Učinak spuštanja mokraćnog kiselina i mehanizam acteozida i ehinacOzida izvana iz Cistanche Tubulosa
Mar 03, 2025
Sažetak:Cilj je istražiti efekte spuštanja mokraćnog kiselina i mehanizme acteozida (as) i ehinakozida (ECHINACOSIDE (ECH) izvučeni izCistanche Tubulosa.
MetodeModel Hyperuricemia (HUA) uspostavljen je pomoću kalijum oshonata (1,5 g · kg -1 · d -1) u kombinaciji sa adeninom (100 mg · kg -1 · d -1). Hua model pacovi bili su nasumično podijeljeni u grupu modela, alopurinol grupu (30 mg · kg {-1), kao niska i visoka (50, 100 mg · kg -1) Grupe doze i visoki (50, 100 mg · kg {-1) Grupe doze. Prethodno je uspostavljena normalna kontrolna grupa. Nakon četiri sedmice administracije, analizator biohemiju krvi korišten je za otkrivanje sua uree, Crea, adenozin deaminase (ADA) i mokraćne kiseline (UUA) nivoa u urinu. Imunozorbentni test sa enzimom korišten je za otkrivanje nivoa Xantine oksidaze (XOD) u serumu. Prikupljeno je bubrežno tkivo, a koeficijent bubrega je važan i izračunat. Rukovanje hematoksilina (HE) korišten je za posmatranje bubrežnih patoloških promjena. Imunohistohemija (IHC) i PCR u stvarnom vremenu korišteni su za otkrivanje razine ekspresije proteina i mRNA transportera 1 (URAT1), transporter glukoze 9 (GLUT9), Trup za organski anion 1 (OAT1) i organski anion transporter 3 (OAT3) u bubrežnom tkivu. Rezultati AS i ECH mogu poboljšati bubrežnu funkciju u Hua Model Rasina, promoviranje izlučivanja mokraćnog kiseline, udvostručenje urušavanju urušavanju i MRNA Expression u bubrežnom tkivu, dok u bubrežnom tkivu i MRNA u bubrezi.
Zaključci Feniletanoidni glikozidi kao i Ech iz Cistanche Tubulosa može iznijeti efekte spuštanja u mokraćnim kiselinom poboljšanjem bubrežne funkcije u HUA model pacovima, smanjujući nivoi ADA i XOD-a i reguliranje izraza URAT1, GLUT9, OAT1 i OAT3.
Ključne riječi: cistanche tubulosa; ACTEOSIDE; ehinacOside; hiperuricemija; Smanjenje mokraćne kiseline; mehanizam
Cistanche tubulosa ekstrakt sa 16% acteoside
Hiperuricemija (HUA) je metabolička bolest uzrokovana neurednim puninskim metabolizmom u ljudskom tijelu, što dovodi do povišene razine u mokraćne kiseline u krvi [1]. Obično se dijagnosticira kada nivoi uric kiseline u krvi prelazi 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. {4}} μmol·l⁻¹) u muškarcima i 6. 0 mg · dl⁻¹ (357. {8}} μmol·l⁻¹) u ženama [2]. Razvoj hiperikemije prvenstveno je povezan sa faktorima kao što su visoke prehrane, hronična potrošnja alkohola, upotreba lijekova i hipotireoza. Ne samo povećava rizik od kardiovaskularnih bolesti, dijabetesa i hipertenzije [3-4] ali takođe značajno utječe na zdravlje pacijenata.
Trenutno klinički tretmani za hiperikemiju uglavnom uključuju lijekove koje inhibiraju proizvodnju mokraćne kiseline i promoviraju izlučivanje mokraćne kiseline. Međutim, ovi tretmani imaju određena ograničenja za pacijente sa oštećenom funkcijom jetre ili bubrega [5-6]. Stoga je istraživanje učinkovitih lijekova sa niskim nuspojavama od velikog značaja za prevenciju i liječenje hiperikemije.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, obično se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini kao biljku za toniranje bubrega, za liječenje uslova kao što su nestručnost, neplodnost, nedostatak suštine i krvi, slabosti u donjem dijelu leđa i koljena zbog crijevne suhoće [7]. Studije su to pokazaleCistanche TubulosaPosjeduje neuroprotektivne [8], protuupalno [9], metabolizam kostiju - reguliranje [10], i efekte za poboljšanje efikasnosti u hemoterapiju za pacijente na raku [11]. Među njegovim različitim aktivnim komponentama, feniletanoidni glikozidi su najviše obilniji.
ACTEOSID (AS) i ehinacOzid (ECHINACOSID (ECH), dva feniletanoidna glikozida sa visokim sadržajem uCistanche Tubulosa, pokazuju snažnu biološku aktivnost i zadržite značajan potencijal za razvoj i primjenu. Shodno tome, naša istraživačka grupa odabrala je kao i ECH za dalju proučavanje. Kroz mrežnu predviđanja farmakologije i predeksperimente u miševima otkrili smo da feniletanoidni ekstrakti glikozida izCistanche Tubulosamože imati određeni efekt spuštanja u mokraćnog kiselina. Međutim, putevi i mehanizmi tih efekata ostaju nejasni.
