Nova uloga interleukina (IL) u fibrozi

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Dio Ⅰ: Nuklearni IL-33 sputava ranu konverziju fibroblasta u fenotip koji izlučuje ekstracelularni matriks

FrancescaGatti, Sobuj Mia, Clara Hammarström i dr.

Interleukin(IL)-33 je citokin za koji se čini da posredujefibrozasignaliziranjem preko svog receptora ST2 (IL(Interleukin)-33R/ILiRL1). To je, međutim, i protein koji se nakon sinteze sortira u ćelijsku jezgru, gdje se čini da utiče na savijanje hromatina. Ovdje opisujemo novu ulogu nuklearnog IL(Interleukin)-33 u regulaciji fenotipa fibroblasta kod miševabubregfibrozauzrokovano jednostranom opstrukcijom uretera. Transkripciono profilisanje IL(Interleukin)-33-deficitarni bubrezi 24 h nakon ligacije otkrili su pojačanu ekspresiju fibrogenih gena i obogaćivanje genskih skupova uključenih u formiranje i remodeliranje ekstracelularnog matriksa. Ove promjene su se oslanjale na intracelularne efekte IL(Interleukin)-33 jer nisu reproducirani tretmanom neutralizirajućim antitijelom na L.33 koje sprječava IL(Interleukin)-Signalizacija 33R/ST2L receptora niti su uočene u bubrezima s nedostatkom L-33R/ST2-. Da bismo dalje istražili intracelularnu funkciju lL-33, ustanovili smo transkripcione profile ljudskih fibroblasta, primjećujući da je nokdaun IL-33 iskrivio profil transkripcije od upalnog prema fenotipu miofibroblasta, što se ogleda u višim nivoima COL3Al , COL5A1 i protein transgelina, kao i niži nivoi ekspresije IL6, CXCL8, CLL7 i CCL8. Zaključno, naši nalazi sugeriraju da nuklearni IL(Interleukin)-33 u fibroblastima prigušuje početni profibrotički odgovor sve dok uporni stimulansi, kako ih forsira UUO, ne mogu nadjačati ovaj zaštitni mehanizam.

Interleukin-33 (IL-33/IL(Interleukin)1F1l) je članinterleukin-1 superporodica koja je dobila značajnu pažnju kao navodni posrednikfibrozarazvoj. Veliki dio ovog interesovanja je pojačan promatranjem ponovljenih injekcija IL(Interleukin)-33, koji djeluje preko transmembranskog receptora ST2 (IL(Interleukin)33RJ/IL(Interleukin)1RL1), indukovana kožnafibroza' i posmatranjem tog IL(Interleukin)-33-nedostatak značajno smanjuje jetru izazvanu tetrahloridom ugljenikafibroza. Zaista, IL(Interleukin)-33 može promoviratifibrozastvaranjem profibrotičnog IL(Interleukin)-13 od urođenih limfoidnih ćelija tipa 2 (ILC2) i T pomoćnih 2 limfocita.

Bubrežni intersticijalnifibrozai gubitak parenhimskih tubularnih stanica uobičajeni su krajnji rezultati kroničnih bubrežnih bolesti i dobri prediktori progresije bolesti. Trenutni podaci generirani iz dva različita modela miša podržavaju hipotezu da je IL(Interleukin)-33 također doprinosi patologiji bubregafibroza: kod jednostrane opstrukcije uretera (UUO), Chen i suradnici su prijavili smanjen gubitak parenhima i pojačanu proliferaciju epitela u oba IL-a(Interleukin)-33- i ST2-miševi sa nedostatkom ST{1}, te kod bubrežne ishemije-reperfuzije, Liang et al. pokazao da inhibicija IL(Interleukin)-33 signalizacija davanjem rastvorljivog IL(Interleukin)-33 receptor (sST2) je također smanjenfibroza.

