aspartat (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) u 0.1 M fosfatnom puferu (pH 7,20) je infundirano u svako mjesto pri 0,04 ul u minuti putem 2.5-ulHamilton špric (Reno, NV, SAD) pomoću mikro infuzione pumpe (Stoelting, Wood Dale, IL).

AV siteper hemisfera je primila {{0}}.12 i 0.10 ul za dorzalna i ventralna mjesta, respektivno; 0,06 ul je korišteno za svaku AM lokaciju. Igla šprica je ostala in situ 3 minper strane, nakon infuzije.
Operacije lažnih lezija koristile su istu proceduru, ali je igla spuštena na 1 mm iznad gornjeg AV i AM mjesta lezije uz datu infuziju.

2.3|Zadaci ponašanja

RAM sa osam krakova potvrdio je oštećenje prostorne memorije kod pacova sa ATN lezijom nakon operacije. Aparat za poletno-sletno-sletno-sletno-sletno-sletno-sletno-sletnu stazu korišćen je za obuku štakora za sve neprostorne zadatke, to jest, jednostavno razlikovanje mirisa i jednostavnih objekata i zadatke upareni-saradnici miris–predmet i miris–trag–objekt.

Prije operacije, pacovi koji su bili ograničeni na hranu navikli su na RAM s osam krakova, opisan u nastavku, kako bi uzeli 0.1 g komadića čokolade (Foodfirst LTD Auckland, NZ) i prilagodili se otvaranju i zatvaranju vrata ruke. Na crvenoj perspeks pisti (Slika 1), pacovi su također bili oblikovani tako da zabadaju nosom 2-cm kružnu bijelu plastičnu kapu koja je bila 10 cm iznad nivoa poda iu središtu tanke spužve na prozirnom umetku od perspeksa koji je bio pričvršćen za krajnji zid.

Također su bili oblikovani da guraju (koristeći nos ili šapu) predmet koji je bio spojen na stražnjoj strani baze do vrha bunara za hranu koji je bio uvučen u sredinu drvenog bloka od 5 8,5 3 cm. Hrana je sadržavala komadiće čokolade (i držala je nepristupačnu hranu ispod udubljenja). Objekt korišten za prethodnu obuku nije ponovo korišten. Nakon operacije, pacovi koji su se oporavili su ponovo upoznati i sa RAM-om i sa pistom.

2.4|Prostorna radna memorija u RAM-u

Nakon operacije, prostorna radna memorija testirana je korištenjem RAM memorije smještene u centru prostorije bez prozora (3 3 m). Labirint je imao sivo obojenu drvenu središnju glavčinu širine 35 cm sa osam aluminijskih krakova (65 cm dužine i 8,6 cm širine, sa ivicama visine 4,5 cm), podignutih 67,5 cm iznad poda prostorije. Prozirni zidovi od perspeksa (19 cm dugi i 25 cm visoki) koji se pružaju duž jedne strane svake ruke od glavčine kako bi spriječili pacove da skaču između krakova.

Crni drveni bunar za hranu (5 8,5 3 cm), sa nedostupnom hranom ispod, stavljen je na kraj svake ruke. Tokom testiranja, 2 0.1 g komada čokolade bilo je prisutno u svakoj posudi za hranu na početku svake suđenje. Prozirna vrata od perspexgiljotine, koja su se mogla podići ispod glavčine pomoću sistema remenica, kontrolisala su pristup krakovima glave.

Deset uzastopnih dana formalne obuke u RAM-u korišteno je za testiranje prostorne radne memorije. Pacov je stavljen u centralnu glavčinu, a 10 sekundi kasnije, svih osam ruku je otvoreno, a štakoru je dozvoljeno da napravi izbor definisan kao obje zadnje noge preko praga ruku. Kada je pacov ušao u ruku, sva vrata su bila zatvorena, i bio je zatvoren za ruku 15 s, bez obzira na to da li je napravio ispravan izbor.

Pacov je tada pušten nazad u centralnu glavčinu i držan tamo 10 sekundi prije nego što su sva vrata ponovo otvorena kako bi se omogućio drugi izbor ruke. Suđenje je završeno kada je rathad posjetio svih osam krakova, napravljeno je 20 izbora ruku ili je proteklo 10 minuta.

2.5|Neprostorni zadaci: Jednostavna diskriminacija i učenje u paru

I jednostavna diskriminacija i zadaci upareni-saradnici koristili su istu crvenu Perspex pistu (93 26 26 cm) postavljenu na sto visok 75-cm (Slika 1). Pista bi mogla biti podijeljena sa tri vertikalno uklonjiva vrata (redPerspex, 26 26 cm) koja su odabrana na osnovu specifičnog zadatka ponašanja. Što se tiče upoznavanja, sunđer tanki 6,5 6 8 mm sa poklopcem u sredini držao je nagradu za čokoladnu hranu (slika 1).