Dakle, koristeći mehanizme proizvodnje mokraćne kiseline i njenih primarnih izlučenih puteva kao istraživačkog fokusa istraživali smo efekte koji se spuštaju mokraćne kiseline feniletanoidni glikozidni ekstrakti kao i ECH. Ova studija ima za cilj da razradi puteve i mehanizme putem kojih kao i ECH izvrši efekte spuštanja u mokraćnim kiselinom.
1 Materijali
1.1 Eksperimentalne životinje
Sedamdeset muškaraca SPF-stupa SPF-oke-Dawley (SD), vaganje 150-180 g, kupljeno je iz eksperimentalnog životinjskog centra Xinjiang Medical University. Broj licenci za životinje: SCXK (XIN) 2023-0001. Ovaj eksperiment odobrio je odbor za životinjsku etiku Xinjiang Autonomna regija Institut za istraživanje medicine Uygur, sa brojem odobrenja za životinjsku etiku: Iacec- (Zhun) -2024-009.
1.2 Lijekovi i reagencije
Feniletanoidni ekstrakti glikozida (AS i ECH)izCistanche Tubulosa (purity >98%, verificiranih tečnim kromatografijom visokih performansi izvučene su, pročišćene, pročišćene i pripremili ključna laboratorija za formulaciju Uygur Formulacije, Xinjiang Autonomna regija Istraživačkog instituta medicine. Brojevi paketa: 20220617 (AS) i 20220526 (ECH).
Allopurinol tablete, Broj paketa: 62208726, Proizvođač Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Kalijum oslugiadenin, brojevi paketa: I2130050 i C2202255, kupljeni iz Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co, Ltd.
Crea (kreatinin), ua (mokraćna kiselina), urea i ada (adenozine deaminase) test setovi, brojevi paketa: 141123010, 141223004, 141323008, i 043624005, kupljen iz Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (Xanthine oksidaza) Aktivnost Assay Kit, Broj paketa: Y10001219, kupljen iz Šangaj Macklin Biochemical Technology Co, Ltd.
Antitela (Urat1, Glut9, OAT1, OAT3), brojevi paketa: 3I5723 {5}}, 92f0296 / 4, 0F33081 / 2I44618, kupljen od bioznanosti od afiniteta.
HRP-ekipa za kozju protiv zečeva Igg, Broj paketa: 245440113, kupljen iz ZSGB-Bio.
Rješenje za bojenje hematoksilina, Broj paketa: 24135741H, kupljen iz Pekinga Lanjieke Technology Co, Ltd.
DAB kromogeni kit reagensa, Broj serije: 240010512, kupljen iz ZSGB-Bio.
Depc (dietil pirokarbonat), Kataloški broj: D 60029-500 ml, kupljen od Amresco (SAD).
M5 Hiclear DL2000 marker DNK, Kataloški broj: MF025, kupljen iz Peking Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Trizol ™ reagens, Kataloški broj: 15596026, kupljen od termo Fisher Naučno (SAD).
5x all-in-one rt mastermixiEvaGreen Express 2 × QPCR MasterMix-Low Rox, Kataloški brojevi: G492 i G891, oba kupljena iz primijenjenih bioloških materijala Inc. (ABM).
2 metode
2.1 Model osnivanja i grupiranje
Sedamdeset muškaraca Sprague-Dawley (SD) pacovi su aklimatizirane i podijeljene u dvije grupe: normalnu kontrolnu grupu (1 {3}} štakori) i grupu modela (60 pacova). Normalna kontrolna grupa data je 0,5% CMC-na gavage. Model Control Group je dao kalijum oktonat (1,5 g · kg⁻¹) u kombinaciji s adeninom (100 mg · kg⁻¹) u dozi od 10 ml · kg⁻¹, jednom dnevno 14 dana uzastopno. Model se smatrao uspješno uspostavljen kada se urea, CREA i SUA nivoi značajno povećali, mjerilo biohemijski analizator.
Model hiperurikemije bili su dodatni podijeljeni u sljedeće grupe zasnovane na nivou SUA, UREA i Crea: Alopurinol Group (3 {/ 12}} Mg · KG⁻¹), mahovina AS Group (100 mg · kg⁻¹), i ECH GROUP (100 mg · kg⁻¹), i ECH GROUP (50 mg · · kg⁻¹), te Grupa visoke doze (100 mg · kg⁻¹), i ECH GROUP (100 mg · · kg⁻¹), te ECH GROUP (100 mg · kg⁻¹), i ECH Group (100 mg · kg⁻¹), a velika doza ECH Group (100 mg mg · kg⁻¹), sa 10 pacova u svakoj grupi. Za održavanje stabilne hiperikemije, sve grupe, osim normalne kontrolne grupe, primijenjeno je kalijum oskudno (500 mg · kg⁻¹) u kombinaciji s adeninom (100 mg · kg⁻¹) putem Gavagea ujutro, nakon čega slijedi administracija odgovarajućih lijekova u svakoj grupi za liječenje u svakoj grupi za liječenje u svakoj grupi tretmana u svakoj grupi za liječenje u svakoj grupi tretmana u svakoj grupi tretmana u svakoj grupi za liječenje u svakoj grupi tretmana u svakoj grupi za liječenje u svakoj grupi tretmana u svakoj grupi za liječenje. Normalna kontrolna grupa primila je 0,5% cmc-na otopinu ujutro i pitku vodu popodne u dozi od 10 ml · kg⁻¹, jednom dnevno 14 dana uzastopno. Nakon toga, zaustavljena je primjena agenata za modeliranje, a odgovarajući lijekovi su kontinuirano primjenjivani dnevno još 14 dana.