Izveštaji koji su se bavili fibrogenim svojstvima IL(Interleukin)-33 se općenito izvode i tumače s obzirom na mehanizam pomoću kojeg IL(Interleukin)-33, oslobođen iz stresnih ili oštećenih ćelija, vezuje se za ekstracelularni domen svog receptora. Nasuprot tome, sortiranje IL.(Interleukin)-33 u ćelijsko jezgro nakon sinteze- i njegova sposobnost da utiče na presavijanje kromatina neovisno o receptoru sugerira da IL-33 također može vršiti funkcije poput transkripcionog faktora, receptor-nezavisne, način djelovanja koji je dobio daleko manje eksperimentalne pažnje . Ova razmatranja su tim interesantnija s obzirom na činjenicu da je nuklearna lokalizacija IL(Interleukin)-33 je od vitalnog značaja, kao što se otkriva smrtonosnom, neriješavajućom upalom kada je signal nuklearne lokalizacije poremećen'.

Ključni ćelijski posrednikfibrozaje miofibroblast, koji kada se aktivira služi kao primarna ćelija za proizvodnju kolagena i kontraktilna ćelija za popravku tkiva. Miofibroblaste karakterizira ekspresija a-aktina glatkih mišića (a-SMAACTA2) koji omogućava njihovu kontraktilnu funkciju i doprinosi destruktivnom djelovanjufibrozaRanije smo pokazali da se nuklearni I-33 brzo i snažno indukuje u miofibroblastima tokom eksperimentalnog zacjeljivanja rana, kod čira na želucu i ulceroznog kolitisa. Zaista, ekspresija IL(Interleukin)Čini se da je -33 opća karakteristika a-SMA-pozitivnih miofibroblasta, jer se također nalazi u pankreasufibrozai u zvjezdanim ćelijama jetre nalik miofibroblastima. Uzeti zajedno, ovi nalazi čine zanimljivim pitanje da li je IL(Interleukin)-33 može imati ulogu u regulaciji funkcije i diferencijacije miofibroblasta.

Ovdje opisujemo novu ulogu nuklearnog lL-33 u regulaciji fenotipa miofibroblasta. Pomoću genetske delecije ili farmakološke inhibicije IL(Interleukin)-33 u modelu UUO, kao i iscrpljivanje IL(Interleukin)-33 u aktiviranim ljudskim primarno kultiviranim dermalnim fibroblastima, pokazujemo da nuklearni IL(Interleukin)-33 ograničava ranu konverziju u potpuno razvijeni miofibroblastični fenotip i podržava upalni fenotip. Smanjenje IL(Interleukin)-33 je povećao ekspresiju komponenti ekstracelularnog matriksa COL1Al, COL1A2, COL3A1, COL5A1 i transgelina, ali je inhibirao ekspresiju proinflamatornog citokina IL(Interleukin)-6 i hemokini CXCL8 CCL7 i CCL8. Naši nalazi, stoga, uvode novu perspektivu u razumijevanje uloge IL-33 ufibrozarazvoj i homeostaza tkiva.