Spužva je bila pričvršćena na vrata koja se mogu ukloniti na pisti (za zadatke uparenih saradnika) ili na krajnji zid piste (za zadatak jednostavnog razlikovanja). Za svaki miris korištena je različita doorplus spužva, koja je dodana pored posude sa 5 ml suncokretovog ulja pomiješanog sa 20 ul esencijalnih ulja novozelandske supstance.

Mirisi su bili limun i karanfilić za zadatke uparenih saradnika, a cimet i limeta za jednostavne zadatke diskriminacije, ili obrnuto u grupama sa protivtežom. Lagani i vizualno različiti objekti (Slika 1) pričvršćeni su šarkom na stražnjoj strani svoje baze za vrh otvora za hranu tako da je štakor mogao lako gurnuti predmet nazad (bilo nos ili šapu) kako bi pretražio bunar za nagradu za hranu.

Drveni okvir (visok 1,8 m od poda širine 1,3 m), ogrnut crnim zavjesama, zatvorio je sve strane ispitnog prostora kako bi se smanjili prostorni znakovi tokom testiranja.

Jednostavna diskriminacija (samo miris; samo objekt) i zadaci upareni-saradnici koristili su proceduru 'idi/ne-idi'.

Prvo ispitivanje za svaku sesiju započinjalo je zadržavanjem štakora u početnoj zoni na 120 s kako bi se ponovo aklimatizirao na temu; naredni pokušaji su koristili 20 s u ovoj početnoj oblasti. Allrats je primio 12 masovnih ispitivanja po dnevnoj sesiji, sa šestgo (nagrađenih) i šest ne-gos (nenagrađenih) ispitivanja po apseudo-randomiziranom redoslijedu. Ne više od tri go ili tri zabrana suđenja su vođena uzastopno u jednoj sesiji.

Nijedan od četiri različita para stimulansa miris-predmet nije ponovljen u uzastopnim ispitivanjima. Ispravne stavke u jednostavnim zadacima diskriminacije i ispravni parovi stimulansa u zadacima upareni-saradnici bili su uravnoteženi među pacovima.

Za jednostavnu diskriminaciju mirisa, odgovor je definiran kao zabadanje nosa u kapicu u sredini teoduriziranog sunđera; samo njušenje sunđera smatralo se odgovorom zabranom. Hrana je uvijek bila prisutna u kapici u središtu spužve za zadatke miris-predmet upareni-saradnici; idi/ne-idi aspekt ovdje se odnosi na to da li je predmet gurnut da otkrije da li je ispod njega, na kraju piste, bila nagrada za hranu.

Za objekte, odgovor je definiran kao svaki guranje nosom ili šapom koji je naginjao objekt unatrag. Latencija od trenutka kada su zadnja vrata podignuta i kada je štakor stupio u interakciju s mirisom (bod nosom u kapicu; za jednostavnu diskriminaciju mirisa) ili s objektom (gurnut natrag na šarku, za jednostavnu diskriminaciju predmeta i zadatke uparene) bila je mjereno tihom štopericom (Dick Smith, Novi Zeland).

Posmatrač je sjedio unutar zavjesa i pored piste kako bi otvorio vrata i zabilježio ponašanje. Ispitivanje je označeno kao 'ispravno' ako je pacov odgovorio za manje od 8 s u pokusu ili nije reagirao prije 8 s na pokusima bez upotrebe.

2.6|Jednostavna diskriminacija

Polovina pacova je obučena u jednostavnom zadatku diskriminacije mirisa nakon čega je slijedila jednostavna diskriminacija predmeta i obrnuto za drugu polovinu. Zabilježeno je kašnjenje između vrata X (slika 1a) i interakcije s mirisom ili objektom na kraju piste. Pacovi su obučavani na jednostavnom zadatku razlikovanja mirisa i jednostavnog predmeta sve dok nisu dostigli kriterij (80% tačnih tokom 2 uzastopna dana).

Za jednostavan zadatak diskriminacije mirisa, jedan miris je predstavljen u svakom ispitivanju. Rathad za razlikovanje koji je od dva mirisa uparen sa nagradom za hranu predstavljenom u sunđeru na kraju odjeljka B (slika 1a).