2.2 Prikupljanje uzorka
Nakon završne doze, štakori su bili preveli preko noći (voda nije bila ograničena). Urin iz svake grupe prikupljeni su za ispitivanje mokraćnog kiselina. Težina tjelesne težine mjeri se nakon posta, a uzorci krvi su prikupljeni u anesteziji. Serum je odvojen centrifugiranjem i pohranjen za buduću upotrebu. Bubrežna tkiva su sakupljena i odvajana. Jedan je bubreg bio fiksan u 4% Paraformaldehide otopinu, dok je drugi bio snažni u tečnom azotu za daljnju analizu.
2.3 Mjerenje mokraćne kiseline u urinu štakora
Uzorci urina iz svake grupe bili su centrifugirani (3, {1}} R · Min⁻¹, 10 min, radijus centrifuge 14 cm), a supernatant je prikupljen. Uzorci urina razrijeđeni su 1: 9 s fiziološkom i analizom za sadržaj mokraće kiseline koristeći biohemijski analizator.
2.4 Mjerenje Ade, Urea, Crea i Sua u serumu štakora
Uzorci krvi iz svake grupe bili su centrifugirani (3, {1}} R · Min⁻¹, 10 min, radijus centrifuge 14 cm), a sakupljen je serum. Ada, Urea, Crea i nivo sua u serumu mjerene su biohemijskim analizatorom.
2.5 Mjerenje XOD-a u serumu štakora
Promjene u nivoima XOD-a u serumu štakora izmjerene su enzimskim testom prema uputama proizvođača. Zabilježeno je početno apsorbancija (a₁) i konačna apsorbancija (a₂) na 290 nm, a izračunat je ΔA (ΔA {{{{{{= a₂ - a₁). ΔA je zamijenjen u formulu:
Xod (Nmol⁻¹ · Min⁻¹ · ml⁻¹)=Sistem reakcije Ukupna jačina zvuka ÷ (molarni koeficijent izumiranja molarne kiseline × optička staza Dužina) × 10⁹] ÷ Volumen uzorka ÷ Vrijeme=4262 × ΔA,
Za izračunavanje količine katalizirane mokraćne kiseline u minuti po mililitru seruma.
2.6 Merenje koeficijenta bubrega
Bubrežna tkiva su prikupljena, oprana fiziološka otopina, a višak vode uklonjena je. Težina organa precizno je izmjerena, a koeficijent bubrega izračunat je na sljedeći način:
Koeficijent bubrega=Težina bubrega (mg) / tjelesna težina (g).
2.7 Histopatološko promatranje bubrežnog tkiva od mrlja
Bubrežna tkiva fiksna u 4% Paraformaldehide otopina dehidrirana su s ocjenom koncentracija etanola, očišćena ksilenom, ugrađena u parafinu i presječena u 4- μm kriške. Odjeljci su bili odparni sa ksilenom, hidrirani s ocjenjivim etanolom, obojenim hematoksilinom i eoninom (HE) i zapečaćen neutralnom gumom. Morfološke promjene u tkivu bubrega primijećene su pod svjetlosnim mikroskopom, a slike su zarobljene na 400 × uvećanju.
2.8 Detekcija URAT1, GLUT9, OAT1 i Ekspresija proteina OAT3 u bubrežnom tkivu od strane IHC-a
Bubrežna tkiva fiksna u 4% Paraformaldehide otopina su dehidrirana sa ocjenjivanim etanol koncentracijama, očišćene sa ksilenom, ugrađenim u parafinu i presjek. Izvršeni su blokiranje antigena i blokiranje kozjeg seruma. Primarna antitijela (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) dodani su u razrjeđivanju 1: 200 i inkubiranom preko noći u 4 stupnju. Sledećeg dana, presjeci su oprane sa PBS-om, sušenim zrakom i inkubiraju se sa cimeznim anti-zečjim IgG-om označenim biotinom u 37 stepeni tokom 30 minuta. Odjeljci su oprane sa PBS-om i inkubirani sa Cromogenim reagensom za 10 minuta, a slijede se od ispiranja od strane HEMATOXYLIN-a za 3 minute, diferencijaciju sa hidrouklorovim etanolom, dehidracijom s gradijentnim etanolom i brtvljenjem sa neutralnom gumom.
Za svaki pacov birani su dva slučajna 4 0 0 × polja bubrega. Analizirano je pozitivno obojenje (smeđe žuto), a integrirana optička gustina (IOD) svakog polja mjeri se pomoću slike-pro plus 6.0 za statističku analizu.