Cistanchetubulosasprečavabubregbolesti, kliknite ovdje da dobijete uzorak

Rezultati

Miofibroblasti su dominantni IL(Interleukin)-33-izražavanje ćelija u mišjem UUO.Nedavna studija Chena i kolega prijavila je povećanu ekspresiju IL(Interleukin)-33 i ST2 4. dan nakon jednostrane opstrukcije uretera. Pristupili smo njihovom eksperimentu prikupljanjem bubrega na 1,7 i 21 dan nakon UUO kod miševa C57BL/6J, primjećujući postojano povećanje IL-a.(Interleukin)33 transkripta mRNA (slika 1A) i povećan broj ćelija koje eksprimiraju nuklearni IL(Interleukin)-33(Sl.1B). Također smo uočili transkripciju i ekspresiju proteina kolagena tipa I koji odražavaju razvojfibroza(Sl. IC, D). Zatim smo analizirali fenotip IL(Interleukin)-33-izražavanje ćelija. Kao i Chen et al., primijetili smo da je IL(Interleukin)-33-izražavajući podskup ćelija viđen na dan 2 sastojao se pretežno od a-SMA-pozitivnih miofibroblasta, međutim, nismo pronašli signal za IL(Interleukin)-33 u CD31-pozitivnim endotelnim ćelijama niti u CD45-pozitivnim leukocitima (slika IE i slika S1). Takođe smo posmatrali IL(Interleukin)-33 u raštrkanim pericitima (crvena strelica na slici 1A, 21. dan panel). Upareno imunološko bojenje za PDGFRB, još jedan marker za miofibroblaste i pericite, otkrilo je ekstenzivnu kolokalizaciju (slika IE). Štaviše, procijenili smo da li je IL(Interleukin)33 je kolokaliziran sa poznatim markerima aktivacije fibroblasta, otkrivši da je ekspresija S100A4 (također poznat kao fibroblast specifičan protein, FSP-1), prilično izražena u endotelnim ćelijama kapilara i krvnih sudova srednje veličine (slika IE) . Slično, VIM/vimentin je također pronađen pretežno u endotelnim stanicama, posebno u glomerulima i žilama srednje veličine, a nije bilo očite koekspresije u IL-u.(Interleukin).33-pozitivne ćelije (slika 1E). Dalja analiza IL(Interleukin)-33-ekspresija miofibroblasta 7. dana je otkrila da su uglavnom lokalizirani na korteksu i kortikomedularnom spoju. a manje u meduli i papili (slika 1F).

Slika 1. Jednostrana opstrukcija uretera izaziva IL(Interleukin)-33 izraz u bubrezima miša.

(A,C) Relativna ekspresija 33 i Collala u bubrezima zdravih kontrolnih miševa (n=2) ili miševa podvrgnutih lažnoj operaciji (n=1) ili UUO nakon 1,7 ili 21 dana (n=3 u svakoj vremenskoj tački). Nivoi transkripcije su kvantifikovani kao što je detaljno opisano u materijalima i metodama pomoću qRT-PCR. Tačke podataka predstavljaju pojedinačne miševe.(B,DF) Reprezentativne fotomikrografije dijelova tkiva obojenih na IL(Interleukin)-33 [smeđi signal u (B) i (F), smeđi ili plavi signal u (E)], COL1 (smeđi signal na panelu D), Asma (crvena, E, F), CD31 (ljubičasta, E ),PDGFRB(teal,E),Vimentin (teal,E) i S100A4(ljubičasta,E)u bubrezima zdravih kontrolnih miševa ili miševa podvrgnutih UUO2 dana (E), 7 dana (B,D,F) ili 21 dan (B,D)prethodno. Panel (F) prikazuje različite oblasti bubrega kao što su označene. Skaliranje =20 μm.

Genetsko brisanje I-33 ima zanemariv uticaj na progresiju fibroze u UUO, ali posreduje u ranom pojačanju sinteze kolagena.Zatim smo procijenili pretpostavljenu ulogu IL-a(Interleukin)-33 poređenjem odgovora na opstrukciju bubrega u IL(Interleukin)-33 i miševi divljeg tipa. Za razliku od Chena i kolega, koji su prijavili smanjenjefibrozarazvoj u IL(Interleukin)-33-miševi s nedostatkom podvrgnutih UUO, nismo primijetili razliku između IL(Interleukin)33--i WT'miševi u razvoju fibroze na dan 7 ili 21 nakon UUO imunohistohemijskom analizom kolagena tipa I (sl. 2A, B). Međutim, secirajući fibrozni odgovor na nivou transkripcije procjenom kolagenskih transkripata, uočili smo ranu, značajnu regulaciju do dvostruko viših nivoa Collal transkripata i trend povećanja Col3al kada se uporedi IL.(Interleukin)-33-deficijentni bubrezi divljeg tipa prvog dana (sl. 2C, D). Stoga smo odlučili da ponovimo eksperimentalni dizajn Chen et al. također analizom uzoraka 4. dana nakon UUO i uključivanjem miševa s nedostatkom ST2-, upoređujući ih sa IL(Interleukin)-33-deficitarni i WT miševi. Ove analize su otkrile značajno povećanje Colla2 u IL(Interleukin).33-deficitarni bubrezi u poređenju sa bubrezima divljeg tipa 4. dana, ali bez odgovarajućeg povećanja ST-2-deficijentnih bubrega (slika 2E). Nije bilo jasne razlike u nivoima Collar i Col3al transkripta između genotipova 4. dana, što ukazuje da je efekat na ove gene kraće trajan (podaci nisu prikazani i slika 2F).