U jednostavnom zadatku diskriminacije objekata, jedan objekat je predstavljen na svakom ogledu na kraju odjeljka B (nije prikazano na slici 1). Therat je morao naučiti koji od dva predmeta je uparen s nagradom za hranu koja je predstavljena ispod objekta.

2.7|Upareni zadaci (trace andno-trace) Ovi zadaci su koristili novi raspored vertikalno uklonjivih vrata (slika 1). Štakori su naučili koji od dva para miris-predmet će biti nagrađen (npr. Miris 1 + Objekat A i Miris 2 + Objekt B) i koji parovi nisu nagrađeni (tj. Miris 1 + Objekat B i Miris 2 + Objekat A).

Bez obzira na uparivanje, pacovi su uvijek primali nagradu za predstavljanje mirisa kada su bili dozvoljeni u drugi odjeljak piste. Ovo je bio odjeljak C za stanje 'bez traga' u kojem odjeljak A nije korišten, a odjeljak B je bio početni odjeljak. Miris je bio na kraju odjeljka B za stanje 'trag', za koji je odjeljak A korišten kao početna kutija.

Pacovi u stanju tragova bili su podvrgnuti kašnjenju od 10- između prikaza mirisa i predmetnih stimulansa, tako što su držani u odeljku C, dok su štakori u stanju bez traga bili izloženi objektu neposredno nakon njihove interakcije sa mirisom (nakon jede nagradu). I u uslovima tragova i bez tragova, zabilježili smo kašnjenje za prelazak preko odjeljka D, od trenutka kada su vrata Z podignuta do trenutka kada je pacov stupio u interakciju s objektom ili se suzdržao od interakcije s njim 8 sekundi.

Dve grupe štakora (Sham-lezija i ATN-lezija) su obučavane na zadacima upareni-saradnici miris-objekat (grupe bez traga), a dve odgovarajuće grupe su obučavane na zadatku upareni-saradnici miris-trag-objekt (grupe u tragovima) sve dok nisu dostignuti kriterijum (80% tačnih ispitivanja kroz 3 dana) ili maksimalno 50 dana.

2.8|Test retencije nakon akvizicije

Zadržavanje zadatka upareni-saradnik za bilo kog štakora je provedeno 5 dana nakon postizanja kriterija ili nakon 50 dana treninga. Ova sesija koristila je 12 masovnih nagrađenih/nenagrađenih pokušaja u jednom danu na identičan način kao što je ranije korišteno za tog štakora.

2.9|Histologija

2.9.1|Perfuzija i sakupljanje tkiva

3 dana prije retencionog testa, pojedinačni štakori su upoznati sa praznim čistim kavezom 90 minuta u mračnoj i tihoj prostoriji. Neposredno nakon posljednjeg ispitivanja u retencionom testu, pacov je stavljen u kavez u poznatoj mračnoj tihoj prostoriji 90 minuta prije perfuzije.

Pacovi su duboko anestezirani natrijum pentobarbitalom (125 mg/kg) i transkardijalno perfundirani fiziološkom otopinom praćenom paraformaldehidom [4% PFA u 0.1 M fosfatnom puferu (PB)] da bi se fiksirao mozak. Mozak je naknadno fiksiran u 4% PFA, nakon čega je uslijedilo najmanje 48 h u dugotrajnoj otopini (20% glicerola u 0.1 M PB). Presjeci krune 40- μm su sakupljeni pomoću mikrotoma za zamrzavanje (Thermo Fisher, UK) i pohranjeni u rastvoru krio-protektanta (30% glicerol, 30% etilen glikol u 0,1 M PB) na 20 C do obrade za imunohistohemiju.

Koronalni preseci su sakupljeni u dve odvojene serije. Prva serija je obuhvatila uzastopne sekcije u pet kriopijala za imunohistohemiju (tj. jedan od pet). Ova serija je uključivala prednji blok sekcija od prefrontalnog korteksa do septalnog područja (približno {{0}}}.7 do 0,6 mm od Bregme) i stražnji blok od mediodorzalnog talamusa (približno 3,5 mm od Bregme) do kaudalnog retrosplenijalni korteks.

Druga serija obuhvatila je uzastopne dijelove za verifikaciju lezija. Ovi dijelovi su sakupljeni u četiri kriopijale od neposredno prednjeg od ATN do stražnjeg mediodorzalnog talamusa (približno 0.6 do 3,5 mm od Bregme).

2.9.2|Neu-N bojenje i provjera ATN lezija

Slobodno plutajući dijelovi u cijeloj ATN regiji su isprani (3 10 min) u 0.1 M fiziološkom otopinom puferovanom fosfatom sa Triton-X (0,2%; PBSTx) prije inkubacije u puferu koji blokira endogenu peroksidazu 30 min [1% vodonik peroksid (H2O2), 50% metanol (CH3OH) u 2%PBSTx].