Slika 2. Ekspresija kolagena u IL(Interleukin)-33-/i divlji tip bubrega tokom UUO.

(A,B) Reprezentativne fotomikrografije dijelova tkiva obojenih na COL1(braon)u bubrezima I-33--i WT miševa 7 i 21 dan nakon UUO.(C,D)Vremenski tok upoređujući transkripciju mRNA Collala i Col3al u IL(Interleukin)-33--i WT miševa, koji prikazuju zdrave kontrolne miševe (n=2), lažno operirane miševe (n=1) i miševe podvrgnute UUO1,7 ili 21 dan ranije (n{{ 7}} u svakoj vremenskoj tački i za svaki genotip).(E,F) Poređenje transkripcije Collal i Col3al u bubrezima iz IL(Interleukin)-33-,ST2-i WT miševi 4 dana nakon lažne operacije (n=5 po genotipu) ili UUO (n=10po genotipu). Nivoi transkripcije su kvantifikovani pomoću qRT-PCR mRNA. Tačke podataka predstavljaju pojedinačne miševe, trake pokazuju srednje vrijednosti.*str<><><>

IL(Interleukin)-33 umanjuje ekspresiju profibrotičkih gena u ranoj fazi UUO.Povećana ekspresija Collar i Col31 na dan 1 (slika 1CD) i Colla2 na dan 4 (slika 2E) u IL(Interleukin).33-miševi s nedostatkom ukazuju na ulogu IL(Interleukin)-33 u ranom odgovoru na povredu. Istražili smo ovu mogućnost uključivanjem više životinja u prošireni eksperiment, promatrajući povećane nivoe transkripta ovratnika, Colla2 i Col3al u IL(Interleukin).-33-miševi s nedostatkom prvog dana (sl. 3A-C).

Uočivši da IL(Interleukin)-33 u tkivima bubrega miševa podvrgnutih UUO lokaliziranom na ćelijskim jezgrama, zatim smo pitali da li je izmijenjena ekspresija gena uočena u IL(Interleukin)-33-deficijentni miševi na dan 1 nakon UUO je bio zbog otpuštanja impresivne, nuklearne funkcije IL-33 ili odsustva ekstracelularnog IL(Interleukin)-33. Posljednju opciju smo riješili primjenom neutralizirajućeg antitijela usmjerenog na IL(Interleukin)-33 na miševe divljeg tipa prije UUO (slika 3D). Ovaj tretman nije reproducirao fibrogeni fenotip IL(Interleukin)33 mutanta, jačajući hipotezu da je povećanje ekspresije profibrotičnog gena uočeno u odsustvu IL(Interleukin)-33 je nastao zbog nedostatka nuklearnog, a ne ekstracelularnog IL(Interleukin)-33.

Slika 3.IL(Interleukin)-33 umanjuje ekspresiju kolagena u ranoj fazi UUO.

(AC) Transkripcija Collal, Colla2 i Col3al u bubrezima iz IL(Interleukin)-33-/i WT miševi l dan nakon lažne operacije (n=5 po genotipu) ili UUO (n=10po genotipu). (D) Transkripcija Col3al u bubrezima od WT miševa tretiranih anti-IL(Interleukin)-33, kontrolna antitijela izotipa ili vehikulum prije UUO. Bubrezi su sakupljeni 24 sata nakon UUO (n=10 po grupi tretmana) ili lažne operacije (n=5). Nivoi transkripcije su kvantifikovani pomoću qRT-PCR. Tačke podataka predstavljaju pojedinačne miševe, trake pokazuju srednje vrijednosti.**str<><>

Transkriptomska analiza IL(Interleukin)-33-nedostatak bubrega otkriva profil reorganizacije ekstracelularnog matriksa i formiranja kolagena.Da bi se rani odgovor na UUO detaljnije istražio transkripcijskim profiliranjem, RNA je ekstrahirana iz bubrega IL(Interleukin)-33-deficijentni i divlji miševi 24 h nakon UUO. Fisherov linearni diskriminant24 u paru korišten je za identifikaciju prvih 5 posto (200 gena) različito eksprimiranih gena između WT i IL(Interleukin)-33-deficitarni bubrezi koji otkrivaju jasno razdvajanje između genotipova u analizi glavne komponente (slika 4A). Pristup koji nije strog (str<0.05,><0.25, and="" fold="" change="">1.3) identifikovali su 134 niže regulisane i 46 pojačano regulisane sonde u kontrastnom IL(Interleukin)33−/− (n=5) naspram WT (n=4) (Suppl. Tabela S1), među potonjima posebno Col1a1, Col1a12 i Col3a1, kao i Acta2 povezan sa miofibroblastom (slika 4B) . Osim toga, analiza genske ontologije različito eksprimiranih gena korištenjem DAVID klasteriranja anotacija (Tabela S2) otkrila je pozitivno obogaćivanje GO-termina povezanih s kolagenima i inhibitorima proteaze, kao i PDGF vezivanje i interakciju ECM-receptora, te negativno obogaćivanje za GO- termini povezani s aktivnošću oksidoreduktaze i natrijum-ovisnim anionskim transporterima.

Slika 4. Sažetak transkripcionih razlika između IL(Interleukin)-33-miševi s nedostatkom i divlji tip 24 sata nakon UUO.

(A) 3D dijagram raspršenja pokazuje distribuciju uzoraka na osnovu analize glavnih komponenti 200 gena. (B) Toplotna mapa vrhunskih diferencijalno eksprimiranih gena.