Sekcije su inkubirane preko noći na 4 C inanti-NeuN primarnom antitelu (1:5000; monoklonalni-MouseCat# MAB377; Millipore, Kalifornija SAD) u PBSTx sa 1% normalnog kozjeg seruma (NGS; Life Technologies, NZ).

Višak pufera za antitijela je uklonjen sa PBSTx i nakon toga je uslijedila inkubacija u biotiniliranom kozjem antimišjem sekundarnom antitelu (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, California USA) preko noći na 4°C u PBSTx i 1% NGS. Sekcije su stavljene u ExtrAvidin (konjugiran s peroksidazom; 1:1000; Sigma, NSW Australija), PBSTx i 1% NGS tokom 2 h na sobnoj temperaturi.

Da bi se uklonio višak ExtrAvidina i Tritona X{{0}}, sekcije su isprane u PBS, PB, a zatim Tris puferu (pH 7,4 u destilovanoj H20) kako bi se sekcije pripremile za vizualizaciju svježe pripremljenog diaminobenzidina ( DAB 0,05%; Sigma, u 0,01% H2O2 u Tris puferu).

DAB reakcija (otprilike 5 min) je zaustavljena korišćenjem Tris pufera (1 10 min ispiranja), a sekcije su stavljene u PB na 4 C preko noći pre nego što su montirane na želatinizovana stakla i ostavljene da se osuše. Stakalca su dehidrirana kroz alkohol (70%-100%) prije nego što su očišćena inksilenom i montirana DPX-om (06522; Sigma-Aldrich) i pokrovnim stakalcem.

Broj Neu-N-pozitivnih ćelija u ATN-u korišten je za određivanje obima lezije. Ovo je koristilo odsječke i lijeve i desne hemisfere za svaki od četiri40- μm sekcije širom ATN-a i područja kvantificiranog pomoću ImageJ (NIH, SAD). NeuN-pozitivno bojenje ćelija je fotografisano na 5 objektiva na LeicaDM6 B uspravnom mikroskopu i DFC7000T kameri (Leica Microsystems, Nemačka).

Automatsko prebrojavanje ćelija dobijeno je putem ImageJ (softver za analizu slika, Nacionalni institut za zdravlje, NIH, SAD). Područje koje okružuje neurone u ATN regiji je ručno odabrano i slike su konvertovane u {{0}}bitnu sivu skalu, pozadina je oduzeta (rotirajući=40), pretvorena u masku i primijenjena je funkcija vododjelnice, i sve neuronske ćelije iznad praga (prag 'MaxEntropy', kružnost 0.5–1.0) su izbrojane.

Prag detekcije bio je isti za sve sekcije. Automatizovana NeuN obojena jezgra ćelija prebrojana su u devet lažnih pacova (pet u grupi lažnih tragova i četiri u grupi sa lažnim tragom) da bi se izrazio broj ćelija u ATN.

Automatski broj NeuN obojenih jezgri pošteđenih ćelija kod svih pacova sa ATN lezijom upoređen je u odnosu na prosječan broj NeuN ćelija uočenih kod lažnih pacova. Prihvatljive lezije su definisane kao dostizanje kriterijuma od 50% gubitka ćelija u ATN, sa minimalno 25% po hemisferi. Ovo je u skladu s kriterijima ATN-lezije u prethodnim studijama (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perryet al., 2018).

2.9.3|Zif268 imunohistohemija

Slobodno plutajuće sekcije su obrađene na sličan način kao i za NeuN, ali su inkubirane u zečjem poliklonskom Zif268 primarnom antitelu (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, USA) tokom 72 h na 4 C u PBSTx sa 1% NGS, nakon čega slijedi inkubacija u biotiniliranom kozjem antizečjem sekundarnom antitelu (1:1000: Vector LaboratoriesBA-1000) preko noći u PBSTx i 1% NGS.

Nakon DAB vizualizacije (18 min), Zif268-pozitivno bojenje ćelija u svakoj regiji od interesa je fotografisano sa 10 objektivom sa svjetlosnim mikroskopom (Leica, Njemačka). Automatski broj ćelija je dobijen putem ImageJ ( NIH, SAD) na isti način kao i NeuNpozitivne ćelije, osim što je kružnost postavljena na 0.65–1.0.