Smanjenje fibroblasta IL.33 promoviše potpis gena u skladu sa povećanim taloženjem ekstracelularnog matriksa.Istražiti funkciju IL(Interleukin)-33u dominantnom IL(Interleukin)-33-izražavajući ćelijsku populaciju opstruiranih bubrega, iskrivili smo kultivirane ljudske fibroblaste prema fenotipu miofibroblasta tako što smo ih izložili IFN-y i TGF- tokom 24 h² nakon uništavanja I-33 posredovanog siRNA. Efikasan nokdaun je verifikovan i na nivou proteina i na nivou transkripta (Sl. 5A) i praćen je povećanim nivoima mRNA i proteina profibrotičkih COL3A1, COL5A1 i TAGLN (Slika 5B-D). Inicijalne analize su ukazale na uključenost TGF-a i potaknule nas da transkripcijski profiliramo udružene, kultivirane ljudske fibroblaste tretirane siRNA na IL(Interleukin)-33 i aktivira se IFN-y (za izazivanje IL(Interleukin)-33 ekspresija) ili kombinacijom IFN-y i TGF-B tokom 24 h. Ova analiza je identifikovala 64 različito eksprimirana gena povezanih sa iscrpljivanjem IL(Interleukin)-33(pril. str<0.05 and="" fold="" change="">1.5, Slika 5E),35 od kojih su bili zajednički za oba tretmana citokinom (Slika 5E, F). Nadalje, većina gena je pokazala slične trendove u oba uslova, čak i ako su dostigli odabrani prag za diferencijalnu ekspresiju samo pod jednim od njih (slika 5F), podržavajući pretpostavku da je efekat inhibicije IL-a(Interleukin)-33 je bio sličan pod oba uslova. Za analizu ontologije gena, uzeli smo u obzir gene koji su različito eksprimirani IL(Interleukin)-33 iscrpljivanje pod najmanje jednim uslovom i izvršeno grupisanje napomena (Tabela S3), u skladu s našim nalazom u UUO izloženom, IL(Interleukin)-33-u nedostatku bubrega, otkrili smo tu inhibiciju IL(Interleukin)-33 u fibroblastima doveo je do povećane ekspresije gena obogaćenih za GO-termine povezane sa kolagenom i komponentama ekstracelularnog matriksa. Nadalje, geni potisnuti iscrpljivanjem I-33 obogaćeni su za GO-termine povezane s odgovorom na upalne stimulacije. Zajedno, naši podaci impliciraju da je IL(Interleukin)-33 ekspresija u fibroblastima služi za ublažavanje regulacije transkripata vezanih za taloženje ekstracelularnog matriksa i aktivaciju miofibroblasta, dok su inflamatorni transkripti u određenoj mjeri podržani IL(Interleukin)-33.

Slika 5. Deplecija IL fibroblasta(Interleukin)-33informira genski potpis u skladu s povećanim taloženjem ekstracelularnog matriksa.

Ekspresija IL(Interleukin)33(A), COL5A1(B), FIBL5(C) i TGLN(D) ekspresija u ljudskim fibroblastima tretiranim IL(Interleukin)-33-specifična i kodirana siRNA mjerena je gRT-PCR (gornji paneli) i Western blot (donji paneli). Trake pokazuju srednje vrijednosti 4 nezavisna eksperimenta,*str<0.05.(e)venn diagram="" comparing="" differential="" expression="" of="" transcripts="" in="" response="" to="" the="" silencing="" of="">(Interleukin)33 između kontrolnih i aktiviranih ćelija.

(F) Toplotna mapa koja prikazuje različito izražene transkripte kao odgovor na siRNA-utišavanje IL-a(Interleukin)-33 u kontrolnim i aktiviranim ćelijama.

Smanjenje IL(Interleukin)-33 u aktiviranim fibroblastima daje prednost miofibroblastu u odnosu na inflamatorni fenotip.Na osnovu našeg zapažanja da se čini da efekat I-33 opstaje i postaje izraženiji tokom vremena iako IL(Interleukin)-33 izraz opada (slika S2A, B), zatim smo pitali da li je glavna nuklearna funkcija IL(Interleukin)-33 može biti regulacija diferencijacije fibroblasta prije nego direktna regulacija profibrotskih efektora. Nakon stimulacije, mirni fibroblasti i druge mezenhimske stanice razvijaju upalne i/ili kontraktilne funkcije. Spektar između inflamatornih fibroblasta i kontraktilnih miofibroblasta ostaje slabo definiran i vjerovatno predstavlja klizni prijelaz, a ne dva različita fenotipa. Međutim, nedavna publikacija Ohlund et al.23 upoređivala je fibroblaste povezane s rakom (CAF) sa mirujućim zvjezdanim stanicama pankreasa, identificirajući upalni fenotip nazvan iCAFs (ko-kultiviran u Transwells-u s tumorskim organoidima koji luče citokine i izražavajući visoke i niske razine IL(Interleukin)6 i SMA, respektivno [IL(Interleukin).dPa-SMAl]) i kontraktilni miofibroblastični fenotip, myCAFs (IL(Interleukin)6"a-SMA-, kultivisan u gustim monoslojevima), Transkripciono profilisanje i poređenje iCAF-a i mvCAF-a identifikovali su karakteristične transkripcione profile. Dok su fibroblasti sa inflamatornim fenotipom (iCAFs) pojačali svoju ekspresijuinterleukinai hemokini, oni sa miofibroblastičnim fenotipom (myCAFs) su bili okarakterisani pojačanom ekspresijom gena TGF odgovora i komponenti ekstracelularnog matriksa uključujući kolagene3. Koristili smo ovaj skup podataka da generišemo liste potpisa koje se sastoje od vrhunskih diferencijalno regulisanih gena između fenotipova i izvršili analizu obogaćivanja skupa gena u softveru GSEA. Rezultati su pokazali da inhibicija I-33 podržava kontraktilni miofibroblastični fenotip (myFBL) i inhibira inflamatorni fenotip (iFBL) u ljudskim fibroblastima (slika 6A, B, tabela S4), slažući se na taj način s rezultatima naše analize ontologije gena . U ovom trenutku smo skrenuli pažnju na IL(Interleukin)6 i CXCL8, citokini koji su predloženi kao markeri za iCAFs, otkrivši da iako ovi geni nisu ispunili kriterije za diferencijalnu ekspresiju u našoj analizi transkriptoma, smanjenje nivoa njihove ekspresije moglo bi se otkriti qRT-PCR nakon iscrpljivanja IL-a.(Interleukin)-33(Sl.6C, D). Među inflamatornim medijatorima za koje je u našoj analizi transkriptoma utvrđeno da su smanjeni (slika 5F), također smo potvrdili smanjenje ekspresije za CCL7 i CCL8 u stanicama tretiranim anti-IL(Interleukin)-33 siRNA (slika 6E, F).

Ova zapažanja su nas potaknula da istražimo mogu li se naši nalazi prevesti na mišji UUO model prvog dana. Imunohistokemijska analiza (Fg.6G) i kvantifikacija (slika 6H) otkrile su indukciju IL(Interleukin)6-koji eksprimiraju ćelije u bubrezima divljeg tipa, slično zapažanjima na nivou transkripta od strane Chen et al4. Nasuprot tome, primijetili smo značajno smanjen broj IL(Interleukin)-6-pozitivne ćelije u IL(Interleukin)-33- miševa, u dobroj saglasnosti s našim in vitro generiranim podacima o ljudskim fibroblastima.

Slika 6. Smanjenje IL(Interleukin)-33 skreće fibroblaste prema miofibroblastičnom fenotipu.

(A,B) Analiza obogaćivanja genskog skupa pokazala je da su ćelije tretirane IL(Interleukin)-33-specifične siRNA bile su pozitivno obogaćene za potpis miofibroblasta (myFBL) naspram inflamatornog fibroblasta (iFBL) i negativno obogaćene za inflamatorni u odnosu na mirni potpis fibroblasta. (CF) Transkripcija IL(Interleukin)6(C), IL(Interleukin)8(D), CCL7(E) i CCL8(F) u ljudskim fibroblastima tretiranim IL(Interleukin)33-specifična ili kodirana siRNA je izmjerena gRT-PCR. Svaka tačka podataka pokazuje srednje vrijednosti tehničkih triplikata iz nezavisnih eksperimenata. (G) Reprezentativne fotomikrografije sekcija bubrega sakupljenih 4 dana nakon lažne ili UUO operacije iz WT i IL(Interleukin)-33-/- miševi i imunobojeni na IL(Interleukin)-6(smeđi signal). Skala bar=100 um.(H) Zaslijepljena kvantifikacija signala koja nabraja prosječan broj pozitivnih ćelija po vidnom polju velike snage. Pojedinačne tačke podataka pokazuju prosječan broj pozitivnih ćelija u jednom mišu, računajući 3 polja velike snage u područjima najveće gustine. *str<>

KLIKNITE OVDJE ZA DIO Ⅱ