Broj Zif268-pozitivnih ćelija za sve regije koristio je isti algoritam praga, sa kvantificiranim između dva i šest sekcija po regiji od interesa za svakog pacova. Korišćen je prosječan broj Zif268-pozitivnih ćelija po mm2 u dijelovima (sa obje hemisfere) unutar regije od interesa.

2.10|Analiza podataka

ANOVA pomoću Statistica (v13; Dell Inc.) je sprovedena da bi se testirale srednje razlike između četiri grupe pacova (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace i ATNTrace). Faktori ponovljenih mjerenja dodani su za dane (RAM i jednostavna diskriminacija), blokovi pokušaja (zadaci upareni-saradnici) i Zif268 brojanja u srodnim regijama ili podregijama od interesa.

ANOVA za RAM i jednostavne zadatke diskriminacije upoređivala je četiri grupe kako bi potvrdila da su dvije grupe Sham-lezija i dvije ATN-lezije bile međusobno konzistentne, ali imajte na umu da nije bilo komponente traga u RAM-u ili jednostavnim zadacima diskriminacije. I za jednostavnu diskriminaciju i za uparene zadatke na pisti, korištena je recipročna transformacija podataka o kašnjenju u pojedinačnim pokusima kako bi se osigurala homogenost varijanse.

Na bilo koji dan testiranja, transformirane latencije su generirale srednju latencije za svaki od šest nenagrađenih pokušaja i šest nagrađenih pokušaja. Za jednostavne zadatke diskriminacije, analizirali smo srednju ocenu razlike u kašnjenju (prosek nagrađenih pokušaja minus prosek nenagrađenih pokušaja), ali ne i nagrađene i nenagrađene pokušaje odvojeno zbog greške u pohranjivanju podataka.

Sve tri mjere latencije bile su dostupne za uparene-saradničke memorijske zadatke (nenagrađeni pokušaji, nagrađeni pokušaji i razlika u kašnjenju). Da bismo uzeli u obzir višestruka poređenja i uravnotežili greške tipa I i tipa II, koristili smo nivo značajnosti p < 0.02 za analize ponašanja jer su postojale tri povezane mjere u zadatku uparenog saradnika (nenagrađena ispitivanja, nagrađena ispitivanja i srednja razlika u kašnjenju).

Bilo je šest primarnih analiza za regije od interesa za ekspresiju Zif268, tako da je značaj u ovim analizama postavljen na p < 0.01. Posthoc Newman-Keuls (NK) testovi su procjenjivali grupne razlike u paru. Jednostavna analiza glavnih efekata je korištena kada su postojale značajne interakcije koje uključuju faktore ponovljenih mjera.

3|REZULTATI

3.1|Verifikacija lezije

Svi osim jednog od 18 pacova sa ATN lezijama ispunili su apriorni kriterij od 50% bilateralnog oštećenja ATN-a i minimalno 25% po hemisferi. Srednje obostrano oštećenje bilo je 76% u obje grupe ATN-lezija (opseg: ATN-No Trace, 61%–93%; ATN-Trace, 63%–93%; Slika 2). Isključeni štakor je imao zadovoljavajuću leziju samo na jednoj hemisferi (48% ukupno, 75% lijevo i 20% desno).

Slika 2d pokazuje da je broj NeuN za ATN neurone kod pacova sa ATN lezijom (M=3388, SD=2024) bio znatno ispod vrijednosti pronađenih kod pacova s ​​lažnim lezijama (M=15, 339, SD=1065; ovaj broj je bio sličan onom koji su prijavili Frost et al., 2020.). Osam od 17 pacova sa lezijom (četiri u Trace grupi i četiri u No-Trace grupi) nije imalo oštećenja ni mediodorzalnog talamusa (MD) ni ponovnog spajanja/romboidnog (Re/Rh) jezgra, a bilo je relativno malo oštećenja na ove strukture u preostalih devet pacova sa lezijama.

Kada je došlo do MD oštećenja, to je bilo u prednjim aspektima koji leže uz ATN. Dakle, MD oštećenje je procijenjeno od približno {{0}}.72 do +2.10 mm od Bregme, gdje se kretalo od 0% do 41% gubitka ćelija u cijeloj grupa (medijan=21%). Kada je došlo do Re/Rh oštećenja, ono je također bilo u blizini ATN regije, tako da je procijenjeno otprilike 1,08 do 2,04 mm od Bregme, gdje se kretalo od 0% do 33% (medijan=6%). Imajte na umu da ove procentualne vrijednosti povrede ne predstavljaju cjelokupni MD i Re/Rhregione, jer su stražnji regioni oba jezgra bili netaknuti kod svih pacova sa ATN lezijom.

For more information:1950477648nn@gmail.com